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中华口腔医学会第四届颞下颌关节病学及（牙合）学专业委员会换届大会暨第十一次全国颞下颌关节病学及（牙合）学学术研讨会

作者：刘静刘文静张德莹石安迪暨南大学医学院口腔系口腔修复学教研室

目的如何利用肌球蛋白ATP酶染色法(包括酸性、碱性预孵)、琥珀酸脱氢酶(SDH酶)染色法及免疫组织化学法测定骨骼肌肌纤维类型;以大鼠咬肌为例分述并比较上述染色法的特点与相关性及选用;不同染色法对大鼠咬肌各型肌纤维的区分和对比。方... 详细信息

目的如何利用肌球蛋白ATP酶染色法(包括酸性、碱性预孵)、琥珀酸脱氢酶(SDH酶)染色法及免疫组织化学法测定骨骼肌肌纤维类型;以大鼠咬肌为例分述并比较上述染色法的特点与相关性及选用;不同染色法对大鼠咬肌各型肌纤维的区分和对比。方法 8周龄SD雄性大鼠20只,3%戊巴比妥钠腹腔注射,麻醉下经升主动脉快速灌注0.9%生理盐水,制备双侧咬肌组织块。行酶组织化学染色标本直接置入液氮速冻,或立即进行恒冷箱(-20℃)切片;行免疫组化染色的标本置入4%多聚甲醛固定72小时,梯度蔗糖BP液脱水。切片分别行下述染色法:酸性和碱性预孵的肌球蛋白ATP酶染色法,检测Ⅰ型、ⅡA型和ⅡB型肌纤维在咬肌内的分布和构成;SDH酶染色法,可将肌纤维分为SO、FG和FOG三型;免疫组化SABC法,检测咬肌肌纤维MyHC-Ⅰ和MyHC-Ⅱ异构型的表达、定位及空间分布。应用图象分析仪摄像和并对数据进行分析和量化处理。结果 (1)肌球蛋白ATP酶染色法:ATP酶碱法(PH10.4)染色,可将咬肌肌纤维可分为Ⅰ型、Ⅱ型,Ⅰ型肌纤维较细,染色浅;Ⅱ型肌纤维较粗,染色深。此法不能明确界定ⅡA和ⅡB型纤维。咬肌含大量Ⅱ型纤维,约占80%,Ⅰ型纤维主要分布在咬肌深部。与此相反,ATP酶酸法(pH 4.4)染色,Ⅰ型肌纤维被染成深褐色,Ⅱ型肌纤维则着色较浅。Ⅱ型纤维可进一步区分为亮色的ⅡA型和暗褐色的ⅡB型。咬肌Ⅰ型、ⅡA型和ⅡB型纤维的比例分别约为18%、50%和32%。ATP酶酸、减法所显示的Ⅰ型与Ⅱ型纤维基本吻合。(2)SDH酶染色:肌纤维呈蔚蓝色,可分为浅染FG(相对应ⅡB型)、中染SO(相对应Ⅰ型)和深染FOG(相对应ⅡA)三型。大鼠咬肌SO、FOG·及FG型的比例依次约为20%、47%、20%和33%。ATP酶和SDH酶染色在区分Ⅰ型纤维上基本吻合。(3)免疫组化染色:大鼠咬肌90%以上为MyHC-Ⅱ型肌纤维,仅在咬肌深部有少量MyHC-I型肌纤维。结论肌球蛋白ATP酶酸、碱法及SDH酶染色法三者之间在大鼠咬肌肌纤维分型上有相对的一致性,酶组织化学染色法与免疫组织化学染色法对肌纤维型的区分有所差异。ATP酶活性可反映肌纤维收缩特性,SDH酶活性主要反映肌纤维的代谢特征。免疫组化学法可检测肌纤维MyHC构型特征,从蛋白分子结构区分纤维类型,鉴定肌纤维收缩特性。上述染色法值得在骨骼肌相关研究中借鉴选用。关键词:肌纤维型;肌球蛋白ATP酶染色法,SDH酶染色法,免疫组织化学染色法,MyHC异构型,咬肌,大鼠

关键词：肌球蛋白 ATP 染色法肌纤维

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疏肝健脾方药对NASH大鼠原代肝细胞NF-κB信号通路相关基因及蛋白表达的影响

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中药材 2013年第9期36卷 1469-1476页

作者：杨钦河徐拥建冯高飞杨雪松韩莉张玉佩王洪暨南大学医学院中医系广东广州510632 暨南大学医学院组织学与胚胎学教研室广东广州510632 暨南大学附属第一医院广东广州510632

目的:探讨疏肝健脾方药对非酒精性脂肪性肝炎(NASH)大鼠肝细胞NF-κB信号通路相关基因及蛋白表达的影响。方法:将SD雄性大鼠随机分为8组:正常对照组、模型组、疏肝高/低剂量组、健脾高/低剂量组、合方高/低剂量组,每组15只。采用高脂饲... 详细信息

目的:探讨疏肝健脾方药对非酒精性脂肪性肝炎(NASH)大鼠肝细胞NF-κB信号通路相关基因及蛋白表达的影响。方法:将SD雄性大鼠随机分为8组:正常对照组、模型组、疏肝高/低剂量组、健脾高/低剂量组、合方高/低剂量组,每组15只。采用高脂饲料喂养复制大鼠NASH模型,16后检测肝脂、血脂,油红O和HE染色观察肝组织病理学变化。同时每组取6只采用离体循环灌注Ⅳ型胶原酶法分离肝细胞,Real time Q-PCR法Western blot法分别检测各组大鼠肝细胞IKKβ、NF-κB mRNA和蛋白及磷酸化IKKβ蛋白表达。结果:与正常对照组比较,模型组大鼠肝细胞存在显著的脂质代谢紊乱;血清TC,肝脂及肝细胞IKKβ、NF-κB mRNA和蛋白表达及磷酸化IKKβ蛋白表达较正常对照组均显著升高(P<0.01);与模型组比较,健脾高剂量组、合方高剂量组大鼠肝细胞IKKβ、NF-κB mRNA表达水平显著降低(P<0.05或P<0.01),各药物干预组大鼠肝细胞IKKβ、NF-κB及磷酸化IKKβ蛋白表达均显著下调(P<0.05或P<0.01),其中以健脾高剂量组、合方高剂量组下调趋势最为显著。结论:抑制肝细胞IKKβ/NF-κB信号通路相关基因及蛋白表达可能是疏肝健脾方药防治NASH的药理作用机制之一;上述蛋白可能是其药物作用的有效靶点。疏肝健脾方药对NASH的干预可能存在一定的量效关系。

关键词：非酒精性脂肪性肝炎疏肝健脾方药核转录因子-κB 原代肝细胞

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肥大细胞Toll样受体4在人慢性牙周炎牙龈组织中的表达

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中国病理生理杂志 2013年第8期29卷 1476-1480页

作者：蓝田吕芳丽李娟陆达明黄博黄世光暨南大学医学院口腔医学系广东广州510632 中山大学医学院寄生虫教研室广东广州510080

目的:观察人慢性牙周炎牙龈组织中肥大细胞Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)的表达,并探讨其在牙周炎发病中的可能作用。方法:将68例自愿接受本研究的牙周炎患者按照牙周炎的病变程度分成3组:轻度牙周炎组(23例)、重度牙周炎组(2... 详细信息

目的:观察人慢性牙周炎牙龈组织中肥大细胞Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)的表达,并探讨其在牙周炎发病中的可能作用。方法:将68例自愿接受本研究的牙周炎患者按照牙周炎的病变程度分成3组:轻度牙周炎组(23例)、重度牙周炎组(25例)和正常对照组(20例)。取牙龈组织标本,4%中性甲醛液固定48 h以上。制作牙龈组织的连续切片,HE染色,光学显微镜下观察各实验组牙龈组织的组织学改变;免疫组化法染色观察各实验组牙龈组织TLR4的表达;免疫荧光双染色法观察TLR4在肥大细胞中的表达。结果:(1)与正常对照组相比,各慢性牙周炎组牙龈组织中TLR4的表达及TLR4在肥大细胞中的表达均显著升高(P<0.05);(2)重度牙周炎组牙龈组织中TLR4表达的数量及TLR4在肥大细胞中的表达明显高于轻度牙周炎组(P<0.05)。结论:TLR4在牙龈组织中的表达及在肥大细胞中的表达量随着牙周炎的炎症程度加重而增加,提示TLR4,特别是肥大细胞TLR4可能在慢性牙周炎的发病和疾病进程中起着重要的作用。

关键词：牙周炎肥大细胞 Toll样受体4

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乙型肝炎病毒对肝内TGF-β_1/Smads信号通路的作用

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中国病理生理杂志 2013年第12期29卷 2218-2222页

作者：张香梅乐晓华陈培芬苟继周孙炎钟荀珍周亚敏刘晓玲陈青山深圳市第三人民医院病理科广东深圳518112 暨南大学医学院流行病学教研室广东广州510632

目的:探讨乙型肝炎病毒(HBV)对肝内TGF-β1蛋白表达及Smads信号通路的作用,为制定慢性乙肝肝纤维化临床治疗策略提供理论依据。方法:(1)运用免疫组化PV-6000法检测对照组和慢性乙肝组肝组织中TGF-β1、HBsAg和HBcAg的表达,并采用荧光定... 详细信息

目的:探讨乙型肝炎病毒(HBV)对肝内TGF-β1蛋白表达及Smads信号通路的作用,为制定慢性乙肝肝纤维化临床治疗策略提供理论依据。方法:(1)运用免疫组化PV-6000法检测对照组和慢性乙肝组肝组织中TGF-β1、HBsAg和HBcAg的表达,并采用荧光定量PCR法测定慢性乙肝患者血清HBV DNA含量。(2)应用体外细胞培养技术培养HBV刺激的人肝星状细胞系LX-2细胞,Western blotting方法测定其细胞内TGF-β1、Smad3和Smad7的蛋白表达。结果:(1)慢性乙肝组肝组织内TGF-β1的表达高于对照组(P<0.01);肝内TGF-β1表达水平与血清HBV DNA含量呈正相关(P<0.01),且HBcAg阳性肝组织水平较高(P<0.01)。(2)体外细胞学实验中,HBV刺激组LX-2细胞内TGF-β1和Smad3蛋白含量高于对照组和HBV+抗-TGF-β1组(P<0.01);Smad7蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论:(1)TGF-β1在慢性乙肝患者肝组织中的表达与血清HBV DNA含量及肝内HBcAg的表达有关。(2)在TGF-β1/Smads信号通路中,HBV致纤维化作用机制以Smad3的正性调控为主,Smad7的作用不明显。

关键词：乙型肝炎病毒转化生长因子 β1 Smad蛋白类肝纤维化

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疏肝健脾方对NASH大鼠肝组织IKKβmRNA和蛋白表达的影响

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中国病理生理杂志 2012年第8期28卷 1448-1454页

作者：魏波杨钦河王文晶胡巢凤方梅霞刑会杰张玉佩程少冰王彦平冯高飞何秀敏徐拥建闫海震黄进暨南大学医学院中医系暨南大学医学院病理生理学教研室国家中医药管理局病理生理三级实验室暨南大学医学院实验动物管理中心广东广州510632

目的:探讨疏肝健脾方对非酒精性脂肪性肝炎(NASH)大鼠肝组织核因子κB(NF-κB)抑制蛋白激酶β(IKKβ)mRNA和蛋白表达的影响。方法:采用高脂饲料喂养建立NASH大鼠实验模型,在施以造模因素的同时各药物干预组大鼠分别灌服疏肝方(柴胡疏肝... 详细信息

目的:探讨疏肝健脾方对非酒精性脂肪性肝炎(NASH)大鼠肝组织核因子κB(NF-κB)抑制蛋白激酶β(IKKβ)mRNA和蛋白表达的影响。方法:采用高脂饲料喂养建立NASH大鼠实验模型,在施以造模因素的同时各药物干预组大鼠分别灌服疏肝方(柴胡疏肝散)、健脾方(参苓白术散)和综合方(柴胡疏肝散和参苓白术散的合方)的高、低剂量进行干预,16周后各组大鼠腹主动脉采血,全自动生化分析仪检测血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)及肝组织TC、TG的含量;ELISA检测血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)及白细胞介素1(IL-1)的水平;HE染色观察肝组织病理变化;实时荧光定量RT-PCR检测肝组织IKKβmRNA的表达水平;Western blotting检测肝组织IKKβ蛋白磷酸化水平的变化。结果:肝组织病理染色提示大鼠NASH造模成功,与正常组比较,模型组大鼠血清TC、LDL-C、肝组织TC、TG及炎症细胞因子TNF-α、IL-1、IL-6水平均显著升高(P<0.01,P<0.05),肝组织IKKβmRNA及其磷酸化蛋白的表达水平均明显升高(P<0.01)。与模型组相比,肝组织TC、TG含量及血清TNF-α的含量以综合方高、低剂量组、健脾方高剂量组及疏肝方高剂量组下降显著(P<0.01,P<0.05);IL-1和IL-6含量均以综合方高剂量组降低显著(P<0.05),IKKβmRNA的表达水平以综合方高组及健脾方高组下调明显(P<0.05),磷酸化IKKβ蛋白的表达水平以健脾方高剂量组及综合方高、低剂量组下降最为显著(P<0.01,P<0.05)。结论:血清炎症细胞因子TNF-α、IL-1和IL-6水平的显著升高、肝组织IKKβmRNA及其磷酸化蛋白的高表达可能参与NASH的发病。降低相关炎症细胞因子的含量、抑制IKKβmRNA及蛋白磷酸化可能是疏肝健脾方抗NASH的重要机制之一。

关键词：非酒精性脂肪性肝炎疏肝健脾方 IκB激酶大鼠

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肥大细胞脱颗粒在牙周炎病理中的作用

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实用口腔医学杂志 2012年第3期28卷 316-319页

作者：潘倩茹吕芳丽黄博陈莹刘曼黄世光暨南大学医学院口腔医学系广州510632 广州中山大学医学院寄生虫教研室

目的:探讨肥大细胞脱颗粒在牙周炎病理中的意义。方法:将自愿接受研究的受试者分为3组:轻度慢性牙周炎组(轻度组,17例)、重度慢性牙周炎组(重度组,18例)、正常对照组(15例)。取牙龈活检组织制作连续切片,HE染色在光镜下观察各组牙周组... 详细信息

目的:探讨肥大细胞脱颗粒在牙周炎病理中的意义。方法:将自愿接受研究的受试者分为3组:轻度慢性牙周炎组(轻度组,17例)、重度慢性牙周炎组(重度组,18例)、正常对照组(15例)。取牙龈活检组织制作连续切片,HE染色在光镜下观察各组牙周组织的组织学改变;甲苯胺蓝染色法观察各组肥大细胞的数量及肥大细胞脱颗粒状况;天狼猩红染色法观察各组牙周组织纤维化的程度。结果:与正常对照组相比,各慢性牙周炎组的牙周组织中肥大细胞显著增多(P<0.01);重度组与轻度组相比较肥大细胞数量和脱颗粒率均明显升高(P<0.01),牙周组织纤维化程度更加严重(P<0.05)。结论:肥大细胞的募集、脱颗粒和纤维化程度与牙周炎的严重程度相关,提示肥大细胞可能在牙周炎的发病和疾病进程中起着重要的作用。

关键词：牙周炎肥大细胞脱颗粒纤维化

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慢性心理应激对大鼠实验性牙周炎及血清乳酸脱氢酶1的影响

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中国病理生理杂志 2012年第5期28卷 924-928页

作者：黄世光王晓歌潘倩茹黄博吕芳丽叶秀华杨云珍郭柳婷练楚文暨南大学医学院口腔医学系广东广州510632 中山大学医学院寄生虫学教研室广东广州510080

目的:通过建立大鼠实验性牙周炎模型,探讨慢性心理应激影响牙周炎的致病机制。方法:清洁级4周龄雌性Wistar大鼠80只,随机分为4组:(1)正常对照组;(2)实验性牙周炎组:用浸有牙周致病菌的丝线结扎左侧上颌第二磨牙牙颈部复制牙周炎模型;(3... 详细信息

目的:通过建立大鼠实验性牙周炎模型,探讨慢性心理应激影响牙周炎的致病机制。方法:清洁级4周龄雌性Wistar大鼠80只,随机分为4组:(1)正常对照组;(2)实验性牙周炎组:用浸有牙周致病菌的丝线结扎左侧上颌第二磨牙牙颈部复制牙周炎模型;(3)单纯应激组:牙周不作特殊处理,给予应激刺激;(4)牙周炎+应激组:按上法复制牙周炎模型,并予以应激刺激。各组动物分别于实验后第2、4、6和8周分批处死,各时点每组处死动物5只。大鼠处死前尾静脉采血检测血糖浓度、心脏采血检测血清促肾上腺皮质激素(ACTH)、乳酸脱氢酶(LDH)及其同工酶LDH1。制作组织切片,HE染色观察大鼠左侧上颌第二磨牙牙周组织的炎性变化及牙槽骨的吸收情况。结果:(1)单纯应激组及牙周炎+应激组血糖及血清ACTH水平在2和4周时明显高于正常对照组和实验性牙周炎组(P<0.01),牙周炎+应激组在6和8周时血糖及血清ACTH水平仍较正常对照组和实验性牙周炎组高(P<0.01);(2)牙周炎+应激组血清LDH水平在各时点明显高于正常对照组和实验性牙周炎组(P<0.01),牙周炎+应激组血清LDH1水平在各时点均明显低于正常对照组和实验性牙周炎组(P<0.01);(3)组织学观察显示与正常对照组和单纯应激组牙龈及牙槽骨均无明显改变;牙周炎+应激组牙龈组织的炎症及牙槽骨破坏程度在4、6和8周时明显高于牙周炎组。结论:应激刺激可能通过降低牙周组织氧代谢水平加重大鼠牙周炎症程度。

关键词：牙周炎模型,动物心理应激乳酸脱氢酶

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在《口腔病理学》教学中开展混合教学模式的调查分析

在《口腔病理学》教学中开展混合教学模式的调查分析

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第八届全国口腔医学教育学术研讨会

作者：谢思明沈丽佳谢立群暨南大学医学院口腔组织病理学教研室

混合教学模式是把传统学习方式的优势和e-Learning(即数字化或网络化学习)的优势结合起来的一种教学方法。基于《口腔病理学》这门校级精品课程和省级精品课程,我们对暨南大学口腔医学系2007、2008年级的学生进行了混合教学模式的探索,... 详细信息

混合教学模式是把传统学习方式的优势和e-Learning(即数字化或网络化学习)的优势结合起来的一种教学方法。基于《口腔病理学》这门校级精品课程和省级精品课程,我们对暨南大学口腔医学系2007、2008年级的学生进行了混合教学模式的探索,在传统的课堂教学的基础上,结合基于网络教学资源利用的研究性学习、探索性学习、以问题为中心的讨论式学习、案例教学等多种形式的混合教学方法。在这些学生学习完成后进行调查研究,分析混合教学模式的效果,以期为进一步优化这种混合教学模式提供理论依据和支持。

关键词：混合教学模式blending learning 口腔病理学调查报告

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在《口腔病理学》教学中开展混合教学模式的调查分析

在《口腔病理学》教学中开展混合教学模式的调查分析

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第八届全国口腔医学教育学术会

作者：谢思明沈丽佳谢立群暨南大学医学院口腔组织病理学教研室广东广州 510632

混合教学模式是把传统学习方式的优势和e-Learning (即数字化或网络化学习)的优势结合起来的一种教学方法。基于《口腔病理学》这门校级精品课程和省级精品课程，我们对暨南大学口腔医学系2007、2008 年级的学生进行了混合教学模式的探... 详细信息

混合教学模式是把传统学习方式的优势和e-Learning (即数字化或网络化学习)的优势结合起来的一种教学方法。基于《口腔病理学》这门校级精品课程和省级精品课程，我们对暨南大学口腔医学系2007、2008 年级的学生进行了混合教学模式的探索，在传统的课堂教学的基础上，结合基于网络教学资源利用的研究性学习、探索性学习、以问题为中心的讨论式学习、案例教学等多种形式的混合教学方法。在这些学生学习完成后进行调查研究，分析混合教学模式的效果，以期为进一步优化这种混合教学模式提供理论依据和支持。

关键词：混合教学模式blending learning 口腔病理学调查报告

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口腔扁平苔藓局部浸润淋巴细胞颗粒酶B和穿孔素蛋白表达与上皮细胞凋亡的关系

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第三军医大学学报 2011年第18期33卷 1943-1946页

作者：雷蕾詹丽华谭为霞周序珑暨南大学医学院口腔系广州510632 暨南大学第一附属医院口腔内科广州510632 深圳市瑞尔齿科门诊部广东深圳518008 暨南大学医学院病理学教研室广州510632

目的检测口腔扁平苔藓(oral lichen planus,OLP)上皮细胞凋亡状况,观察颗粒酶B、穿孔素在OLP固有层浸润淋巴细胞中的蛋白表达,探讨细胞毒作用对OLP上皮细胞凋亡的影响。方法采用原位缺口末端DNA标记技术,定位检测OLP上皮细胞凋亡情况;... 详细信息

目的检测口腔扁平苔藓(oral lichen planus,OLP)上皮细胞凋亡状况,观察颗粒酶B、穿孔素在OLP固有层浸润淋巴细胞中的蛋白表达,探讨细胞毒作用对OLP上皮细胞凋亡的影响。方法采用原位缺口末端DNA标记技术,定位检测OLP上皮细胞凋亡情况;分别使用免疫组化法检测颗粒酶B和穿孔素在组织总淋巴细胞以及CD8+细胞中的表达,以健康口腔黏膜组织(NOM)作对照。结果与NOM相比,OLP上皮细胞凋亡显著增加(P=0.037);OLP淋巴细胞中颗粒酶B、穿孔素表达明显增强(P值分别为0.016和0.012),其部分阳性细胞接近上皮基底层。OLP中CD8+/颗粒酶B+细胞双阳性表达和CD8+/穿孔素+细胞双阳性表达较NOM明显升高(P值分别为0.043和0.032)。OLP上皮细胞凋亡与淋巴细胞颗粒酶B和穿孔素表达成正相关(r=0.56,P=0.038;r=0.42,P=0.041)。结论 OLP浸润淋巴细胞包括CD8+T细胞中颗粒酶B、穿孔素表达增强,提示OLP淋巴细胞可能以颗粒酶B、穿孔素作为细胞毒介质攻击口腔上皮细胞引起其凋亡。

关键词：口腔扁平苔藓 T淋巴细胞颗粒酶B 穿孔素细胞凋亡

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