检索结果-内蒙古大学图书馆

暨南大学学报（自然科学与医学版） 2005年第4期26卷 495-501页

作者：李君武江静许小亮暨南大学医学院微生物免疫学教研室广东广州510632

目的:进行丙型肝炎病毒非结构蛋白3基因真核表达载体的构建,并分析其在体外培养的人肝细胞中的表达。方法:从含有丙肝病毒全长基因的重组质粒pBRTM/HCV1-3011表达载体中PCR扩增出HCV NS3基因片段,将其与表达载体pcDNA3.1(-)重组,得到重... 详细信息

目的:进行丙型肝炎病毒非结构蛋白3基因真核表达载体的构建,并分析其在体外培养的人肝细胞中的表达。方法:从含有丙肝病毒全长基因的重组质粒pBRTM/HCV1-3011表达载体中PCR扩增出HCV NS3基因片段,将其与表达载体pcDNA3.1(-)重组,得到重组的真核表达载体pcDNA3.1(-)/NS3。然后采用阳离子多聚体将其转染人肝细胞QSG7701,以免疫组织化学SP法及Western Blotting检测HCV NS3蛋白的表达。结果:所得到的NS3片段正确,序列正确,所构建的真核质粒成功转染QSG7701细胞并表达蛋白,表达的NS3蛋白相对分子质量为70 000。结论:成功构建了丙型肝炎病毒非结构蛋白3基因的真核表达载体pcDNA3.1(-)/NS3,并且该载体在体外培养的人肝细胞中能有效表达特异性HCV NS3蛋白。

关键词：丙型肝炎病毒非结构蛋白3 蛋白表达

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玉米特异启动子驱动下结核hsp65基因植物表达载体构建及鉴定

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玉米科学 2009年第5期17卷 14-18页

作者：李君武黄清华王珊刘艳黄泽棋宋东暨南大学医学院微生物免疫学教研室广州510632

以本实验室构建的pEGHLE为模板经聚合酶链反应(PCR)扩增出Hsp65基因,连接到含有玉米特异性启动子globulin-1的pCR2.1载体上;将globulin1-Hsp65联合片断切下连到含有抗除草剂基因bar的pCAMBIA1300载体中;电击法将重组质粒转化到农杆菌LBA... 详细信息

以本实验室构建的pEGHLE为模板经聚合酶链反应(PCR)扩增出Hsp65基因,连接到含有玉米特异性启动子globulin-1的pCR2.1载体上;将globulin1-Hsp65联合片断切下连到含有抗除草剂基因bar的pCAMBIA1300载体中;电击法将重组质粒转化到农杆菌LBA4404中。结果表明:成功构建了pC1300GHsp65质粒,酶切鉴定得到3Kb和8.6Kb两条带,测序分析表明,克隆的Hsp65与NCBI上公布序列一致;成功转化到农杆菌中,酶切从农杆菌中所提的质粒条带大小与预期结果相符合。结果显示,已成功构建和转化了pC1300GHsp65质粒,为成功研制利用转基因植物生产抗结核口服疫苗奠定了基础。

关键词：玉米特异启动子基因表达载体构建

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人GM-CSF基因真核表达载体构建与表达

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中山大学学报（医学科学版） 2007年第5期28卷 590-593,597页

作者：卢燕茹江振友暨南大学医学院微生物学与免疫学教研室广东广州510632

【目的】构建以基因佐剂hGM-CSF基因为基础的真核表达质粒pIGM-CSF,并在宫颈癌细胞HeLa中表达与鉴定。【方法】采用聚合酶链反应从载体pORF-hGM-CSF中,扩增出hGM-CSF基因,克隆到双顺反子真核表达载体pIRES的多克隆位点B(MCSB)中,构建pIG... 详细信息

【目的】构建以基因佐剂hGM-CSF基因为基础的真核表达质粒pIGM-CSF,并在宫颈癌细胞HeLa中表达与鉴定。【方法】采用聚合酶链反应从载体pORF-hGM-CSF中,扩增出hGM-CSF基因,克隆到双顺反子真核表达载体pIRES的多克隆位点B(MCSB)中,构建pIGM-CSF真核表达载体。然后采用脂质体转染法将其转染HeLa细胞,用RT-PCR在RNA水平和ELISA在蛋白水平检测其在真核细胞中的表达。【结果】所克隆hGM-CSF基因片段经测序完全正确;重组质粒转染Hela细胞后,检测有hGM-CSF表达。【结论】成功构建含基因佐剂真核表达载体pIGM-CSF,并在宫颈癌细胞中能有效表达,为继续克隆目的抗原从而构建双顺反子真核表达质粒奠定了基础。

关键词：真核表达载体 hGM-CSF 基因佐剂双顺反子

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ATP及其衍生物影响不死化人成纤维细胞增殖的实验研究

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中国病理生理杂志 2001年第2期17卷 150-153页

作者：李君武暨南大学医学院微生物学免疫学教研室广东广州510632

目的 :探讨ATP及其衍生物对不死化人成纤维细胞的增殖抑制作用 ,并通过P2 嘌呤能受体从而了解ATP发挥细胞毒性作用的途径。方法 :使用ATP及其衍生物ATP -Na2 ,ATP -Mg ,ADP ,MeATP ,BzATP ,ATPγS ,2 -MeSATP和UTP在不同条件培养KMST - ... 详细信息

目的 :探讨ATP及其衍生物对不死化人成纤维细胞的增殖抑制作用 ,并通过P2 嘌呤能受体从而了解ATP发挥细胞毒性作用的途径。方法 :使用ATP及其衍生物ATP -Na2 ,ATP -Mg ,ADP ,MeATP ,BzATP ,ATPγS ,2 -MeSATP和UTP在不同条件培养KMST - 6人不死化成纤维细胞 ,检测细胞增殖状况 ,Westernblot分析、流式细胞仪检测细胞增殖周期以及Hoechst 3 3 2 5 8特异性细胞染色和DNA电泳检测细胞凋亡。结果 :ATP及其衍生物对细胞增殖抑制作用的程度依次为 :ATP =ADP >ATPγS >MeATP =BzATP ;而 2 -MeSATP和UTP却未显示任何细胞毒性作用 ;0 4mmol/LATP培养 4 8h时P2 1表达未见增高 ,细胞增殖停止于G1/S期 ;1mmol/LATP培养 4 8h时未发现细胞凋亡。结论 :通过与P2X或P2Y嘌呤能受体相结合 ,ATP激活细胞内某些信号传导发挥细胞增殖的抑制作用 ;ATP引起增殖抑制不是通过细胞凋亡或者是周期素 /CDK激酶抑制剂P2 1所致。

关键词：腺苷三磷酸细胞受体嘌呤能

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枸骨叶两种溶媒萃取物抑制念珠菌机制探讨

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中国病理生理杂志 2005年第8期21卷 1653-1654页

作者：林晨张晶沈伟哉岑颖洲江振友暨南大学医学院微生物学与免疫学教研室广东广州510632

目的:本草纲目记载,枸骨叶味苦,微涩,性寒.有清热解毒、止渴生津的功能.本实验旨在探讨枸骨叶极性萃取物成分对病原性念珠菌的抑菌活性及作用机制,以期能开发对临床有实用价值的天然抗真菌药物.

关键词：光滑念珠菌枸骨叶萃取物机制探讨抑制溶媒透射电镜分析稀释浓度阴性对照

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肾素-血管紧张素系统基因多态性与原发性高血压的相关性研究现状

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广东医学 2005年第9期26卷 1301-1302页

作者：王志鹏林绍强暨南大学医学院微生物免疫学教研室广州510632

原发性高血压（essential hypertension，EH）是一种与环境因素相互作用的多基因遗传病，遗传因素在EH发病中所起的作用占到30％．50％。肾素-血管紧张素系统（reninangiotensin system，RAS）是调节血压和血容量的激素系统，也是一个... 详细信息

原发性高血压（essential hypertension，EH）是一种与环境因素相互作用的多基因遗传病，遗传因素在EH发病中所起的作用占到30％．50％。肾素-血管紧张素系统（reninangiotensin system，RAS）是调节血压和血容量的激素系统，也是一个复杂的血压调节反馈系统，在EH发生、发展中起重要作用；其编码基因是EH候选易感基因之一，研究最为广泛。各国学者通过比较EH人群和正常血压人群RAS基因状态差异，发现个体间可因携带的RAS等位基因不一致而对EH易感程度不同。本文就其研究现状综述如下。[第一段]

关键词：肾素-血管紧张素系统基因多态性原发性高血压基因频率氨基酸

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丙型肝炎病毒NS3蛋白生物学功能研究进展

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广东医学 2005年第7期26卷 1006-1007页

作者：王志鹏暨南大学医学院微生物与免疫学教研室广州510632

丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)是一种严重威胁人类生命健康的微生物,持续感染可导致慢性丙型肝炎,并可发展为肝硬化和肝细胞癌.HCV非结构蛋白NS3在HCV复制和宿主细胞负面调控中发挥重要作用.因其具有的生物学功能,已成为HCV研究... 详细信息

丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)是一种严重威胁人类生命健康的微生物,持续感染可导致慢性丙型肝炎,并可发展为肝硬化和肝细胞癌.HCV非结构蛋白NS3在HCV复制和宿主细胞负面调控中发挥重要作用.因其具有的生物学功能,已成为HCV研究热点.本文就NS3主要生物学功能研究进展综述如下.

关键词：丙型肝炎病毒功能研究进展 NS3蛋白非结构蛋白NS3 慢性丙型肝炎 HCV复制生物学功能生命健康持续感染肝细胞癌宿主细胞研究热点进展综述微生物肝硬化

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结核分枝杆菌融合基因Hsp65-Esat6荧光表达载体的构建及表达(英文)

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中国组织工程研究与临床康复 2007年第29期11卷 5836-5839页

作者：李君武黄泽棋姚翠婵周曙光李晓栋宋东黄清华暨南大学医学院微生物免疫学教研室广东省广州市510632

背景:Hsp65和Esat6之间的Linker编码一段疏水性多肽,其具有良好的柔顺性和折叠性,有利于翻译成融合蛋白时融合蛋白之间的空间折叠,使融合蛋白保持与两个天然蛋白空间构象的一致性,从而形成正确的构型而提高它们的免疫原性。目的:从结核... 详细信息

背景:Hsp65和Esat6之间的Linker编码一段疏水性多肽,其具有良好的柔顺性和折叠性,有利于翻译成融合蛋白时融合蛋白之间的空间折叠,使融合蛋白保持与两个天然蛋白空间构象的一致性,从而形成正确的构型而提高它们的免疫原性。目的:从结核分枝杆菌(MTB)H37Rv株中克隆目的融合基因Hsp65-Esat6,与报告基因EGFP一起构建真核表达载体pEGHsp65-Esat6,通过免疫组织化学法分别检测细胞中Hsp65蛋白和ESAT-6蛋白的表达。设计:单一样本实验。单位:暨南大学医学院微生物免疫学教研室。材料:质粒pVAE由华南理工大学曹以诚教授惠赠,MTBH37Rv株、大肠杆菌DH5α、表达质粒pEGFP-C1为本实验室保存,Hela细胞由本教研室胡萍博士惠赠。方法:实验于2005-09/2006-06在暨南大学医学院微生物与免疫教研室和中心实验室完成。以MTB全基因组为模板经聚合酶链反应(PCR)扩增出Hsp65基因(不含终止子),与pEGFP-C1载体进行重组,构建pEGHsp65(不含终止子)重组质粒。再以pVAE质粒为模板,经PCR扩增出Linker-Esat6基因,与pEGHsp65质粒(不含终止子)进行重组,构建真核表达载体pEGHsp65-Esat6。通过限制性内切酶图谱测定pEGHsp65-Esat6融合质粒大小;对质粒pEGFP-C1的多克隆位点内的DNA序列进行序列分析鉴定;将质粒转染Hela细胞,观察荧光的表达情况及转染效率,通过免疫组织化学法分别检测细胞中Hsp65蛋白和ESAT-6蛋白的表达。主要观察指标:①pEGHsp65-Esat6融合质粒大小。②pEGFP-C1DNA序列分析。③转染后Hela细胞的荧光表达情况。④细胞中Hsp65蛋白和ESAT-6蛋白的免疫组织化学结果。结果:①质粒pEGFP-C1的大小约为4.7kb,而pEGHsp65为6.4kb,融合质粒pEGHsp65-Esat6约为6.7kb,在琼脂糖凝胶电泳图上可以分辨出泳动速度的差异。②结果与结核分支杆菌H37Rv株的Hsp65和Esat6的基因序列完全相同。③转染融合质粒24h后,使用共聚焦显微镜可观察到有部分细胞表达荧光蛋白,说明融合质粒转染成功,转染率约为30%。未转染的Hela细胞则无荧光表达。④通过免疫组织化学法证实融合质粒在Hela细胞内能正确表达出具有生物学活性的Hsp65与ESAT-6蛋白。结论:采用Hsp65和Esat6搭配作为免疫原,成功克隆并构建了结核分枝杆菌融合基因Hsp65-Esat6荧光真核表达质粒。

关键词：结核分枝杆菌 Hsp65 Esat6 融合基因 DNA疫苗

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gp120mAb对gp120抑制大鼠海马脑片CA_1区LTP作用的研究

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中国免疫学杂志 2005年第5期21卷 355-358页

作者：董军江振友暨南大学医学院病理生理教研室广州510632 暨南大学医学院微生物和免疫学教研室广州510632

目的:探讨人类免疫缺陷病毒Ⅰ型(HIV 1)的包膜糖蛋白gp12 0特异抗体gp12 0mAb对gp12 0引起大鼠海马脑片CA1区的突触传递及可塑性变化的影响。方法:应用离体脑片记录技术,记录大鼠海马CA1区的兴奋性突触后电位(EPSP) ,研究gp12 0mAb对gp1... 详细信息

目的:探讨人类免疫缺陷病毒Ⅰ型(HIV 1)的包膜糖蛋白gp12 0特异抗体gp12 0mAb对gp12 0引起大鼠海马脑片CA1区的突触传递及可塑性变化的影响。方法:应用离体脑片记录技术,记录大鼠海马CA1区的兴奋性突触后电位(EPSP) ,研究gp12 0mAb对gp12 0抑制高频电刺激Schaffer侧支引起的鼠海马长时程增强效应(LTP)作用的影响。结果:gp12 0对高频电刺激(HFS ,10 0Hz ,10 0 0ms×2 ,串间隔2 0秒,共2次)Schaffer侧支引起的大鼠海马CA1区LTP产生抑制作用,而对其基础EPSP没有影响。用浓度为2 0 0pmol/L的gp12 0灌流脑片,可引起LTP的维持发生抑制。这种抑制作用可被gp12 0特异抗体gp12 0mAb( 5 0ng/ml)所拮抗。结论:gp12 0mAb可能是通过拮抗gp12 0抑制海马CA1区的LTP诱发和维持而参与艾滋病痴呆(HIV 1associateddementia ,HAD)

关键词：人类免疫缺陷病毒Ⅰ型 gp120特异抗体长时程增强海马脑片

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小鼠血浆TNF-α、NO、NOS水平与脑不对称的关系

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生理学报 2002年第6期54卷 513-518页

作者：付清玲李康生汕头大学医学院微生物学与免疫学教研室汕头515031

研究脑不对称对单核巨噬细胞 (Mo/MФ)的影响。选用雌性 4周龄Balb/c健康小鼠 ,用伸爪取食法根据右利分将小鼠区分为左利、右利和双利三组。细菌脂多糖 (lipopolysaccharide ,LPS)腹腔注射两小时后取血浆检测肿瘤坏死因子 α(TNF α)... 详细信息

研究脑不对称对单核巨噬细胞 (Mo/MФ)的影响。选用雌性 4周龄Balb/c健康小鼠 ,用伸爪取食法根据右利分将小鼠区分为左利、右利和双利三组。细菌脂多糖 (lipopolysaccharide ,LPS)腹腔注射两小时后取血浆检测肿瘤坏死因子 α(TNF α)、一氧化氮 (NO)、一氧化氮合酶 (NOS)水平。结果显示 :( 1)各组间血浆TNF α和NO、NOS水平的变化 :正常生理组NO水平为双利组高于左利组 (P <0 0 5 ) ;LPS刺激后双利组和右利组血浆TNF α水平高于左利组 (P <0 0 5 ) ,NO水平为双利组高于右利组 (P <0 0 1)和左利组 (P <0 0 5 ) ,NOS水平在三组小鼠间无明显差别。 ( 2 )血浆TNF α、NO、NOS与右利分有一定的相关关系 ,各项指标随右利分的变化趋势多为双利>右利和左利 ,形成一以双利分段 (右利分为 2 1～ 2 9)为高峰的弓形向上的曲线 ,随右利分的增加或减少曲线向两侧延伸和下降。上述结果提示 ,脑不对称小鼠单核 /巨噬细胞功能存在差异。脑不对称对免疫功能的影响程度与右利分有关。

关键词：小鼠血浆TNF-α NO NOS 脑不对称关系免疫调控肿瘤坏死因子α 一氧化氮一氧化氮合酶巨噬细胞

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