检索结果-内蒙古大学图书馆

中国组织工程研究 2008年第24期12卷 4705-4708页

作者：王珊珊谢颖锋周曙光刘玥唐小龙宋东暨南大学医学院微生物学与免疫学教研室安徽大学安徽省生态工程与生物技术重点实验室暨南大学医学院微生物学与免疫学教研室广东省广州市510632 安徽大学安徽省生态工程与生物技术重点实验室安徽省合肥市广东省广州市

目的:构建pIHsp65-Esat6双顺反子真核表达质粒并在真核细胞中表达,以进一步了解两者共同表达在体内的免疫保护力。方法:实验于2006-12/2007-05在暨南大学医学院微生物学与免疫学教研室完成。以结核分枝杆菌H37Rv株基因组为模板经聚合酶... 详细信息

目的:构建pIHsp65-Esat6双顺反子真核表达质粒并在真核细胞中表达,以进一步了解两者共同表达在体内的免疫保护力。方法:实验于2006-12/2007-05在暨南大学医学院微生物学与免疫学教研室完成。以结核分枝杆菌H37Rv株基因组为模板经聚合酶链反应分别扩增出Hsp65和Esat-6基因,分别克隆到真核表达载体pIRES的多克隆位点A和B中,构建pIHsp65-Esat6真核表达质粒,并转染HepG-2细胞中表达和检测。结果:酶切鉴定提示插入的基因片段分别为1.64kb和0.31kb,测序分析表明克隆的Hsp65和Esat6序列与GenBank上公布序列完全一致;反转录-聚合酶链反应分别检测到Hsp65和Esat-6两基因mRNA转录,表达的蛋白Mr分别为65000和10500。结论:成功构建和表达pIHsp65-Esat6质粒。

关键词： DNA疫苗结核分枝杆菌 Hsp65 Esat-6

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Jukart T细胞经超抗原刺激的原子力显微镜研究

Jukart T细胞经超抗原刺激的原子力显微镜研究

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第十届全国扫描隧道显微学学术会议

作者：龚超群郜世隽蔡继业胡明铅董世松暨南大学生命科学技术学院化学系广州 510632 暨南大学医学院微生物学免疫学教研室广州510632

本研究利用原子力显微镜分别对静息Jukart T细胞和经超抗原(SEA)刺激15min,30min,1h,后的Jukart T细胞进行了细胞全貌和细胞表面超微结构成像和探测研究,以期对Jukart T细胞形态结构和细胞功能之间的关系有进一步的了解。结果发现：与... 详细信息

本研究利用原子力显微镜分别对静息Jukart T细胞和经超抗原(SEA)刺激15min,30min,1h,后的Jukart T细胞进行了细胞全貌和细胞表面超微结构成像和探测研究,以期对Jukart T细胞形态结构和细胞功能之间的关系有进一步的了解。结果发现：与静息的JukartT细胞相比,随着超抗原刺激时间的延长,Jukart T细胞形貌和细胞膜发生明显变化,其超微结构也趋复杂。经SEA刺激后的细胞高低差Rp-v、均方根粗糙度Rq、平均粗糙度Ra、平均高度Z4个几何参数值均明显发生改变。对Jukart T细胞的表面超微结构,细胞膜结构的改变和分化的研究对于更深入的了解T细胞活化与免疫信号的传递,阐明其免疫过程的作用机制具有重要的意义。

关键词：原子力显微镜超抗原 Jukan T细胞

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乳腺癌组织中HPV 16E6和E7的检测

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现代检验医学杂志 2008年第1期23卷 36-38页

作者：何谦张淑群楚雍烈赵丽华王香玲西安交通大学医学院第二附属医院检验科西安710004 西安交通大学医学院第二附属医院肿瘤科西安710004 西安交通大学医学院免疫和微生物教研室西安710061

目的检测乳腺癌组织中人乳头状瘤病毒(human papillom avirus,HPV)16E6和E7基因。方法采用聚合酶链反应法(PCR)检测40例乳腺癌和20例正常乳腺组织中HPV16E6和E7。结果40例乳腺癌中HPV16E6和E7基因的检出率分别为60%(24/40)和55%(22/40)... 详细信息

目的检测乳腺癌组织中人乳头状瘤病毒(human papillom avirus,HPV)16E6和E7基因。方法采用聚合酶链反应法(PCR)检测40例乳腺癌和20例正常乳腺组织中HPV16E6和E7。结果40例乳腺癌中HPV16E6和E7基因的检出率分别为60%(24/40)和55%(22/40),20例正常乳腺组织中HPV16E6和E7检出率分别为5%(1/20)和5%(1/20),两者均存在显著性差异(P<0.05)。乳腺癌中HPV16E6和E7基因的检出率在患者不同年龄、肿块大小、雌孕激素受体水平和淋巴结转移中均无显著性差异(P>0.05)。结论E6和E7基因共存于HPV16感染的乳腺癌中,HPV16可能是乳腺癌发病的病因学因素之一。

关键词：人乳头状瘤病毒16 乳腺癌 E6 E7

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融合蛋白FADDdel-GFP对死亡受体介导的胰岛细胞凋亡的影响

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中国免疫学杂志 2007年第4期23卷 296-299,305页

作者：胡萍李君武叶嗣颖林绍强李小兰韦静暨南大学医学院微生物和免疫学教研室广州510632

目的研究融合蛋白FADDdel-GFP对死亡受体介导的细胞凋亡信号的生物学效应,以探讨通过基因修饰靶细胞对1型糖尿病的影响。方法用脂质体将融合基因pFADDdel-GFP导入胰岛细胞株NIT,通过细胞RT-PCR和荧光显微镜检测其表达,采用FACS检测抗-Fa... 详细信息

目的研究融合蛋白FADDdel-GFP对死亡受体介导的细胞凋亡信号的生物学效应,以探讨通过基因修饰靶细胞对1型糖尿病的影响。方法用脂质体将融合基因pFADDdel-GFP导入胰岛细胞株NIT,通过细胞RT-PCR和荧光显微镜检测其表达,采用FACS检测抗-Fas抗体诱导的胰岛细胞株的细胞毒效应。结果转染重组子pFADDdel-GFP的NITf-g细胞可见绿色荧光蛋白表达;NITf-g细胞对抗-Fas诱导的细胞损伤率为10.16%,细胞内的Caspase-3的活性为12.33%,均明显低于对照组(P<0.05)。结论成功建立了稳定表达FADDdel-GFP的胰岛细胞株;FADDdel-GFP可有效抑制死亡受体介导的细胞内凋亡信号传导。

关键词： FADD Caspase-3 凋亡 1型糖尿病

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登革病毒感染对人血管内皮细胞PGIS表达及PGI_2分泌的影响

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细胞与分子免疫学杂志 2007年第1期23卷 48-51页

作者：江振友肖瑞暨南大学医学院微生物学与免疫学教研室广东广州510632

目的:研究登革病毒感染对人血管内皮细胞分泌血管活性物质前列环素(PGI2)的影响,以了解登革出血热/登革休克综合征(DHF/DSS)的发病机制。方法:用登革病毒Ⅱ型感染人脐静脉内皮细胞(HUVEC),于感染后6、12、24、48、72、96h,分别收集病毒... 详细信息

目的:研究登革病毒感染对人血管内皮细胞分泌血管活性物质前列环素(PGI2)的影响,以了解登革出血热/登革休克综合征(DHF/DSS)的发病机制。方法:用登革病毒Ⅱ型感染人脐静脉内皮细胞(HUVEC),于感染后6、12、24、48、72、96h,分别收集病毒感染的HUVEC,用RT-PCR检测细胞内前列环素合酶(PGIS)mRNA的水平;分别收集病毒感染的上清液,用放射免疫检测法测定PGI2的含量。结果:登革病毒感染可使PGISmRNA的水平增高,导致HUVEC分泌PGI2的量明显升高。在病毒感染后48、72、96h,与对照组比较HUVEC表达PGISmRNA的水平和HUVEC分泌PGI2的量明显升高(P<0.05)。结论:DV2感染可显著上调HUVEC中PGISmRNA转录及PGI2的分泌,导致登革病毒所致血管内皮细胞的功能障碍,可能与DHF/DSS的发病机制有关。

关键词：登革病毒血管内皮细胞前列环素合酶前列环素

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融合基因FADDdel-GFP修饰在胰岛细胞自杀效应中的作用

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免疫学杂志 2007年第3期23卷 270-273页

作者：胡萍李君武叶嗣颖季煜华李小兰韦静暨南大学医学院微生物学和免疫学教研室暨南大学组织移植与免疫中心广州510632

目的研究FADDdel-GFP在Fas/FasL介导的胰岛细胞自杀效应中的作用。方法采用DNA转染技术将重组体pFADDdel-GFP导入哺乳动物细胞NIT(鼠胰岛细胞瘤细胞);采用FACS检测细胞因子诱导后NIT细胞的Fas和FasL表达情况及细胞自杀效应;采用active c... 详细信息

目的研究FADDdel-GFP在Fas/FasL介导的胰岛细胞自杀效应中的作用。方法采用DNA转染技术将重组体pFADDdel-GFP导入哺乳动物细胞NIT(鼠胰岛细胞瘤细胞);采用FACS检测细胞因子诱导后NIT细胞的Fas和FasL表达情况及细胞自杀效应;采用active caspase3检测试剂盒检测细胞因子作用前后NIT细胞的caspase-3活性变化。结果NIT细胞表面无Fas和FasL表达,细胞因子可促其表达增加;细胞因子作用后,FADDdel-GFP修饰的NIT细胞的细胞损伤百分率和细胞内caspase3活性明显低于对照组。结论FADDdel-GFP修饰的NIT细胞具有一定的抵抗Fas/FasL途径介导细胞自杀效应的能力。

关键词： Fas相关死亡结构域 Fas FasL 细胞因子

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HCMV pp150抗原基因在蚕豆中的遗传转化及鉴定

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中华微生物学和免疫学杂志 2007年第12期27卷 1150-1154页

作者：严华李国才焦红梅陈红菊扬州大学医学院微生物学和免疫学教研室 225001

目的研制人巨细胞病毒(HCMV)口服疫苗。方法根据HCMV基质磷蛋白PP150基因序列设计引物,PCR法从HCMV AD169株基因组DNA中扩增出编码PP150抗原决定簇区域的基因片段。将Kozak序列插入pp150基因的起始密码子的上游,3′端引入了内质网滞留信... 详细信息

目的研制人巨细胞病毒(HCMV)口服疫苗。方法根据HCMV基质磷蛋白PP150基因序列设计引物,PCR法从HCMV AD169株基因组DNA中扩增出编码PP150抗原决定簇区域的基因片段。将Kozak序列插入pp150基因的起始密码子的上游,3′端引入了内质网滞留信号KDEL序列,将修饰后的基因片段克隆进载体pBI121,构建了带潮霉素(Hyg)选择抗性基因的植物表达载体pCAM- BIA1300/pp150和根癌农杆菌工程菌EHA105;采用叶盘法转化蚕豆,获得了5株抗性植株,通过PCR、Southern blot和RNA dot blot分析鉴定,确认了3株为转基因植株。通过ELISA和Western blot对这3株的蛋白萃取物进行分析,以鉴定其免疫学活性。结果这3株转基因植株表达的PP150蛋白具有免疫原活性。结论这些转基因植株为HCMV口服疫苗的研究提供了条件。

关键词：人巨细胞病毒 pp150 口服疫苗转基因蚕豆

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结核分枝杆菌融合基因Hsp65-Esat6荧光表达载体的构建及表达(英文)

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中国组织工程研究与临床康复 2007年第29期11卷 5836-5839页

作者：李君武黄泽棋姚翠婵周曙光李晓栋宋东黄清华暨南大学医学院微生物免疫学教研室广东省广州市510632

背景:Hsp65和Esat6之间的Linker编码一段疏水性多肽,其具有良好的柔顺性和折叠性,有利于翻译成融合蛋白时融合蛋白之间的空间折叠,使融合蛋白保持与两个天然蛋白空间构象的一致性,从而形成正确的构型而提高它们的免疫原性。目的:从结核... 详细信息

背景:Hsp65和Esat6之间的Linker编码一段疏水性多肽,其具有良好的柔顺性和折叠性,有利于翻译成融合蛋白时融合蛋白之间的空间折叠,使融合蛋白保持与两个天然蛋白空间构象的一致性,从而形成正确的构型而提高它们的免疫原性。目的:从结核分枝杆菌(MTB)H37Rv株中克隆目的融合基因Hsp65-Esat6,与报告基因EGFP一起构建真核表达载体pEGHsp65-Esat6,通过免疫组织化学法分别检测细胞中Hsp65蛋白和ESAT-6蛋白的表达。设计:单一样本实验。单位:暨南大学医学院微生物免疫学教研室。材料:质粒pVAE由华南理工大学曹以诚教授惠赠,MTBH37Rv株、大肠杆菌DH5α、表达质粒pEGFP-C1为本实验室保存,Hela细胞由本教研室胡萍博士惠赠。方法:实验于2005-09/2006-06在暨南大学医学院微生物与免疫教研室和中心实验室完成。以MTB全基因组为模板经聚合酶链反应(PCR)扩增出Hsp65基因(不含终止子),与pEGFP-C1载体进行重组,构建pEGHsp65(不含终止子)重组质粒。再以pVAE质粒为模板,经PCR扩增出Linker-Esat6基因,与pEGHsp65质粒(不含终止子)进行重组,构建真核表达载体pEGHsp65-Esat6。通过限制性内切酶图谱测定pEGHsp65-Esat6融合质粒大小;对质粒pEGFP-C1的多克隆位点内的DNA序列进行序列分析鉴定;将质粒转染Hela细胞,观察荧光的表达情况及转染效率,通过免疫组织化学法分别检测细胞中Hsp65蛋白和ESAT-6蛋白的表达。主要观察指标:①pEGHsp65-Esat6融合质粒大小。②pEGFP-C1DNA序列分析。③转染后Hela细胞的荧光表达情况。④细胞中Hsp65蛋白和ESAT-6蛋白的免疫组织化学结果。结果:①质粒pEGFP-C1的大小约为4.7kb,而pEGHsp65为6.4kb,融合质粒pEGHsp65-Esat6约为6.7kb,在琼脂糖凝胶电泳图上可以分辨出泳动速度的差异。②结果与结核分支杆菌H37Rv株的Hsp65和Esat6的基因序列完全相同。③转染融合质粒24h后,使用共聚焦显微镜可观察到有部分细胞表达荧光蛋白,说明融合质粒转染成功,转染率约为30%。未转染的Hela细胞则无荧光表达。④通过免疫组织化学法证实融合质粒在Hela细胞内能正确表达出具有生物学活性的Hsp65与ESAT-6蛋白。结论:采用Hsp65和Esat6搭配作为免疫原,成功克隆并构建了结核分枝杆菌融合基因Hsp65-Esat6荧光真核表达质粒。

关键词：结核分枝杆菌 Hsp65 Esat6 融合基因 DNA疫苗

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人GM-CSF基因真核表达载体构建与表达

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中山大学学报（医学科学版） 2007年第5期28卷 590-593,597页

作者：卢燕茹江振友暨南大学医学院微生物学与免疫学教研室广东广州510632

【目的】构建以基因佐剂hGM-CSF基因为基础的真核表达质粒pIGM-CSF,并在宫颈癌细胞HeLa中表达与鉴定。【方法】采用聚合酶链反应从载体pORF-hGM-CSF中,扩增出hGM-CSF基因,克隆到双顺反子真核表达载体pIRES的多克隆位点B(MCSB)中,构建pIG... 详细信息

【目的】构建以基因佐剂hGM-CSF基因为基础的真核表达质粒pIGM-CSF,并在宫颈癌细胞HeLa中表达与鉴定。【方法】采用聚合酶链反应从载体pORF-hGM-CSF中,扩增出hGM-CSF基因,克隆到双顺反子真核表达载体pIRES的多克隆位点B(MCSB)中,构建pIGM-CSF真核表达载体。然后采用脂质体转染法将其转染HeLa细胞,用RT-PCR在RNA水平和ELISA在蛋白水平检测其在真核细胞中的表达。【结果】所克隆hGM-CSF基因片段经测序完全正确;重组质粒转染Hela细胞后,检测有hGM-CSF表达。【结论】成功构建含基因佐剂真核表达载体pIGM-CSF,并在宫颈癌细胞中能有效表达,为继续克隆目的抗原从而构建双顺反子真核表达质粒奠定了基础。

关键词：真核表达载体 hGM-CSF 基因佐剂双顺反子

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瑶药黄酮化合物体外抗肿瘤活性研究

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中药材 2007年第8期30卷 980-984页

作者：王辉李药兰沈伟哉郭国庆江振友岑颖洲范兆永暨南大学医学院解剖教研室广东广州510632 暨南大学药学院中药及天然产物研究所广东广州510632 暨南大学医学院微生物及免疫教研室广东广州510632 暨南大学化学系广东广州510632

目的:研究瑶族药用植物中黄酮化合物的体外抗肿瘤活性,并初步分析它们的构效关系。方法:采用四甲基偶氮唑盐(MTT)吸收减少实验,测定6个黄酮化合物对2种正常细胞的毒性和对7种肿瘤细胞的增殖抑制作用。结果:6种化合物中,圣草苷、柚皮苷... 详细信息

目的:研究瑶族药用植物中黄酮化合物的体外抗肿瘤活性,并初步分析它们的构效关系。方法:采用四甲基偶氮唑盐(MTT)吸收减少实验,测定6个黄酮化合物对2种正常细胞的毒性和对7种肿瘤细胞的增殖抑制作用。结果:6种化合物中,圣草苷、柚皮苷、槲皮素和槲皮苷对2种正常细胞非洲绿猴肾细胞Vero和人黑色素细胞MC基本不显示出毒性,柚皮素对这2种细胞的毒性都较大,而圣草酚对Vero细胞毒性很小,对MC细胞的毒性非常大。柚皮素有较广谱的抗肿瘤活性,它对7个受试肿瘤细胞都显示出较强的增殖抑制,尤其对乳腺癌细胞MCF-7的半数抑制浓度达到了50μg/m l。在7种肿瘤细胞中,MCF-7和肝癌细胞HepG2对受试黄酮化合物最为敏感,两者都被圣草酚、柚皮素和槲皮素以较低浓度有效地抑制。这些化合物对肿瘤细胞的抑制作用都显示出浓度依赖性。结论:圣草酚、柚皮素和槲皮素对肿瘤细胞的生长有较好的抑制作用,而它们的葡萄糖苷的细胞毒性较小。

关键词：黄酮化合物抗肿瘤 MTT法

来源：评论

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