检索结果-内蒙古大学图书馆

广东医学 2007年第5期28卷 697-699页

作者：李君武黄泽棋姚翠婵林绍强周曙光李晓栋宋东黄清华王珊暨南大学医学院微生物学与免疫学教研室广州510632

目的从质粒pVAE中克隆目的基因Esat6,与hGM-CSF一起构建双顺反子表达载体pIEG,并进行鉴定。方法以质粒pVAE为模板扩增出Esat6基因,与pIRES的MCS A进行重组,构建pIEsat6重组质粒。然后再以pORF-hGM-CSF为模板扩增出hGM-CSF基因,与pIRES... 详细信息

目的从质粒pVAE中克隆目的基因Esat6,与hGM-CSF一起构建双顺反子表达载体pIEG,并进行鉴定。方法以质粒pVAE为模板扩增出Esat6基因,与pIRES的MCS A进行重组,构建pIEsat6重组质粒。然后再以pORF-hGM-CSF为模板扩增出hGM-CSF基因,与pIRES载体的MCS B进行重组,构建pIGM重组质粒,上述两重组质粒经PCR、限制性内切酶图谱及DNA序列测定分析等多种方法进行鉴定后,再通过酶切、连接把hGM-CSF构建于pIEsat6质粒中,形成双顺反子真核表达载体pIEG。结果通过PCR可克隆得到相应大小的产物,酶切鉴定所切下的两片段大小约为0.29 kb和0.47 kb,与预计相符。测序结果与报道一致。结论成功构建结核杆菌Esat6基因与hGM-CSF双顺反子真核表达载体,为进一步研究其结核融合DNA疫苗及其转染DC疫苗原型的免疫保护效果奠定了基础。

关键词：结核分支杆菌 Esat6 hGM—CSF 双顺反子 DNA疫苗

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NOD/SCID小鼠人源化TCR Vβ亚家族T细胞分布与克隆性分析

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免疫学杂志 2007年第4期23卷 376-378,382页

作者：林晨谭玉波白雪陈少华杨力健江振友李扬秋暨南大学医学院微生物学与免疫学教研室广州510632 暨南大学医学院血液病研究所广州510632

目的应用脐血CD34+细胞移植NOD/SCID鼠所建立的人源化SCID模型,分析人源化TCR Vβ亚家族T淋巴细胞分布与克隆性。方法磁珠分选法分离脐血中CD34+细胞,分别经尾静脉输入亚致死剂量照射的NOD/SCID小鼠。第6周处死小鼠提取外周血、骨髓、... 详细信息

目的应用脐血CD34+细胞移植NOD/SCID鼠所建立的人源化SCID模型,分析人源化TCR Vβ亚家族T淋巴细胞分布与克隆性。方法磁珠分选法分离脐血中CD34+细胞,分别经尾静脉输入亚致死剂量照射的NOD/SCID小鼠。第6周处死小鼠提取外周血、骨髓、胸腺的RNA,RT-PCR扩增人TCR Vβ亚家族基因,并用基因扫描进行T细胞克隆性分析。结果采用RT-PCR技术在模型小鼠骨髓中检测到部分人TCR Vβ亚家族基因Vβ1、2、91、3、19。经进一步基因扫描分析,发现部分TCR Vβ亚家族基因Vβ9、13、19呈寡克隆表达。结论在NOD/SCID模型可重建分化成熟的TCR Vβ亚家族T细胞。未能检测到全部人TCR VβT细胞的原因可能与免疫重建不完全或存在移植物抗宿主的反应有关。人源T淋巴细胞在模型鼠骨髓中分化成熟。

关键词：造血干细胞 NOD/SCID鼠 T细胞受体Vβ基因

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登革病毒感染对血管内皮细胞ICAM-1表达的影响

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中华微生物学和免疫学杂志 2007年第12期27卷 1112-1116页

作者：江振友柏志全肖瑞卢业成暨南大学医学院微生物学与免疫学教研室广州510632 暨南大学医学院生理学教研室广州510632 广州医学院临床技能中心广州市第八人民医院

目的探讨登革病毒2型(DV2)体外感染对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)表达细胞间黏附分子(intercellular adhesion molecule,ICAM-1)的影响。方法原代分离培养HUVEC,用生长良好的2、3代细胞进行实验。用CCK-8法测定DV2感染前后的细胞活性。流... 详细信息

目的探讨登革病毒2型(DV2)体外感染对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)表达细胞间黏附分子(intercellular adhesion molecule,ICAM-1)的影响。方法原代分离培养HUVEC,用生长良好的2、3代细胞进行实验。用CCK-8法测定DV2感染前后的细胞活性。流式细胞仪测定DV2感染组和对照组细胞在不同实验时间点细胞表面ICAM-1蛋白表达的情况。采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法和图像定量分析技术分析DV2感染组和对照组在不同实验时间点HUVEC内ICAM-1 mRNA水平。结果病毒感染HUVEC对细胞活力的影响与对照组相比差异无统计学意义。DV2感染HUVEC促进ICAM-1 mRNA转录,DV2组与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。其中,正常状态下HUVEC有一定水平ICAM-1 mRNA转录,但感染后显著增加(P<0.05),24～72 h维持于高水平,与其他时间表达差异有统计学意义(P<0.05)。DV2感染HUVEC,细胞表达ICAM-1蛋白在12～72 h显著升高,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论DV2感染上调HUVEC的ICAM-1 mRNA水平和蛋白表达,从而诱发并加重血管内皮局部的损伤,破坏血管的屏障功能,促进血管渗漏的形成与发展。这可能是DV2感染诱发患者血管通透性升高和血浆渗漏的重要分子机制之一。

关键词：登革病毒人脐静脉内皮细胞细胞间黏附分子

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结核杆菌Hsp65和hGM-CSF双顺反子表达质粒的构建与表达

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第四军医大学学报 2007年第13期28卷 1189-1192页

作者：李君武周曙光黄泽棋李晓栋宋东王珊黄清华暨南大学医学院微生物学与免疫学教研室广东广州510632

目的:应用分子生物学技术,构建pIHsp65GM双顺反子真核表达质粒,并在真核细胞中表达.方法:以结核分枝杆菌H37Rv株基因组为模板经聚合酶链反应(PCR)扩增出Hsp65基因,同时从质粒pORF-hGM-CSF中扩增出基因佐剂hGM-CSF,分别克隆到真核表达载... 详细信息

目的:应用分子生物学技术,构建pIHsp65GM双顺反子真核表达质粒,并在真核细胞中表达.方法:以结核分枝杆菌H37Rv株基因组为模板经聚合酶链反应(PCR)扩增出Hsp65基因,同时从质粒pORF-hGM-CSF中扩增出基因佐剂hGM-CSF,分别克隆到真核表达载体pIRES的多克隆位点A(MCSA)和B(MCSB)中,构建pIHsp65GM真核表达质粒,并转染HepG-2细胞中表达和检测.结果:酶切鉴定提示插入的基因片段大小分别为1.64kb和0.47kb,测序分析表明克隆的Hsp65和hGM-CSF序列与GenBank上公布序列完全一致;免疫组织化学方法检测到表达Hsp65的阳性细胞;ELISA方法检测到pIHsp65GM转染组细胞培养上清中hGM-CSF的表达,与空载体对照组比较差异有统计学意义(P<0.01).结论:成功构建和表达了pIHsp65GM质粒,为研制优于卡介苗的新型抗结核病DNA疫苗奠定基础.

关键词：结核分枝杆菌热休克蛋白-65 人粒巨噬细胞集落刺激因子双顺反子基因佐剂

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人源化NOD/SCID小鼠免疫细胞的动态变化与鉴定

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中国病理生理杂志 2007年第5期23卷 986-990页

作者：林晨谭玉波白雪陈少华杨力建江振友李扬秋暨南大学医学院微生物学与免疫学教研室广东广州510632 暨南大学医学院血液病研究所广东广州510632

目的:比较脐血干细胞与单个核细胞移植NOD/SCID鼠所建立的人源化SCID模型,分析人源化淋巴细胞重建。方法:磁珠分选法分离脐血中CD34+细胞,淋巴细胞分层液分离脐血单个核细胞,分别经尾静脉输入NOD/SCID小鼠。每隔2周采血至10周,流式细胞... 详细信息

目的:比较脐血干细胞与单个核细胞移植NOD/SCID鼠所建立的人源化SCID模型,分析人源化淋巴细胞重建。方法:磁珠分选法分离脐血中CD34+细胞,淋巴细胞分层液分离脐血单个核细胞,分别经尾静脉输入NOD/SCID小鼠。每隔2周采血至10周,流式细胞术动态检测人源淋巴细胞CD45、CD19、CD3抗原。第10周处死小鼠收集外周血、骨髓、胸腺组织,RT-PCR检测模型鼠组织中人β2M基因及RAG2基因。结果:两种类型细胞移植均可重建人源免疫细胞,人源淋巴细胞表达水平均在第8周达高峰。骨髓中人源淋巴细胞表达水平明显高于外周血。RT-PCR在外周血与骨髓检测到人β2M基因及RAG2基因标志。结论:CD34+细胞移植重建人源化NOD/SCID免疫系统模型效果要好于脐血单个核细胞。人源T淋巴细胞在模型鼠骨髓中分化成熟。

关键词：造血干细胞 NOD/SCID鼠 CD34^+细胞 T淋巴细胞

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NOD/SCID小鼠抗原对脐血T细胞上TCRVβ亚家族基因克隆性的影响

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细胞与分子免疫学杂志 2007年第8期23卷 772-773,777页

作者：林晨白雪谭玉波杨力健陈少华李扬秋暨南大学医学院微生物学与免疫学教研室广东广州510632 暨南大学医学院血液病研究所广东广州510632

目的:了解脐血单个核细胞(MNC)体外与NOD/SCID小鼠抗原共培养后,TCRVβ亚家族T细胞分布和克隆性增殖的特点。方法:将NOD/SCID小鼠外周血MNC、骨髓、胸腺及脾细胞反复冻融3次制成可溶性抗原,分别与Ficoll-Hypaque法分离的脐血MNC共培养。... 详细信息

目的:了解脐血单个核细胞(MNC)体外与NOD/SCID小鼠抗原共培养后,TCRVβ亚家族T细胞分布和克隆性增殖的特点。方法:将NOD/SCID小鼠外周血MNC、骨髓、胸腺及脾细胞反复冻融3次制成可溶性抗原,分别与Ficoll-Hypaque法分离的脐血MNC共培养。第15天和第20天,分别收集细胞提取RNA,用RT-PCR扩增人TCRVβ亚家族基因,并用基因扫描进行T细胞克隆性分析。结果:扩增前脐血T细胞表达大部分Vβ亚家族,经NOD/SCID小鼠抗原诱导后,TCRVβ亚家族T细胞呈限制性表达,某些Vβ亚家族基因(Vβ10、11)呈寡克隆性增殖,而某些Vβ亚家族基因(Vβ2、15、16、19)呈寡克隆表达的趋势。结论:NOD/SCID小鼠抗原可刺激脐血T细胞选择性增殖,提示在建立人源化NOD/SCID小鼠免疫模型时应考虑所存在的GVHR问题。

关键词：脐血 NOD/SCID小鼠 T细胞TCRVβ基因

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番荔枝内酯单体Desacetyluvaricin对肝癌细胞株生长和凋亡的影响

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中山大学学报（医学科学版） 2007年第3期28卷 254-257,267页

作者：陈孝银周光雄赵昌林夏芳毛慧君江振友敖杰男暨南大学医学院中医系广东广州510632 暨南大学药学院广东广州510632 暨南大学医学院微生物学与免疫学教研室广东广州510632

【目的】探讨Desacetyluvaricin在体外对肝癌HpG2.2.15细胞株生长和凋亡的作用及机制。【方法】处于生长期的人肝癌HepG2.2.15细胞分为3组:对照组,Desacetyluvaricin组和顺铂组。用MTT法检测各组肿瘤细胞增殖情况,流式细胞仪检测各组细... 详细信息

【目的】探讨Desacetyluvaricin在体外对肝癌HpG2.2.15细胞株生长和凋亡的作用及机制。【方法】处于生长期的人肝癌HepG2.2.15细胞分为3组:对照组,Desacetyluvaricin组和顺铂组。用MTT法检测各组肿瘤细胞增殖情况,流式细胞仪检测各组细胞周期、细胞调亡以及凋亡基因Fas的表达情况,比较Desacetyluvaricin与顺铂的疗效。【结果】Desacetyluvaricin对肝癌细胞增殖的抑制率高达62.2%。Desacetyluvaricin抑制肝癌细胞增殖的机制可能为阻滞肝癌HepG2.2.15细胞从G1期进入S期,从而抑制了肿瘤细胞的增殖,同时通过促进Fas表达,诱导HepG2.2.15细胞凋亡。其诱导Fas表达的效果还优于顺铂。【结论】Desacetyluvaricin可能通过延缓细胞G1期及诱导细胞凋亡等机制,对肝癌细胞的增殖有一定的抑制作用。

关键词： Desacetyluvaricin 肝癌细胞周期细胞凋亡 Fas基因

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丝裂原激活蛋白激酶在内毒素脂多糖诱导大鼠施万细胞一氧化氮合酶表达中的作用

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解剖学报 2007年第6期38卷 660-664页

作者：沈爱国王海波秦永伟程纯牛淑琼南通大学神经再生重点实验室南通大学医学院微生物和免疫学教研室南通226001

目的主要研究丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)信号途径在内毒素脂多糖(LPS)诱导大鼠施万细胞(Scs)诱导型一氧化氮合酶(iNOS)基因表达和一氧化氮(NO)产生中的作用。方法先用3种MAPK的特异性抑制剂PD98059(ERK1/2)、SB202190(P38MAPK)和SP600125... 详细信息

目的主要研究丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)信号途径在内毒素脂多糖(LPS)诱导大鼠施万细胞(Scs)诱导型一氧化氮合酶(iNOS)基因表达和一氧化氮(NO)产生中的作用。方法先用3种MAPK的特异性抑制剂PD98059(ERK1/2)、SB202190(P38MAPK)和SP600125(JNK)以不同浓度预处理细胞1h,再用LPS作用施万细胞4h后,用RT-PCR检测细胞中iNOS mRNA、IL-6mRNA和TNF-αmRNA的表达;Western blotting观察iNOS蛋白水平的表达变化;通过测定细胞培养液中亚硝酸盐含量来观察NO的水平。结果LPS可显著激活施万细胞中MAPK信号通路诱导iNOS表达。MAPK的抑制剂预处理细胞后,可显著抑制细胞iNOS mRNA和NO的合成及IL-6mRNA和TNF-αmRNA的表达。结论MAPK信号通路参与了LPS介导的大鼠施万细胞iNOS基因表达和NO产生,通过阻断细胞内信号转导通路来减少iNOS及其他细胞因子的产生,为抑制周围神经损伤后的炎症以及免疫反应发生提供了一条新思路。

关键词：丝裂原激活蛋白激酶内毒素脂多糖一氧化氮合酶施万细胞 RT-PCR Western blotting 大鼠

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重组病毒炎症蛋白Ⅱ长期静脉注射对食蟹猴免疫系统的影响

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中国免疫学杂志 2007年第1期23卷 11-15页

作者：孙晗笑吕秋军江振友莫雪梅张光陈宏杨清玲暨南大学基因组药物研究所广州510632 军事医学科学院二所毒理室北京100850 暨南大学医学院微生物和免疫学教研室广州510632

目的研究重组vMIP-Ⅱ在体内对食蟹猴免疫系统的影响。方法食蟹猴随机分为阴性对照组(静脉注射人白蛋白)和实验组(分别连续13周静脉注射50、250和1250μg/kg剂量的重组vMIP-Ⅱ),于不同时间采集血液(给药前、给药6周、给药13周和恢复期2周... 详细信息

目的研究重组vMIP-Ⅱ在体内对食蟹猴免疫系统的影响。方法食蟹猴随机分为阴性对照组(静脉注射人白蛋白)和实验组(分别连续13周静脉注射50、250和1250μg/kg剂量的重组vMIP-Ⅱ),于不同时间采集血液(给药前、给药6周、给药13周和恢复期2周)及各器官、淋巴组织(给药13周和恢复期2周)样品。ELISA测定血清中重组vMIP-Ⅱ抗体,分离外周血单个核细胞(PBMCs),FACS计数CD3+、CD4+以及CD8+细胞并测定淋巴细胞转化率;各器官及淋巴组织样品做病理学检查,并采用末端转移酶介导的缺口标记(TUNEL)法检测淋巴组织细胞凋亡指数。结果长期大剂量静脉注射重组vMIP-Ⅱ并不引起食蟹猴产生中和抗体;在用药期间动物外周血CD3+T细胞、CD4+以及CD8+T细胞计数显著性增强(P<0·05),CD4+/CD8+比值仍属正常,同时体外观察到淋巴细胞转化率增加(P<0·05);各器官无病理学改变,淋巴组织出现增生,并且重组vMIP-Ⅱ注射组食蟹猴增生的淋巴组织细胞凋亡指数与阴性对照组相比无明显改变;在恢复期以上指标均有所降低。结论在重组vMIP-Ⅱ对食蟹猴免疫原性不明显的情况下,长期大剂量注射重组vMIP-Ⅱ具有刺激食蟹猴免疫系统、T淋巴细胞增生和增加T淋巴细胞功能的作用。

关键词：重组vMIP-Ⅱ 食蟹猴 T淋巴细胞淋巴细胞增生凋亡

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硒化麒麟菜多糖抑制人喉癌细胞株Hep-2增殖的作用

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肿瘤防治研究 2007年第4期34卷 249-252页

作者：白雪林晨江振友袁桂秀沈伟哉李扬秋唐渝暨南大学医学院微生物学与免疫学教研室广州510632 暨南大学医学院人体解剖学教研室广州510632 暨南大学医学院血液病研究所广州510632 暨南大学医学院生命科学院化学系广州510632

目的通过比较研究海藻麒麟菜多糖粗提物、无机硒化合物-亚硒酸钠(Na2SeO3)及其共价化合物-硒化麒麟菜多糖对人喉癌细胞株Hep-2的作用,探索新的具有抗肿瘤活性的有机硒化合物。方法应用不同剂量的样品作用于Hep-2细胞株后,用MTT比色分析... 详细信息

目的通过比较研究海藻麒麟菜多糖粗提物、无机硒化合物-亚硒酸钠(Na2SeO3)及其共价化合物-硒化麒麟菜多糖对人喉癌细胞株Hep-2的作用,探索新的具有抗肿瘤活性的有机硒化合物。方法应用不同剂量的样品作用于Hep-2细胞株后,用MTT比色分析法计算肿瘤抑制率。结果硒化多糖对Hep-2细胞的抑制率高于相同多糖浓度的麒麟菜多糖和相同硒浓度的亚硒酸钠(P<0.05)。硒化多糖的抑制率可高达71.53%,其多糖IC50与硒IC50分别为1805μg/ml和7.0μmol/L,分别低于麒麟菜多糖的多糖IC50(3034μg/ml)和亚硒酸钠的硒IC50(9.0μmol/L)。结论硒化麒麟菜多糖具有抗Hep-2细胞增殖的活性,其抑制作用明显优于亚硒酸钠及天然麒麟菜多糖的抗肿瘤活性。

关键词：硒化麒麟菜多糖亚硒酸钠 HEp-2 抗肿瘤

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