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玉米特异启动子驱动下结核Hsp65与Esat-6融合基因表达载体的构建及鉴定

华北农学报 2009年第3期24卷 28-31页

作者：李君武王珊珊宋东刘艳黄清华暨南大学医学院微生物与免疫学教研室广东广州510632

利用转基因玉米研制新型结核口服疫苗。构建植物双元表达质粒pCAMBIA1300GHLE,并转化农杆菌LBA4404。以本实验室构建的pEGHLE为模板经聚合酶链反应(PCR)扩增出Hsp65-Esat6基因,连接到含有玉米特异性启动子globulin-1的pCR2.1载体上;将gl... 详细信息

利用转基因玉米研制新型结核口服疫苗。构建植物双元表达质粒pCAMBIA1300GHLE,并转化农杆菌LBA4404。以本实验室构建的pEGHLE为模板经聚合酶链反应(PCR)扩增出Hsp65-Esat6基因,连接到含有玉米特异性启动子globulin-1的pCR2.1载体上;将globulin1-HLE联合片断切下连到含有抗除草剂基因bar的pCAMBIA1300载体中;电击法将重组质粒转化到农杆菌LBA4404中。成功构建了pC1300GHLE质粒,酶切鉴定得到3.3 kb和8.6 kb 2条带,测序分析表明克隆的Hsp65和Esat6序列与NCBI上公布序列一致;成功转化到农杆菌中,酶切从农杆菌中所提的质粒,条带大小与预期结果相符合。成功构建和转化了pC1300GHLE表达载体,为成功研制利用转基因植物生产抗结核口服疫苗奠定了基础。

关键词：结核分支杆菌热休克蛋白65 Esat-6 globulin-1

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1型糖尿病与基因治疗

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广东医学 2006年第7期27卷 1102-1103页

作者：胡萍林绍强暨南大学医学院微生物和免疫学教研室广州510632

1 型糖尿病（type 1 diabetes，T1D）是由于自身免疫机制引起胰岛β细胞破坏，胰岛素分泌缺乏。胰岛移植治疗糖尿病是研究的热点之一，但供体来源不足和免疫排斥仍是亟待解决的问题。随着基因重组及转基因技术的不断发展，再造分泌胰岛... 详细信息

1 型糖尿病（type 1 diabetes，T1D）是由于自身免疫机制引起胰岛β细胞破坏，胰岛素分泌缺乏。胰岛移植治疗糖尿病是研究的热点之一，但供体来源不足和免疫排斥仍是亟待解决的问题。随着基因重组及转基因技术的不断发展，再造分泌胰岛素的克隆细胞，或特异性阻断针对胰岛自身免疫过程治疗T1D，为T1D治疗提供新的研究方向。

关键词： 1型糖尿病基因治疗胰岛素分泌自身免疫机制转基因技术分泌胰岛素细胞破坏移植治疗免疫排斥供体来源

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丙型肝炎病毒非结构蛋白5A与干扰素的应答耐受

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新医学 2006年第1期37卷 64-67页

作者：王志鹏暨南大学医学院微生物与免疫学教研室 510632

丙型肝炎病毒是丙型病毒性肝炎的病原体,目前缺乏有效的疫苗。干扰素是其主要治疗药物,但普遍存在耐受。丙型肝炎病毒非结构蛋白5A在丙型肝炎病毒的干扰素耐受中发挥重要作用。涉及的可能机制包括非结构蛋白5A干扰素敏感决定区变异、抑... 详细信息

丙型肝炎病毒是丙型病毒性肝炎的病原体,目前缺乏有效的疫苗。干扰素是其主要治疗药物,但普遍存在耐受。丙型肝炎病毒非结构蛋白5A在丙型肝炎病毒的干扰素耐受中发挥重要作用。涉及的可能机制包括非结构蛋白5A干扰素敏感决定区变异、抑制双链核糖核酸依赖性蛋白激酶、抑制2',5'-寡腺苷酸合成酶、诱生白介素-8和作用于干扰素的蛋白酪氨酸激酶和转录激动子信号途径。

关键词：丙型肝炎病毒非结构蛋白5A 干扰素应答耐受

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融合基因FADDdel-GFP修饰在胰岛细胞自杀效应中的作用

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免疫学杂志 2007年第3期23卷 270-273页

作者：胡萍李君武叶嗣颖季煜华李小兰韦静暨南大学医学院微生物学和免疫学教研室暨南大学组织移植与免疫中心广州510632

目的研究FADDdel-GFP在Fas/FasL介导的胰岛细胞自杀效应中的作用。方法采用DNA转染技术将重组体pFADDdel-GFP导入哺乳动物细胞NIT(鼠胰岛细胞瘤细胞);采用FACS检测细胞因子诱导后NIT细胞的Fas和FasL表达情况及细胞自杀效应;采用active c... 详细信息

目的研究FADDdel-GFP在Fas/FasL介导的胰岛细胞自杀效应中的作用。方法采用DNA转染技术将重组体pFADDdel-GFP导入哺乳动物细胞NIT(鼠胰岛细胞瘤细胞);采用FACS检测细胞因子诱导后NIT细胞的Fas和FasL表达情况及细胞自杀效应;采用active caspase3检测试剂盒检测细胞因子作用前后NIT细胞的caspase-3活性变化。结果NIT细胞表面无Fas和FasL表达,细胞因子可促其表达增加;细胞因子作用后,FADDdel-GFP修饰的NIT细胞的细胞损伤百分率和细胞内caspase3活性明显低于对照组。结论FADDdel-GFP修饰的NIT细胞具有一定的抵抗Fas/FasL途径介导细胞自杀效应的能力。

关键词： Fas相关死亡结构域 Fas FasL 细胞因子

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丙型肝炎病毒NS3基因真核质粒的构建及其在人肝细胞中的诱导表达

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暨南大学学报（自然科学与医学版） 2005年第4期26卷 495-501页

作者：李君武江静许小亮暨南大学医学院微生物免疫学教研室广东广州510632

目的:进行丙型肝炎病毒非结构蛋白3基因真核表达载体的构建,并分析其在体外培养的人肝细胞中的表达。方法:从含有丙肝病毒全长基因的重组质粒pBRTM/HCV1-3011表达载体中PCR扩增出HCV NS3基因片段,将其与表达载体pcDNA3.1(-)重组,得到重... 详细信息

目的:进行丙型肝炎病毒非结构蛋白3基因真核表达载体的构建,并分析其在体外培养的人肝细胞中的表达。方法:从含有丙肝病毒全长基因的重组质粒pBRTM/HCV1-3011表达载体中PCR扩增出HCV NS3基因片段,将其与表达载体pcDNA3.1(-)重组,得到重组的真核表达载体pcDNA3.1(-)/NS3。然后采用阳离子多聚体将其转染人肝细胞QSG7701,以免疫组织化学SP法及Western Blotting检测HCV NS3蛋白的表达。结果:所得到的NS3片段正确,序列正确,所构建的真核质粒成功转染QSG7701细胞并表达蛋白,表达的NS3蛋白相对分子质量为70 000。结论:成功构建了丙型肝炎病毒非结构蛋白3基因的真核表达载体pcDNA3.1(-)/NS3,并且该载体在体外培养的人肝细胞中能有效表达特异性HCV NS3蛋白。

关键词：丙型肝炎病毒非结构蛋白3 蛋白表达

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玉米特异启动子驱动下结核hsp65基因植物表达载体构建及鉴定

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玉米科学 2009年第5期17卷 14-18页

作者：李君武黄清华王珊刘艳黄泽棋宋东暨南大学医学院微生物免疫学教研室广州510632

以本实验室构建的pEGHLE为模板经聚合酶链反应(PCR)扩增出Hsp65基因,连接到含有玉米特异性启动子globulin-1的pCR2.1载体上;将globulin1-Hsp65联合片断切下连到含有抗除草剂基因bar的pCAMBIA1300载体中;电击法将重组质粒转化到农杆菌LBA... 详细信息

以本实验室构建的pEGHLE为模板经聚合酶链反应(PCR)扩增出Hsp65基因,连接到含有玉米特异性启动子globulin-1的pCR2.1载体上;将globulin1-Hsp65联合片断切下连到含有抗除草剂基因bar的pCAMBIA1300载体中;电击法将重组质粒转化到农杆菌LBA4404中。结果表明:成功构建了pC1300GHsp65质粒,酶切鉴定得到3Kb和8.6Kb两条带,测序分析表明,克隆的Hsp65与NCBI上公布序列一致;成功转化到农杆菌中,酶切从农杆菌中所提的质粒条带大小与预期结果相符合。结果显示,已成功构建和转化了pC1300GHsp65质粒,为成功研制利用转基因植物生产抗结核口服疫苗奠定了基础。

关键词：玉米特异启动子基因表达载体构建

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《医学微生物学图鉴》多媒体CAI课件的设计与应用

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微生物学通报 2004年第4期31卷 122-124页

作者：江振友暨南大学医学院微生物学与免疫学教研室广州510632

计算机辅助教学 (CAI)是现代化教育技术的重要组成部分。我们利用多媒体形象、多样化表达及交互性强的特点 ,将文本、声音、图片、动画、录像等有机结合在一起 ,设计制作了卫生部CAI课件《医学微生物学图鉴》。教学实践表明 :本课件在... 详细信息

计算机辅助教学 (CAI)是现代化教育技术的重要组成部分。我们利用多媒体形象、多样化表达及交互性强的特点 ,将文本、声音、图片、动画、录像等有机结合在一起 ,设计制作了卫生部CAI课件《医学微生物学图鉴》。教学实践表明 :本课件在教学中的应用提高了微生物学的教学质量 ,促进教学的整体改革 ,优化教学过程 ,取得较好的教学效果。

关键词： CAI 微生物学图鉴医学

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丙型肝炎病毒NS3蛋白生物学功能研究进展

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广东医学 2005年第7期26卷 1006-1007页

作者：王志鹏暨南大学医学院微生物与免疫学教研室广州510632

丙型肝炎病毒(hepatitis C virus，HCV)是一种严重威胁人类生命健康的微生物，持续感染可导致慢性丙型肝炎，并可发展为肝硬化和肝细胞癌。HCV非结构蛋白NS3在HCV复制和宿主细胞负面调控中发挥重要作用。因其具有的生物学功能，已成为HC... 详细信息

丙型肝炎病毒(hepatitis C virus，HCV)是一种严重威胁人类生命健康的微生物，持续感染可导致慢性丙型肝炎，并可发展为肝硬化和肝细胞癌。HCV非结构蛋白NS3在HCV复制和宿主细胞负面调控中发挥重要作用。因其具有的生物学功能，已成为HCV研究热点。本文就。NS3主要生物学功能研究进展综述如下。

关键词：丙型肝炎病毒功能研究进展 NS3蛋白非结构蛋白NS3 慢性丙型肝炎 HCV复制生物学功能生命健康持续感染肝细胞癌宿主细胞研究热点进展综述微生物肝硬化

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联合免疫缺陷小鼠的发展及其人免疫重建的研究

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第三军医大学学报 2005年第13期27卷 1415-1417页

作者：谭玉波林晨李扬秋暨南大学医学院微生物学与免疫学教研室广州510632

多年来研究者致力于在联合免疫缺陷小鼠(severe combined immunodeficiency mice，SCID mice)体内重建有功能的人免疫系统，期以解决动物模型难以确切反映人体免疫系统的特点和研究人体免疫应答受限于体外实验的难题1988年Mosier等将人... 详细信息

多年来研究者致力于在联合免疫缺陷小鼠(severe combined immunodeficiency mice，SCID mice)体内重建有功能的人免疫系统，期以解决动物模型难以确切反映人体免疫系统的特点和研究人体免疫应答受限于体外实验的难题1988年Mosier等将人外周血淋巴细胞移植入C.B—17 SCID小鼠首次建立了人源化的SCID鼠模型。人类造血干／祖细胞移植给联合免疫缺陷鼠后可在其体内多系分化、增殖。

关键词：免疫缺陷鼠再植免疫重建

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HCMV pp150抗原基因在蚕豆中的遗传转化及鉴定

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中华微生物学和免疫学杂志 2007年第12期27卷 1150-1154页

作者：严华李国才焦红梅陈红菊扬州大学医学院微生物学和免疫学教研室 225001

目的研制人巨细胞病毒(HCMV)口服疫苗。方法根据HCMV基质磷蛋白PP150基因序列设计引物,PCR法从HCMV AD169株基因组DNA中扩增出编码PP150抗原决定簇区域的基因片段。将Kozak序列插入pp150基因的起始密码子的上游,3′端引入了内质网滞留信... 详细信息

目的研制人巨细胞病毒(HCMV)口服疫苗。方法根据HCMV基质磷蛋白PP150基因序列设计引物,PCR法从HCMV AD169株基因组DNA中扩增出编码PP150抗原决定簇区域的基因片段。将Kozak序列插入pp150基因的起始密码子的上游,3′端引入了内质网滞留信号KDEL序列,将修饰后的基因片段克隆进载体pBI121,构建了带潮霉素(Hyg)选择抗性基因的植物表达载体pCAM- BIA1300/pp150和根癌农杆菌工程菌EHA105;采用叶盘法转化蚕豆,获得了5株抗性植株,通过PCR、Southern blot和RNA dot blot分析鉴定,确认了3株为转基因植株。通过ELISA和Western blot对这3株的蛋白萃取物进行分析,以鉴定其免疫学活性。结果这3株转基因植株表达的PP150蛋白具有免疫原活性。结论这些转基因植株为HCMV口服疫苗的研究提供了条件。

关键词：人巨细胞病毒 pp150 口服疫苗转基因蚕豆

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