检索结果-内蒙古大学图书馆

PCR-反向点杂交法在外阴阴道念珠菌病诊断及白念珠菌耐药基因突变检测中的应用

临床检验杂志 2017年第7期35卷 495-498页

作者：刘秀卿王革非李卓成黄磊汕头大学医学院微生物学与免疫学教研室广东汕头515041 深圳市第二人民医院检验科广东深圳518035

目的评价PCR-反向点杂交法用于念珠菌菌种鉴定及白念珠菌耐药基因突变检测的应用价值。方法收集念珠菌性阴道炎患者及体检健康妇女分泌物各285份和50份。用生物梅里埃酵母菌鉴定卡进行菌种鉴定,用最低抑菌浓度(MIC)法(郑州安图真菌快速... 详细信息

目的评价PCR-反向点杂交法用于念珠菌菌种鉴定及白念珠菌耐药基因突变检测的应用价值。方法收集念珠菌性阴道炎患者及体检健康妇女分泌物各285份和50份。用生物梅里埃酵母菌鉴定卡进行菌种鉴定,用最低抑菌浓度(MIC)法(郑州安图真菌快速培养鉴定药敏试剂)进行药敏试验;采用PCR-反向点杂交法(深圳亚能念珠菌菌种鉴定及白念珠菌耐药基因突变检测试剂)进行菌种鉴定和耐药基因突变检测;采用PCR及测序方法进行耐药基因的检测。分别以培养鉴定法、MIC法、核酸序列测定法为对比方法,评价PCR-反向点杂交法念珠菌菌种鉴定及白念珠菌耐药基因突变检测的敏感性、特异性及准确性。结果与培养鉴定法相比,PCR-反向点杂交法检测6种念珠菌菌种的敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值和总符合率分别为95%、96%、96%、98%、97%以上,2种方法检测6种念珠菌(白念珠菌、光滑念珠菌、热带念珠菌、近平滑念珠菌、克柔念珠菌和季也蒙念珠菌)结果的差异无统计学意义(χ~2值分别为0.44、0、0、0、0和0,P均>0.05),一致性较好(Kappa均>0.9)。与MIC法相比,PCR-反向点杂交法检测白念珠菌耐药的敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值和总符合率分别为98%、88%、98%、88%和96%,2种方法检测结果的差异无统计学意义(χ~2=0.17,P>0.05),一致性较好(Kappa>0.8)。PCR-反向点杂交法与核酸序列测定法相比,对6种白念珠菌耐药基因突变位点的检测结果完全一致。结论PCR-反向点杂交法在念珠菌菌种鉴定及白念珠菌耐药基因突变检测上与培养鉴定法以及核酸序列测定法的一致性高,比传统检测方法更早期更快速,可应用于外阴阴道念珠菌病(VVC)的辅助诊断。

关键词：外阴阴道念珠菌病白念珠菌 PCR-反向点杂交法 ERG11点突变

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低浓度乙醇对人肝癌HepG2细胞的杀伤作用

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解剖学报 2016年第2期47卷 228-233页

作者：刘英杰李景华河南大学医学院微生物学教研室河南开封475003 河南大学天然药物与免疫工程重点实验室河南开封475003

目的探讨低浓度乙醇对人肝癌Hep G2细胞的杀伤作用,及其作用机制。方法以体外培养的人肝癌Hep G2细胞为研究对象,MTT法检测细胞毒性,吖啶橙(AO)、溴化乙锭(EB)染色观察细胞凋亡形态,2’,7’-二氢二氯荧光黄双乙酸钠(DCFH-DA)法检测Hep G... 详细信息

目的探讨低浓度乙醇对人肝癌Hep G2细胞的杀伤作用,及其作用机制。方法以体外培养的人肝癌Hep G2细胞为研究对象,MTT法检测细胞毒性,吖啶橙(AO)、溴化乙锭(EB)染色观察细胞凋亡形态,2’,7’-二氢二氯荧光黄双乙酸钠(DCFH-DA)法检测Hep G2细胞内活性氧族(ROS)水平,罗丹明123(Rh123)染色检测线粒体膜电位变化,免疫荧光法检测Caspase-9表达,流式细胞术检测细胞凋亡率。结果 MTT显示,低浓度乙醇呈时间依赖性和剂量依赖性抑制Hep G2细胞增殖,1.0、1.6mol/L乙醇作用6h后,细胞内ROS、Caspase-9荧光强度均显著高于对照组(P<0.01,n=20),Rh123荧光强度显著低于对照组(P<0.01,n=20);高内涵活细胞成像系统可见细胞核固缩呈圆珠状凋亡特征;流式细胞术显示,1.0mol/L乙醇作用6h可诱导27.92%Hep G2细胞凋亡,5.4%细胞坏死;1.6mol/L乙醇作用6h可诱导31.22%Hep G2细胞凋亡,15.1%Hep G2细胞坏死。结论低浓度乙醇可通过升高细胞内ROS水平,降低线粒体膜电位,上调Caspase-9表达,通过线粒体途径诱导Hep G2细胞凋亡。

关键词：乙醇肝癌HepG2细胞高内涵筛选流式细胞术人

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3801例高脂蛋白(a)血症患者临床分析

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医药前沿 2017年第36期7卷 198-200页

作者：陈远东杨海莫銮周晓云邱海山李康生广东省汕头大学医学院微生物学与免疫学教研室广东汕头 515063 广东省惠州市第三人民医院广东惠州 516002

目的:探讨高脂蛋白a血症患者在不同性别、不同年龄的分布差异,及高血清脂蛋白(a)在临床诊断的应用.方法:收集我院2015年10月到2016年10月LP(a)>300mg的3801例高脂蛋白a血症患者血清标本,利用日立7600全自动生化分析仪进行血清脂蛋白... 详细信息

目的:探讨高脂蛋白a血症患者在不同性别、不同年龄的分布差异,及高血清脂蛋白(a)在临床诊断的应用.方法:收集我院2015年10月到2016年10月LP(a)>300mg的3801例高脂蛋白a血症患者血清标本,利用日立7600全自动生化分析仪进行血清脂蛋白a水平测定并收集数据.结果:在3801例高脂蛋白(a)血症患者中男性和女性患者脂蛋白(a)水平年龄主要集中分布在50～80岁;临床主要疾病分布脑梗死、冠心病、骨折、2型糖尿病、高血压等.结论:脑梗死、冠心病、骨折、2型糖尿病、高血压可出现脂蛋白(a)水平升高,并应特别关注50岁以上男性和40岁以上的女性高血清脂蛋白(a)水平的人群,及早干预高脂蛋白(a)血症及其引起的其他并发症的发生.

关键词：高脂蛋白(a) 脑梗死冠心病临床分析

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家养及大型养殖场鸡肠道微生物菌群及四环素耐药菌多样性的比较研究(英文)

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微生物与感染 2017年第3期12卷 146-155页

作者：崔泽林冯婷婷周与华黄秋婧王翰瑜陈炽华蔡梦鑫秦凯捷张彦董坷郭晓奎秦金红上海交通大学医学院附属上海市第一人民医院检验医学科上海200080 上海交通大学医学院免疫学与微生物学教研室上海200025 上海交通大学医学院附属上海市第一人民医院临床药学科上海201620

本研究分析比较了农家家养鸡与大型养殖场鸡肠道菌群组成及抗四环素抗性基因在肠道菌群中的分布情况。通过454焦磷酸法对细菌16SrRNA V3区进行测序来分析肠道菌群的组成;用平板琼脂法筛选四环素耐药菌株,对其16SrRNA基因全长测序,并与RD... 详细信息

本研究分析比较了农家家养鸡与大型养殖场鸡肠道菌群组成及抗四环素抗性基因在肠道菌群中的分布情况。通过454焦磷酸法对细菌16SrRNA V3区进行测序来分析肠道菌群的组成;用平板琼脂法筛选四环素耐药菌株,对其16SrRNA基因全长测序,并与RDP(Ribosomal Database Project)数据库比对进行菌种鉴定;聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)检测常见四环素耐药基因。家养鸡粪便中菌群香农多样性指数为5.321±0.590,养殖场鸡为4.398±0.440,前者显著大于后者(Mann-Whitney U test,P=0.008)。从家养鸡和养殖场鸡粪便中随机分离到69株和65株四环素耐药菌株,后者四环素耐药菌的种类多于前者。家养鸡较养殖场鸡的肠道菌群更具多样性,而抗生素抗性基因在养殖场鸡的肠道菌群中分布更广泛。结果表明,不同饲养方式对鸡的肠道菌群有影响,对抗生素抗性基因的分布也有一定影响。

关键词：鸡粪微生物群四环素耐药多样性

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浅谈PBL教学法在护理专业医学微生物学教学中的应用探讨

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教育教学论坛 2016年第47期 159-160页

作者：李红梅延边大学医学院医学微生物学与免疫学教研室吉林延吉133002

PBL教学是现代护理教育必要的教学方法。本文主要探讨了在本科护理专业医学微生物学教学中引入PBL教学的必要性、PBL教学设计、PBL教学的优点及存在的问题。

关键词： PBL 护理专业医学微生物学教学改革

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流感病毒分子进化研究进展

流感病毒分子进化研究进展

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2016新发传染病研究热点研讨会

作者：李康生汕头大学医学院微生物学与免疫学教研室

流感病毒属正黏病毒科,为分节段的负向单链RNA病毒。流感病毒根据其基质蛋白M和核蛋白NP的抗原性可分为甲、乙、病三个型,其中甲型流感病毒的宿主最为广泛、流行最为活跃,给人类的威胁也最为严重。由于流感病毒独特的生物学特性,导致甲... 详细信息

流感病毒属正黏病毒科,为分节段的负向单链RNA病毒。流感病毒根据其基质蛋白M和核蛋白NP的抗原性可分为甲、乙、病三个型,其中甲型流感病毒的宿主最为广泛、流行最为活跃,给人类的威胁也最为严重。由于流感病毒独特的生物学特性,导致甲型流感病毒的防控异常艰难。在基因组结构上,流感病毒的核心为RNA,具备高频突变特征,使得流感病毒的抗原性变异,即抗原漂移;而流感病毒分节段的基因组特点,会使得子代病毒包装时可能发生不同来源的亲代病毒基因组片断

关键词：流感病毒基因组 RNA 抗原性分子进化流感大流行

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流感病毒感染小鼠体内肺泡巨噬细胞极化模式的研究

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汕头大学医学院学报 2016年第4期29卷 201-203页

作者：贺妍王革非郑华丽谷李铭李蕊汕头大学医学院微生物学及免疫学教研室广东汕头515041

目的:研究流感病毒感染小鼠体内肺泡巨噬细胞在不同时期的极化状态。方法:建立小鼠流感病毒感染模型;20G静脉留置针对小鼠全肺进行支气管肺泡灌洗术;贴壁培养分离巨噬细胞并提取其RNA,荧光定量PCR测定其表达水平;取肺泡灌洗液,用ELISA... 详细信息

目的:研究流感病毒感染小鼠体内肺泡巨噬细胞在不同时期的极化状态。方法:建立小鼠流感病毒感染模型;20G静脉留置针对小鼠全肺进行支气管肺泡灌洗术;贴壁培养分离巨噬细胞并提取其RNA,荧光定量PCR测定其表达水平;取肺泡灌洗液,用ELISA试剂盒检测细胞因子(白细胞介素(IL)-12)。结果:感染组体质量呈下降趋势,之后处于恢复期上升,对照组体质量平缓上升;感染组表达流感病毒PR8 M1基因,第5天显著升高(P<0.000 1),第14天没有检测出M1基因;感染组IL-1β和一氧化氮合酶2(NOS2)表达水平呈先上升后下降趋势,其第5天表达水平明显高于对照组(P<0.000 1);感染组IL-10表达水平在第5天高于第1天,且高于对照组(P<0.05);感染组精氨酸酶表达水平呈先上升后下降趋势,在第1天无检出并低于对照组,第5天达最高值(P<0.000 1);感染组第1天TGFβ表达水平与对照组比低于正常水平(P<0.05);感染组肺泡灌洗液中IL-12浓度在第5天最高(P<0.000 1)。结论:流感病毒感染会致肺泡巨噬细胞极化,在早期肺泡巨噬细胞极化为M1型,随着时间推移,巨噬细胞极化亚型表现为M2型。

关键词：流感病毒肺泡巨噬细胞极化支气管肺泡灌洗

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随机噬菌体肽库筛选血型D抗原模拟多肽方案的建立及初步验证

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中国输血杂志 2016年第8期29卷 775-779页

作者：吴凡庄乃保张印则徐华周华友李康生汕头大学医学院微生物学与免疫学教研室广东汕头515041 深圳市血液中心陕西省血液中心南方医科大学南方医院

目的探讨随机噬菌体十二肽库筛选血型D抗原模拟多肽的影响因素，以建立最佳筛选方案。方法对比洗脱时间分别为4、8、12、16和30min的洗脱液滴度；3轮清洗缓冲液中Tween20浓度分别为0．1％、0．2％、0．5％和分别为0．1％、0．5％、0．5... 详细信息

目的探讨随机噬菌体十二肽库筛选血型D抗原模拟多肽的影响因素，以建立最佳筛选方案。方法对比洗脱时间分别为4、8、12、16和30min的洗脱液滴度；3轮清洗缓冲液中Tween20浓度分别为0．1％、0．2％、0．5％和分别为0．1％、0．5％、0．5％时每轮淘洗的投入／产出比，以及3轮封闭缓冲液均为0．5％BSA和分别为0．5％BSA、1％明胶、5％脱脂奶时每轮淘洗的投入／产出比，以分析筛选效果，得出最佳筛选方案。对采用最佳筛选方案筛选得到的阳性克隆测定其DNA序列和做抗体竞争抑制试验检测D抗原模拟表位。结果洗脱8min时洗脱液滴度为（2．31±0．25）×10^6pfu／mL，洗脱4、12、16和30min时的洗脱液滴度与之相比明显下降（P〈0．01）。当洗脱时间为8min且3轮封闭缓冲液均为0．5％BSA时，3轮淘洗清洗缓冲液Tween20浓度分别为0．1％、0．5％、0．5％时投入／产出比分别为1．69×10^7、4．95×10^5、9．58×10^2，与清洗缓冲液Tween20浓度分别为0．1％、0．2％、0．5％时投入／产出比分别为2．70×10^7、4．57×10^5、1．14×10^3相比，对筛选效果影响不大。当洗脱时间为8min且3轮淘洗清洗缓冲液Tween20浓度分别为0．1％、0．5％、0．5％时，3轮封闭缓冲液分别为0．5％BSA、1％明胶、5％脱脂奶时投入／产出比分别为1．93×10^7、6．44×10^3、6．23×10^1，明显优于3轮淘洗封闭缓冲液均为0．5％BSA时的投入／产出比（分别为1．94×10^7、1．66×10^5、8．23×10^2）。通过优化方案筛选得到1个抑制率约为50％的十二肽序列“VHWDFRQWWQPS”。结论洗脱时间、清洗缓冲液成分以及封闭缓冲液类型对筛选效率有一定影响。洗脱时间为8min，3轮淘洗的清洗缓）中液Tween20浓度分别为0．1％、0．5％、0．5％和3轮淘洗的封闭缓冲液分别为0．5％BSA、1％明胶、5％脱脂奶粉时，筛选效果较优，可获得较理想的血型D抗原模拟多肽。

关键词：噬菌体肽库 RhD抗原筛选效率洗脱时间清洗缓冲液封闭缓冲液

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HMGB1与原因不明复发性流产的关系

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免疫学杂志 2016年第4期32卷 346-350页

作者：仇笑笑何泽现王健穆雅琴钱正宇刘润花赵富玺山西医科大学基础医学院微生物学与免疫学教研室太原030001 大同大学免疫学研究所 037009 山西医科大学第一临床医学院太原030001 大同市第三人民医院产科 037008 大同大学医学院外科实验室 037009

目的探讨原因不明复发性流产(URSA)患者外周血中高迁移率族蛋白B1(HMGB1)的表达水平,及其对Th17/Treg平衡的影响。方法选取42例早孕期原因不明复发性流产患者为研究对象(URSA早孕组),并以32例正常早孕孕妇为正常早孕组(NP组)。采用流式... 详细信息

目的探讨原因不明复发性流产(URSA)患者外周血中高迁移率族蛋白B1(HMGB1)的表达水平,及其对Th17/Treg平衡的影响。方法选取42例早孕期原因不明复发性流产患者为研究对象(URSA早孕组),并以32例正常早孕孕妇为正常早孕组(NP组)。采用流式细胞术(FCM)检测外周血中Th17和Treg细胞的比例;采用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测外周血中HMGB1、RAGE、IL-17、IL-6、TGF-β及IL-10表达水平。结果 URSA早孕组外周血中Treg细胞比例低于正常早孕组(P<0.05),而Th17细胞比例和Th17/Treg比值均高于正常早孕组(P<0.05);URSA早孕组外周血HMGB1和RAGE表达高于正常早孕组(P<0.05);与正常早孕组相比,URSA早孕组外周血IL-17、IL-6表达水平均增高(P<0.05),而TGF-β、IL-10的表达水平均下降(P<0.05);在相关性分析比较中,URSA早孕组外周血HMGB1表达水平与RAGE、IL-17、IL-6均呈正相关,而HMGB1表达水平与TGF-β、IL-10均呈负相关。结论 URSA外周血中HMGB1表达水平增高,HMGB1可能通过直接或间接的方式调节Th17/Treg平衡模式参与URSA的发病机制。

关键词：原因不明复发性流产高迁移率族蛋白B1 Th17/Treg平衡

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布鲁菌Ⅳ型分泌系统效应蛋白BspA、BspF的原核表达及布鲁菌免疫逃逸分析

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中华地方病学杂志 2016年第4期35卷 238-243页

作者：李默王远志易德武徐立业刘康张俊波陈创夫郭飞新疆石河子大学医学院病原生物学与免疫学教研室石河子832002 新疆石河子大学医学院动物科技学院预防兽医学教研室石河子832002 河北省邢台市刑台医学高等专科学校第二附属医院病理科邢台054000 河北省保定市第二中心医院骨科保定072750 贵州省铜仁学院生物与农林工程学院动物微生物学教研室铜仁554300

目的克隆并表达布鲁菌Ⅳ型分泌系统效应蛋白BspA、BspF并推测其免疫逃逸机制。方法以羊种布鲁菌16M基因组为模板，利用PCR扩增布鲁菌分泌蛋白BspA（BAB1-0678）、BspF（BAB1-1948）基因，连接质粒pMD19-T后测序，将测序正确的基因片段... 详细信息

目的克隆并表达布鲁菌Ⅳ型分泌系统效应蛋白BspA、BspF并推测其免疫逃逸机制。方法以羊种布鲁菌16M基因组为模板，利用PCR扩增布鲁菌分泌蛋白BspA（BAB1-0678）、BspF（BAB1-1948）基因，连接质粒pMD19-T后测序，将测序正确的基因片段经双酶切后克隆至pET-30a（＋）载体中，转化大肠埃希菌BL21（DE3），经异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷（IPTG）诱导表达，通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶（SDS—PAGE）和蛋白质免疫印迹（Western blot）分析鉴定表达产物；并与先天性免疫分子的蛋白序列进行比对分析。结果成功克隆了BspA、BspF基因，片段大小分别为576、1287bp；SDS—PAGE显示，BspA、BspF蛋白相对分子质量分别约为28×10^3、55×10^3；Western blot分析显示，BspA、BspF蛋白均可与布鲁菌阳性血清发生特异性反应，并且与先天性免疫分子白细胞介素1R（IL-1R）、髓样细胞分化因子88（MyD88）、Toll样受体2（TLR-2）、Toll样受体4（TLR-4）、单免疫球蛋白白介素1相关受体（SIGIRR）有同源性。结论成功获得了布鲁菌BspA、BspF蛋白，通过同源性分析，证明BspA、BspF蛋白在布鲁菌感染宿主过程中具有免疫逃逸的作用。研究结果为进一步研究布鲁菌的致病机制和揭示布鲁菌免疫逃逸机制提供了理论依据。

关键词：布鲁菌属蛋白质类 Ⅳ型分泌系统原核表达免疫逃逸

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