目的本研究通过诱导结核分枝杆菌在低氧环境中进入持留状态,来比较分析不同时间不同低氧环境下结核分枝杆菌中的PhoP基因和PhoR基因的表达水平差异,探讨研究PhoPR双组分信号转导系统对结核分枝杆菌持留性的调控机制。方法首先对结核分枝杆菌国际标准无毒株(H37Ra)和结核分枝杆菌国际标准强毒株(H37Rv)在不同低氧环境下进行培养,提取每个样本菌株的总RNA,并进行完整性鉴定;运用SYBR Green I实时荧光定量PCR检测每个样本菌株中PhoP基因和PhoR基因的表达水平;比较分析不同时间不同低氧环境下的结核分枝杆菌菌株PhoP基因和PhoR基因的表达水平差异。结果在不同时间点对低氧环境的结核分枝杆菌PhoP基因和PhoR基因的表达水平进行检测,结果显示:与第10d相比,培养至第15d时H37Rv菌株和H37Ra菌株中的PhoP基因和PhoR基因的表达水平均显著上调,差异有统计学意义(P<0.05);并且培养至第25d时,H37Rv菌株中的PhoP基因和PhoR基因的表达水平比H37Ra菌株表达均上调2.34倍,差异有统计学意义(P<0.05)。结论在不同时间点相同毒力的结核分枝杆菌的PhoPR双组分信号转导系统中PhoP基因和PhoR基因在不同低氧环境下的表达存在差异,而且在相同时间点不同毒力结核分枝杆菌的PhoPR双组分信号转导系统中PhoP基因和PhoR基因在不同低氧环境下的表达也存在差异,表明PhoPR双组分信号转导系统对结核分枝杆菌的持留性具有调控作用。
目的通过革兰阴性菌LPS(脂多糖,Lipopolyssacride,LPS)预处理体外培养大脑皮质小胶质细胞,模拟轻型细菌感染,尝试建立体外LPS耐受模型,探讨小胶质细胞促炎细胞因子分泌反应的变化情况。方法体外培养与分离小鼠大脑皮质小胶质细胞,免疫荧光法进行纯度鉴定。纯化的小胶质细胞分为未刺激对照组、0.01μg/m L LPS单次刺激组、1μg/m L LPS刺激组、预处理组(先采用0.01μg/m L LPS刺激18h后,再用1μg/m L LPS刺激6、24、48h)。处理后收获各组细胞培养上清,采用ELISA法检测小胶质细胞TNF-α、IL-6分泌水平与变化趋势。结果经过LPS处理的小胶质细胞(0.01μg/m L LPS单次刺激组、1μg/m L LPS单次刺激组与预处理组)TNF-α与IL-6分泌增加,但预处理组在经过1μg/m L LPS再次刺激不同时间点(6h、24 h、48 h)分泌的总体水平变化不大(P>0.05)。在6 h,1μg/m L单次刺激组、预处理组的TNF-α与IL-6水平比对照组水平明显升高,差异均具有统计学意义(P<0.05);在48 h,TNF-α水平在1μg/m L单次刺激组、预刺激组中也较对照组水平明显升高(P<0.01)。另外,在LPS预处理24h与48h后,TNF-α水平较1μg/m L单次刺激组均有下降趋势,其中在48h,预刺激组较1μg/m L单次刺激组分泌减少,差异具有统计学意义(P<0.05),但IL-6水平预刺激组较1μg/m L单次刺激组分泌具有增加趋势。结论体外LPS预处理可在小胶质细胞中诱导部分耐受效应,表现为某些关键炎性细胞因子的分泌抑制,但并非是一种全面的抑制,这可能与细胞来源以及信号通路分子的重新调配有关。
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