检索结果-内蒙古大学图书馆

齐鲁医学杂志 2013年第3期28卷 192-195页

作者：王娟纪新强吕庆凤张文卿青岛大学医学院附属医院妇产科山东青岛266003 青岛大学医学院基础学院病原微生物学教研室山东青岛266003

目的探讨脂质体法转染Raf激酶抑制蛋白(RKIP)基因对宫颈癌细胞增殖的影响及RKIP在宫颈癌转移中的作用。方法应用脂质体法,将含有人RKIP基因的反义质粒asRKIP及空白质粒pcDNA3.1(-)分别转染宫颈癌Caski细胞,采用G418筛选出稳定转染的宫颈... 详细信息

目的探讨脂质体法转染Raf激酶抑制蛋白(RKIP)基因对宫颈癌细胞增殖的影响及RKIP在宫颈癌转移中的作用。方法应用脂质体法,将含有人RKIP基因的反义质粒asRKIP及空白质粒pcDNA3.1(-)分别转染宫颈癌Caski细胞,采用G418筛选出稳定转染的宫颈癌Caski细胞。空白质粒转染后Caski细胞即空白对照细胞命名为Caski-(-),asRKIP转染后Caski细胞分为平行的两组分别命名为Caski-asRKIP#1细胞和Caski-asRKIP#2细胞,应用Western Blotting方法检测各种Caski细胞中RKIP蛋白的表达,建立RKIP表达下调的宫颈癌细胞系(转染细胞系及对照细胞系);采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法、软琼脂集落形成实验和Transwell小室实验检测RKIP表达下调对宫颈癌细胞增殖的影响。结果成功建立了RKIP表达下调的Caski宫颈癌细胞系。Caski-asRKIP#1细胞和Caski-asRKIP#2细胞中RKIP的表达水平明显低于Caski-(-)细胞和Caski细胞,Cas-ki-asRKIP#1和Caski-asRKIP#2细胞的增殖速度比Caski-(-)细胞和Caski细胞快,差异有显著性(t=4.98～6.43,P<0.05);而Caski细胞和Caski-(-)细胞的增殖速度无明显差异(t=1.36,P>0.05)。各组Caski细胞均可以在双层琼脂中增殖形成细胞集落,Caski-asRKIP#1细胞和Caski-asRKIP#2细胞与Caski-(-)细胞、Caski细胞比较,形成的集落大且数目多,差异有统计学意义(F=19.98,P<0.05);Caski-(-)细胞与Caski细胞集落数目比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 RKIP表达下调可能对宫颈癌细胞的增殖具有一定的促进作用。

关键词：脂质体法 Raf激酶抑制蛋白基因宫颈肿瘤

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基于基因序列的乙型肝炎病毒基因分型方法的比较

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南昌大学学报（理科版） 2013年第2期37卷 179-184页

作者：邹淑慧应颖周艳熊英余克花刘金辉莫冰南昌大学医学院微生物学教研室江西南昌330006 江西儿童医院检验科江西南昌330006 江西省疾病预防控制中心疾病监测所江西南昌330029

采用3种不同的生物信息分析法对HBV S基因序列进行分析以鉴定HBV基因型,并比较分析各方法的优缺点。采集10例HBV慢性感染者血清,抽提HBV DNA,PCR扩增HBV S基因并测序。分别采用Clustal X软件和Bioedit软件计算S基因核苷酸和氨基酸同源性... 详细信息

采用3种不同的生物信息分析法对HBV S基因序列进行分析以鉴定HBV基因型,并比较分析各方法的优缺点。采集10例HBV慢性感染者血清,抽提HBV DNA,PCR扩增HBV S基因并测序。分别采用Clustal X软件和Bioedit软件计算S基因核苷酸和氨基酸同源性;DNAstart软件、Clustal X软件和Mega 4软件绘制S基因遗传进化树;以及在线Genotyping软件,将10例S基因序列与不同型及亚型HBV S序列比较以鉴定基因型及亚型。S基因核苷酸和氨基酸同源性计算结果显示1,3,4,5,7,8,9,10号标本与B2AF121243同源性最高,核苷酸同源性分别是98.0%,99.0%,98.8%,99.1%,99.2%,99.5%,99.5%,99.6%,而2号标本与C2 M38636同源性最高,核苷酸同源性为97.7%,6号标本与C4GQ377630同源性最高,核苷酸同源性为97.3%;构建系统树法鉴定结果为1,3,4,5,7,8,9,10号标本与B2AF121243进化距离最近,而2号标本与C2M38636进化距离最近,6号标本与C4GQ377630进化距离最近;Genotyping比对发现1,3,4,5,7,8,9,10号标本属于B基因型,2,6号标本属于C基因型。结论S基因核苷酸及氨基酸同源性的计算法可有效用于乙型肝炎病毒基因分型,是对现有分型方法系统树构建法以及在线Genotyping法的补充。

关键词：乙型肝炎病毒基因型基因测序

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热休克预处理对对乙酰氨基酚所致小鼠急性肝损伤的保护作用

热休克预处理对对乙酰氨基酚所致小鼠急性肝损伤的保护作用

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作者：李三强杜景霞朱沙郑州大学基础医学院微生物学与免疫学教研室河南科技大学医学院生化与分子生物学教研室河南科技大学医学院药理学教研室河南科技大学肝损伤与修复分子医学重点实验室

目的探讨热休克预处理对对乙酰氨基酚(AAP)诱导的小鼠急性肝损伤的保护作用。方法 40℃分别热休克(HS)处理小鼠10 min(HS10组)、20 min(HS20组)和30 min(HS30组),室温恢复8 h后,小鼠ip给予AAP 550 mg·kg~(-1)诱导急性肝损伤,分别于... 详细信息

目的探讨热休克预处理对对乙酰氨基酚(AAP)诱导的小鼠急性肝损伤的保护作用。方法 40℃分别热休克(HS)处理小鼠10 min(HS10组)、20 min(HS20组)和30 min(HS30组),室温恢复8 h后,小鼠ip给予AAP 550 mg·kg~(-1)诱导急性肝损伤,分别于AAP后0,6,24,42和72 h进行相关指标检测。赖氏法检测小鼠血清中天冬氨酸转氨酶(AST)和丙氨酸转氨酶(ALT)活性,HE染色进行病理学分析,免疫组化法检测给予AAP后0 h,小鼠肝热休克蛋白70(HSP70),细胞色素P4501A2(CYP1A2)和增殖细胞核抗原(PCNA)的表达,Western印迹法检测给予AAP后0,6,24,42和72 h时小鼠PCNA的表达。结果与AAP对照组相比,HS20组小鼠血清中AST和ALT酶活水平显著降低(P<0.05),而HS10组和HS30组小鼠无显著差异。与AAP对照组相比,HS20显著降低了AAP诱导的小鼠肝损伤程度(P<0.05),而HS10和HS30未显著降低肝损伤的程度。HS20显著诱导了小鼠肝HSP70(P<0.01),CYP1A2(P<0.01)和PCNA(P<0.05)的表达,而HS10和HS30显著诱导了小鼠肝HSP70和CYP1A2(P<0.05)的表达,但未明显诱导PCNA的表达。与HS10和HS30相比,HS20更加显著地诱导了HSP70和CYP1A2的表达(P<0.05)。HS20组小鼠在注射AAP后0,6,24,42和72 h,小鼠肝PCNA的表达均显著高于AAP对照组(P<0.05)、HS10和HS30组(P<0.05)。结论 40℃热休克预处理20 min可以有效降低AAP诱导的小鼠急性肝损伤程度,加速肝损伤后的修复。

关键词：热休克对乙酰氨基酚急性肝损伤保护作用

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热休克预处理对对乙酰氨基酚所致小鼠急性肝损伤的保护作用

热休克预处理对对乙酰氨基酚所致小鼠急性肝损伤的保护作用

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2013年（第三届）中国药物毒理学年会暨药物非临床安全性评价研究论坛

作者：李三强杜景霞朱沙河南科技大学肝损伤与修复分子医学重点实验室河南科技大学医学院生化与分子生物学教研室河南科技大学医学院药理学教研室郑州大学基础医学院微生物学与免疫学教研室

目的探讨热休克预处理对对乙酰氨基酚（AAP）诱导的小鼠急性肝损伤的保护作用。方法 40℃分别热休克（HS）处理小鼠10 min（HS1O组）、20 min（HS20组）和30 min（HS30组）,室温恢复8 h后,小鼠ip给予AAP 550 mg·kg诱导急性肝损伤,... 详细信息

目的探讨热休克预处理对对乙酰氨基酚（AAP）诱导的小鼠急性肝损伤的保护作用。方法 40℃分别热休克（HS）处理小鼠10 min（HS1O组）、20 min（HS20组）和30 min（HS30组）,室温恢复8 h后,小鼠ip给予AAP 550 mg·kg诱导急性肝损伤,分别于AAP后0,6,24,42和72 h进行相关指标检测。赖氏法检测小鼠血清中天冬氨酸转氨酶（AST）和丙氨酸转氨酶（ALT）活性,HE染色进行病理学分析,免疫组化法检测给予AAP后0 h,小鼠肝热休克蛋白70（HSP70）,细胞色素P4501A2（CYP1A2）和增殖细胞核抗原（PCNA）的表达,Western印迹法检测给予AAP后0,6,24,42和72 h时小鼠PCNA的表达。结果与AAP对照组相比,HS20组小鼠血清中AST和ALT酶活水平显著降低（P<0.05）,而HS10组和HS30组小鼠无显著差异。与AAP对照组相比,HS20显著降低了AAP诱导的小鼠肝损伤程度（P<0.05）,而HS10和HS30未显著降低肝损伤的程度。HS20显著诱导了小鼠肝HSP70（P<0.01）,CYP1 A2（P<0.01）和PCNA（P

关键词：热休克对乙酰氨基酚急性肝损伤保护作用

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TGF-β1参与调控LMP1介导信号转导通路的研究

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青岛大学医学院学报 2013年第5期49卷 386-389页

作者：张少燕刘霞王笑峰王云罗兵青岛大学医学院微生物学教研室山东青岛266021 青岛大学医学院附属医院检验科山东青岛266021 青岛大学医学院附属医院生殖医学中心山东青岛266021

目的探讨转化生长因子β1(TGF-β1)和EB病毒(EBV)潜伏期膜蛋白1(LMP1)在EBV相关胃癌发生中的作用及其机制。方法设计合成靶向LMP1的siRNA649转染EBV阳性胃癌细胞系GT38,并与TGF-β1联合作用,RT-PCR检测LMP1沉默和TGF-β1作用对LMP1介导... 详细信息

目的探讨转化生长因子β1(TGF-β1)和EB病毒(EBV)潜伏期膜蛋白1(LMP1)在EBV相关胃癌发生中的作用及其机制。方法设计合成靶向LMP1的siRNA649转染EBV阳性胃癌细胞系GT38,并与TGF-β1联合作用,RT-PCR检测LMP1沉默和TGF-β1作用对LMP1介导的信号转导通路相关因子转录表达的影响。结果与细胞对照和脂质体对照比较,siRNA649、siRNA649+TGF-β1分别作用GT38细胞系后,基质金属蛋白酶9(MMP9)、生存素(Survivin)和细胞黏附分子1(ICAM-1)表达降低,而细胞周期依赖性激酶4(CDK4)表达升高,差异均有显著性(F=10.48～26.23,P<0.05);siRNA649+TGF-β1联合作用后表皮生长因子受体(EGFR)表达水平显著高于对照组(F=9.47,P<0.05),而siRNA649组与对照组比较差异无显著性(P>0.05)。TGF-β1作用EBV阳性细胞系(GT38和SNU719)和EBV阴性细胞系(SGC7901和HGC-27),与对照组相比GT38细胞中ICAM-1表达显著降低,差异有显著性(F=30.36,P<0.05),其他细胞中ICAM-1的表达差异无显著性(P>0.05);4种细胞系TGF-β1作用前后MMP9、Survivin、CDK4和EGFRmRNA转录表达差异均无显著意义(P>0.05)。结论 LMP1可以调控MMP9、Survivin和CDK4表达,LMP1与TGF-β1相互作用可调控ICAM-1和EGFR的转录表达。

关键词：转化生长因子β EB病毒潜伏期膜蛋白1 EB病毒相关胃癌

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某院分离的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌ESBLs基因检测及分型

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中国感染控制杂志 2013年第5期12卷 339-343页

作者：王喜仁王笑峰赵淑堂青岛大学医学院微生物学教研室山东青岛266021 威海市立医院山东威海264200 威海卫人民医院山东威海264200

目的了解某院分离的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌产生的超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)基因型。方法采用表型确证试验测定并收集该院产ESBLs大肠埃希菌(40株)和肺炎克雷伯菌(20株),提取质粒DNA。采用特异性引物扩增TEM、SHV和CTX-M系列基因,测... 详细信息

目的了解某院分离的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌产生的超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)基因型。方法采用表型确证试验测定并收集该院产ESBLs大肠埃希菌(40株)和肺炎克雷伯菌(20株),提取质粒DNA。采用特异性引物扩增TEM、SHV和CTX-M系列基因,测序后进行序列分析。结果 60株表型确证试验阳性的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌,聚合酶链反应(PCR)扩增均阳性,包括TEM、SHV、CTX-M-3组和CTX-M-9组4种基因型。大肠埃希菌中上述4种基因型阳性率分别为37.50%(15株)、2.50%(1株)、62.50%(25株)、50.00%(20株);肺炎克雷伯菌上述4种基因型阳性率分别为40.00%(8株)、90.00%(18株)、65.00%(13株)、40.00%(8株)。100.00%的大肠埃希菌和80.00%的肺炎克雷伯菌产生blaCTX-M,12.50%(5/40)的大肠埃希菌和25.00%(5/20)的肺炎克雷伯菌携带2种CTX-M酶基因。23例TEM基因皆为TEM-1型;19例SHV型基因包括SHV-1型6株、SHV-11型6株、SHV-12型5株及SHV-25型2株,仅SHV-12为ESBLs基因,且均来源于肺炎克雷伯菌;66例CTX-M型基因,其中CTX-M-14在大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的检出率分别为45.00%和35.00%,CTX-M-55检出率均为35.00%,CTX-M-15检出率分别为20.00%和15.00%,检出少量CTX-M-3、CTX-M-65、CTX-M-101及CTX-M-123基因型。结论该院分离的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌ESBLs基因型以CTX-M为主,其次为SHV-12。CTX-M基因型中以CTX-M-14最为常见,CTX-M-101及CTX-M-123型ESBLs为山东省首次检出。

关键词：大肠埃希菌肺炎克雷伯菌超广谱β-内酰胺酶基因

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EBVaGC肿瘤差异表达的基因表达谱芯片筛选

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青岛大学医学院学报 2013年第5期49卷 381-385页

作者：张岩贾玉平王云王笑峰罗兵青岛大学医学院微生物学教研室山东青岛266021 淄博市中心医院检验科潍坊市人民医院检验科

目的应用全基因组表达谱芯片技术,分析EB病毒(EBV)阳性胃癌细胞系与EBV阴性胃癌细胞系基因表达谱差异,筛选EBV相关胃癌(EBVaGC)相关基因。方法采用TRIzol一步法提取3种EBV阳性胃癌细胞系(GT38、PT、SNU-719)和3种EBV阴性胃癌细胞系(SGC7... 详细信息

目的应用全基因组表达谱芯片技术,分析EB病毒(EBV)阳性胃癌细胞系与EBV阴性胃癌细胞系基因表达谱差异,筛选EBV相关胃癌(EBVaGC)相关基因。方法采用TRIzol一步法提取3种EBV阳性胃癌细胞系(GT38、PT、SNU-719)和3种EBV阴性胃癌细胞系(SGC7901、HGC-27、MKN-45)总RNA并纯化,逆转录合成cDNA,利用荧光染料(Cy3)标记aaUTP,转录合成标记的cRNA,与Agilent人类全基因组表达谱芯片杂交,扫描荧光信号图像,对芯片原始数据扣除本底和归一化处理,利用倍数差异和t检验计算筛选差异表达的基因,采用上海博豪生物在线分析系统进行基因的功能注释和关联分析,明确差异基因的生物学功能。将处理前后差异表达倍数>2.0或<0.5,且在不同样本间的具有统计学差异的基因判断为差异表达基因。选取特定的差异表达基因,应用实时荧光PCR技术验证芯片结果的可靠性。结果聚类热图及矩阵图分析显示,EBV阳性胃癌细胞系与阴性胃癌细胞系之间表达谱存在明显差异。EBV阳性胃癌细胞系与阴性胃癌细胞系之间有322条基因的表达有明显差异,其中与肿瘤相关的基因涉及转录翻译、信号转导、黏附、细胞增殖和凋亡以及免疫应答等多种生物学过程。选取6条差异基因进行验证,结果有3条基因表达上调,3条基因表达下调,表达趋势与芯片结果一致。结论 EBV阳性胃癌细胞系与阴性胃癌细胞系基因表达存在明显差异,提示EBV感染可影响胃癌细胞相关基因的表达,分析这些差异表达基因有助于阐明EBV感染在EBVaGC发生发展中的作用机制,为进一步筛选EBVaGC特异性肿瘤标记物以及进行生物治疗提供理论依据。

关键词：寡核苷酸序列分析疱疹病毒4型人胃肿瘤基因表达癌基因

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甲型流感病毒核蛋白的表达与鉴定及其B细胞表位的预测

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西部医学 2013年第6期25卷 824-828页

作者：李莎刘冯欢李明远李燕张菁杨靖丁娜娜李婉宜王保宁四川大学华西基础医学与法医学院微生物学教研室四川成都610041 成都中医药大学医学技术学院四川成都611137

目的构建甲型流感病毒核蛋白(nucleoprotein,NP)的原核表达载体,诱导NP融合蛋白在大肠杆菌中的表达与鉴定;预测人NP蛋白的B细胞抗原表位。方法以pcDNA3.1(+)/NP为模板,利用PCR方法扩增目的片段NP,再将此片段插入原核表达载体pET-32a(+)... 详细信息

目的构建甲型流感病毒核蛋白(nucleoprotein,NP)的原核表达载体,诱导NP融合蛋白在大肠杆菌中的表达与鉴定;预测人NP蛋白的B细胞抗原表位。方法以pcDNA3.1(+)/NP为模板,利用PCR方法扩增目的片段NP,再将此片段插入原核表达载体pET-32a(+),并进行PCR鉴定、酶切鉴定和测序鉴定,将鉴定正确的质粒转入表达菌Rosetta-gami(2)中,用异丙基-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导融合蛋白的表达,用SDS-PAGE和Western Blot检测表达产物。按Chou-Fasman和Gamier-Robson方法预测其编码蛋白的二级结构,采用Karplns-Schulz方法预测蛋白骨架区的柔韧性;用Kyte-Doolittle方法预测其亲水性,Emini方法预测蛋白质表面可能性及Jameson-Wolf方法预测抗原性指数。结果成功构建了流感病毒核蛋白(NP)的原核表达载体,经SDS-PAGE检测NP蛋白得到了表达,Western Blot证明表达的重组蛋白具有免疫活性。在蛋白质第6～11、79～91、241～248和319～326区段附近很可能为B细胞表位优势区域。结论流感病毒核蛋白的表达及B细胞表位的预测为流感病毒的快速诊断试剂的研发工作提供了基础。

关键词：流感病毒核蛋白 B细胞表位

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布鲁菌致病特点和疫苗的研究新进展

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微生物学杂志 2013年第3期33卷 81-85页

作者：白旭华吕昌龙内蒙古民族大学医学院微生物学与免疫学教研室内蒙古通辽028000 中国医科大学免疫研究所辽宁沈阳110001

布鲁菌能够干扰宿主细胞发挥固有和适应性免疫应答,这是布鲁菌突出的致病特点。布鲁菌通过减少、修饰或隐藏病原相关分子模式,经由脂筏进入巨噬细胞后形成布氏小体,实现胞内生存复制,从而导致机体的持续性感染。深入了解布鲁菌逃避机体... 详细信息

布鲁菌能够干扰宿主细胞发挥固有和适应性免疫应答,这是布鲁菌突出的致病特点。布鲁菌通过减少、修饰或隐藏病原相关分子模式,经由脂筏进入巨噬细胞后形成布氏小体,实现胞内生存复制,从而导致机体的持续性感染。深入了解布鲁菌逃避机体免疫应答的机制有助于研制新型有效的疫苗,如DNA疫苗、重组蛋白疫苗等。

关键词：布鲁菌布鲁菌病致病机制疫苗

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一种易于推广的分离与培养小鼠原代肝细胞的方法

一种易于推广的分离与培养小鼠原代肝细胞的方法

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中华医学会第十六次全国病毒性肝炎及肝病学术会议

作者：张丁丁辛永宁罗兵姜曼刘昊刚宣世英青岛市市立医院消化内二科中国海洋大学医药学院青岛市消化疾病重点实验室青岛大学医学院微生物学教研室青岛大学医学院

目的对传统的两步灌流法进行简化,并对细胞纯化与培养方法进行改进,建立一种可以在普通实验室普及推广的分离与培养小鼠原代肝细胞的方法。方法水合氯醛腹腔注射麻醉小鼠,75%酒精消毒腹部皮肤;T形切口打开腹腔,暴露肝脏;将肠管及肠系膜... 详细信息

目的对传统的两步灌流法进行简化,并对细胞纯化与培养方法进行改进,建立一种可以在普通实验室普及推广的分离与培养小鼠原代肝细胞的方法。方法水合氯醛腹腔注射麻醉小鼠,75%酒精消毒腹部皮肤;T形切口打开腹腔,暴露肝脏;将肠管及肠系膜翻向左侧,暴露下腔静脉和门静脉,穿线备用;剪断肝上缘与膈肌相连的镰状韧带,暴露肝脏上方进入膈肌的下腔静脉,穿线结扎;下腔静脉穿

关键词：小鼠原代肝细胞分离与培养细胞活率

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