目的:在已有的众多防治骨质疏松的复方中药中,龟板是最常用的动物药之一,具有滋阴潜阳,益肾强骨等功效,但其作用机制有待进一步明确。神经肽NPY及血管活性肠肽VIP广泛分布于中枢及外周神经系统中,且与骨代谢存在密切联系。因此,本课题观察了骨质疏松症发生过程中脑、下丘脑和骨组织中NPY、VIP及其受体的变化,龟板水提液对骨质疏松症的药效学评价及基于NPY、VIP及其受体的药理机制研究,以期为OP的防治提供新的思路。方法:1.选用3月龄SD雌性大鼠,利用双侧去卵巢法建立骨质疏松症模型。采用灌胃给药,PTE组给予80 mg/kg/d的龟板水提液,OVX及CON组给予等量生理盐水。灌胃给药12 w后,收集大鼠骨、全脑、下丘脑组织。2.采用Micro-CT及HE染色观察骨微结构的变化,采用Q-PCR、Western blot、免疫组织化学等方法检测ALP、BMP2、COL1、Runx2等骨形成相关基因的表达。3.采用Q-PCR、Western blot检测全脑、下丘脑及骨组织中NPY、VIP及其受体NPY1R、NPY2R、VIP1R、VIP2R m RNA及蛋白的表达。结果:1.在脑组织中,与CON组相比:OVX大鼠NPY、NPY1R、NPY2R的m RNA及蛋白表达显著增加;VIP1R、VIP2R的m RNA及蛋白表达显著增加,VIP m RNA的表达显著增加,VIP蛋白表达显著降低。2.在下丘脑中,与CON组相比:OVX大鼠NPY及NPY2R的m RNA及蛋白表达显著增加,NPY1R的蛋白表达显著增加,m RNA水平无显著变化;VIP的m RNA及蛋白表达显著增加,VIP1R m RNA的表达显著增加,蛋白水平明显降低,VIP2R m RNA的表达显著降低,蛋白水平显著增加。3.在骨组织中,与CON组相比:OVX大鼠NPY的m RNA及蛋白的表达显著增加,NPY1R的m RNA及蛋白表达显著降低,NPY2R的蛋白表达显著降低;VIP1R的m RNA及蛋白表达明显增加,VIP2R的m RNA及蛋白表达显著下降,VIP蛋白的表达显著下降。***可改善OVX大鼠骨微结构,明显增加ALP、BMP2、COL1和Runx2的m RNA水平,显著促进COL1、Runx2蛋白的表达。***干预12 w后,结果显示,在全脑组织中,PTE可明显降低OVX大鼠中NPY、NPY1R的m RNA及蛋白表达,显著降低NPY2R m RNA的表达,对NPY2R蛋白的表达无影响。PTE可显著降低OVX大鼠VIP1R、VIP2R的m RNA的表达,对VIP m RNA的表达无影响,PTE可增加VIP蛋白的表达,降低VIP2R蛋白的表达,对VIP1R蛋白的表达无明显作用。***干预12 w后,结果显示,在下丘脑中,PTE可显著降低OVX大鼠NPY、NPY1R、NPY2R的m RNA表达,下调NPY1R蛋白的表达,但对NPY及NPY2R蛋白的表达无明显作用。PTE可降低OVX大鼠VIP、VIP1R m RNA的表达,对VIP2R m RNA无明显作用,PTE可增加VIP蛋白的表达,但对VIP1R及VIP2R蛋白水平无明显作用。***干预12 w后,结果显示,在骨组织中,PTE可减少OVX大鼠骨组织中NPY m RNA及蛋白的表达,显著增加NPY1R及NPY2R蛋白的表达,但对NPY1R m RNA无显著作用。PTE可降低VIP蛋白的表达、下调VIP1R m RNA及蛋白的表达,增加VIP2R m RNA及蛋白的表达。结论:1.去卵巢骨质疏松大鼠可引起脑、下丘脑及骨组织中NPY、VIP及其受体的变化。2.龟板水提液可通过调节脑、下丘脑及骨组织中NPY、VIP及其受体的表达改善骨微结构、促进骨形成。
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