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中国实验血液学杂志 2006年第2期14卷 232-236页

作者：汪亚伦王彤许凤冮岩王杰沈阳医学院生化及分子生物学教研室沈阳110034 东京大学医学院血液研究室

本研究旨在探讨急性髓系白血病(AML)患者6;9染色体易位与DEK-CAN融合基因表达之间的关系及临床意义。患者骨髓细胞短期培养后按常规方法制备染色体,采用R显带技术进行染色体核型分析。用逆转录巢式聚合酶链反应(RT-nest-PCR)对4例AML患... 详细信息

本研究旨在探讨急性髓系白血病(AML)患者6;9染色体易位与DEK-CAN融合基因表达之间的关系及临床意义。患者骨髓细胞短期培养后按常规方法制备染色体,采用R显带技术进行染色体核型分析。用逆转录巢式聚合酶链反应(RT-nest-PCR)对4例AML患者的骨髓或外周血单个核细胞DEK-CAN融合基因表达进行了分析,并对其中3例行异体骨髓移植(allo-BMT)患者进行动态随访。结果表明:4例急性髓系白血病患者为t(6;9)(p23;q34)易位;4例初诊、再发及完全缓解期患者均不同程度检出DEK-CAN融合基因,占100%;其中初诊、再发期表达明显增强,完全缓解期减弱;3例患者allo-BMT后1-24个月均表达DEK-CANmRNA。临床资料显示4例AML患者中2例于CR后1-24个月复发(其中1例接受异体骨髓移植)、死亡,其余2例完全缓解,在治疗中先后接受异体骨髓移植,现仍然生存。结论:DEK-CAN基因是AML发病的分子基础,检测DEK-CAN融合基因对于AML的诊断、疗效观察及预后判断有重要意义。

关键词：急性髓系白血病 6 9染色体易位 DEK-CAN融合基因

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微RNA对K562细胞基因表达谱的影响

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南方医科大学学报 2006年第5期26卷 606-609页

作者：周珏宇马文丽费嘉丁大鹏石嵘姜立郑文岭南方医科大学基因工程研究所广东广州510515 暨南大学医学院生物化学与分子生物学教研室广东广州510632 华南基因组研究中心广东广州510800

目的应用基因芯片技术,研究微RNA(miR-181a)对人白血病K562细胞基因表达谱的影响。方法针对miR-181a成熟序列设计并合成miR-181aRNAduplexes,采用OligofectamineTM脂质体法转染K562细胞。应用AgilentHuman1A寡核苷酸基因芯片,检测和分... 详细信息

目的应用基因芯片技术,研究微RNA(miR-181a)对人白血病K562细胞基因表达谱的影响。方法针对miR-181a成熟序列设计并合成miR-181aRNAduplexes,采用OligofectamineTM脂质体法转染K562细胞。应用AgilentHuman1A寡核苷酸基因芯片,检测和分析对照组与微RNA转染组间的基因表达谱差异。结果从20173个候选基因中,筛选出228个差异表达基因。与对照组K562细胞比较,表达上调的基因有59个,主要有代谢相关基因、抑癌基因、信号转导相关基因、免疫防御相关基因等;表达下调的有169个,主要有原癌基因、DNA结合与转录因子、代谢相关基因、信号转导相关基因、细胞周期及发育相关基因等。RT-PCR技术验证了CTCF、ZAP70、SEMA4C和RALA4个基因表达的变化。结论微RNA转染K562细胞48h后,影响了细胞内一系列基因的表达。这些基因可能与微RNA的功能相关,同时也是转录后水平上抑制基因表达的调控方式实现的基础。这为进一步深入研究微RNA的功能及其具体的作用机制提供了重要的线索和依据。

关键词： K562细胞微RNA 白血病基因表达谱基因芯片

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皮质酮诱导的大鼠Leydig细胞凋亡中caspase-3活化途径的研究

皮质酮诱导的大鼠Leydig细胞凋亡中caspase-3活化途径的研究

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华东六省一市生物化学与分子生物学学会2006年学术交流会

作者：王骞陈亮高惠宝上海交通大学医学院生化与分子生物学教研室上海交通大学医学院生化与分子生物学教研室上海交通大学医学院生化与分子生物学教研室

目的:超生理剂量的皮质酮(大鼠体内的糖皮质激素)可诱导大鼠Leydig细胞凋亡,使细胞数量减少,最终导致睾酮合成水平降低。皮质酮引起大鼠Leydig细胞凋亡的细胞内机制是一经死亡受体 Fas／FasL介导,其后伴有caspase-3激活的过程。但是casp... 详细信息

目的:超生理剂量的皮质酮(大鼠体内的糖皮质激素)可诱导大鼠Leydig细胞凋亡,使细胞数量减少,最终导致睾酮合成水平降低。皮质酮引起大鼠Leydig细胞凋亡的细胞内机制是一经死亡受体 Fas／FasL介导,其后伴有caspase-3激活的过程。但是caspase-3上游的caspase家族的其他成员(如 caspase8、9)在皮质酮诱导Leydig细胞凋亡中的作用尚未进一步探讨。本研究是在我们新近研究工作的基础上,评价在皮质酮诱导的大鼠Leydig细胞凋亡中是否有caspase-8和caspase-9的参与,以进一步探讨此凋亡过程的胞内信号转导机制。方法:采用荧光分光光度法检测经皮质酮处理的大鼠Leydig 细胞中caspase-8活性,以DNA梯状电泳条带作为评价细胞凋亡的指标,观察caspase-8抑制剂是否能够抑制细胞凋亡,采用RT-PCR检测皮质酮诱导的大鼠Leydig细胞中caspase-9的mRNA水平。结果:在皮质酮诱导的大鼠Leydig细胞中出现caspase-8活性增高,以12小时最为显著,升高的caspase -8的活性可被caspase-8抑制剂抑制,并导致Leydig细胞的凋亡过程被阻断。Leydig细胞中 caspase-9的mRNA水平在皮质酮作用下上升,同样以12小时最为显著。结论:皮质酮诱导的大鼠Leydig 细胞凋亡与caspase-8和caspase-9有关。

关键词：皮质酮 Leydig细胞凋亡 caspase-8 caspase-9

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金边瑞香的抗肿瘤作用研究

金边瑞香的抗肿瘤作用研究

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第三届全国中医药免疫学术研讨会

作者：徐静傅颖媛黄彬红赣南医学院生化与分子生物学教研室南昌大学医学院免疫学教研室赣南医学院生化与分子生物学教研室

目的:研究金边瑞香浸膏在体内外的抗肿瘤作用。方法:1、金边瑞香浸膏体外抑瘤实验:(1)采用MTT法检测不同浓度金边瑞香浸膏对SMMC7721、 NKM45、A549、S180肿瘤细胞株增殖作用的影响;(2)光镜下观察不同浓度金边瑞香浸膏对SMMC7721 细胞... 详细信息

目的:研究金边瑞香浸膏在体内外的抗肿瘤作用。方法:1、金边瑞香浸膏体外抑瘤实验:(1)采用MTT法检测不同浓度金边瑞香浸膏对SMMC7721、 NKM45、A549、S180肿瘤细胞株增殖作用的影响;(2)光镜下观察不同浓度金边瑞香浸膏对SMMC7721 细胞形态的影响;(3)采用流式细胞术观察不同浓度金边瑞香浸膏对SMMC7721细胞增殖周期的影响。2、金边瑞香浸膏对S180荷瘤小鼠体内抑瘤实验及免疫功能影响:小鼠右腋部皮下接种S180 肿瘤,单纯荷瘤模型组给予生理盐水,实验组给予不同浓度金边瑞香浸膏,每天灌胃给药1次,连续给药10天,并设环磷酰胺阳性对照组,未荷瘤小鼠为正常对照组,测定以下指标:(1)解剖分离皮下瘤块,计算各组平均瘤重和抑瘤率;(2)MTT法检测ConA诱导的小鼠T淋巴细胞增殖的功能;(3)鸡红细胞吞噬试验检测巨噬细胞吞噬功能。结果:1、金边瑞香浸膏浓度为0．03125g／ml～lg／ml范围内对体外培养的SMMC7721、NKM45、 A549、S180肿瘤细胞生长有抑制作用,并在0．03125g／ml～0．5g／ml范围内成量效关系,0．5g／ml 金边瑞香浸膏对SMMC7721、NKM45、A549、S180肿瘤细胞生长抑制率分别达到65．82％、60．38％、 42．36％、49．94％。2、金边瑞香浸膏能使SMMC-7721细胞增殖周期G0-G1细胞增多,S期细胞减少, 0．5g／ml剂量组G0-G1期达到80．64％。3、金边瑞香浸膏各剂最组S180荷瘤小鼠的肿瘤重量与生理盐水对照组相比均有降低趋势,其中8g／Kg／d、40g／kg／d金边瑞香组与生理盐水组相比差异有显著性 (P<0．01、P<0．05),抑瘤率为43．57％、28．13％。4、金边瑞香各剂量组与生理盐水组S180荷瘤小鼠相比,ConA对小鼠脾脏淋巴细胞的刺激指数均有增高,其中40g／Kg·d和8g／Kg·d金边瑞香组增高明显(P<0．01)。生理盐水组和环磷酰胺组与正常对照组比较,ConA诱导的T淋巴细胞增殖的刺激指数均降低(P<0．01)。5、金边瑞香各剂量组与生理盐水对照组S180荷瘤小鼠相比,小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬率和吞噬指数均有增高,其中40g／Kg·d和8g／Kg·d金边瑞香组增高明显(P<0．05),尤其是8g／Kg·d金边瑞香剂量组,其吞噬率要高于40g／Kg·d金边瑞香剂量组(P<0．05)。生理盐水组和环磷酰胺组与正常对照组相比,小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬率和吞噬指数均降低(P<0．01)。结论:1、金边瑞香浓度为0．03125g／ml～lg／ml范围内对体外培养的肿瘤细胞生长有抑制作用,并在0．03125g／ml～0．5g／ml范围内与剂量成正相关。2、金边瑞香能使体外培养的SMCC7721 细胞周期阻滞在G0-G1期。3、金边瑞香8g／Kg／d～40g／kg／d对小鼠移植性肿瘤S180有明显的抑制作用,以8g／Kg／d作用明显。4、金边瑞香在8g／Kg／d～40g／kg／d剂量范围内能明显增强荷S180瘤小鼠的非特异性免疫、细胞免疫功能,以8g／Kg／d作用明显。

关键词：金边瑞香肿瘤细胞免疫功能抗肿瘤作用

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O-糖基化位点预测及糖基化酶催化特点

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生命的化学 2006年第1期26卷 25-27页

作者：刘可人金美芳吴士良苏州大学医学院基础医学系生物化学与分子生物学教研室苏州大学生化工程研究所苏州215123

O-糖链维持所连接蛋白质部分的空间构象。O-糖基化作为生物体内重要的生物过程,其起始步骤具有复杂的高度选择性,迄今为止还未发现固定的模式。人们通过比较已知O-糖基化部位周围的氨基酸序列,推测出O-糖基化位点的一些规律及其酶的催... 详细信息

O-糖链维持所连接蛋白质部分的空间构象。O-糖基化作为生物体内重要的生物过程,其起始步骤具有复杂的高度选择性,迄今为止还未发现固定的模式。人们通过比较已知O-糖基化部位周围的氨基酸序列,推测出O-糖基化位点的一些规律及其酶的催化特性。

关键词： O-糖基化黏蛋白脯氨酸串联重复 ppGaNTases

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活化T细胞核因子的研究进展

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中国男科学杂志 2006年第5期20卷 69-72页

作者：柴蔚然高惠宝上海交通大学医学院生化与分子生物学教研室上海200025

活化T细胞核因子（nuclear factor of activated Tcells，NFAT）蛋白在许多免疫细胞中，如：T细胞、B细胞、NK细胞、肥大细胞、单核细胞和嗜酸性粒细胞上均有表达，在机体免疫反应中对诱导细胞因子和其它基因的转录起着重要作用。在免... 详细信息

活化T细胞核因子（nuclear factor of activated Tcells，NFAT）蛋白在许多免疫细胞中，如：T细胞、B细胞、NK细胞、肥大细胞、单核细胞和嗜酸性粒细胞上均有表达，在机体免疫反应中对诱导细胞因子和其它基因的转录起着重要作用。在免疫系统外，如心肌、骨骼肌、睾丸和卵巢中也有广泛的分布，提示它在这些组织和细胞中也具有重要功能。NFAT蛋白的活性受钙调蛋白磷酸酯酶（calcineurin，

关键词： NFAT CaN Ca^2+信号 T细胞核因子

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hVEGF_(165)单克隆工程细胞的筛选和鉴定

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外科理论与实践 2006年第1期11卷 49-53页

作者：叶展李劲松赵涵芳陈诗书上海交通大学医学院生化与分子生物学教研室上海200025

目的:用基因工程方法改造成纤维细胞,筛选出能够持续分泌人血管内皮细胞生长因子(hVEGF165)的细胞株,为难于愈合创面(如糖尿病性慢性溃疡)的治疗提供有效方法。方法:将含有hVEGF165的穿梭质粒pCDNA3-hVEGF165导入NIH3T3细胞,使用G-418... 详细信息

目的:用基因工程方法改造成纤维细胞,筛选出能够持续分泌人血管内皮细胞生长因子(hVEGF165)的细胞株,为难于愈合创面(如糖尿病性慢性溃疡)的治疗提供有效方法。方法:将含有hVEGF165的穿梭质粒pCDNA3-hVEGF165导入NIH3T3细胞,使用G-418根据有限稀释法筛选出7个单克隆细胞株。挑选出整合有hVEGF165基因且表达最高的一个细胞克隆在DNA、mRNA和蛋白质水平进行鉴定,同时使用四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT)、鸡胚实验检测表达产物的生物学活性。结果:PCR和Southern印迹证明hVEGF165基因已整合入NIH-3T3细胞基因组,RT-PCR和Northern印迹则表明该细胞株能够表达hVEGF165-mRNA。用hVEGF165-ELISA法证实在蛋白质水平该细胞株能够持续表达hVEGF165 3个月以上,并始终保持非常高的水平。MTT实验显示其具备较强的促进内皮细胞增殖的功能,而鸡胚实验则表明该工程细胞有很强的促进胚胎血管生成的作用。结论:成功地制备了hVEGF165单克隆工程细胞,为创伤愈合的基因治疗提供实验准备。

关键词：血管内皮生长因子人克隆细胞基因疗法

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MicroRNA抑制BCL2表达的初步研究

MicroRNA抑制BCL2表达的初步研究

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华东六省一市生物化学与分子生物学学会2006年学术交流会

作者：赵涵芳黄胜林吴怡张兴黔上海交通大学医学院基础医学院生化与分子生物学教研室上海交通大学医学院基础医学院生化与分子生物学教研室上海交通大学医学院基础医学院生化与分子生物学教研室上海交通大学医学院基础医学院生化与分子生物学教研室

在实验中,我们发现一株细胞,用RT-PCR和western blot检测该株细胞BCL2的表达水平,发现转录水平上有较高的表达,而蛋白水平表达相对较低(与Hela-S3比较)。由于miRNA通常抑制的靶基因的翻译,因此我们考虑在这个细胞中BCL2是否受miRNA的调... 详细信息

在实验中,我们发现一株细胞,用RT-PCR和western blot检测该株细胞BCL2的表达水平,发现转录水平上有较高的表达,而蛋白水平表达相对较低(与Hela-S3比较)。由于miRNA通常抑制的靶基因的翻译,因此我们考虑在这个细胞中BCL2是否受miRNA的调控。利用miRNA靶位点搜索程序 TargetScan法,查找BCL2可能受调控的miRNA,发现miR-15a和miR-16可能调控BCL2的表达。经 BLAST(http:／／***／BLAST／,Search for short,nearly exact matches)搜索,找出在基因组中的定位,其序列在AF440619中,miR-15和miR-16串连排列在一起。从AF440619获取一段包含miR-15和miR-16的DNA序列,利用pemier5设计PCR引物,以正常人血液DNA为模板, PCR扩增,电泳回收并克隆了miR-15a和miR-16,构建pcDNA3-miR-15a-16,转染293细胞48h后收集细胞,抽提RNA,RT-PCR检测BCL2的表达水平,PCR结果显示pcDNA3-miR-15a-16对BCL2的转录水平无明显影响;抽提蛋白质western blot检测BCL2的表达水平,结果显示pcDNA3-miR-15a-16 与对照pCDNA3相比可抑制BCL2的表达。实验结果初步表明了BCL2蛋白质水平表达受miR-15a和 miR-16的调控。最近,Cimmino A报道了miR-15a和miR-16可抑制BCL2的表达,实验还认为过表达 miR-15a和miR-16可引起白血病细胞的凋亡是由于抑制BCL2的表达引起的,在我们的实验中也发现过表达miR-15a和miR-16可引起细胞明显的变化,但我们认为单独抑制BCL2的表达并不会引起细胞的凋亡,我们已有实验表明抑制BCL2的表达只是引起细胞对凋亡的敏感性增强,因此miR-15a和 miR-16可能引起其它凋亡相关基因的变化,这有待进一步研究。

关键词： MicroRNA 初步研究

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白藜芦醇诱导K562细胞凋亡过程中Bcl-2蛋白水平的改变

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中国临床药理学与治疗学 2006年第4期11卷 421-423页

作者：温志震于宝海魏虎来苏海翔郝春燕甘肃省铁路中心医院血液肿瘤科兰州大学医学实验中心兰州大学基础医学院生化与分子生物学教研室

目的:观察白藜芦醇对K562细胞的诱导凋亡效应,探讨其可能的作用机制。方法:应用噻唑蓝(MTT)比色法、光镜、电镜观察K562细胞凋亡;流式细胞术(FCM)测定K562细胞Bcl-2、P53蛋白水平的变化;比色法检测Caspase-3活性变化。结果:白藜芦醇可抑... 详细信息

目的:观察白藜芦醇对K562细胞的诱导凋亡效应,探讨其可能的作用机制。方法:应用噻唑蓝(MTT)比色法、光镜、电镜观察K562细胞凋亡;流式细胞术(FCM)测定K562细胞Bcl-2、P53蛋白水平的变化;比色法检测Caspase-3活性变化。结果:白藜芦醇可抑制K562细胞增殖,光镜和电镜下观察呈典型凋亡形态改变,Bcl-2蛋白表达明显下调,Caspase-3活性明显增强。结论:白藜芦醇可通过Bcl-2依赖性Caspase-3激活而诱导K562细胞凋亡。

关键词：白藜芦醇白血病凋亡

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酵母单杂交筛选人食管癌细胞系SHEEC中NF-kappa B元件结合蛋白

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癌变．畸变．突变 2006年第4期18卷 310-313页

作者：牛永东许丽艳韩溟方王楷沈忠英李恩民汕头大学医学院生化与分子生物学教研室汕头大学医学院肿瘤病理研究室

背景与目的:从食管癌细胞cDNA文库中筛选能够特异性结合NF-kappaB核心元件的蛋白质分子,探讨NGAL基因的表达调控机制,探寻NGAL基因在食管上皮细胞癌变中过表达的原因。材料与方法:应用酵母单杂交系统,以三重NF-kappaB元件寡聚核苷酸串... 详细信息

背景与目的:从食管癌细胞cDNA文库中筛选能够特异性结合NF-kappaB核心元件的蛋白质分子,探讨NGAL基因的表达调控机制,探寻NGAL基因在食管上皮细胞癌变中过表达的原因。材料与方法:应用酵母单杂交系统,以三重NF-kappaB元件寡聚核苷酸串为诱饵,对人食管癌细胞系SHEECcDNA酵母杂交文库进行筛选,应用DNA测序及生物信息学技术对筛选克隆进行分析。结果:共获得30个阳性克隆,包括4种编码蛋白,2个hypotheticalprotein,2种线粒体基因,3类非编码RNA等。结论:应用酵母单杂交手段筛选出食管癌细胞NF-kappaB核心元件结合蛋白,但只是一种初步的实验,还需进一步研究证实。

关键词：酵母单杂交食管癌 cDNA文库

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