检索结果-内蒙古大学图书馆

西安交通大学学报（医学版） 2002年第4期23卷 344-347,413页

作者：王晓侠李胜利付员根姚小宝刘晖宁小萱刘志国朱宏亮樊代明西安交通大学第二医院院耳鼻喉科西安710004 汕头大学医学院生化与分子生物学教研室汕头515031 西京医院消化病研究所西安710032 西安交通大学第一医院耳鼻喉科西安710061

目的　进行促凋亡治疗喉癌实验 ,构建和鉴定携带反义HSP70 (heatshockprotein 70 )基因的真核表达载体。方法　将HSP70cDNA反向克隆入 pcDNA 3.1,构建CMV启动子控制的真核表达载体 pcDNA AHSP70 ,用酶切鉴定结果 ;应用该载体转染人喉表... 详细信息

目的　进行促凋亡治疗喉癌实验 ,构建和鉴定携带反义HSP70 (heatshockprotein 70 )基因的真核表达载体。方法　将HSP70cDNA反向克隆入 pcDNA 3.1,构建CMV启动子控制的真核表达载体 pcDNA AHSP70 ,用酶切鉴定结果 ;应用该载体转染人喉表皮样癌细胞Hep 2 ,G4 18筛选阳性克隆 ;westernblot和免疫组化检测转染前后瘤细胞的HSP70的表达。检测转染前后瘤细胞的生物学性状。结果　获得 pcDNA AHSP70真核表达载体 ,HSP70反义RNA阻断了Hep 2细胞的HSP70的表达 ,经westernblotting和免疫组化证实 ,实验组瘤细胞不能表达或低表达HSP70 ,而对照和空载体组高表达HSP70。转染反义HSP70的真核表达载体的Hep 2细胞比空载体组和对照组的细胞生长缓慢 ,细胞周期可见实验组出现亚二倍凋亡峰 ,而空载体组没有。结论　本研究成功构建了反义HSP70真核表达载体并在人喉癌细胞得以表达。

关键词：热休克蛋白70 真核表达载体构建喉癌基因表达

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γ射线对白血病细胞株K562中MMP-2表达的影响及牛磺酸的防护作用

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中国血液流变学杂志 2002年第4期12卷 276-278页

作者：范雁吴士良徐岚仇灏徐爱华苏州大学生化工程研究所苏州大学医学院生化及分子生物学教研室苏州215007

目的　探讨γ射线对白血病细胞中MMP - 2表达的影响 ,以及从细胞水平初步探讨牛磺酸对肿瘤细胞受辐照后MMP - 2表达的抑制作用。方法　6 0 Coγ射线 1 5Gy照射白血病细胞K562作为阳性对照组 ,不照射的作为阴性对照组 (1 -不加药 ,2 -加... 详细信息

目的　探讨γ射线对白血病细胞中MMP - 2表达的影响 ,以及从细胞水平初步探讨牛磺酸对肿瘤细胞受辐照后MMP - 2表达的抑制作用。方法　6 0 Coγ射线 1 5Gy照射白血病细胞K562作为阳性对照组 ,不照射的作为阴性对照组 (1 -不加药 ,2 -加药 2 0 0mg/L) ,另设三组实验组 (照射 ,加药量分别为 50mg/L、1 0 0mg/L、2 0 0mg/L) ,照后 1 2h收集 ,细胞经处理后采用Western blotting技术分析各组细胞MMP - 2的表达水平。结果　 1 5Gy照射剂量阳性对照组细胞MMP - 2表达量明显增加 ,阴性对照组 1中MMP - 2表达量较少 ,实验组细胞MMP - 2表达量随剂量增加而依次减少 ,其中 2 0 0mg/L组与阴性对照组 1细胞MMP - 2表达量基本一致。结论　 1 5Gy6 0 Coγ射线照射促进白血病细胞K562中MMP - 2表达 ,电离辐射可引起肿瘤细胞的进一步侵袭和转移 ;加不同剂量牛磺酸后对MMP - 2表达有抑制作用 ,且与剂量呈相关性。

关键词： γ射线牛磺酸白血病细胞K562 MMP-2

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NGAL的结构与功能研究进展

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生命科学 2002年第1期14卷 27-29页

作者：许丽艳李恩民熊华淇汕头大学医学院生化与分子生物学教研室汕头大学医学院肿瘤病理研究室汕头515031 汕头大学医学院肿瘤病理研究室

NGAL(neutrophil gelatinase-associated lipocalin）是一种新的lipocalin,其结构与功能的研究进展为人瞩目。目前认为ＮＧＡＬ具有运输疏水性小分子，调节明胶酶B(gelatinase B或matrixmetalloproteinase-9,ＭＭＰ－９）活性等功能，并可能参与免疫炎症反应以及肿瘤的发生发展，特别是肿瘤的浸润转移等过程。最近，ＮＧＡＬ蛋白的空间结构已被研究清楚。这对于促进ＮＧＡＬ生物学作用或功能的研究，特别是对其新的生物学作用或功能的探索，比如与肿瘤的关系（ＮＧＡＬ可能是一种新的癌基因或促癌基因）将具有十分重要的意义。对此作者进行了综合评述。

关键词： NGAL 基因结构蛋白质结构 MMP-9 肿瘤

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Ⅴ型腺病毒纤维蛋白基因真核表达质粒的构建及表达

引用

中国肿瘤生物治疗杂志 2002年第1期9卷 27-31页

作者：付员根刘志国温博贵王晓侠吴开春樊代明汕头大学医学院生化与分子生物学教研室广东汕头515031 第四军医大学全军消化病研究所西安交通大学第二医院耳鼻喉科陕西西安710032

目的 :构建腺病毒纤维蛋白基因的真核表达质粒 ,并检测其在真核细胞中的表达 ,为腺病毒靶向性载体构建创造条件。方法 :采用限制性内切酶技术 ,酶切腺病毒骨架质粒pAdEasy 1,经多次亚克隆 ,最后完成克隆纤维蛋白基因并构建其真核表达质... 详细信息

目的 :构建腺病毒纤维蛋白基因的真核表达质粒 ,并检测其在真核细胞中的表达 ,为腺病毒靶向性载体构建创造条件。方法 :采用限制性内切酶技术 ,酶切腺病毒骨架质粒pAdEasy 1,经多次亚克隆 ,最后完成克隆纤维蛋白基因并构建其真核表达质粒。用脂质体法将构建好的真核表达质粒瞬时转染COS 7细胞 ,于转染后 72h ,用Westernblot法检测所表达的蛋白。结果 :克隆成功纤维蛋白基因 ,并构建纤维蛋白基因真核表达质粒pcDNA/Fiber,经限制性内切酶酶切鉴定及测序证实了其正确性。Westernblot结果显示 ,新表达蛋白在变性条件下大小为 6 2kD ,而在非变性条件下为 186kD。结论 :纤维蛋白基因真核表达质粒能在真核细胞中表达 ,产物具有三聚体结构 ,可用于腺病毒靶向性载体的构建。

关键词：基因转染 V型腺病毒纤维蛋白真核表达质粒构建

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Ⅴ型腺病毒纤毛基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

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细胞与分子免疫学杂志 2001年第6期17卷 518-520页

作者：付员根刘志国温博贵王晓侠吴开春樊代明汕头大学医学院生化与分子生物学教研室广东汕头515031 第四军医大学全军消化病研究所西安交通大学第二医院耳鼻喉科

目的克隆腺病毒纤毛基因,为构建腺病毒靶向性载体创造条件。方法应用限制性内切酶酶切技术酶切腺病毒骨架质粒pAdEasy1,经多次亚克隆最后完成克隆纤毛基因并构建纤毛基因原核表达载体。用IPTG诱导纤毛蛋白的表达,再用SDS-PAGE和We... 详细信息

目的克隆腺病毒纤毛基因,为构建腺病毒靶向性载体创造条件。方法应用限制性内切酶酶切技术酶切腺病毒骨架质粒pAdEasy1,经多次亚克隆最后完成克隆纤毛基因并构建纤毛基因原核表达载体。用IPTG诱导纤毛蛋白的表达,再用SDS-PAGE和Westernblot对其进行分析。结果成功地克隆纤毛基因。质粒pBS/Fiber经限制性内切酶酶切鉴定及测序证实了其正确性。经质粒pQE/Fiber转化的细菌,在IPTG诱导下可表达一种新的蛋白,并于5h表达量最高。经Westernblot证实,在变性条件下表达蛋白的Mr为62000,在非变性条件下为186000。结论已克隆的纤毛基因能在大肠杆菌中表达,并具有三聚体结构,可用于腺病毒载体靶向性构建。

关键词：腺病毒克隆大肠杆菌表达纤毛基因

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DNA甲基化在基因表达调控中的作用

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国外医学（临床生物化学与检验学分册） 2001年第6期22卷 287-288页

作者：潘泽民周祖钊谢建新新疆石河子大学医学院生化教研室 832002 新疆石河子大学医学院分子生物学与遗传学研究中心

DNA甲基化是基因表达的重要调控方式 ,甲基化与癌症的发生有关 ,现已发现抑癌基因启动子高度甲基化后 ,可使这些基因表达受抑 ,同癌症的发生关系密切。随着DNA甲基化抑制剂的使用。

关键词： DNA甲基化 DNA甲基转移酶基因调控

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P53反义RNA抑制肝细胞癌生长的研究

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癌变．畸变．突变 2001年第4期13卷 269-270页

作者：盖晓东欧阳红生等北华大学医学院病理解剖教研室，吉林市132001 解放军军需大学生化与分子生物学教研室，长春130064

目的：针对突变型P53基因的致癌性，采用反义RNA技术以阻断肝细胞内源突变型P53的表达，研究对肝癌细胞生长的影响，为肝癌基因治疗提供可靠的理论基础。方法：采用定向克隆法将人野生型P53基因cDNA反向插入到哺乳动物表达载体PCR3．1的... 详细信息

目的：针对突变型P53基因的致癌性，采用反义RNA技术以阻断肝细胞内源突变型P53的表达，研究对肝癌细胞生长的影响，为肝癌基因治疗提供可靠的理论基础。方法：采用定向克隆法将人野生型P53基因cDNA反向插入到哺乳动物表达载体PCR3．1的EcorRⅠ和XbaⅠ位点，构建了反义PCR3.1-P53(AS)表达载体。用免疫组化法鉴定Bel-7402肝癌细胞株为内源P53突变株，用脂质体转染法将PCR3．1-P53（AS）、PCR3．1空载体导入Bel7402细胞中，同时设Bel7402细胞对照组。用MTT法测定细胞的生长、用FCM测定细胞周期的变化。结果：转入PCR3．1-P53（AS）Bel7402细胞生长明显受到抑制，而转入PCR3．1的Bel7402细胞生长与对照组Bel7402细胞之间差异不大；FCM结果也表明转入PCR3.1-P53（AS）的细胞的生长明显被阻滞于G0／G1期，而其他两组之间则相差不大，表明可能P53反义RNA对肝癌细胞突变型P53表达的阻断，肝癌细胞显示出正常方向逆转迹象。结论：本研究结果表明，肝细胞癌内源突变型P53的表达被反义RNA抑制后，细胞增殖速度显著下降，FCM的结果也证明细胞部分受阻于G0／G1期，显示了向正常方向逆转的迹象。此研究结果即为肝癌发生提供理论基础，也为肝癌基因治疗提供新思路。

关键词： P53反义RNA 肝细胞癌癌细胞生长抑制作用

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V型腺病毒纤毛基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

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细胞与分子免疫学杂志 2001年第6期17卷 518-521页

作者：付员根温博贵刘志国吴开春樊代明王晓侠汕头大学医学院生化与分子生物学教研室第四军医大学全军消化病研究所西安交通大学第二医院耳鼻喉科

目的克隆腺病毒纤毛基因,为构建腺病毒靶向性载体创造条件.方法应用限制性内切酶酶切技术,酶切腺病毒骨架质粒pAdEasy-1,经多次亚克隆最后完成克隆纤毛基因,并构建纤毛基因原核表达载体.用IPTG诱导纤毛蛋白的表达,再用SDS-PAGE和Western... 详细信息

目的克隆腺病毒纤毛基因,为构建腺病毒靶向性载体创造条件.方法应用限制性内切酶酶切技术,酶切腺病毒骨架质粒pAdEasy-1,经多次亚克隆最后完成克隆纤毛基因,并构建纤毛基因原核表达载体.用IPTG诱导纤毛蛋白的表达,再用SDS-PAGE和Western blot对其进行分析.结果成功地克隆纤毛基因.质粒pBS/Fiber经限制性内切酶酶切鉴定及测序证实了其正确性.经质粒pQE/Fiber转化的细菌,在IPTG诱导下可表达一种新的蛋白,并于5h表达量最高.经Western blot证实,在变性条件下表达蛋白的Mr为62 000,在非变性条件下为186 000.结论已克隆的纤毛基因能在大肠杆菌中表达,并具有三聚体结构,可用于腺病毒载体靶向性构建.

关键词：腺病毒克隆大肠杆菌表达纤毛基因

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伴线粒体tRNAleu（UUR）基因A3243G点突变糖尿病的PASA诊断方法

伴线粒体tRNAleu（UUR）基因A3243G点突变糖尿病的PASA诊断方法

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中国生物化学与分子生物学会第八届会员代表大会暨全国学术会议

作者：韩伟国杨伟珠徐丰查锡良金由辛王德宝中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所分子生物学国家重点实验室镇江医学院生化教研室中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所分子生物学国家重点实验室复旦大学医学院生化教研室中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所分子生物学国家重点实验室中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所分子生物学国家重点实验室

根据等位基因特异性PCR（PASA）原理,建立由线粒体tRNA基因A3243G点突变引起的糖尿病的基因诊断新方法.我们设计并合成了四个寡合苷酸引物,引物1,引物2,引物3为5′端引物,分别特异性地对应于突变型tRNA基因,野生型tRNA基因和线粒体DNA（... 详细信息

根据等位基因特异性PCR（PASA）原理,建立由线粒体tRNA基因A3243G点突变引起的糖尿病的基因诊断新方法.我们设计并合成了四个寡合苷酸引物,引物1,引物2,引物3为5′端引物,分别特异性地对应于突变型tRNA基因,野生型tRNA基因和线粒体DNA（mtDNA）,引物4为共用3′端引

关键词：糖尿病点突变线粒体 A3243G UUR leu

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tRNALeu（UUR）氨基酸接受活力的影响

tRNALeu（UUR）氨基酸接受活力的影响

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中国生物化学与分子生物学会第八届会员代表大会暨全国学术会议

作者：韩伟国杨伟珠徐丰查锡良金由辛王德宝中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所分子生物学国家重点实验室镇江医学院生化教研室中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所分子生物学国家重点实验室复旦大学医学院生化教研究中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所分子生物学国家重点实验室中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所分子生物学国家重点实验室

用化学方法合成人线粒体tRNA~(（Leu）(UUR))的野生型和突变型（A3243G）基因,分别克隆到pGEM-9zf（-）载体中,并在T7RNA聚合酶的体外转录系统中转录出不含修饰核苷酸的野生型和突变型tRNA~(（Leu）(UUR)),其转录产物可达模板量的100倍... 详细信息

用化学方法合成人线粒体tRNA~(（Leu）(UUR))的野生型和突变型（A3243G）基因,分别克隆到pGEM-9zf（-）载体中,并在T7RNA聚合酶的体外转录系统中转录出不含修饰核苷酸的野生型和突变型tRNA~(（Leu）(UUR)),其转录产物可达模板量的100倍.在大肠杆菌亮氨酰tRNA合成酶的催化下,突变型tRNA~(（Leu）(UUR))的亮氨酸接受活

关键词：突变型野生型 UUR Leu 氨基酸

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