检索结果-内蒙古大学图书馆

第十一届全国化学生物学学术会议

作者：王冲冲李燕青施仙庆周家宏周林魏少华江苏省生物医药功能材料重点实验室南京师范大学化学与材料科学学院

一氧化碳(CO)和血红蛋白有很强的结合能力,会降低血红蛋白对氧气的运输能力,因此CO又被称为沉默的杀手。然而,几十年的研究表明,内源性CO是一种普遍存在的第二信使,参与广泛的生理和病理反应,如炎症、增殖和凋亡。此外,CO在提高血管通... 详细信息

一氧化碳(CO)和血红蛋白有很强的结合能力,会降低血红蛋白对氧气的运输能力,因此CO又被称为沉默的杀手。然而,几十年的研究表明,内源性CO是一种普遍存在的第二信使,参与广泛的生理和病理反应,如炎症、增殖和凋亡。此外,CO在提高血管通透性中起着重要作用。这对增强肿瘤渗透性和保留(EPR)效应有重要意义,从而提高了在实体肿瘤中积累纳米药物的能力。我们设计合成了表面吸附CO的钯纳米片(PdNS-CO)作为光热触发CO释放的CO纳米供体。PdNS-CO被808 nm的近红外光照射后会将吸收的光能转换成热量,导致材料表面迅速升温,使其表面吸附的CO释放出来。研究发现,释放的CO可提高肿瘤的EPR效应,从而增加肿瘤中PdNS-CO的积累,进而促进其在低激光功率密度光热治疗(PTT)中的应用。

关键词：钯纳米片 CO供体光热治疗 EPR效应

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化瘀祛痰方调控铁死亡相关蛋白减少ApoE-/-小鼠肝脏脂质过氧化的研究

化瘀祛痰方调控铁死亡相关蛋白减少ApoE-/-小鼠肝脏脂质过氧化的...

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第15届中国中西医结合学会基础理论专业委员会学术年会暨第二届广东省中西医结合学会转化医学专业委员会年会

作者：吴瑶宋囡王杰陈丝贾连群王俊岩曹慧敏辽宁中医药大学重大科研平台中医脏象理论及应用教育部重点实验室

目的:观察化瘀祛痰方对ApoE-/-小鼠肝脏铁死亡相关因子的影响,探讨抑制铁死亡相关因子对肝脏脂质过氧化损伤的调控作用。方法:30只ApoE-/-小鼠随机分为模型组、化瘀祛痰方组、辛伐他汀组,10只C57BL/6J小鼠作为空白对照组。模型组及各治... 详细信息

目的:观察化瘀祛痰方对ApoE-/-小鼠肝脏铁死亡相关因子的影响,探讨抑制铁死亡相关因子对肝脏脂质过氧化损伤的调控作用。方法:30只ApoE-/-小鼠随机分为模型组、化瘀祛痰方组、辛伐他汀组,10只C57BL/6J小鼠作为空白对照组。模型组及各治疗组均给予高脂饲料喂养,空白组给予普通饲料喂养。造模4周后化瘀祛痰方组以及辛伐他汀组分别给予相应的药物灌胃,对照组与模型组给予等量的生理盐水。8周后全自动生化分析仪检测血清甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)的含量;HE染色观察肝脏组织病理变化;油红O染色观察脂滴沉积情况;Elisa法检测各组小鼠血清中超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)、活性氧(ROS)水平;Western blot法及Realtime RT-PCR法检测肝脏铁死亡相关因子PTGS2、GPX4、SLC7A11蛋白及mRNA表达。结果:与空白对照组比较,模型组小鼠血清TC、TG和LDL-C含量显著升高,HDL-C含量显著降低(P<0.05或P<0.01)。与模型组相比较,化瘀祛痰组及辛伐他汀组小鼠血清TC、TG和LDL-C含量显著下降,HDL-C含量显著升高(P<0.05或P<0.01)。HE染色结果,模型组小鼠肝细胞肿胀明显,脂肪空泡大量蓄积;化瘀祛痰组及辛伐他汀组肝脏细胞形态恢复正常或部分恢复,脂肪空泡显著减少或消失。油红O染色结果显示,模型组肝细胞肿胀明显,胞浆疏松且含有大量脂滴沉积;化瘀祛痰组及辛伐他汀组肝脏细胞脂肪变性程度减轻,脂肪空泡数量减少,脂质沉积减少。Elisa结果显示,模型组小鼠血清ROS、MDA水平显著升高,SOD活性显著下降(P<0.05或P<0.01);化瘀祛痰组及辛伐他汀组ROS、MDA水平显著降低,SOD活性显著升高(P<0.05或P<0.01)。Western blotting及Realtime RT-PCR结果,模型组小鼠肝组织中PTGS2蛋白及mRNA的表达增高,GPX4、SLC7A11蛋白和mRNA水平显著降低(P<0.05或P<0.01);化瘀祛痰组及辛伐他汀组与模型组相比,PTGS2蛋白及mRNA的表达显著降低,GPX4、SLC7A11蛋白和mRNA水平显著升高(P<0.05或P<0.01)。结论:化瘀祛痰方可能通过调控肝脏铁死亡相关因子,减轻ApoE-/-小鼠脂质过氧化损伤,进而减缓动脉粥样硬化的发展。

关键词：化瘀祛痰方动脉粥样硬化脂质过氧化铁死亡 ApoE-/-小鼠

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MicroRNAs调控干细胞的诱导与分化

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生命科学 2015年第10期27卷 1255-1260页

作者：蒋豆蔻李富荣暨南大学第二临床医学院(深圳市人民医院)干细胞与细胞治疗重点实验室暨南大学医学院病理学与病理生理学系

干细胞根据其所处的发育阶段可分为胚胎干细胞(embryonic stem cell,ESCs)和成体干细胞(somatic stem cell),具有自我复制能力和多向分化潜能,因此,被认为可修复、重建组织器官。近年有大量研究致力于诱导干细胞分化为各种成体细胞,但... 详细信息

干细胞根据其所处的发育阶段可分为胚胎干细胞(embryonic stem cell,ESCs)和成体干细胞(somatic stem cell),具有自我复制能力和多向分化潜能,因此,被认为可修复、重建组织器官。近年有大量研究致力于诱导干细胞分化为各种成体细胞,但诱导过程繁琐与分化效率低下一直困扰着科研人员。Micro RNAs(miRNAs)是在真核生物中发现的一类内源性的具有调控功能的非编码RNA,其大小长约2025个核苷酸。研究表明miRNA可通过抑制干细胞靶m RNA序列的翻译或者降解靶m RNA来调控干细胞的诱导与分化。因此,调控mi RNAs的表达水平可影响分化过程。现就miRNA调控干细胞向成体细胞分化的研究现状和机制作一综述。

关键词： microRNAs 干细胞诱导多能干细胞分化

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基于代谢组学的方法研究双酚A致大鼠肝损伤的机制

基于代谢组学的方法研究双酚A致大鼠肝损伤的机制

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2018年中国质谱学术大会（CMSC 2018）

作者：孙亚新张俊红周园园闫昊徐霞郑州大学药学院河南省肿瘤重大疾病靶向治疗与诊断重点实验室

双酚A是合成聚碳酸酯及食品包装的一种重要有机体,具有类雌激素效应,作为内分泌干扰物,可对人类的神经系统,免疫系统产生影响[1, 2]。本实验采用基于UPLC-MS/MS的代谢组学方法,探究连续暴露于高剂量双酚A(BPA)下引起大鼠肝损伤的机制。S... 详细信息

双酚A是合成聚碳酸酯及食品包装的一种重要有机体,具有类雌激素效应,作为内分泌干扰物,可对人类的神经系统,免疫系统产生影响[1, 2]。本实验采用基于UPLC-MS/MS的代谢组学方法,探究连续暴露于高剂量双酚A(BPA)下引起大鼠肝损伤的机制。SD雄性大鼠,按体重随机分三组(n=5),分别为生理盐水对照组、玉米油载体组和BPA给药组。每日口服给药,连续给药14天,第15天取血清和肝脏组织样品进行生化分析和病理生理学观察。采用UPLC-MS/MS的方法对血清和肝组织样品进行代谢组学分析。实验期间,给药组大鼠与对照组相比精神萎靡,进食量减少。BPA给药组血清中的丙氨酸转氨酶(ALT)的酶活力mean±SD为64.3±10.4 U/L,玉米油载体组为43.5±10.9 U/L,两者之间的差异具有统计学意义(P<0.05),另一个具有较显著差异的指标为碱性磷酸酶,BPA给药组的ALP酶活力mean±SD为340.4±31.4 U/L,玉米油载体组为240.6±36.8 U/L,两者之间差异具有统计学意义(P<0.01)。H&E染色结果显示,BPA给药组与玉米油载体组比较出现炎症细胞浸润性病变。代谢组学结果表明,与载体组相比,BPA给药组中初级和次级胆汁酸显著性下调,花生四烯酸代谢途径中其下游的前列腺素2显著性上调,除此之外还影响三羧酸循环中的柠檬酸和富马酸等。表明BPA给药后能使胆汁酸生物合成,花生四烯酸代谢和能量代谢等途径受到干扰。结果表明,SD大鼠日常暴露于高剂量双酚A下可能通过调控原发性胆汁酸的生物合成,花生四烯酸代谢和能量代谢等途径,造成代谢途径紊乱,进而引起机体功能紊乱,出现肝损伤现象。

关键词： UPLC-MS/MS 双酚A 丙氨酸转氨酶胆汁酸生物合成花生四烯酸代谢

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抗坏血酸对周围神经损伤后华勒变性与神经元存活的影响及其在神经修复的意义

抗坏血酸对周围神经损伤后华勒变性与神经元存活的影响及其在神经...

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作者：李莉霞南方医科大学

学位级别：博士

周围神经损伤(Peripheral nerve injury,PNI)后损伤远端会发生一系列的病理变化,包括轴突和髓鞘的崩解破碎、溶解、吸收,这一系列变化称为华勒变性(Walleriandegeneration)。主要变现为轴突部分发生交替的膨胀、缩窄,之后缩窄的部分会... 详细信息

周围神经损伤(Peripheral nerve injury,PNI)后损伤远端会发生一系列的病理变化,包括轴突和髓鞘的崩解破碎、溶解、吸收,这一系列变化称为华勒变性(Walleriandegeneration)。主要变现为轴突部分发生交替的膨胀、缩窄,之后缩窄的部分会发生断裂,呈现颗粒状。随着轴突的崩解变性,其周围的髓鞘也会发生变性,具体变现为其特有的同心圆样的板层结构松解、变形、内陷,形成一个或多个卵圆形的髓球,并被进一步降解。在这一过程中,施万细胞(Schwann cell,SCs)在其形成的髓鞘崩解后,细胞并不会死亡,且会发生去分化、增殖、迁移和分泌等一系列生物学功能的变化,并能发挥吞噬作用以清除崩解的轴突和髓鞘碎片。与此同时,局部的巨噬细胞受刺激后大量增殖,外周的巨噬细胞也会被募集,它们和SCs一起吞噬和清除轴突和髓鞘碎片,进而为可能的神经再生提供良好的微环境。因周围神经损伤导致轴突断裂的神经元会发生不同程度的退行性变化,甚至发生死亡。如果神经元死亡,轴突再生就完全不可能了,所以促进神经元胞体的存活是轴突再生的最基本要求。因此,华勒变性以及神经元的存活对周围神经损伤后的再生有着至关重要的作用。抗坏血酸(Ascorbic acid,AA)是一种膳食必需的微量营养素,有防治坏血病的功效。它在许多重要的生物过程中着发挥关键作用,如促进胶原、儿茶酚胺、胆固醇和一些肽激素的生物合成。而神经系统中维持着高浓度的AA,说明AA对神经系统尤为重要。近年来有研究表明AA对神经的发育和损伤修复十分重要,如AA参与神经的发生、成熟以及部分神经递质的合成,对神经退行性疾病有治疗作用。本课题组前期研究发现AA可以促进周围神经损伤再生。为了探究AA促进周围神经再生的机制,本课题从华勒变性和神经元存活这2个角度探讨AA促进周围神经再生的可能机制。研究方法:1.切取SD大鼠坐骨神经在体外进行外植块培养,或进行SD大鼠坐骨神经横断损伤后分别灌胃给予AA(200mg/kg)或等量生理盐水以比较有无AA处理对华勒变性的影响。体内外实验均在损伤后5d或8d取材进行组织学(MBP/NF免疫荧光染色、油红O染色、透射电镜)和Western blot(MBP、NF)等检测轴突和髓鞘的退变程度;同时通过MAG,c-Jun免疫荧光染色和Western blot检测SCs的成熟标志物和幼稚标志物的改变,探究AA对SCs去分化的影响;S100/ki67免疫荧光染色判定SCs的增殖;油红O/ED1双染方法评价巨噬细胞的吞噬能力变化。2.在db-cAMP诱导SCs体外分化过程中用AA处理,用定量PCR(MAG,Krox20,PMP22,c-Jun,Sox2,p75)和 Western blot(MAG,Krox20,c-Jun,Sox2)检测SCs成熟标志物和幼稚标志物在转录和翻译水平表达的改变,进一步验证AA对SCs去分化的影响。3.在体外培养SCs并用AA处理,通过WST、BrdU法,Transwell法和微球吞噬法分别检测AA对SCs增殖、迁移和吞噬能力的影响;通过Western blot检测AA对SCs营养因子(NGF,NT-3,GDNF,BDNF)和细胞外基质(laminin)表达的影响。4.采用单侧臂丛神经夹伤模型后分别灌胃给予AA(200mg/kg)或等量生理盐水以比较有无AA处理对神经元存活的影响。通过免疫荧光法(ChAT或NeuN)检测C7节段脊髓和背根节中运动或感觉神经元数量的变化,同时通过免疫荧光法检测C7节段脊髓中星形胶质细胞(GFAP)或小胶质细胞(IBA1)数量的变化,探究AA是否影响运动或感觉神经元的存活;通过免疫荧光法检测C7节段背根节神经元内神经凋亡因子(cleaved-caspase3,Bax/Bc12)或再生因子(GAP43)表达的改变。研究结果:1.体外坐骨神经外植块培养和体内坐骨神经横断后AA组的MBP或NF阳性髓鞘或轴突碎片长度更短、蛋白表达水平更低,ORO阳性着色更多、更强,说明AA加快轴突和髓鞘崩解;同时AA组内SCs的成熟标志物表达降低,幼稚标志物表达增高提示AA在体外或体内华勒变性过程中促进SCs去分化;此外AA组内S100阳性细胞数量和S100/ki67双阳性细胞数量较对照组更多,说明AA在华勒变性过程中促进SCs增殖;AA组内ED1阳性细胞数量和单个ED1阳性细胞内吞噬的ORO阳性脂滴数量更多,提示AA促进巨噬细胞数量的增多,同时增强巨噬细胞的吞噬能力。2.在db-cAMP诱导SCs体外分化过程中用AA后SCs的成熟标志物在转录和翻译水平上表达降低,同样证明AA促进SCs去分化。3.在体外培养SCs并用AA处理后,AA组较对照组BrdU 阳性数量更多、WST的OD值更高,提示AA促进了 SCs的增殖;AA组内SCs吞噬

关键词：抗坏血酸周围神经损伤神经再生华勒变性施万细胞存活神经元

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高气压光电离和化学电离及其在呼出气分析中的应用

高气压光电离和化学电离及其在呼出气分析中的应用

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2018年中国质谱学术大会（CMSC 2018）

作者：李海洋王艳蒋吉春李庆运花磊陈平侯可勇中国科学院分离分析化学重点实验室中国科学院大连化学物理研究所中国科学院大学吉林大学仪器科学与电气工程学院

人体新陈代谢的部分产物经由血液运送至肺部,在肺泡内通过气体交换出现在呼出气体中。呼出气中含有近千种痕量挥发性有机代谢物(VOMs),如酮、醛、醇、烃及含硫化合物等,这些VOMs反映了机体的代谢和病理状况,其中一些物质甚至可作为疾病... 详细信息

人体新陈代谢的部分产物经由血液运送至肺部,在肺泡内通过气体交换出现在呼出气体中。呼出气中含有近千种痕量挥发性有机代谢物(VOMs),如酮、醛、醇、烃及含硫化合物等,这些VOMs反映了机体的代谢和病理状况,其中一些物质甚至可作为疾病的生物标记物。对呼出气中小分子VOMs进行在线分析,可作为一种非侵入式、无损伤、对人体友好的检测手段,用于人体生理状况监测、病理学研究、人体环境暴露状况,以及辅助疾病诊断等。然而,呼出气中的VOMs成分复杂,含量极低,通常在pptv-ppbv量级,且样品湿度大,传统的气相色谱(GC)及色谱-质谱联用(GC-MS)的方法难以实现快速的、高灵敏在线分析。光电离质谱(PI-MS)具有高的电离效率和分子离子产率,以及谱图简单、易解析的特点,在复杂混合物中痕量挥发性有机化合物(VOCs)的在线检测中具有独特的优势。针对呼出气中痕量VOMs的在线检测,我们基于光子能量为10.6 e V的真空紫外(VUV)氪气(Kr)放电灯,发展了一系列用于在线质谱的新型光电离及化学电离技术:将电离源气压提高至h Pa～k Pa量级,研制了高气压光电离源(HPPI),通过增大电离源内样品的分子数密度,提高光电离效率和仪器检测灵敏度,对常见脂肪族和芳香族VOMs的检出限低至mid-pptv;通过向高气压光电离源中通入二溴甲烷(CH2Br2)试剂气体以及利用电离区电场加速光电子的方式,分别开发出光致二溴甲烷阳离子化学电离源(PDCI)和高气压光电子诱导O2+阳离子化学电离源(HPPI-OCI),实现了对呼出气中电离能高、光电离截面低的痕量含硫化合物和短链正构烷烃的高敏度在线检测。基于高气压光电离和化学电离的在线质谱技术,大大提高了仪器的检测灵敏度,同时扩大了直接质谱法可检测的样品范围。将其应用于人体呼出气分析,具有简单、快速、无需任何前处理的优势,将有望成为一种高通量的疾病筛查工具,用于临床上大数据样本分析,有利于发现新的疾病生物标志物,逐步推进呼出气体的分析和检测成为一种新型的临床辅助诊断手段,在医疗诊断领域具有广阔的应用前景。

关键词：高气压光电离化学电离呼出气分析挥发性有机代谢物在线质谱

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酶与化学辅助下超痕量植物激素的色谱-质谱测定

酶与化学辅助下超痕量植物激素的色谱-质谱测定

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2018年中国质谱学术大会（CMSC 2018）

作者：陈义刘翠梅李冬梅郭振朋科学院活体分析化学重点实验室科教融合卓越中心中国科学院化学研究所中国科学院大学

植物激素的测定是现代植物学研究的前沿领域,其挑战在于如何获取超痕量植物激素的真实的时空分布定量信息。目前只有荧光示踪等不甚准确的间接测定方法可用,但荧光分子本身甚至超过植物激素分子自身的尺寸,其信息的可靠性并无保证。先... 详细信息

植物激素的测定是现代植物学研究的前沿领域,其挑战在于如何获取超痕量植物激素的真实的时空分布定量信息。目前只有荧光示踪等不甚准确的间接测定方法可用,但荧光分子本身甚至超过植物激素分子自身的尺寸,其信息的可靠性并无保证。先进的色-质联用等现代仪器分析方法虽能提供定量和定性信息,但灵敏度和时间分辨率却未能满足要求,无法直接用其提取植物激素的时空分布定量信息。为此,我们从样品制备入手,展开了比较系统的研究,先后发展了化学辅助色谱-质谱高灵敏测定方法和超微量毛细管电泳测定方法等[1-3],实现了对拟南芥单花器官中赤霉素的定量测定,能用于够揭示不同花期赤霉素及其相关通路代谢成分的时空分布变化。该方法可以扩展到羧酸类和生物碱类植物激素的测定上。以此为基础,我们引入温和的酶解策略,实现了对植物中结合态赤霉素的测定。由此可以探讨赤霉素的在植物体内的储存状态。本为赤霉素等植物激素在植物发育、生长、枯萎等不同生理、病理过程研究,提供了新的可能,也为拓展以质谱为龙头的现代仪器分析的应用领域和水平,打开了新的通路。根据文献调研,尚未见有与本工作雷同的研究报道。相关研究的细节,届时将在会上讨教各位方家。

关键词：色-质联用超痕量植物激素时空分布酶解化学辅助

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Tau蛋白在缺氧/复氧诱导的PC12细胞凋亡中的机制初探

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中国病理生理杂志 2015年第10期 1918-1918页

作者：赵严冬刘潘虹王晓彤李健玲王华东陆大祥戚仁斌暨南大学医学院病理生理学系国家中医药管理局病理生理实验室暨南大学附属第一医院麻醉科

目的:初步探讨缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)诱导PC12细胞凋亡模型中tau蛋白及其磷酸化水平、凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2的表达情况。方法:类神经元PC12细胞体外培养并传至第三代,进行相应处理,实验分组为正常对照组(control组)、... 详细信息

目的:初步探讨缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)诱导PC12细胞凋亡模型中tau蛋白及其磷酸化水平、凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2的表达情况。方法:类神经元PC12细胞体外培养并传至第三代,进行相应处理,实验分组为正常对照组(control组)、模型组(H/R组)。Annexin V-PI双染流式细胞术分别检测各组凋亡率以确定模型是否成功;造模成功后,使用RIPA裂

关键词：细胞凋亡 Tau 蛋白 PC12

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动态吹扫进样-高气压光电离-飞行时间质谱用于尿液中挥发性有机代谢物的快速分析

动态吹扫进样-高气压光电离-飞行时间质谱用于尿液中挥发性有机代...

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2018年中国质谱学术大会（CMSC 2018）

作者：花磊王艳蒋吉春谢园园侯可勇李海洋中国科学院分离分析化学重点实验室中国科学院大连化学物理研究所中国科学院大学

尿液作为一种可非侵入式采集、易于获取的生物样品,含有大量的小分子挥发性有机代谢物(VOMs)。这些VOMs与人体生理及病理状况密切相关,其中一些VOMs可作为某些疾病,如糖尿病、肺癌等的重要生物标志物,为疾病的快速筛查提供重要信息。此... 详细信息

尿液作为一种可非侵入式采集、易于获取的生物样品,含有大量的小分子挥发性有机代谢物(VOMs)。这些VOMs与人体生理及病理状况密切相关,其中一些VOMs可作为某些疾病,如糖尿病、肺癌等的重要生物标志物,为疾病的快速筛查提供重要信息。此外,对尿液中有毒有害的外源性挥发性有机物进行检测,对于评估污染暴露对人体健康的风险具有重大意义。然而,目前还缺少可用于尿液中VOMs快速分析的技术和方法。为此,我们发展了一种动态吹扫进样-高气压光电离-飞行时间质谱(HPPI-TOFMS)的技术用于尿液中VOMs的快速分析。动态吹扫进样装置包括恒温水浴和鼓泡瓶,首先向鼓泡瓶中的尿液样品中加入少量H2SO4/NaOH进行简单、快速的酸化/碱化处理,通过鼓泡法使酸化/碱化尿液中的VOMs在气泡爆裂过程中大量释放进入气相,VOMs组分在载气的携带下,通过HPPI-TOFMS的进样毛细管进入质谱仪进行快速分析。该方法通过对尿液进行简单的酸化/碱化处理,即可实现高湿度条件下酮类、醇类、酸类、含硫化合物、吡咯、有机胺等的高灵敏直接快速分析,整个分析时间不到6 min。仪器对三甲胺等的检出限低至0.1μg/L,不同物质的日内相对标准偏差(R.S.D.)在0.42%～4.51%,日间相对标准偏差在0.59%～14.44%,具有良好的精密度。该方法实现了对三甲胺、甲苯、2,5-二甲基吡咯三种重要代谢物的准确靶标定量分析。此外,在对健康吸烟者的尿液分析中,发现了一种新的烟草暴露相关的化合物——2,5-二甲基吡咯。动态吹扫进样结合HPPI-TOFMS的方法具有较低的检出限、宽的线性范围以及良好的精密度的优点,将在污染暴露分析、疾病生物标志物的快速筛查以及靶标物质的生理监测中具有重要应用前景。

关键词：高气压光电离飞行时间质谱动态吹扫进样尿液分析挥发性有机代谢物

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光化学衍生质谱分析斑马鱼胚胎不饱和脂质异构体

光化学衍生质谱分析斑马鱼胚胎不饱和脂质异构体

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2018年中国质谱学术大会（CMSC 2018）

作者：赵旭陈静张四纯张新荣马潇潇微量分析测试方法与仪器研制北京市重点实验室清华大学化学系清华大学生命科学学院精密测试技术及仪器国家重点实验室清华大学精密仪器系

斑马鱼(Danio rerio)是发育生物学研究中常用的模式脊椎动物,其基因组和人类具有较高的相似性。斑马鱼胚胎在体外发育,发育周期短,体积较大且通体透明,便于进行各类发育生物学研究。脂质(lipids)作为斑马鱼胚胎中丰度较高的一类生物分子... 详细信息

斑马鱼(Danio rerio)是发育生物学研究中常用的模式脊椎动物,其基因组和人类具有较高的相似性。斑马鱼胚胎在体外发育,发育周期短,体积较大且通体透明,便于进行各类发育生物学研究。脂质(lipids)作为斑马鱼胚胎中丰度较高的一类生物分子,承担着构建生物膜、作为信号传导分子和能量来源等重要功能。近年来,已有研究对斑马鱼胚胎中的主要脂质物种进行成像1、定量分析并揭示发育过程中活跃的脂质代谢2。但常规的质谱脂质组学分析手段很难区分不饱和脂质的碳碳双键(C=C)位置异构体,这一技术难题阻碍了对不饱和脂质代谢相关的生理、病理过程的深入研究。在本研究中,我们采用基于Paternò-Büchi反应的在线光化学衍生法与串联质谱联用3,分别分析斑马鱼胚胎发育早期(0-5 hpf)体细胞(body)与卵黄(yolk)中不饱和磷脂物种碳碳双键(C=C)位置异构体的组成。在254 nm波长紫外光激发下,不饱和脂质和丙酮发生加成反应,生成含有氧杂四元环结构的产物分子。在串联质谱(MS/MS)模式下,反应产物碎裂,产生一对携带有C=C位置信息的诊断离子。根据诊断离子的强度信息,还可以对C=C位置异构体进行相对定量。初步数据显示,部分磷脂酰胆碱(PC)物种的脂肪酸链组成异构体与C=C位置异构体在细胞与卵黄中的相对含量存在较为显著的差异。本研究旨在通过分析斑马鱼胚胎中主要不饱和脂质物种的C=C位置异构体,为基于斑马鱼的发育生物学研究提供一个全新的视角。

关键词：不饱和脂质斑马鱼胚胎发育 Paternò-Büchi反应串联质谱

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