检索结果-内蒙古大学图书馆

中华实验眼科杂志 2012年第5期30卷 408-413页

作者：李彬斌杨筱曦周清何艳花陈剑暨南大学附属第一医院眼科暨南大学医学院眼科研究室广州510630

背景角膜新生血管（CNV）是一种常见的眼部病变，研究其发病机制及其抑制剂是眼科研究的热点和难点。目的研究人羊膜上皮细胞（AECs）培养液对CNV的抑制作用及机制。方法消化法培养及鉴定人AECs，并收集培养液，酶联免疫吸附试验（ELIS... 详细信息

背景角膜新生血管（CNV）是一种常见的眼部病变，研究其发病机制及其抑制剂是眼科研究的热点和难点。目的研究人羊膜上皮细胞（AECs）培养液对CNV的抑制作用及机制。方法消化法培养及鉴定人AECs，并收集培养液，酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测色素上皮衍生因子（PEDF）和白细胞介素1受体拮抗剂（IL-1Ra）在培养液中的质量浓度。兔角膜上皮细胞分离后分别用无血清DMEM培养基、人AECs培养液、混合培养液（DMEM＋人AECs培养液）培养48h，采用实时定量聚合酶链反应（QRT—PCR）法检测不同培养液培养的角膜上皮细胞中血管内皮生长因子（VEGF）及碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）的表达。用含质量分数10％胎牛血清的DMEM培养基培养人脐静脉血管内皮细胞（UVECs），并分别加入无血清DMEM、混合培养液和人AECs培养液，划痕法和细胞计数试剂盒8（CCK8）法检测各组培养液对人UVECs迁移的影响。分别在上述3种培养基中加入终质量浓度为50txg／L的bFGF，CCK8法检测各培养液中人UVECs的增生情况。在原子力显微镜（AFM）下观察人AECs培养液对人UVECs超微结构的影响。结果人羊膜培养和传代细胞角蛋白免疫组织化学染色阳性证实为人AECs。与无血清DMEM组相比，人AECs培养液组的兔角膜上皮细胞VEGFmRNA（1．00＋0．22VS．2．98_＋0．46）及bFGFmRNA（1．00＋0．36VS．2．55-＋0．48）的表达均明显下降，差异均有统计学意义（p_-0．001、0．002）；培养后不同时间人AECs培养液组人UVECs的增生吸光度（A）值明显下降，差异均有统计学意义（P〈0．05），人UVECs的迁移率下降，差异有统计学意义（P〈0．05）。AFM观察见人AECs培养液组的血管内皮细胞膜粗糙、表面颗粒紊乱，细胞间连接及伪足减少。ELISA法检测人AECs培养液中PEDF的质量浓度为（70．41±0．68）Ixg／L，IL-1Ra的质量浓度为（153．56±0．36）-s／L，无血清DMEM组中未检出。结论人AECs培养液可抑制角膜上皮VEGF及bFGF的表达，抑制血管内皮细胞的增生和迁移，细胞结构和功能改变，这可能是其抑制CNV的机制之一。

关键词：人羊膜上皮细胞角膜新生血管血管内皮生长因子人脐静脉血管内皮细胞碱性成纤维细胞生长因子超微结构

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丝裂霉素C对翼状胬肉成纤维细胞膜通透性及超微结构的影响

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中华实验眼科杂志 2012年第6期30卷 490-494页

作者：杨筱曦蔡小芳陈剑李彬斌何艳花张静辉暨南大学附属第一医院眼科暨南大学医学院眼科研究室广州510630 暨南大学化学系广州510630

背景丝裂霉素C（MMC）对人翼状胬肉成纤维细胞的生长和增生有明显的抑制作用，但关于其对细胞膜影响的研究很少。目的探讨MMC对翼状胬肉成纤维细胞膜理化特性及超微结构改变的干预。方法收集翼状胬肉手术切除标本15例，用组织块培养法... 详细信息

背景丝裂霉素C（MMC）对人翼状胬肉成纤维细胞的生长和增生有明显的抑制作用，但关于其对细胞膜影响的研究很少。目的探讨MMC对翼状胬肉成纤维细胞膜理化特性及超微结构改变的干预。方法收集翼状胬肉手术切除标本15例，用组织块培养法培养人成纤维细胞，以波形蛋白免疫组织化学染色法对培养细胞进行鉴定。取传3代后对数生长期细胞以5×10^3个／孔的密度接种于96孔板，将不同质量浓度0、50、100、200、300、400mg／LMMC加入培养孔中处理翼状胬肉成纤维细胞12h，用细胞计数试剂盒8（CCK-8）法检测培养细胞的活力，应用Annexin V—FICT／碘化丙啶（PI）法检测细胞凋亡的情况；利用原子力显微镜（AFM）观察不同质量浓度MMC作用后人成纤维细胞膜超微结构的改变；检测细胞上清液中丙二醛（MDA）的浓度以评价细胞的脂质过氧化程度；检测细胞外液中漏出的乳酸脱氢酶（LDH）含量以评估细胞膜的通透性变化；用Fluo-3／AM标记和流式细胞术检测培养细胞内游离钙离子的变化。结果组织块法原代培养贴壁1～2周可见大量长梭形细胞爬出，波形蛋白检测呈阳性反应。用MMC处理培养细胞12h后，人成纤维细胞的活力减弱，MMC对细胞增生的抑制作用呈剂量依赖性。0、50、100、200、300mg／LMMC处理组细胞凋亡百分比分别为4．2％、4．2％、5．4％、19．3％和25．8％。AFM下可见不同质量浓度MMC作用后人成纤维细胞膜超微结构的异常，不同质量浓度MMC处理组细胞外液中LDH活性及细胞上清液中MDA浓度明显高于对照组，且均随着MMC质量浓度的增加，LDH活性及细胞上清液中MDA浓度逐渐增加，组间两两比较，差异均有统计学意义（P〈0．05）。Fluo-3／AM标记和流式细胞术检测表明，培养细胞内游离钙离子增多。结论MMC能引起翼状胬肉成纤维细胞膜的理化性质改变，其作用呈剂量依赖性，细胞膜是其药效和毒性的作用靶点之一。

关键词：丝裂霉素C 翼状胬肉细胞毒性超微结构

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原子力显微镜观察角膜内皮细胞诱导后诱导多能干细胞的形态学变化

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中华实验眼科杂志 2012年第11期30卷 976-981页

作者：招志毅陈建苏钟敬祥谭美华李善义戴应暨南大学附属第一医院眼科暨南大学医学院眼科研究所再生医学教育部重点实验室广州510632

背景诱导多能干细胞（iPSCs）具有类似胚胎干细胞的分化能力，可以分化为全身各种类型的体细胞，同时不会引起伦理学问题和免疫排斥反应，因此iPSCs有可能作为组织工程角膜内皮重建的种子细胞。目的利用原子力显微镜（AFM）观察人iPSCs... 详细信息

背景诱导多能干细胞（iPSCs）具有类似胚胎干细胞的分化能力，可以分化为全身各种类型的体细胞，同时不会引起伦理学问题和免疫排斥反应，因此iPSCs有可能作为组织工程角膜内皮重建的种子细胞。目的利用原子力显微镜（AFM）观察人iPSCs与兔角膜内皮细胞（CECs）混合共培养后分化iPSCs的形态学变化，并找出其细胞膜超微结构变化的规律。方法分别培养兔CECs和人MMC-iPSCs细胞系，用免疫组织化学法测定iPSCs细胞的标志物以鉴定iPSCs细胞。将传代后7d的iPSCs与60％融合的CECs在内皮细胞培养基中共培养建立混合共培养模型，利用AFM结合倒置显微镜观察CECs及共培养前后iPSCs的形貌和超微结构变化。结果CECs的长度和宽度分别为（66．93±10．48）μm和（44．85±8．14）μm，共培养前未分化的谮SCs的长度和宽度分别为（12．51±1．40）μm和（10．93±1．69）μm，共培养后分化的iPSCs长度和宽度分别为（36．12±10．29）μm和（31．53±9．65）μm。分化的iPSCs长度和宽度均大于共培养前的iPSCs，差异均有统计学意义（P〈0．05）。分化的iPSCs宽度与CECs比较差异无统计学意义（P〉0．05）。CECs细胞膜表面突起的最大宽度和高度分别为（2．11±1．03）μm和（115．68±92．08）nm，膜表面凹陷为窗孔样凹陷，最大宽度为（1．49±0．65）μm，膜表面结构几何参数均方根粗糙度（Rq）为（39．20±7．82）nm，平均粗糙度（Ra）为（30．37±5．32）nm；未分化的iPSCs细胞膜表面突起为颗粒状，突起的最大宽度和高度分别为（0．39±0．22）μm和（13．11±9．18）nm，膜表面凹陷为虫蚀样，凹陷的最大宽度为（0．34±0．18）μm，Rq和Ra分别为（26．60±4．93）nm和（9．97±3．78）nm；分化的iPSCs细胞膜表面突起为指状，突起的最大宽度和高度分别为（1．91±0．76）μm和（106．55±77．27）nm，膜表面凹陷为窗孔样，凹陷的最大宽度为（1．61±1．25）μm，Rq为（57．33±12．80）nm，Ra为（43．63±11．17）nm。分化的iPSCs细胞膜表面突起最大宽度和高度、凹陷最大宽度、Rq、Ra均大于共培养前未分化的iPSCs，差异均有统计学意义（P〈0．05），与CECs比较差异均无统计学意义（P〉0．05）。结论AFM能够敏感地观察到iPSCs与CECs接触共培养7d后iPSCs向CECs方向转化的形态学变化，为进一步研究iPSCs向CECs的分化提供了研究基础。

关键词：诱导多能干细胞角膜内皮细胞混合共培养分化原子力显微镜

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小环肽C＊HSDGIC＊对中波紫外线诱导的视网膜色素人上皮细胞凋亡的影响

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中国病理生理杂志 2012年第5期28卷 914-918页

作者：丁勇程欢欢余榕捷陈建苏暨南大学附属第一医院眼科广东广州510632 暨南大学生物工程研究所广东广州510632 暨南大学医学院眼科研究室广东广州510632

目的:探讨垂体腺苷酸环化酶激活多肽(PACAP)的衍生物小环肽C*HSDGIC*(CHC)对中波紫外线(UVB)诱导的人视网膜色素上皮(RPE)细胞凋亡的影响。方法:Western blotting检测人RPE细胞PACAP 1型受体(PAC1受体)表达;RPE细胞接受0.2 J/cm2UVB照射... 详细信息

目的:探讨垂体腺苷酸环化酶激活多肽(PACAP)的衍生物小环肽C*HSDGIC*(CHC)对中波紫外线(UVB)诱导的人视网膜色素上皮(RPE)细胞凋亡的影响。方法:Western blotting检测人RPE细胞PACAP 1型受体(PAC1受体)表达;RPE细胞接受0.2 J/cm2UVB照射,随后实验组给予含不同浓度CHC的无血清培养基培养,对照组给予无血清培养基培养;CCK-8法检测CHC对RPE细胞活性的影响;流式细胞术Annexin-V/PI双染检测RPE细胞凋亡情况,JC-1染色检测线粒体膜电位。结果:Western blotting显示RPE细胞表达PAC1受体,CCK-8法显示CHC促细胞活性的最佳浓度为100μmol/L,细胞活性比对照组增加(34.23±3.39)%(P<0.05),抗凋亡最佳浓度也为100μmol/L,细胞活性比对照组增加(20.10±1.48)%(P<0.05)。流式细胞仪分析显示,100μmol/L CHC能使UVB照射后凋亡细胞比例下降(5.63±1.49)%,线粒体去极化细胞比例下降(5.2±0.5)%(P<0.05)。结论:人RPE细胞存在PAC1受体,小环肽C*HSDGIC*对人RPE细胞有促进活性和拮抗凋亡的作用。

关键词： C＊HSDGIC＊紫外线B 细胞凋亡视网膜色素上皮

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诱导多能干细胞在眼科的研究进展

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中华实验眼科杂志 2012年第7期30卷 662-666页

作者：招志毅(综述) 陈建苏(审校) 暨南大学附属第一医院眼科、暨南大学医学院眼科研究所、再生医学教育部重点实验室广州510632

2006年诱导多能干细胞（iPSCs）的建立被誉为是干细胞研究领域的重大突破，使得进行患者体细胞来源的干细胞治疗成为可能。近年的研究表明，动物和人的成纤维细胞、B淋巴细胞、神经干细胞、头发角质细胞、胰腺细胞、脐带基质和羊膜的间... 详细信息

2006年诱导多能干细胞（iPSCs）的建立被誉为是干细胞研究领域的重大突破，使得进行患者体细胞来源的干细胞治疗成为可能。近年的研究表明，动物和人的成纤维细胞、B淋巴细胞、神经干细胞、头发角质细胞、胰腺细胞、脐带基质和羊膜的间充质细胞均可重编程成为iPSCs并可通过一定的诱导分化为特定类型的细胞，为多种疾病的特异性治疗提供了新的方法。而iPSCs研究在眼科领域的研究也取得了长足进展。在眼科，iPSCs诱导后可分化为视网膜色素上皮（RPE）细胞、感光细胞和其他视网膜细胞，从而为治疗视网膜退行性病变奠定了基础。与传统的干细胞治疗不同，iPSCs移植治疗相应的疾病避免了传统干细胞治疗所存在的道德伦理及免疫排斥等限制，具有较好的应用前景。就iPSCs的概念、诱导策略及方法、在眼科领域的研究现状、研究中存在的问题及应用前景等方面进行综述。

关键词：诱导多能干细胞视网膜变性性疾病眼科

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单核细胞增多动物模型的制备

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广东医学 2012年第8期33卷 1082-1083页

作者：张婷吴静何艳花侯光辉陈剑徐锦堂暨南大学附属第一医院眼科广州510630 暨南大学医学院眼科研究室广州510632 广东省珠海市人民医院眼科 519000

目的探索一种制备单核细胞百分率增多动物模型的方法。方法在新西兰兔腹部植入异物,按照自身前后对照试验设计,采用配对t检验,比较在腹部植入异物手术干预前后兔单核细胞百分比的变化情况。结果经植入异物手术干预前后的单核细胞百分比... 详细信息

目的探索一种制备单核细胞百分率增多动物模型的方法。方法在新西兰兔腹部植入异物,按照自身前后对照试验设计,采用配对t检验,比较在腹部植入异物手术干预前后兔单核细胞百分比的变化情况。结果经植入异物手术干预前后的单核细胞百分比值比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论应用腹部植入异物的方法制备单核细胞增多的动物模型,是一种安全、可靠的方法,能有效达到实验目的。

关键词：植入异物单核细胞增多动物模型兔

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体外诱导人羊膜上皮细胞分化为角膜上皮样细胞的初步研究

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眼科新进展 2012年第9期32卷 801-805页

作者：姚敏陈剑王文娟张晓玲杨筱曦周清徐锦堂暨南大学附属第一医院眼科广东省广州市510632 暨南大学医学院眼科研究室广东省广州市510632

目的探索以人永生化角膜上皮细胞( immortalized human corneal epithelial cells,ihCEC) 培养液体外模拟角膜上皮细胞微环境,诱导人羊膜上皮细胞( human corneal epithe-lial cells,hAEC) 分化为角膜上皮样细胞的可行性。方法取( 37 &#... 详细信息

目的探索以人永生化角膜上皮细胞( immortalized human corneal epithelial cells,ihCEC) 培养液体外模拟角膜上皮细胞微环境,诱导人羊膜上皮细胞( human corneal epithe-lial cells,hAEC) 分化为角膜上皮样细胞的可行性。方法取( 37 ± 1) 周剖宫产人羊膜组织,酶消化法提取 hAEC; 流式细胞仪测 CD29、CD90、CD105、CD34、HLA-DR 的表达。复苏培养 ihCEC,以 0 mg·L- 1、10 mg·L- 1、20 mg·L- 1、30 mg·L- 1、40 mg·L- 1丝裂霉素 37℃作用 2 h,吸去丝裂霉素,继续培养 72 h 后 CCK8 测吸光度并计算增殖抑制率。10 mg·L- 1、20 mg·L- 1丝裂霉素处理细胞后 12 h、24 h 收集细胞培养液培养 hAEC,CCK8 测吸光度绘制生长曲线; 收集 ihCEC 细胞培养液,制备条件培养基( CM) 培养 hAEC 10 d,倒置显微镜观察细胞形态,免疫荧光检测 CK12 的表达。结果 hAEC 可表达 CD29、CD90、D105,不表达 CD34、HLA-DR; 各浓度丝裂霉素组增殖抑制率分别为 10 mg·L- 1( 65. 48% ±1. 03) 、20 mg · L- 1( 77. 01% ± 0. 99) 、30 mg · L- 1( 75. 25% ± 0. 71) 、40 mg · L- 1( 76. 90% ±0. 97) ;20 mg·L- 1丝裂霉素培养 12 h 收集的细胞培养液对 hAEC 具有明显促增殖作用; 诱导分化后 hAEC 可表达 CK12。结论以 ihCEC 细胞培养液模拟的角膜上皮细胞微环境可诱导 hAEC 分化为角膜上皮样细胞。

关键词：人永生化角膜上皮细胞人羊膜上皮细胞丝裂霉素微环境组织工程

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持续性角膜上皮缺损对骨髓间充质干细胞增殖能力的影响

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眼科新进展 2012年第8期32卷 701-704页

作者：齐文娟吴静侯光辉王观峰陈剑徐锦堂暨南大学附属第一医院眼科广东省广州市510632 暨南大学医学院眼科研究室广东省广州市510632 珠海市人民医院眼科广东省珠海市519000

目的建立持续性角膜上皮缺损模型,观察不同时相的角膜上皮缺损对骨髓间充质干细胞增殖能力的影响。方法取健康雄性Wistar大鼠40只,随机平均分为8组,按每天处死1组大鼠的先后顺序分别命名为缺损组(A、B、C、D、E、F、G)和空白对照组。对... 详细信息

目的建立持续性角膜上皮缺损模型,观察不同时相的角膜上皮缺损对骨髓间充质干细胞增殖能力的影响。方法取健康雄性Wistar大鼠40只,随机平均分为8组,按每天处死1组大鼠的先后顺序分别命名为缺损组(A、B、C、D、E、F、G)和空白对照组。对全部缺损组大鼠建立持续性角膜上皮缺损模型,每天对缺损组大鼠左眼行角膜上皮刮除术,第1次术后1d处死缺损组A组大鼠,然后对剩余缺损组大鼠左眼行角膜上皮刮除术;第2次术后1d处死缺损组B组大鼠,然后对剩余缺损组大鼠左眼行角膜上皮刮除术,依此类推连续7d,并在无菌条件下获取各组骨髓间充质干细胞,流式细胞技术检测各组细胞周期。结果骨髓间充质干细胞细胞周期检测结果显示:B、D组S期细胞百分数分别为16.76%±4.49%、17.95%±2.77%,明显高于其他缺损组和对照组(均为P<0.05),B、D组G1期细胞百分数分别为72.26%±8.81%、71.33%±5.30%,均低于其他缺损组和对照组(均为P<0.05);但B、D组S期细胞及G1期细胞百分数差异无统计学意义(均为P>0.05),A、C、E、F、G组及对照组间的S期细胞及G1期细胞百分数差异亦无统计学意义(均为P>0.05)。结论持续性角膜上皮缺损模型,在缺损持续的第3天和第5天骨髓间充质干细胞的增殖能力明显提高。

关键词：欁骨髓间充质干细胞细胞周期角膜上皮缺损动物模型

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人羊膜上皮细胞体外培养重建角膜上皮的实验研究

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中国病理生理杂志 2012年第4期28卷 689-693页

作者：刘小勇陈剑周清吴静王彦平金玲徐锦堂贺春香姚敏暨南大学附属第一医院眼科医学院眼科研究室医学院病理生理学教研室广东广州510630 深圳市宝安区人民医院眼科广东深圳518101

目的:探讨人羊膜上皮细胞(human amniotic epithelial cells,HAECs)诱导分化为角膜上皮细胞的可塑性及其重建角膜上皮的可行性。方法:取足月产人羊膜,通过胶原酶、胰蛋白酶和EDTA消化获得HAECs,将细胞在体外培养扩增、传代,将2～3代HAEC... 详细信息

目的:探讨人羊膜上皮细胞(human amniotic epithelial cells,HAECs)诱导分化为角膜上皮细胞的可塑性及其重建角膜上皮的可行性。方法:取足月产人羊膜,通过胶原酶、胰蛋白酶和EDTA消化获得HAECs,将细胞在体外培养扩增、传代,将2～3代HAECs接种于去上皮的兔角膜基质上培养,待HAECs融合形成单层后,置于插入式培养皿中进行气液界面培养14 d。对角膜基质上培养的HAECs用光镜、扫描电镜和透射电镜进行形态学及超微结构观察,以及细胞角蛋白(CK)3/12的免疫组织化学检测。结果:HAECs可在角膜基质上生长,培养1～2 d可形成单层,气液界面培养14 d可形成4～5层细胞的复层上皮,扫描电镜观察细胞表面有丰富的微绒毛,透射电镜下可见上皮细胞之间有桥粒连接,免疫组化检测复层细胞表达CK3/12,所形成的复层结构与正常角膜上皮相似。结论:HAECs有可能作为种子细胞用于组织工程角膜上皮重建。

关键词：羊膜角膜上皮细胞组织工程

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姜黄素对ActD/TNF-α协同诱导PC12细胞损伤的保护作用

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暨南大学学报（自然科学与医学版） 2012年第4期33卷 357-361页

作者：汪军兵龚正行妍妍谢赛邓钦莹唐红梅潘锐陆大祥董军暨南大学医学院病理生理教研室国家中医药管理局病理生理学三级科研实验室暨南大学脑科学研究所暨南大学-香港大学脑功能与健康联合实验室广东广州510632 暨南大学附属第一医院骨科广东广州510630

目的:观察放线菌素D(ActD)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)对大鼠肾上腺嗜铬细胞(PC12细胞)的协同损伤作用,探讨中药单体姜黄素对这种损伤的保护作用及机制。方法:采用MTT法确定实验药物的最佳浓度;LDH法检测PC12细胞的损伤;倒置显微镜观察细... 详细信息

目的:观察放线菌素D(ActD)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)对大鼠肾上腺嗜铬细胞(PC12细胞)的协同损伤作用,探讨中药单体姜黄素对这种损伤的保护作用及机制。方法:采用MTT法确定实验药物的最佳浓度;LDH法检测PC12细胞的损伤;倒置显微镜观察细胞形态变化;caspase-3活性检测试剂盒检测caspase-3的活性。结果:ActD/TNF-α可致PC12细胞的生存力下降(P<0.05);细胞培养液中LDH的活性升高(P<0.05);PC12数量减少,体积缩小,突起变短;可致PC12细胞内caspase-3的活化增强(P<0.05)。浓度为5μmol/L姜黄素可阻止ActD/TNF-α所致的细胞的生存力下降(P<0.05);抑制ActD/TNF-α引起的细胞培养液中LDH的活性升高(P<0.05);拮抗ActD/TNF-α引起的细胞数量减少,体积变小,突起减少变短;抑制ActD/TNF-α引起的PC12细胞内caspase-3的活化(P<0.05)。结论:姜黄素可以拮抗ActD/TNF-α协同作用引起的PC12细胞损伤,其机制可能与抑制caspase-3的活化有关。

关键词：姜黄素 PC12细胞放线菌素D 肿瘤坏死因子α 细胞凋亡蛋白酶3

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