检索结果-内蒙古大学图书馆

中华实验眼科杂志 2022年第2期40卷 104-109页

作者：傅婷黄奕嘉刘俊李志杰暨南大学基础医学院眼表疾病协同创新研究实验室&眼科研究所广州510632 暨南大学第一临床医学院眼科广州510632

目的研究快速、精确获取小鼠角膜神经三维(3D)图像及其参数的技术方案。方法选取SPF级雌性C57BL/6小鼠4只,吸入过量乙醚麻醉后使小鼠安乐死,立即在解剖显微镜下获取具有完整角膜缘的角膜4个,经过常规固定、透膜和抗β-Ⅲ微管蛋白荧光抗... 详细信息

目的研究快速、精确获取小鼠角膜神经三维(3D)图像及其参数的技术方案。方法选取SPF级雌性C57BL/6小鼠4只,吸入过量乙醚麻醉后使小鼠安乐死,立即在解剖显微镜下获取具有完整角膜缘的角膜4个,经过常规固定、透膜和抗β-Ⅲ微管蛋白荧光抗体标记后整铺片处理。在高分辨率去卷积显微镜下采用科学互补性金属氧化物半导体探测器捕获图像,通过显微镜系统自携带图像处理软件对图像进行3D去卷积运算,Z轴数据平面投影以及自动拼接处理得到完整的角膜神经纤维3D图像。采用交互式显微图像分析软件Imaris的丝状追踪模块中的自动检测模式获得不同区域的角膜神经密度,采用自动路径模式手动指定计算起始点到终止点的神经纤维长度。结果在去卷积显微镜60倍油镜下,可以观察到角膜缘处呈密集网络状的基质层神经纤维在角膜缘附近进入前弹力层,并发出密集的分枝,形成基底下神经丛。这些神经丛向角膜中心伸展形成密集的神经网络样结构,在角膜顶点汇聚成漩涡状结构。少部分神经纤维丛垂直进入上皮层,并发出许多微小的神经末梢分枝。采用Imaris软件丝状物追踪模块中的自动检测模式自动统计,发现角膜神经末梢密度从角膜缘的(2488.88±282.84)μm/μm^(2)逐渐增多至角膜中央的(5766.66±298.55)μm/μm^(2);角膜基质神经纤维密度从角膜缘的(40.99±0.99)μm/μm^(2)递减至角膜中央的(34.57±1.28)μm/μm^(2)。通过自动路径模式手动测量发现,角膜缘处基质层神经纤维进入前弹力层约151μm处开始分枝形成基底下神经丛。结论去卷积显微镜系统可以获得整个角膜神经纤维的3D分布,Imaris图像分析软件可以自动、快速统计待测区域角膜神经纤维的不同参数。

关键词：角膜神经纤维三维图像图像处理,计算机辅助去卷积

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昼夜节律颠倒对小鼠角膜上皮创伤修复的影响

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中华实验眼科杂志 2019年第7期37卷 514-520页

作者：何靖新林妍徐鹏洋薛芸霞李志杰暨南大学第一临床医学院眼科广州510632 暨南大学再生医学重点实验室广州510632 暨南大学基础医学院病理生理学系广州510632 暨南大学基础医学院眼科研究所广州510632

目的探究昼夜节律颠倒对角膜上皮创伤修复的影响。方法选取6~8周龄C57BL/6雄性小鼠90只,按照随机数字表法分为昼夜节律正常(LD)组和昼夜节律颠倒(DL)组。置于昼夜节律箱中饲养12d,在小鼠角膜中央标记直径为2mm的圆形区域,用高尔夫样刀... 详细信息

目的探究昼夜节律颠倒对角膜上皮创伤修复的影响。方法选取6~8周龄C57BL/6雄性小鼠90只,按照随机数字表法分为昼夜节律正常(LD)组和昼夜节律颠倒(DL)组。置于昼夜节律箱中饲养12d,在小鼠角膜中央标记直径为2mm的圆形区域,用高尔夫样刀刮除标记区域上皮层,分别使用荧光素钠、苏木精-伊红染色观察并记录角膜再上皮化过程。使用DAPI、FITC标记抗鼠Ly6G抗体和PE标记抗鼠γδTCR抗体进行免疫荧光染色,每隔6h观察角膜创伤后细胞分裂、中性粒细胞和γδT细胞数量的动态变化,直至42h。结果角膜上皮创伤后0、6、12、18和24hLD组角膜上皮缺损面积百分比分别为(100.000±0.000)%、(37.677±5.243)%、(14.959±1.739)%和(0.000±0.000)%,DL组角膜上皮缺损面积百分比分别为(100.000±0.000)%、(10.967±1.065)%、(1.985±0.106)%和(0.000±0.000)%,总体比较差异有统计学意义(F=213.718,P=0.000)。角膜上皮创伤前,DL组和LD组角膜上皮层厚度分别为(33.983±1.074)μm和(33.993±0.904)μm,差异无统计学意义(P>0.05);角膜上皮损伤后24h,DL组角膜上皮厚度为(19.473±0.856)μm,明显大于LD组(17.485±0.718)μm,差异有统计学意义(P<0.05)。苏木精-伊红染色显示,创伤24h后2个组小鼠角膜上皮细胞皆排列疏松、紊乱、形态不规则。LD组角膜上皮主要为基底细胞,DL组除了基底细胞外,还有少量扁平细胞。角膜上皮创伤后LD组和DL组上皮分裂细胞数量、中性粒细胞数量和γδT细胞数量总体比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论昼夜节律颠倒可通过促进角膜上皮分裂细胞、中性粒细胞和γδT细胞募集高峰期提前,进而调节角膜上皮创伤修复过程。

关键词：角膜昼夜节律颠倒创伤修复炎症反应

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兔角膜内皮细胞球形培养的活性和细胞表型

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中华实验眼科杂志 2014年第9期32卷 786-790页

作者：杨艳刘庆郭永龙王婵傅婷陈建苏暨南大学第一临床医学院眼科广州510632 暨南大学第一临床医学院再生医学教育部重点实验室广州510632 暨南大学第一临床医学院眼科研究所广州510632

背景组织工程角膜内皮层的构建和细胞注射疗法需要足够数量的角膜内皮细胞（CECs）,因此如何在体外培养大量高活性的角膜内皮种子细胞是当前亟需解决的问题. 目的建立兔CECs高活性三维（3D）球形培养方法,探索培养细胞的生物学特性. ... 详细信息

背景组织工程角膜内皮层的构建和细胞注射疗法需要足够数量的角膜内皮细胞（CECs）,因此如何在体外培养大量高活性的角膜内皮种子细胞是当前亟需解决的问题. 目的建立兔CECs高活性三维（3D）球形培养方法,探索培养细胞的生物学特性. 方法酶消化法分离和培养兔CECs并进行传代,经低黏附振动培养法产生兔CECs球,倒置相差显微镜下观察培养细胞的形态;采用扫描电子显微镜观察CECs球的表面超微结构;用吖啶橙染色法鉴定CECs球中细胞的活性;采用CCK-8试剂盒检测细胞的吸光度（A450）值,判断细胞的增生情况.将CECs球接种到6孔细胞培养板贴壁培养1周,球形培养的细胞为球形培养组,常规培养的细胞为常规培养组.采用免疫荧光法检测闭锁小带蛋白1（ZO-1）和Na＋/K＋-ATP酶在细胞中的表达.结果经球形培养的CECs呈聚集生长,培养1周细胞形态为六角形或多边形,融合成单层,呈铺路石状排列;扫描电子显微镜下可见兔CECs球体周围有细胞爬出,未长散的细胞球中细胞与细胞之间结合紧密,球体表面凹凸不平.吖啶橙染色表明,细胞球中90％细胞呈绿色荧光;球形培养组细胞平均A450值为1.524±0.013,常规培养组细胞平均A450值为1.265±0.021,球形培养组细胞增生值明显增加,2个组间差异有统计学意义（t=-3.436,P=0.010）.免疫荧光检测表明,培养的细胞中ZO-1和Na＋/K＋-ATP酶阳性细胞膜对FITC呈绿色荧光,细胞核DAPI染色呈蓝色荧光.结论 CECs的3D球形培养方法培养的细胞可保持细胞的高活性、高增生能力和细胞表型,为构建组织工程角膜内皮及细胞疗法提供了更好的角膜内皮种子细朐.

关键词：角膜内皮细胞球形培养三维细胞活性细胞表型

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重编程诱导多功能干细胞的研究进展

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中国病理生理杂志 2014年第7期30卷 1218-1222,1227页

作者：郭晓令刘庆王婵郭永龙余榕捷陈建苏暨南大学再生医学教育部重点实验室广东广州510632 暨南大学附属第一临床学院眼科广东广州510632 暨南大学生命科学技术学院细胞生物学系广东广州510632 暨南大学医学院眼科研究所广东广州510632

诱导多功能干细胞（ induced pluripotent stem cells，iPSCs），即通过不同的转导方法，将影响重编程的关键转录因子、RNA、蛋白或小分子化合物导入到成体细胞，使其＂返老还童＂回到胚胎干细胞状态，并能够被诱导分化产生不同的细胞... 详细信息

诱导多功能干细胞（ induced pluripotent stem cells，iPSCs），即通过不同的转导方法，将影响重编程的关键转录因子、RNA、蛋白或小分子化合物导入到成体细胞，使其＂返老还童＂回到胚胎干细胞状态，并能够被诱导分化产生不同的细胞类型。 iPSCs 的问世，对干细胞的发展具有划时代的意义，使得患者来源的体细胞可以被诱导成iPSCs，用于相关疾病的检测分析与干细胞治疗，规避了免疫排斥和道德论理等问题。但是由于iPSCs诱导的低效性和致瘤性，使得这个＂新星＂在临床中的应用被质疑，目前科学家一直围绕这2个核心问题展开研究，通过改进转导途径，改变重编程方法来提高它的安全性和效率，并取得了一系列喜人的结果，从而使iPSCs未来用于临床的前景变得越来越光明。

关键词：诱导多能性干细胞安全性有效性

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CdSe／ZnS核壳结构量子点用于人诱导多能干细胞标记的研究

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中华实验眼科杂志 2013年第9期31卷 819-822页

作者：谭美华陈建苏陈剑吴静招志毅戴应李善义暨南大学第一临床医学院眼科广州510632 暨南大学医学院眼科研究所广州510632 再生医学教育部重点实验室

背景近年来，诱导多能干细胞（iPSCs）的多向分化特性为各种临床疾病的细胞替代治疗提供了新的种子来源，在眼科领域，iPSCs已成为人眼变性类疾病发病机制研究的良好模型，而更好的iPSCs识别和鉴定技术是对其体内生物学特性进行研究的... 详细信息

背景近年来，诱导多能干细胞（iPSCs）的多向分化特性为各种临床疾病的细胞替代治疗提供了新的种子来源，在眼科领域，iPSCs已成为人眼变性类疾病发病机制研究的良好模型，而更好的iPSCs识别和鉴定技术是对其体内生物学特性进行研究的基础。目的探讨量子点标记人iPSCs的可行性及其最佳浓度，并观察量子点标记人iPSCs的光稳定性，为iPSCs应用于眼部细胞移植的实验研究和临床研究提供一种新的示踪技术。方法用无饲养层细胞培养法培养和扩增脐带间充质基质细胞一人iPSCs系，并用免疫荧光法对其干细胞特性进行鉴定；选取不同浓度CdSe／ZnS核壳结构的量子点对扩增培养的iPSCs进行标记，用三维去卷积实时活细胞成像系统观察标记效果。将量子点标记后的iPSCs继续培养，分别于1次传代后1周和2次传代后1周观察荧光标记的稳定性。结果倒置显微镜下观察可见培养和扩增的iPSCs呈克隆样生长，免疫荧光检测显示iPSCs中OCT4和Nanog两种干细胞标志蛋白均阳性表达。5．0、7．5、10．0nmol／L三种浓度的量子点标记后均可见iPSCs中的橘红色荧光，随着量子点浓度的增加，iPSCs中标记的橘红色颗粒明显增加，10．0nmol／L量子点标记后iPSCs中的橘红色荧光最强，荧光颗粒最多。iPSCs2次传代1周后仍可观察到量子点的橘红色荧光，但与传代前和1次传代后1周相比荧光强度减弱。结论量子点标记技术可示踪iPSCs，其荧光标记效果呈浓度依赖性。本研究实验条件下量子点标记的荧光至少可维持2周。

关键词：量子点标志物诱导多能干细胞示踪

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1,25-二羟维生素D_3对T淋巴细胞的免疫调节作用

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广东医学 2013年第20期34卷 3114-3116页

作者：王超吴静侯光辉陈剑齐文娟崔裕波张瑾暨南大学第一临床医学院眼科广州510630 暨南大学医学院眼科研究室广州510632 广东省珠海市人民医院眼科 519000

目的观察1,25-二羟维生素D3[1,25(OH)2D3]对佐剂性关节炎(AA)小鼠免疫功能的影响,探讨1,25(OH)2D3对T淋巴细胞介导的细胞免疫的调节作用及可能机制。方法将小鼠随机分成3组,每组6只,分别命名为正常组、模型组和干预组。除正常组外,每只... 详细信息

目的观察1,25-二羟维生素D3[1,25(OH)2D3]对佐剂性关节炎(AA)小鼠免疫功能的影响,探讨1,25(OH)2D3对T淋巴细胞介导的细胞免疫的调节作用及可能机制。方法将小鼠随机分成3组,每组6只,分别命名为正常组、模型组和干预组。除正常组外,每只小鼠右足跖部皮下注射完全弗氏佐剂诱导AA模型,并于初次注射后1周再次注射相同剂量的完全弗氏佐剂,强化免疫反应。从第2次注射后当天,干预组腹腔注射1,25(OH)2D3,1次/d,100 ng/次,同时其余两组给予同等剂量生理盐水,按照此方法,隔日给药1次,连续2周。观察各组小鼠脾指数、胸腺指数,脾淋巴细胞增殖及外周血T细胞亚群的情况。结果 1,25(OH)2D3能降低脾和胸腺重量指数,抑制脾淋巴细胞增殖,模型组与干预组T淋巴细胞亚群CD4+/CD8+比值分别为2.9±1.1和2.2±0.5,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 1,25(OH)2D3可通过调节T淋巴细胞亚群CD4+、CD8+细胞数量及比例来改善AA模型小鼠免疫功能紊乱,进而抑制病情的进展。

关键词： 1,25-二羟维生素D3 T细胞增殖 CD4+ CD8+

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CM-Dil与DAPI联合标记人羊膜上皮细胞的可行性研究

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眼科新进展 2013年第11期33卷 1001-1005页

作者：王黎周清杨艳陈剑徐锦堂暨南大学附属第一医院眼科广东省广州市510630 暨南大学医学院眼科研究室广东省广州市510632

目的建立人羊膜上皮细胞（human amniotic epithelial cell，HAEC）的体外培养方法，并探讨氯甲基苯甲酰胺（CM—Dil）与4’，6-二脒基-2-苯基吲哚（DAPI）对HAEC进行联合标记示踪的可行性。方法运用酶消化法获取HAEC，收集第2代细胞，... 详细信息

目的建立人羊膜上皮细胞（human amniotic epithelial cell，HAEC）的体外培养方法，并探讨氯甲基苯甲酰胺（CM—Dil）与4’，6-二脒基-2-苯基吲哚（DAPI）对HAEC进行联合标记示踪的可行性。方法运用酶消化法获取HAEC，收集第2代细胞，流式细胞仪检测CD29、CD34、CD44、CIM5和CD105的表达率，SP免疫化学法鉴定HAEC。CM—Dil与DAPI对HAEC进行体外标记，荧光倒置显微镜下观察1d、7d和14d的标记情况，台盼蓝染色检测细胞活力，CCK-8法检测细胞增殖以明确联合标记对体外培养HAEC生长特性的影响。结果HAEC贴壁培养后呈扁平多角形，CD29、CD34、CD44、CD45和CD105的阳性率分别为99．64％、2．21％、32．41％、0．84％、36．70％，细胞角蛋白Keratin阳性表达。HAEC在cM—Dil和DAPI联合标记1d后，荧光显微镜下可观察到细胞膜和细胞核分别在不同波长下呈红色和蓝色荧光，标记率为100％；14d后，经传代培养的HAEC荧光强度与1d时相近，细胞形态无改变。台盼蓝染色显示标记细胞存活率为96．8％-98．9％，CCK-8检测标记细胞的增殖力较未标记组差异无统计学意义（P〉0．05）。结论CM—Dil和DAPI可有效标记HAEC，染色简单、无细胞毒性，荧光衰减较慢，可作为HAEC的标记及示踪方法。

关键词：人羊膜上皮细胞氯甲基苯甲酰胺 4’ 6-二脒基-2-苯基吲哚标记示踪

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人羊膜上皮细胞培养液抑制角膜炎症的实验研究

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器官移植 2013年第1期4卷 12-18页

作者：李彬斌周清姚敏张晓玲秦晓艳陈剑暨南大学附属第一医院眼科暨南大学医学院眼科研究室广州510630

目的探讨人羊膜上皮细胞(human amniotic epithelial cell,HAEC)培养液对角膜炎症反应的抑制作用及机制。方法体外培养及鉴定HAEC和兔角膜上皮细胞,制备HAEC培养液。根据培养兔角膜上皮细胞的培养液成分不同分为无血清改良杜氏培养基(Du... 详细信息

目的探讨人羊膜上皮细胞(human amniotic epithelial cell,HAEC)培养液对角膜炎症反应的抑制作用及机制。方法体外培养及鉴定HAEC和兔角膜上皮细胞,制备HAEC培养液。根据培养兔角膜上皮细胞的培养液成分不同分为无血清改良杜氏培养基(Dulbecco's modified Eagle's medium,DMEM)组(DMEM组)、无血清DMEM与HAEC培养液1∶1混合组(混合组)、HAEC培养液组(HAEC组)。传代的角膜上皮细胞贴壁24h后,用磷酸盐缓冲液润洗后按分组更换为上述3种培养液培养48h后收集细胞。应用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测HAEC培养液中白介素-1受体拮抗剂(interleukin-1 receptor antagonist,IL-1Ra)的含量。采用实时定量聚合酶链反应(PCR)检测3组培养液中兔角膜上皮细胞中的白介素(IL)-1β信使核糖核酸(messenger RNA,mRNA)的表达,采用八肽胆囊收缩素(cholecystokinin-octapeptide,CCK-8)法检测3组细胞的增殖情况。结果 HAEC和兔角膜上皮细胞的形态学观察符合上皮细胞特征。HAEC培养液中IL-1Ra的含量为(153.56±0.36)ng/L,无血清DMEM对照中未检出IL-1Ra。3组培养液中,兔角膜上皮细胞的IL-1β mRNA表达由低至高分别为HAEC组、混合组和DMEM组,3组的IL-1β mRNA表达差异均有统计学意义(均为P<0.05)。兔角膜上皮细胞分组培养24、48、72h后,HAEC组的兔角膜上皮细胞吸光值明显高于混合组和DMEM组,DMEM组的兔角膜上皮细胞吸光值在各时间点均低于混合组(均为P<0.05)。结论 HAEC可分泌IL-1Ra抑制角膜上皮细胞IL-1β的表达,减少炎症反应及移植排斥作用,并促进角膜上皮细胞增殖。

关键词：羊膜移植羊膜上皮细胞角膜上皮细胞白介素-1 白介素-1受体拮抗剂细胞增殖炎症免疫排斥

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以猪角膜脱细胞基质为载体培养人脐静脉内皮细胞构建实验性角膜后板层

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中国病理生理杂志 2013年第7期29卷 1288-1293页

作者：祁冰侯光辉李柳季青山吴静周清暨南大学附属第三医院珠海市人民医院眼科广东珠海519000 南昌大学附属第三医院南昌市第一医院眼科江西南昌330038 暨南大学附属第一医院眼科广东广州510630 暨南大学医学院眼科研究室广东广州510632

目的:探讨以异种后弹力膜/基质为载体诱导人脐静脉内皮细胞向角膜内皮细胞分化的可行性及移植术后在活体的生理功能。方法:体外分离培养脐静脉内皮细胞作为诱导移植的种子细胞;取当地质检合格的猪眼球以直径6.2 mm、厚100μm、冷冻脱水... 详细信息

目的:探讨以异种后弹力膜/基质为载体诱导人脐静脉内皮细胞向角膜内皮细胞分化的可行性及移植术后在活体的生理功能。方法:体外分离培养脐静脉内皮细胞作为诱导移植的种子细胞;取当地质检合格的猪眼球以直径6.2 mm、厚100μm、冷冻脱水进行角膜深板层载体的制备;接种经CM-DiI荧光标记的第2～3代人脐静脉内皮细胞于载体的后弹力层面,体外培养7～10 d行细胞形态、密度、组织学和扫描电镜观察,待细胞与后弹力层面融合形成单层后,用于兔角膜移植。受眼:正常健康新西兰大白兔24只(24眼),实验组(人脐静脉内皮细胞移植组)12眼,对照组(单纯猪角膜深板层移植组)12眼,全角膜范围去除术眼内皮细胞,实施移植手术。结果:人脐静脉内皮细胞在猪后弹力膜/基质载体上贴附生长,形成紧密连接的单层,形态近似六角形,呈铺路石状分布,具有正常兔角膜内皮细胞的超微结构。术后8周实验组角膜基本透明,周边角膜略有水肿。对照组单纯猪角膜深板层移植后,移植角膜明显水肿、混浊。结论:以异种角膜后弹力膜/基质为载体培养的人脐静脉内皮细胞,行异种异体移植后,能够在活体上成活,并能维持角膜透明,具有正常角膜内皮细胞的生物学功能。深板层角膜内皮移植术是体外培养血管内皮细胞移植的一种有效术式。

关键词：人脐静脉内皮细胞猪角膜脱细胞基质角膜内皮细胞移植

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视网膜中央动静脉阻塞合并贫血一例

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中华实验眼科杂志 2013年第6期31卷 607-607页

作者：谭美华陈建苏刘引招志毅暨南大学第一临床医学院眼科暨南大学医学院眼科研究所广州510632 暨南大学第二临床医学院眼科深圳518040

患者，女，38岁，左眼视力下降1d就诊。3d前头部不慎撞至桌角，当时神志清、无视物模糊，未曾处理。入院前1d自觉左眼视力明显下降，无疼痛、虹视、恶心、呕吐等症状，次日晨起后左眼视物不见。患者有贫血病史30年，曾行胆囊切除术和部... 详细信息

患者，女，38岁，左眼视力下降1d就诊。3d前头部不慎撞至桌角，当时神志清、无视物模糊，未曾处理。入院前1d自觉左眼视力明显下降，无疼痛、虹视、恶心、呕吐等症状，次日晨起后左眼视物不见。患者有贫血病史30年，曾行胆囊切除术和部分肝切除术，既往有全身多处骨折史、肾结石病史，无高血压、糖尿病病史，否认眼部外伤史。眼部体征：视力右眼1．0，

关键词：视网膜中央动静脉阻塞贫血部分肝切除术视力下降眼部体征胆囊切除术视物模糊眼视力

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