检索结果-内蒙古大学图书馆

中华实验眼科杂志 2012年第5期30卷 408-413页

作者：李彬斌杨筱曦周清何艳花陈剑暨南大学附属第一医院眼科暨南大学医学院眼科研究室广州510630

背景角膜新生血管（CNV）是一种常见的眼部病变，研究其发病机制及其抑制剂是眼科研究的热点和难点。目的研究人羊膜上皮细胞（AECs）培养液对CNV的抑制作用及机制。方法消化法培养及鉴定人AECs，并收集培养液，酶联免疫吸附试验（ELIS... 详细信息

背景角膜新生血管（CNV）是一种常见的眼部病变，研究其发病机制及其抑制剂是眼科研究的热点和难点。目的研究人羊膜上皮细胞（AECs）培养液对CNV的抑制作用及机制。方法消化法培养及鉴定人AECs，并收集培养液，酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测色素上皮衍生因子（PEDF）和白细胞介素1受体拮抗剂（IL-1Ra）在培养液中的质量浓度。兔角膜上皮细胞分离后分别用无血清DMEM培养基、人AECs培养液、混合培养液（DMEM＋人AECs培养液）培养48h，采用实时定量聚合酶链反应（QRT—PCR）法检测不同培养液培养的角膜上皮细胞中血管内皮生长因子（VEGF）及碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）的表达。用含质量分数10％胎牛血清的DMEM培养基培养人脐静脉血管内皮细胞（UVECs），并分别加入无血清DMEM、混合培养液和人AECs培养液，划痕法和细胞计数试剂盒8（CCK8）法检测各组培养液对人UVECs迁移的影响。分别在上述3种培养基中加入终质量浓度为50txg／L的bFGF，CCK8法检测各培养液中人UVECs的增生情况。在原子力显微镜（AFM）下观察人AECs培养液对人UVECs超微结构的影响。结果人羊膜培养和传代细胞角蛋白免疫组织化学染色阳性证实为人AECs。与无血清DMEM组相比，人AECs培养液组的兔角膜上皮细胞VEGFmRNA（1．00＋0．22VS．2．98_＋0．46）及bFGFmRNA（1．00＋0．36VS．2．55-＋0．48）的表达均明显下降，差异均有统计学意义（p_-0．001、0．002）；培养后不同时间人AECs培养液组人UVECs的增生吸光度（A）值明显下降，差异均有统计学意义（P〈0．05），人UVECs的迁移率下降，差异有统计学意义（P〈0．05）。AFM观察见人AECs培养液组的血管内皮细胞膜粗糙、表面颗粒紊乱，细胞间连接及伪足减少。ELISA法检测人AECs培养液中PEDF的质量浓度为（70．41±0．68）Ixg／L，IL-1Ra的质量浓度为（153．56±0．36）-s／L，无血清DMEM组中未检出。结论人AECs培养液可抑制角膜上皮VEGF及bFGF的表达，抑制血管内皮细胞的增生和迁移，细胞结构和功能改变，这可能是其抑制CNV的机制之一。

关键词：人羊膜上皮细胞角膜新生血管血管内皮生长因子人脐静脉血管内皮细胞碱性成纤维细胞生长因子超微结构

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体外细胞组织重建中共培养技术的应用

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基础医学与临床 2012年第9期32卷 1111-1114页

作者：谭美华陈建苏暨南大学第一临床医学院眼科暨南大学医学院眼科研究所广东广州510632

细胞共培养体系在维持细胞基本结构和性状的基础上,通过两种或多种细胞组织的相互作用,使体内外环境尽可能相吻合,弥补了单层细胞培养的缺陷,有利于构建更加接近生理状态的重建体外细胞组织,被广泛应用于现代细胞研究,成为角膜、牙周、... 详细信息

细胞共培养体系在维持细胞基本结构和性状的基础上,通过两种或多种细胞组织的相互作用,使体内外环境尽可能相吻合,弥补了单层细胞培养的缺陷,有利于构建更加接近生理状态的重建体外细胞组织,被广泛应用于现代细胞研究,成为角膜、牙周、软骨、心血管以及神经细胞组织等体外构建的重要技术应用。在干细胞研究中,多孔膜两侧直接接触共培养日益受到重视,三维细胞共培养将是未来发展的方向。

关键词：细胞共培养干细胞组织工程

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丝裂霉素C对翼状胬肉成纤维细胞膜通透性及超微结构的影响

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中华实验眼科杂志 2012年第6期30卷 490-494页

作者：杨筱曦蔡小芳陈剑李彬斌何艳花张静辉暨南大学附属第一医院眼科暨南大学医学院眼科研究室广州510630 暨南大学化学系广州510630

背景丝裂霉素C（MMC）对人翼状胬肉成纤维细胞的生长和增生有明显的抑制作用，但关于其对细胞膜影响的研究很少。目的探讨MMC对翼状胬肉成纤维细胞膜理化特性及超微结构改变的干预。方法收集翼状胬肉手术切除标本15例，用组织块培养法... 详细信息

背景丝裂霉素C（MMC）对人翼状胬肉成纤维细胞的生长和增生有明显的抑制作用，但关于其对细胞膜影响的研究很少。目的探讨MMC对翼状胬肉成纤维细胞膜理化特性及超微结构改变的干预。方法收集翼状胬肉手术切除标本15例，用组织块培养法培养人成纤维细胞，以波形蛋白免疫组织化学染色法对培养细胞进行鉴定。取传3代后对数生长期细胞以5×10^3个／孔的密度接种于96孔板，将不同质量浓度0、50、100、200、300、400mg／LMMC加入培养孔中处理翼状胬肉成纤维细胞12h，用细胞计数试剂盒8（CCK-8）法检测培养细胞的活力，应用Annexin V—FICT／碘化丙啶（PI）法检测细胞凋亡的情况；利用原子力显微镜（AFM）观察不同质量浓度MMC作用后人成纤维细胞膜超微结构的改变；检测细胞上清液中丙二醛（MDA）的浓度以评价细胞的脂质过氧化程度；检测细胞外液中漏出的乳酸脱氢酶（LDH）含量以评估细胞膜的通透性变化；用Fluo-3／AM标记和流式细胞术检测培养细胞内游离钙离子的变化。结果组织块法原代培养贴壁1～2周可见大量长梭形细胞爬出，波形蛋白检测呈阳性反应。用MMC处理培养细胞12h后，人成纤维细胞的活力减弱，MMC对细胞增生的抑制作用呈剂量依赖性。0、50、100、200、300mg／LMMC处理组细胞凋亡百分比分别为4．2％、4．2％、5．4％、19．3％和25．8％。AFM下可见不同质量浓度MMC作用后人成纤维细胞膜超微结构的异常，不同质量浓度MMC处理组细胞外液中LDH活性及细胞上清液中MDA浓度明显高于对照组，且均随着MMC质量浓度的增加，LDH活性及细胞上清液中MDA浓度逐渐增加，组间两两比较，差异均有统计学意义（P〈0．05）。Fluo-3／AM标记和流式细胞术检测表明，培养细胞内游离钙离子增多。结论MMC能引起翼状胬肉成纤维细胞膜的理化性质改变，其作用呈剂量依赖性，细胞膜是其药效和毒性的作用靶点之一。

关键词：丝裂霉素C 翼状胬肉细胞毒性超微结构

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共培养环境中兔角膜内皮细胞诱导人iPSCs分化

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中国病理生理杂志 2012年第8期28卷 1488-1493页

作者：谭美华陈建苏招志毅丁勇钟敬祥戴应李善义杨皓庄暨南大学第一临床医学院眼科暨南大学医学院眼科研究所暨南大学再生医学教育部重点实验室暨南大学医学院病理生理学系广东广州510632

目的:观察人诱导多能干细胞(induced pluripotent stem cells,iPSCs)与兔角膜内皮细胞(cornealendothelial cells,CECs)共培养前后的形态学变化,检测iPSCs向CECs分化前后部分标志蛋白表达的变化,为研究iPSCs向CECs的分化提供实验依据。... 详细信息

目的:观察人诱导多能干细胞(induced pluripotent stem cells,iPSCs)与兔角膜内皮细胞(cornealendothelial cells,CECs)共培养前后的形态学变化,检测iPSCs向CECs分化前后部分标志蛋白表达的变化,为研究iPSCs向CECs的分化提供实验依据。方法:分离培养兔CECs并传代,同时使用无饲养层细胞法培养扩增人脐带源iPSCs,Western blotting对其进行鉴定;用量子点对iPSCs进行标记示踪,以不同密度比例建立iPSCs与CECs的共培养模式,用原子力显微镜(atomic force microscopy,AFM)结合倒置显微镜观察共培养前后iPSCs的形态学变化,免疫荧光法检测iPSCs分化前后CD34、CD133、CD31和水通道蛋白1(AQP1)蛋白表达的变化。结果:培养扩增的兔CECs形态为六边形,呈典型的铺路石样外观;iPSCs呈克隆样生长,Western blotting检测Oct4、Nanog和Sox2多能性标志蛋白均呈阳性;10 nmol/L量子点标记的iPSCs以1/4悬液与融合60%的兔CECs共培养为最佳模式;AFM结合倒置显微镜观察到共培养后iPSCs体积增大,胞浆增多,核浆比减小,细胞膜表面可见颗粒状突起物,膜表面粗糙度增加;免疫荧光法检测分化前iPSCs的CD34、CD133、CD31和AQP1表达均呈阴性,共培养2周后iPSCs的CD34、CD133和CD31表达阴性,AQP1表达阳性。结论:与兔CECs混合共培养后人iPSCs不仅从形态学上向内皮样细胞方向转化,同时表达角膜内皮细胞标志蛋白AQP1。

关键词：诱导多能干细胞角膜内皮细胞混合培养显微镜检查原子力水通道蛋白1

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小环肽C＊HSDGIC＊对中波紫外线诱导的视网膜色素人上皮细胞凋亡的影响

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中国病理生理杂志 2012年第5期28卷 914-918页

作者：丁勇程欢欢余榕捷陈建苏暨南大学附属第一医院眼科广东广州510632 暨南大学生物工程研究所广东广州510632 暨南大学医学院眼科研究室广东广州510632

目的:探讨垂体腺苷酸环化酶激活多肽(PACAP)的衍生物小环肽C*HSDGIC*(CHC)对中波紫外线(UVB)诱导的人视网膜色素上皮(RPE)细胞凋亡的影响。方法:Western blotting检测人RPE细胞PACAP 1型受体(PAC1受体)表达;RPE细胞接受0.2 J/cm2UVB照射... 详细信息

目的:探讨垂体腺苷酸环化酶激活多肽(PACAP)的衍生物小环肽C*HSDGIC*(CHC)对中波紫外线(UVB)诱导的人视网膜色素上皮(RPE)细胞凋亡的影响。方法:Western blotting检测人RPE细胞PACAP 1型受体(PAC1受体)表达;RPE细胞接受0.2 J/cm2UVB照射,随后实验组给予含不同浓度CHC的无血清培养基培养,对照组给予无血清培养基培养;CCK-8法检测CHC对RPE细胞活性的影响;流式细胞术Annexin-V/PI双染检测RPE细胞凋亡情况,JC-1染色检测线粒体膜电位。结果:Western blotting显示RPE细胞表达PAC1受体,CCK-8法显示CHC促细胞活性的最佳浓度为100μmol/L,细胞活性比对照组增加(34.23±3.39)%(P<0.05),抗凋亡最佳浓度也为100μmol/L,细胞活性比对照组增加(20.10±1.48)%(P<0.05)。流式细胞仪分析显示,100μmol/L CHC能使UVB照射后凋亡细胞比例下降(5.63±1.49)%,线粒体去极化细胞比例下降(5.2±0.5)%(P<0.05)。结论:人RPE细胞存在PAC1受体,小环肽C*HSDGIC*对人RPE细胞有促进活性和拮抗凋亡的作用。

关键词： C＊HSDGIC＊紫外线B 细胞凋亡视网膜色素上皮

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单核细胞增多动物模型的制备

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广东医学 2012年第8期33卷 1082-1083页

作者：张婷吴静何艳花侯光辉陈剑徐锦堂暨南大学附属第一医院眼科广州510630 暨南大学医学院眼科研究室广州510632 广东省珠海市人民医院眼科 519000

目的探索一种制备单核细胞百分率增多动物模型的方法。方法在新西兰兔腹部植入异物,按照自身前后对照试验设计,采用配对t检验,比较在腹部植入异物手术干预前后兔单核细胞百分比的变化情况。结果经植入异物手术干预前后的单核细胞百分比... 详细信息

目的探索一种制备单核细胞百分率增多动物模型的方法。方法在新西兰兔腹部植入异物,按照自身前后对照试验设计,采用配对t检验,比较在腹部植入异物手术干预前后兔单核细胞百分比的变化情况。结果经植入异物手术干预前后的单核细胞百分比值比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论应用腹部植入异物的方法制备单核细胞增多的动物模型,是一种安全、可靠的方法,能有效达到实验目的。

关键词：植入异物单核细胞增多动物模型兔

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体外诱导人羊膜上皮细胞分化为角膜上皮样细胞的初步研究

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眼科新进展 2012年第9期32卷 801-805页

作者：姚敏陈剑王文娟张晓玲杨筱曦周清徐锦堂暨南大学附属第一医院眼科广东省广州市510632 暨南大学医学院眼科研究室广东省广州市510632

目的探索以人永生化角膜上皮细胞( immortalized human corneal epithelial cells,ihCEC) 培养液体外模拟角膜上皮细胞微环境,诱导人羊膜上皮细胞( human corneal epithe-lial cells,hAEC) 分化为角膜上皮样细胞的可行性。方法取( 37 &#... 详细信息

目的探索以人永生化角膜上皮细胞( immortalized human corneal epithelial cells,ihCEC) 培养液体外模拟角膜上皮细胞微环境,诱导人羊膜上皮细胞( human corneal epithe-lial cells,hAEC) 分化为角膜上皮样细胞的可行性。方法取( 37 ± 1) 周剖宫产人羊膜组织,酶消化法提取 hAEC; 流式细胞仪测 CD29、CD90、CD105、CD34、HLA-DR 的表达。复苏培养 ihCEC,以 0 mg·L- 1、10 mg·L- 1、20 mg·L- 1、30 mg·L- 1、40 mg·L- 1丝裂霉素 37℃作用 2 h,吸去丝裂霉素,继续培养 72 h 后 CCK8 测吸光度并计算增殖抑制率。10 mg·L- 1、20 mg·L- 1丝裂霉素处理细胞后 12 h、24 h 收集细胞培养液培养 hAEC,CCK8 测吸光度绘制生长曲线; 收集 ihCEC 细胞培养液,制备条件培养基( CM) 培养 hAEC 10 d,倒置显微镜观察细胞形态,免疫荧光检测 CK12 的表达。结果 hAEC 可表达 CD29、CD90、D105,不表达 CD34、HLA-DR; 各浓度丝裂霉素组增殖抑制率分别为 10 mg·L- 1( 65. 48% ±1. 03) 、20 mg · L- 1( 77. 01% ± 0. 99) 、30 mg · L- 1( 75. 25% ± 0. 71) 、40 mg · L- 1( 76. 90% ±0. 97) ;20 mg·L- 1丝裂霉素培养 12 h 收集的细胞培养液对 hAEC 具有明显促增殖作用; 诱导分化后 hAEC 可表达 CK12。结论以 ihCEC 细胞培养液模拟的角膜上皮细胞微环境可诱导 hAEC 分化为角膜上皮样细胞。

关键词：人永生化角膜上皮细胞人羊膜上皮细胞丝裂霉素微环境组织工程

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持续性角膜上皮缺损对骨髓间充质干细胞增殖能力的影响

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眼科新进展 2012年第8期32卷 701-704页

作者：齐文娟吴静侯光辉王观峰陈剑徐锦堂暨南大学附属第一医院眼科广东省广州市510632 暨南大学医学院眼科研究室广东省广州市510632 珠海市人民医院眼科广东省珠海市519000

目的建立持续性角膜上皮缺损模型,观察不同时相的角膜上皮缺损对骨髓间充质干细胞增殖能力的影响。方法取健康雄性Wistar大鼠40只,随机平均分为8组,按每天处死1组大鼠的先后顺序分别命名为缺损组(A、B、C、D、E、F、G)和空白对照组。对... 详细信息

目的建立持续性角膜上皮缺损模型,观察不同时相的角膜上皮缺损对骨髓间充质干细胞增殖能力的影响。方法取健康雄性Wistar大鼠40只,随机平均分为8组,按每天处死1组大鼠的先后顺序分别命名为缺损组(A、B、C、D、E、F、G)和空白对照组。对全部缺损组大鼠建立持续性角膜上皮缺损模型,每天对缺损组大鼠左眼行角膜上皮刮除术,第1次术后1d处死缺损组A组大鼠,然后对剩余缺损组大鼠左眼行角膜上皮刮除术;第2次术后1d处死缺损组B组大鼠,然后对剩余缺损组大鼠左眼行角膜上皮刮除术,依此类推连续7d,并在无菌条件下获取各组骨髓间充质干细胞,流式细胞技术检测各组细胞周期。结果骨髓间充质干细胞细胞周期检测结果显示:B、D组S期细胞百分数分别为16.76%±4.49%、17.95%±2.77%,明显高于其他缺损组和对照组(均为P<0.05),B、D组G1期细胞百分数分别为72.26%±8.81%、71.33%±5.30%,均低于其他缺损组和对照组(均为P<0.05);但B、D组S期细胞及G1期细胞百分数差异无统计学意义(均为P>0.05),A、C、E、F、G组及对照组间的S期细胞及G1期细胞百分数差异亦无统计学意义(均为P>0.05)。结论持续性角膜上皮缺损模型,在缺损持续的第3天和第5天骨髓间充质干细胞的增殖能力明显提高。

关键词：欁骨髓间充质干细胞细胞周期角膜上皮缺损动物模型

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角膜基质细胞的表型转化及其分子机制

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中国病理生理杂志 2011年第4期27卷 803-807,812页

作者：潘红卫李学晶徐锦堂陈妙姣马荣暨南大学医学院眼科研究室广东广州510632 暨南大学医附属第一医院眼科广东广州510632 中国中医科学院眼科医院北京100040 暨南大学医学院临床医学系广东广州510632

角膜瘢痕是继发于多种角膜疾病的病理性改变,是许多角膜疾病造成视力不同程度损害甚至丧失的直接原因,也是影响角膜屈光手术效果的重要因素。对于角膜损伤愈合后的角膜瘢痕,目前临床上主要治疗方法是穿透性或者板层角膜移植术,但因为角... 详细信息

角膜瘢痕是继发于多种角膜疾病的病理性改变,是许多角膜疾病造成视力不同程度损害甚至丧失的直接原因,也是影响角膜屈光手术效果的重要因素。对于角膜损伤愈合后的角膜瘢痕,目前临床上主要治疗方法是穿透性或者板层角膜移植术,但因为角膜供体材料缺乏和经济原因,大量的患者无法得到手术治疗而最终丧失视力。近年来国外内相关研究证实了角膜基质细胞向肌成纤维细胞的表型转化在角膜瘢痕形成中的重要作用。

关键词：角膜细胞肌成纤维细胞表型转化

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高浓度葡萄糖对培养兔角膜上皮细胞增殖活性的影响

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广东医学 2011年第10期32卷 1224-1226页

作者：宋子宣陈剑王彦平阮余霞陈建苏吴静唐光霞高松哲暨南大学附属第一医院眼科暨南大学医学院病理生理学教研室广州510630 暨南大学医学院眼科研究室广州510632

目的研究高浓度葡萄糖对体外培养兔角膜上皮细胞增殖活性的影响,建立糖尿病性兔角膜上皮细胞培养模型。方法按照析因设计方法将葡萄糖浓度(25、40、60 mmol/L)和培养时间(24、48、72 h)进行全面组合,应用SunBioTM Am-Blue细胞增殖与活... 详细信息

目的研究高浓度葡萄糖对体外培养兔角膜上皮细胞增殖活性的影响,建立糖尿病性兔角膜上皮细胞培养模型。方法按照析因设计方法将葡萄糖浓度(25、40、60 mmol/L)和培养时间(24、48、72 h)进行全面组合,应用SunBioTM Am-Blue细胞增殖与活性检测试剂检测兔角膜上皮细胞增殖活性,倒置显微镜观察细胞形态。结果高浓度葡萄糖对兔角膜上皮细胞增殖活性的影响有统计学意义(F=276.318,P<0.01),作用时间对细胞增殖活性的影响有统计学意义(F=38.727,P<0.01),葡萄糖浓度和作用时间之间有交互作用(F=2.687,P<0.05)。结论高浓度葡萄糖对体外培养兔角膜上皮细胞增殖活性有抑制作用,随时间的延长抑制作用加强。

关键词：高浓度葡萄糖角膜上皮细胞增殖活性兔

来源：评论

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