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作者：吴连胜陈建苏徐锦堂丁勇唐光霞郑佩娥雷自鸣暨南大学医学院眼科研究室再生医学教育部重点实验室广东省广州市510632 暨南大学附属第一临床医学院眼科广东省广州市510632 暨南大学医学院病理教研室广东省广州市510632 侏罗纪生化有限公司广东省恩平市529458 浙江省温州市龙湾区第一人民医院眼科

目的研究猫新鲜前板层角膜移植治疗兔右眼角膜重度碱烧伤的疗效。方法将16只5个月龄的健康雄性新西兰白兔右眼制作重度角膜碱烧伤模型,随机分成A、B两组,每组各8只兔,其中A组为猫(4只)→兔异种前板层角膜移植组,植片直径为11.0mm,植床... 详细信息

目的研究猫新鲜前板层角膜移植治疗兔右眼角膜重度碱烧伤的疗效。方法将16只5个月龄的健康雄性新西兰白兔右眼制作重度角膜碱烧伤模型,随机分成A、B两组,每组各8只兔,其中A组为猫(4只)→兔异种前板层角膜移植组,植片直径为11.0mm,植床直径为10.0mm;B组未行手术。A组兔术后及B组造模后用500g.L-1葡萄糖及复方氯霉素滴术眼直至处死,记录两组疗效指数,并分别于术后1个月、2个月、3个月取材进行术眼角膜病理学及扫描电镜检查。结果3个月内A组8只角膜碱烧伤兔经异种猫前板层角膜移植后,7只移植角膜保持透明,1只出现局限性角膜混浊和角膜新生血管;而B组未手术的8只兔中出现角膜白斑、新生血管4只,角膜溃疡、穿孔3只,角膜溶解穿孔1只,并且有4只发生睑球粘连等并发症。A、B两组治疗后1个月、2个月、3个月平均疗效指数差异均有统计学意义(均为P<0.05)。A组透明角膜中组织学及扫描电镜下的结构特征清晰;B组兔角膜中有明显的角膜水肿和炎性细胞浸润,组织学及扫描电镜下的结构特征显示细胞连接混乱、消失。B组扫描电镜还提示随着时间的延长,上皮细胞部分生长、增多,细胞连接差,角膜上皮排列紊乱;角膜内皮细胞数量明显减少或无,细胞连接混乱、消失。结论用异种猫新鲜前板层材料对重度兔碱烧伤角膜进行板层移植手术治疗在一定程度上可减轻伤后炎症反应,防止严重并发症的发生,维持眼表结构并可达到一定的光学治疗效果。

关键词：异种角膜移植前板层角膜移植角膜碱烧伤兔猫

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抗原特异TCR Vα6-pIRES2-EGFP和TCRV β13-pIRES2-EGFP真核表达载体的构建及共转染研究

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免疫学杂志 2009年第1期25卷 1-5,11页

作者：尹青松李扬秋陈少华杨力建周羽竝吴秀丽李萡张学利暨南大学医学院血液病研究所暨南大学再生医学教育部重点实验室

目的构建携带弥漫大B型非霍奇金淋巴瘤(DLBL)相关抗原特异性的TCR Vα和TCR Vβ基因片段的真核表达载体TCR Vα-pIRES2-EGFP和TCR Vβ-pIRES2-EGFP,将其共同转染Raji和Jurkat细胞。方法前期研究从1例DLBL患者外周血T细胞中发现克隆性增... 详细信息

目的构建携带弥漫大B型非霍奇金淋巴瘤(DLBL)相关抗原特异性的TCR Vα和TCR Vβ基因片段的真核表达载体TCR Vα-pIRES2-EGFP和TCR Vβ-pIRES2-EGFP,将其共同转染Raji和Jurkat细胞。方法前期研究从1例DLBL患者外周血T细胞中发现克隆性增殖T细胞受体(TCR)Vα6和Vβ13亚家族T细胞,在此基础上利用RT-PCR扩增TCR Vα6和TCR Vβ13基因全长序列后,分别将其定向克隆入带有绿色荧光蛋白(EGFP)的真核表达载体pIRES2-EGFP,酶切和核酸序列测定分析方法鉴定重组质粒TCR Vα6-pIRES2-EGFP和TCR Vβ13-pIRES2-EGFP的正确性;利用核转染技术(nucleofector)将其分别或共同转染Raji细胞和Jurkat细胞,24 h后利用激光共聚焦显微镜观察EGFP的瞬时表达情况,48 h后利用实时定量PCR检测TCR Vα6和TCR Vβ13基因的表达情况,Western blot检测EGFP蛋白的表达情况。结果获得来自DLBL患者的TCR Vα6和TCR Vβ13基因全长序列,酶切分析和核酸序列测定证实TCR Vα6-pIRES2-EGFP和TCR Vβ13-pIRES2-EGFP重组质粒构建正确;转染24 h后,激光共聚焦显微镜下可观察到EGFP的表达,40%以上细胞发出绿色荧光,单独转染和共转染组荧光产生情况相似;实时定量PCR在单独转染和共转染组均可检测到TCR Vα6和TCR Vβ13基因的表达,共转染组2基因的表达水平稍低于单独转染组;Western blot检测在单独转染和共转染组均显示EGFP蛋白的表达,2组的蛋白杂交带强度相似。结论成功构建了DLBL特异性的TCR Vα6-pIRES2-EGFP和TCR Vβ13-pIRES2-EGFP真核表达质粒,两者可同时转染到细胞中,并实现了体外共表达。

关键词： DLBL TCR Vα/Vβ基因 CTL 核转染 EGFP

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醛固酮合酶基因多态性与高血压患者血压及RAAS激素水平的相关性研究

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中国分子心脏病学杂志 2010年第4期10卷 226-228页

作者：于汇民钟久昌禹艳红林曙光靳立军陆立鹤张斌张曹进董太明乌汉东王培宁高向民广东省人民医院心内科广东省医学科学院广东省心血管病研究所广州510080 上海交通大学医学院附属瑞金医院高血压研究所上海200025 暨南大学生命科学技术学院生殖免疫研究所再生医学教育部重点实验室广州510632 中山大学中山医学院病理生理学教研室广州510080

目的探讨醛固酮合酶(CYP11B2)基因-344C/T多态性与高血压患者血压及肾素-血管紧张素-醛固酮系统(RAAS)激素水平的相关性。方法用放射免疫法检测171例原发性高血压患者(92例男性,79女性)RAAS激素水平,包括血浆肾素活性(PRA)、血浆血管紧... 详细信息

目的探讨醛固酮合酶(CYP11B2)基因-344C/T多态性与高血压患者血压及肾素-血管紧张素-醛固酮系统(RAAS)激素水平的相关性。方法用放射免疫法检测171例原发性高血压患者(92例男性,79女性)RAAS激素水平,包括血浆肾素活性(PRA)、血浆血管紧张素II(AT-II)和醛固酮(ALD)水平。用聚合酶链反应(PCR)和限制性酶切方法检测所有患者的CYP11B2基因-344C/T多态性,按CC、CT和TT三种基因型分组。分析其与高血压患者血压及RAAS激素水平的相关性。结果 CYP11B2基因-344C/T多态性与高血压患者血压及血浆PRA和AT-II水平无关,但与血浆ALD水平相关,TT和CT基因型者的血浆ALD水平要高于CC基因型者,其差异有统计学意义(0.66±0.36or0.61±0.35versus0.42±0.23nmol/L,P=0.036)。结论本研究显示,高血压患者的CYP11B2基因-344C/T多态性与血浆ALD水平相关,提示该多态性可能参与了高血压患者血浆ALD水平的调节。

关键词：醛固酮合酶(CYP11B2)基因多态性血压肾素-血管紧张素-醛固酮系统(RAAS) 激素

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实时定量RT-PCR检测TCRVγ亚家族基因表达水平

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细胞与分子免疫学杂志 2009年第2期25卷 166-168页

作者：陈少华李扬秋杨力建李萡罗更新张涛暨南大学医学院血液病研究所暨南大学再生医学教育部重点实验室广东广州510632

目的：建立SYBRGreenI实时定量检测TCRVγ亚家族T细胞表达水平的比较Ct法。方法：利用倍比稀释的成人正常胸腺组织cDNA建立TCRVγⅠ—VγⅢ和B2微球蛋白基因（B2M）基因的相对标准曲线，实验证实靶基因（VγⅠ～VγⅢ）分别和看家基因（... 详细信息

目的：建立SYBRGreenI实时定量检测TCRVγ亚家族T细胞表达水平的比较Ct法。方法：利用倍比稀释的成人正常胸腺组织cDNA建立TCRVγⅠ—VγⅢ和B2微球蛋白基因（B2M）基因的相对标准曲线，实验证实靶基因（VγⅠ～VγⅢ）分别和看家基因（152M）的扩增效率-致，可采用比较ct法对TCRVγI—VγⅢ的表达进行相对定量，并运用该方法检测20例健康成人外周血TCRVγI—VγⅢ的表达水平。结果：成人外周血TCRVγⅡ的表达量最高，TCRVγ1次之，TCRVγⅢ的表达量最低，三者比较有统计学意义（P〈0．05）。结论：本研究率先建立了利用SYBRGreenI实时荧光定量RT—PCR检测人TCRV7基因mRNA表达水平比较Ct法，并在国内首先提供了健康成人外周血TCRVγ基因各亚家族mRNA表达水平的资料。

关键词：实时荧光定量RT-PCR 比较Ct法 TCR

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细胞与分子免疫学杂志 2009年第2期25卷 136-138页

作者：陈少华李扬秋杨力建周羽竝李萡张学利罗更新暨南大学医学院血液病研究所暨南大学再生医学教育部重点实验室暨南大学医学院生化教研室暨南大学第一附属医院血液科广东广州510632

目的:分析急性早幼粒细胞白血病(APL)患者外周血TCRVα和Vβ克隆性增殖T细胞及CDR3序列特点。方法:利用RT-PCR法扩增1例APL患者外周血单个核细胞中29个TCRVα基因和24个Vβ基因CDR3,阳性PCR产物进一步经荧光标记和基因扫描分析确定其CDR... 详细信息

目的:分析急性早幼粒细胞白血病(APL)患者外周血TCRVα和Vβ克隆性增殖T细胞及CDR3序列特点。方法:利用RT-PCR法扩增1例APL患者外周血单个核细胞中29个TCRVα基因和24个Vβ基因CDR3,阳性PCR产物进一步经荧光标记和基因扫描分析确定其CDR3长度,了解其克隆性;寡克隆的PCR产物再进行CDR3区序列分析。结果:该例APL患者外周血T细胞分别在TCRVα6、Vα10和Vβ23亚家族中出现寡克隆性增殖T细胞,经序列分析显示TCRVα6、Vα10和Vβ23亚家族基因序列分别为Vα6NJα17、Vα10NJα35和Vβ23NDβ1NJβ2.7,其CDR3区氨基酸序列分别为CAMRENSAGNK,YLCAGDELLWECA,CASSSKWAG-GTYEQY,该3个TCR基因已被GenBank收录(登陆号:EU544946、EU544947和EU647219)。结论:APL患者外周血T细胞出现的TCRVα6、Vα10和Vβ23克隆性增殖T细胞可能是机体对抗白血病细胞所引起的抗原特异性免疫反应;这3个独特TCR重排序列将进一步作为开展APL特异性免疫治疗研究提供资料。

关键词： APL TCR CDR3 T细胞克隆

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Elf-1基因在急性髓细胞性白血病中的表达情况

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暨南大学学报（自然科学与医学版） 2009年第6期30卷 581-584页

作者：沈琦郑海涛陈少华杨力建李扬秋暨南大学医学院血液病研究所广东广州510632 暨南大学再生医学教育部重点实验室广东广州510632

目的:建立实时定量PCR检测Elf-1基因表达水平的方法,了解急性髓细胞性白血病(AML)患者外周血Elf-1基因表达水平。方法:采用SYBR GreenⅠ荧光定量PCR和相对定量分析法检测33例AML患者:M2型17例、M3型6例、M5型10例和20例健康人外周血的... 详细信息

目的:建立实时定量PCR检测Elf-1基因表达水平的方法,了解急性髓细胞性白血病(AML)患者外周血Elf-1基因表达水平。方法:采用SYBR GreenⅠ荧光定量PCR和相对定量分析法检测33例AML患者:M2型17例、M3型6例、M5型10例和20例健康人外周血的单核细胞的Elf-1表达情况,以β2微球蛋白基因(β2M)作为内参,采用公式2-ΔCt×100%计算Elf-1基因表达水平。结果:AML组Elf-1表达水平(13.518±19.197)%明显高于健康对照组(2.044±1.321)%(P<0.01),不同AML亚型之间Elf-1的表达水平没有显著性差异(P=0.52),但各亚型AML的Elf-1的表达水平均与健康对照组比较均有显著性差异(P<0.01)。结论:建立SYBR GreenⅠ荧光实时定量PCR分析外周血Elf-1表达水平的方法,检测急性髓细胞性白血病Elf-1基因高表达情况。

关键词： Elf-1基因实时定量PCR 急性髓细胞性白血病(AML) T细胞免疫缺陷 TCRζ链

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加固植床减少人工角膜脱出

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眼科新进展 2009年第1期29卷 2-4页

作者：徐锦堂陈建苏暨南大学医学院眼科研究室暨南大学-香港中文大学再生医学教育部重点实验室广东省广州市510630

人工角膜脱出是穿透性人工角膜植入术严重并发症之一,用自身耳软骨和药物加固植床可以减少人工角膜的脱出。本文介绍一些加固方法,这些成功的经验,可以作为临床的借鉴。

关键词：人工角膜脱出植床加固并发症

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肾纤维囊作为载体培养角膜基质细胞的研究

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广东医学 2009年第1期30卷 23-25页

作者：唐光霞陈建苏徐锦堂夏潮涌丁勇暨南大学附属第一医院眼科广州510630 暨南大学医学院眼科研究室再生医学教育部重点实验室广州510632 暨南大学医学院组织学与胚胎学教研室广州510632

目的探索以脱细胞的肾纤维囊作为载体培养角膜基质细胞并研究培养角膜基质细胞特性。方法将培养扩增的兔角膜基质细胞分别接种到培养板和肾纤维囊上进行体外培养,采用倒置显微镜、免疫组化(波形蛋白)和免疫荧光(AO、PI和Hoechst)的方法... 详细信息

目的探索以脱细胞的肾纤维囊作为载体培养角膜基质细胞并研究培养角膜基质细胞特性。方法将培养扩增的兔角膜基质细胞分别接种到培养板和肾纤维囊上进行体外培养,采用倒置显微镜、免疫组化(波形蛋白)和免疫荧光(AO、PI和Hoechst)的方法进行检测,观察兔角膜基质细胞在培养板和肾纤维囊上的生长情况。结果倒置显微镜和免疫荧光显微镜观察结果显示角膜基质细胞在肾纤维囊上快速贴壁生长并增殖,细胞形态呈多角形树枝状,多次传代后细胞仍维持原有的形态和功能,细胞能长期培养。在培养板上培养的细胞呈长梭形,细胞贴壁生长和增殖情况稍差。在肾纤维囊上的活细胞较在培养板上培养的细胞多。结论角膜基质细胞在脱细胞的肾纤维囊载体上生长良好,细胞形态结构明显。本研究为角膜基质细胞的体外培养,提供了简单和高效的方法。

关键词：肾纤维囊角膜基质细胞细胞培养

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