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广东省医学会第十七次血液病学学术会议

作者：徐奕吴秀丽马瑜王旭陈少华杨力建李萡李扬秋暨南大学医学院血液病研究所广东广州510632 暨南大学医学院血液病研究所广东广州510632 再生医学教育部重点实验室暨南大学广东广州510632

目的：A20可能通过多种途径参与肿瘤的发生发展，但其在不同的肿瘤组织和细胞中表达和作用不一，导致对不同肿瘤细胞的增殖、凋亡和耐药的影响作用存在着差异。急性B淋巴细胞白血病(B-ALL)作为血液系统恶性肿瘤，其复杂的分子发病机制...

目的：A20可能通过多种途径参与肿瘤的发生发展，但其在不同的肿瘤组织和细胞中表达和作用不一，导致对不同肿瘤细胞的增殖、凋亡和耐药的影响作用存在着差异。急性B淋巴细胞白血病(B-ALL)作为血液系统恶性肿瘤，其复杂的分子发病机制仍有许多不明之处，深入了解B-ALL患者外周血中A20及其调控基因的表达特点具有重要的研究意义。方法：采用SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR法分别检测33例B-ALL患者(包括15例初发未治B-ALL、8例难治复发B-ALL以及10例缓解期(CR)患者)以及22例健康人外周血单个核细胞的A20和调控基因NF-κB和MALT1基因的表达水平。

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再生障碍性贫血患者外周血T细胞中CD3ζ基因启动子和3'-UTR突变特点

再生障碍性贫血患者外周血T细胞中CD3ζ基因启动子和3'-UTR突变特...

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广东省医学会第十七次血液病学学术会议

作者：李萡方苏牛宇哲杨力建陈少华李扬秋暨南大学医学院血液病研究所广东广州510632 暨南大学再生医学教育部重点实验室广东广州510632 暨南大学医学院血液病研究所广东广州510632

基因的转录受到转录因子、RNA聚合酶和一系列顺式作用元件：启动子、增强子、沉默子和非编码区等因素的严密调控,其中3'端非编码区(3'-UTR)与相应的miRNA结合,在基因表达的转录后调控方面起作用。基于研究发现AA患者中CD3ζ基...

基因的转录受到转录因子、RNA聚合酶和一系列顺式作用元件：启动子、增强子、沉默子和非编码区等因素的严密调控,其中3'端非编码区(3'-UTR)与相应的miRNA结合,在基因表达的转录后调控方面起作用。基于研究发现AA患者中CD3ζ基因及其相关转录因子Elf-1表达升高以及CD3ζ3'-UTR不同类型剪接体的表达特点。同时,CD3ζ基因启动子除有多个转录起始位点之外,还有3个GATA-3和2个Elf-1结合位点的特点,因此本研究进一步分析了AA患者外周血T细胞中CD3ζ启动子和3'-UTR突变情况,以了解AA患者CD3ζ基因表达异常的相关分子调控机制。

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pIRES-PML-RARα重组载体的构建和表达研究

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沈阳医学院学报 2013年第2期15卷 69-72页

作者：胡刚岑东芝杨力建陈少华周羽竝李扬秋广东省惠东县人民医院内一科广东惠东516300 暨南大学医学院血液病研究所暨南大学医学院生物化学教研室暨南大学再生医学教育部重点实验室

目的:采用不同长度的PML-RARα融合基因片段与pIRES质粒构建真核表达载体,并检测其在真核细胞中的表达。方法:利用逆转录多聚酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)从NB4细胞的RNA中分别扩增出包含PML-RAR... 详细信息

目的:采用不同长度的PML-RARα融合基因片段与pIRES质粒构建真核表达载体,并检测其在真核细胞中的表达。方法:利用逆转录多聚酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)从NB4细胞的RNA中分别扩增出包含PML-RARα基因融合点的长度为245 bp和384 bp的基因片段,并将不同长度的基因片段分别克隆到pIRES质粒中,通过酶切和测序验证重组质粒的正确性。将重组质粒转染K562细胞,通过RT-PCR和实时荧光定量PCR检测该质粒在真核细胞中的转录。结果:NheⅠ/MluⅠ双酶切证明重组质粒中含有相应大小的PML-RARα融合基因片段,测序结果证明重组质粒中插入片段的碱基序列均完全正确。将构建的pIRES-PML-RARα质粒转染K562细胞后经RT-PCR和实时荧光定量PCR鉴定表明,插入到重组质粒中的PML-RARα基因能够在真核细胞中进行正常转录。结论:成功构建了含有不同长度的PML-RARα基因的真核表达载体,该载体能够在真核细胞中正常转录,为研发DNA疫苗用于治疗急性早幼粒细胞白血病提供重要资料。

关键词： PML-RARα融合基因急性早幼粒细胞白血病 DNA疫苗

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复发B-ALL伴低克隆性扩增TCR Vγ和TCR Vδ亚家族T细胞

复发B-ALL伴低克隆性扩增TCR Vγ和TCR Vδ亚家族T细胞

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第十六届全国临床肿瘤学大会暨2013年CSCO学术年会

作者：胡峻岩吴秀丽陈少华杨力建李萡李扬秋 510632 暨南大学医学院血液病研究所 510632 广州医学院第三附属院急诊科 510632 暨南大学医学院血液病研究所 510632 暨南大学医学院血液病研究所 510632 暨南大学再生医学教育部重点实验室

目的:前期研究发现初发B细胞急性淋巴细胞白血病(B-ALL)病人外周血T细胞受体(TCR)亚家族T细胞谱系出现克隆性增殖和倾斜性分布等特点,本研究进一步分析复发B-ALL患者外周血的TCR Vγ和TCR Vδ亚家族T细胞的分布和克隆性增殖情况.

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复发B-ALL伴低克隆性扩增TCRVγ和TCRVδ亚家族T细胞

复发B-ALL伴低克隆性扩增TCRVγ和TCRVδ亚家族T细胞

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广东省医学会第十七次血液病学学术会议

作者：胡峻岩吴秀丽陈少华杨力建李萡李扬秋暨南大学医学院血液病研究所广东广州510632 广州医学院第三附属院急诊科广东广州510632 暨南大学医学院血液病研究所广东广州510632 暨南大学医学院血液病研究所广东广州510632 暨南大学再生医学教育部重点实验室广东广州510632

前期研究发现初发B细胞急性淋巴细胞白血病(B-ALL)病人外周血T细胞受体(TCR)亚家族T细胞谱系出现克隆性增殖和倾斜性分布等特点，本研究进一步分析复发B-ALL患者外周血的TCR Vγ和TCR V δ亚家族T细胞的分布和克隆性增殖情况.利用RT-PC...

前期研究发现初发B细胞急性淋巴细胞白血病(B-ALL)病人外周血T细胞受体(TCR)亚家族T细胞谱系出现克隆性增殖和倾斜性分布等特点，本研究进一步分析复发B-ALL患者外周血的TCR Vγ和TCR V δ亚家族T细胞的分布和克隆性增殖情况.利用RT-PCR和基因扫描技术检测8例复发B-ALL患者外周血单个核细胞中3个TCR V γ和8个TCR V δ亚家族基因的的表达和克隆性情况，并以15例初发B-ALL患者为对照组.结果发现：8例复发B-ALL患者TCRγⅠ-Ⅲ亚家族表达率分别为5/8例(62.5％)、1/8例(12.5％)和7/8例(87.5％)，其中TCR γⅡ的表达率较初发B-ALL组(40％)低，但差异无统计学意义，而TCRγⅠ和TCR γⅢ的表达率相似.与初发B-ALL组患者外周血T细胞表达TCR δ各亚家族的结果有所不同，复发B-ALL患者未检测到TCR Vδ5和Vδ7表达，但两组间TCRδ各亚家族的表达率差异无统计学意义.

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原子力显微镜观察角膜内皮细胞诱导后诱导多能干细胞的形态学变化

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中华实验眼科杂志 2012年第11期30卷 976-981页

作者：招志毅陈建苏钟敬祥谭美华李善义戴应暨南大学附属第一医院眼科暨南大学医学院眼科研究所再生医学教育部重点实验室广州510632

背景诱导多能干细胞（iPSCs）具有类似胚胎干细胞的分化能力，可以分化为全身各种类型的体细胞，同时不会引起伦理学问题和免疫排斥反应，因此iPSCs有可能作为组织工程角膜内皮重建的种子细胞。目的利用原子力显微镜（AFM）观察人iPSCs... 详细信息

背景诱导多能干细胞（iPSCs）具有类似胚胎干细胞的分化能力，可以分化为全身各种类型的体细胞，同时不会引起伦理学问题和免疫排斥反应，因此iPSCs有可能作为组织工程角膜内皮重建的种子细胞。目的利用原子力显微镜（AFM）观察人iPSCs与兔角膜内皮细胞（CECs）混合共培养后分化iPSCs的形态学变化，并找出其细胞膜超微结构变化的规律。方法分别培养兔CECs和人MMC-iPSCs细胞系，用免疫组织化学法测定iPSCs细胞的标志物以鉴定iPSCs细胞。将传代后7d的iPSCs与60％融合的CECs在内皮细胞培养基中共培养建立混合共培养模型，利用AFM结合倒置显微镜观察CECs及共培养前后iPSCs的形貌和超微结构变化。结果CECs的长度和宽度分别为（66．93±10．48）μm和（44．85±8．14）μm，共培养前未分化的谮SCs的长度和宽度分别为（12．51±1．40）μm和（10．93±1．69）μm，共培养后分化的iPSCs长度和宽度分别为（36．12±10．29）μm和（31．53±9．65）μm。分化的iPSCs长度和宽度均大于共培养前的iPSCs，差异均有统计学意义（P〈0．05）。分化的iPSCs宽度与CECs比较差异无统计学意义（P〉0．05）。CECs细胞膜表面突起的最大宽度和高度分别为（2．11±1．03）μm和（115．68±92．08）nm，膜表面凹陷为窗孔样凹陷，最大宽度为（1．49±0．65）μm，膜表面结构几何参数均方根粗糙度（Rq）为（39．20±7．82）nm，平均粗糙度（Ra）为（30．37±5．32）nm；未分化的iPSCs细胞膜表面突起为颗粒状，突起的最大宽度和高度分别为（0．39±0．22）μm和（13．11±9．18）nm，膜表面凹陷为虫蚀样，凹陷的最大宽度为（0．34±0．18）μm，Rq和Ra分别为（26．60±4．93）nm和（9．97±3．78）nm；分化的iPSCs细胞膜表面突起为指状，突起的最大宽度和高度分别为（1．91±0．76）μm和（106．55±77．27）nm，膜表面凹陷为窗孔样，凹陷的最大宽度为（1．61±1．25）μm，Rq为（57．33±12．80）nm，Ra为（43．63±11．17）nm。分化的iPSCs细胞膜表面突起最大宽度和高度、凹陷最大宽度、Rq、Ra均大于共培养前未分化的iPSCs，差异均有统计学意义（P〈0．05），与CECs比较差异均无统计学意义（P〉0．05）。结论AFM能够敏感地观察到iPSCs与CECs接触共培养7d后iPSCs向CECs方向转化的形态学变化，为进一步研究iPSCs向CECs的分化提供了研究基础。

关键词：诱导多能干细胞角膜内皮细胞混合共培养分化原子力显微镜

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利用G-CSF体外诱导人调节性γδT细胞的研究

利用G-CSF体外诱导人调节性γδT细胞的研究

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广东省医学会第十七次血液病学学术会议

作者：吴秀丽宣丽王旭于嗣俭范倩易正山郑忠信刘启发李扬秋暨南大学医学院血液病研究所广州510632 南方医科大学南方医院血液科南方医科大学血液病研究所广州510515 暨南大学医学院血液病研究所广州510632 再生医学教育部重点实验室暨南大学广州510632

目的：新近发现,在含有T细胞受体(TCR)γ δ抗体和转化生长因子-3 (TGF-3)的体外诱导培养体系中,外周血单个核细胞可诱导生成新型的调节性γ δ T细胞(γ δ Treg).该群细胞具有免疫抑制功能,Foxp3表达阳性且CD25和CD27高表达.我们前期...

目的：新近发现,在含有T细胞受体(TCR)γ δ抗体和转化生长因子-3 (TGF-3)的体外诱导培养体系中,外周血单个核细胞可诱导生成新型的调节性γ δ T细胞(γ δ Treg).该群细胞具有免疫抑制功能,Foxp3表达阳性且CD25和CD27高表达.我们前期研究发现粒细胞集落刺激因子(G-CSF)可能具有免疫调节作用,G-CSF动员可能影响TRGV和TRDV(γ δ T细胞的TCR)亚家族的谱系分布和克隆性,且G-CSF动员后TRDV1亚家族表达的稳定性与移植受者移植物抗宿主病(GVHD)的低发生率呈正相关.为进一步研究G-CSF的免疫调节功能,本研究探讨了G-CSF体外诱导生成γ δTreg的可能性.方法：在含有TCRγδ抗体和TGF-β或G-CSF或G-CSF+TGF-β联合应用的体外诱导培养体系中培养正常人外周血单个核细胞(同时设置空白组),分别采用流式细胞术(FACS)检测细胞免疫表型、CFSE试剂盒结合FACS检测细胞增殖抑制功能以及实时定量PCR检测Foxp3和CD25的表达水平.结果：体外诱导培养9天后,TGF-β组、G-CSF组和G-CSF+TGF-β组Foxp3+γδ T细胞比例(分别为62.3％、52.9％和63.5％)、CD25+γδ T细胞比例(43.5％、43.4％和44.4％)以及CD27+γ δ T细胞比例(41.5％、41.9％和44.0％)均明显高于空白组的Foxp3+γ δ T细胞、CD25+γδ T细胞和CD27γδ T细胞(7.87％、3.9％和3.5％).TGF-β组、G-CSF组和G-CSF+TGF-β组诱导产生的γδ T细胞对CD4+T细胞增殖的抑制作用均明显强于空白组,但诱导实验组之间的细胞增殖抑制作用无明显差异.TGF-β组、G-CSF组、G-CSF+TGF-β组的Foxp3表达水平(0.623％、0.639％和0.843％)均显著高于空白组(0.384％)( P＜0.001).G-CSF+TGF-β组的Foxp3表达水平明显高于TGF-β组和G-CSF组(P=0.001,P=0.007).TGF-β组、G-CSF组、G-CSF+TGF-β组和空白组的CD25表达水平则无明显差异(P=0.457).结论：初步证实正常人外周血单个核细胞在含有TCR γδ抗体和G-CSF的体外诱导培养体系中可诱导产生γδ Treg.

关键词：

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诱导多能干细胞在眼科的研究进展

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中华实验眼科杂志 2012年第7期30卷 662-666页

作者：招志毅(综述) 陈建苏(审校) 暨南大学附属第一医院眼科、暨南大学医学院眼科研究所、再生医学教育部重点实验室广州510632

2006年诱导多能干细胞（iPSCs）的建立被誉为是干细胞研究领域的重大突破，使得进行患者体细胞来源的干细胞治疗成为可能。近年的研究表明，动物和人的成纤维细胞、B淋巴细胞、神经干细胞、头发角质细胞、胰腺细胞、脐带基质和羊膜的间... 详细信息

2006年诱导多能干细胞（iPSCs）的建立被誉为是干细胞研究领域的重大突破，使得进行患者体细胞来源的干细胞治疗成为可能。近年的研究表明，动物和人的成纤维细胞、B淋巴细胞、神经干细胞、头发角质细胞、胰腺细胞、脐带基质和羊膜的间充质细胞均可重编程成为iPSCs并可通过一定的诱导分化为特定类型的细胞，为多种疾病的特异性治疗提供了新的方法。而iPSCs研究在眼科领域的研究也取得了长足进展。在眼科，iPSCs诱导后可分化为视网膜色素上皮（RPE）细胞、感光细胞和其他视网膜细胞，从而为治疗视网膜退行性病变奠定了基础。与传统的干细胞治疗不同，iPSCs移植治疗相应的疾病避免了传统干细胞治疗所存在的道德伦理及免疫排斥等限制，具有较好的应用前景。就iPSCs的概念、诱导策略及方法、在眼科领域的研究现状、研究中存在的问题及应用前景等方面进行综述。

关键词：诱导多能干细胞视网膜变性性疾病眼科

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共培养环境中兔角膜内皮细胞诱导人iPSCs分化

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中国病理生理杂志 2012年第8期28卷 1488-1493页

作者：谭美华陈建苏招志毅丁勇钟敬祥戴应李善义杨皓庄暨南大学第一临床医学院眼科暨南大学医学院眼科研究所暨南大学再生医学教育部重点实验室暨南大学医学院病理生理学系广东广州510632

目的:观察人诱导多能干细胞(induced pluripotent stem cells,iPSCs)与兔角膜内皮细胞(cornealendothelial cells,CECs)共培养前后的形态学变化,检测iPSCs向CECs分化前后部分标志蛋白表达的变化,为研究iPSCs向CECs的分化提供实验依据。... 详细信息

目的:观察人诱导多能干细胞(induced pluripotent stem cells,iPSCs)与兔角膜内皮细胞(cornealendothelial cells,CECs)共培养前后的形态学变化,检测iPSCs向CECs分化前后部分标志蛋白表达的变化,为研究iPSCs向CECs的分化提供实验依据。方法:分离培养兔CECs并传代,同时使用无饲养层细胞法培养扩增人脐带源iPSCs,Western blotting对其进行鉴定;用量子点对iPSCs进行标记示踪,以不同密度比例建立iPSCs与CECs的共培养模式,用原子力显微镜(atomic force microscopy,AFM)结合倒置显微镜观察共培养前后iPSCs的形态学变化,免疫荧光法检测iPSCs分化前后CD34、CD133、CD31和水通道蛋白1(AQP1)蛋白表达的变化。结果:培养扩增的兔CECs形态为六边形,呈典型的铺路石样外观;iPSCs呈克隆样生长,Western blotting检测Oct4、Nanog和Sox2多能性标志蛋白均呈阳性;10 nmol/L量子点标记的iPSCs以1/4悬液与融合60%的兔CECs共培养为最佳模式;AFM结合倒置显微镜观察到共培养后iPSCs体积增大,胞浆增多,核浆比减小,细胞膜表面可见颗粒状突起物,膜表面粗糙度增加;免疫荧光法检测分化前iPSCs的CD34、CD133、CD31和AQP1表达均呈阴性,共培养2周后iPSCs的CD34、CD133和CD31表达阴性,AQP1表达阳性。结论:与兔CECs混合共培养后人iPSCs不仅从形态学上向内皮样细胞方向转化,同时表达角膜内皮细胞标志蛋白AQP1。

关键词：诱导多能干细胞角膜内皮细胞混合培养显微镜检查原子力水通道蛋白1

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造血干细胞移植后T细胞免疫重建的监测和调控

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白血病．淋巴瘤 2012年第2期21卷 65-67页

作者：李扬秋暨南大学医学院血液病研究所再生医学教育部重点实验室广州510632

造血干细胞移植后T细胞免疫重建是预防病毒感染和肿瘤复发的一个关键因素。如何调整移植预处理方案、移植物成分和促进移植后免疫重建的问题也是2011年美国血液学会（ASH）年会中移植免疫的一个主要专题，本文主要介绍年会相关新进展。

关键词：造血干细胞移植 T细胞免疫重建美国血液学会年会

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