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广东省医学会第十九次血液病学学术会议

作者：吴琼曹长姝杨力建李萡李扬秋暨南大学血液病研究所暨南大学再生医学教育部重点实验室暨南大学医学院解剖学教研室暨南大学再生医学教育部重点实验室暨南大学血液病研究所暨南大学再生医学教育部重点实验室暨南大学第一附属医院血液科

目的前期研究提示金属铜配合物可以特异性结合铜转运蛋白，下调其表达，减少了药物的流失，增强了药物对肿瘤细胞的敏感性。本研究目的主要是研究自主合成含硒铜配合物Se2Cu对白血病细胞的抑制作用及其可能的耐药机制。方法采用CCK8...

目的前期研究提示金属铜配合物可以特异性结合铜转运蛋白，下调其表达，减少了药物的流失，增强了药物对肿瘤细胞的敏感性。本研究目的主要是研究自主合成含硒铜配合物Se2Cu对白血病细胞的抑制作用及其可能的耐药机制。方法采用CCK8检测含硒铜配合物Se2Cu对慢性粒细胞白血病K562细胞和耐药的K562R细胞的抑制作用;应用流式细胞术检测含硒铜配合物抑制白血病细胞生长的作用机制;由于铜配合物具有荧光，采用实时荧光法检测含硒铜配合物在细胞内的分布与定位;应用Western Bloting检测含硒铜配合物处理后的铜转运蛋白的表达量，以研究其抗耐药的机制。

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DHTMF对Jurkat细胞的抑制作用研究

DHTMF对Jurkat细胞的抑制作用研究

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广东省医学会第十九次血液病学学术会议

作者：曹长姝吴琼杨力建李扬秋暨南大学血液病研究所暨南大学医学院解剖学教研室暨南大学血液病研究所暨南大学再生医学教育部重点实验室暨南大学血液病研究所暨南大学血液病研究所暨南大学再生医学教育部重点实验室暨南大学第一附属医院血液科

目的急性T细胞白血病(T-acute lymphoblastic leukemia,T-ALL)是一类生物学特征异质性非常大的疾病,南T系前体细胞发生恶性转化致使造血系统病变的恶性肿瘤.临床应用标准的化疗方案治疗后,由于化疗药物的副作用和复发患者产生抗药性,...

目的急性T细胞白血病(T-acute lymphoblastic leukemia,T-ALL)是一类生物学特征异质性非常大的疾病,南T系前体细胞发生恶性转化致使造血系统病变的恶性肿瘤.临床应用标准的化疗方案治疗后,由于化疗药物的副作用和复发患者产生抗药性,均使得治疗效果不甚理想.3,5-二羟基-6,7,3',4'-四甲氧基黄酮(3,5-hydroxy-6,7,3',4'-tetrameth-oxyflavone,DHTMF)是从中草药臭灵丹中提取的具有抗肿瘤活性的多甲氧基黄酮类化合物.在前期的研究中,我们发现DHTMF可以通过内源性的线粒体凋亡通路抑制伊马替尼耐药的K562R细胞增殖和诱导细胞凋亡.

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RNA干扰下调PPP2R5C对T-ALL TCR Vβ亚家族分布和克隆增殖的影响

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暨南大学学报（自然科学与医学版） 2014年第4期35卷 361-366页

作者：徐艳陈宇周玲玲刘思初杨力建陈少华罗更新李扬秋暨南大学再生医学教育部重点实验室广东广州510632 暨南大学医学院血液病研究所广东广州510632 暨南大学第一附属医院血液科广东广州510630

目的:基于前期利用靶向PPP2R5C基因的小干扰RNA(PPP2R5C-siRNA)抑制白血病T细胞增殖的结果,进一步了解PPP2R5C-siRNA对T-ALL样本中TCR Vβ亚家族基因谱系及其克隆性增殖情况.方法:利用PPP2R5C-siRNA转染2例初发未治疗T-ALL病人外周血单... 详细信息

目的:基于前期利用靶向PPP2R5C基因的小干扰RNA(PPP2R5C-siRNA)抑制白血病T细胞增殖的结果,进一步了解PPP2R5C-siRNA对T-ALL样本中TCR Vβ亚家族基因谱系及其克隆性增殖情况.方法:利用PPP2R5C-siRNA转染2例初发未治疗T-ALL病人外周血单个核细胞(PBMC),设无关序列对照组(SC)和空白对照组(NC);利用实时定量PCR检测PPP2R5C基因表达水平.利用RT-PCR扩增各组样本中24个TCR Vβ亚家族基因的互补决定区3(CDR3);阳性产物进一步经基因扫描分析CDR3长度,了解其Vβ亚家族T细胞克隆性.结果:PPP2R5C-siRNA处理后明显下调PBMC中PPP2R5C基因表达水平.2例初发T-ALL外周血中分别可检测到10和17个Vβ亚家族,多数Vβ亚家族T细胞为多克隆性,病例1中Vβ9和Vβ17为寡克隆性,而病例2中,Vβ14和Vβ16呈寡克隆性;经过RNA干扰处理后,TCR Vβ亚家族表达率降低,仅检测到3和4个Vβ亚家族,分别为Vβ2,Vβ3,Vβ16和Vβ17.其中2个Vβ家族的寡克隆性模式发生改变,病例1中,Vβ17转为多克隆,而病例2中,Vβ16也转变为多克隆.结论:RNA干扰下调白血病T细胞PPP2R5C基因表达抑制细胞增殖时,在一定程度上影响TCR Vβ亚家族T细胞增殖和克隆模式变化,对正常T细胞功能可能存在一定影响.

关键词： PPP2R5C基因 T细胞-急性淋巴细胞白血病 T细胞受体Vβ基因 T细胞克隆性

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MALT1基因2种转录本在正常人和B细胞白血病患者中的表达特点

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中国病理生理杂志 2013年第6期29卷 1124-1128,1132页

作者：王旭张帆徐艳吴秀丽陈少华杨力建李萡卢育洪李扬秋暨南大学再生医学教育部重点实验室广东广州510632 暨南大学医学院血液病研究所广东广州510632 暨南大学第一附属医院血液科广东广州510632

目的:比较正常人和B细胞白血病患者外周血中黏膜相关淋巴样组织淋巴瘤转位基因1(MALT1)2种异构体的分布和表达差异。方法:根据MALT1基因的结构特点,设计2对引物,通过建立2种转录本的逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法分析8例B细胞急性... 详细信息

目的:比较正常人和B细胞白血病患者外周血中黏膜相关淋巴样组织淋巴瘤转位基因1(MALT1)2种异构体的分布和表达差异。方法:根据MALT1基因的结构特点,设计2对引物,通过建立2种转录本的逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法分析8例B细胞急性淋巴细胞白血病(B-ALL)、8例B细胞慢性淋巴细胞白血病(B-CLL)和8例正常人的外周血单个核细胞(PBMC)中MALT1的表达情况。实时定量PCR分析各组样本的MALT1 mRNA表达水平。结果:所有样本中均能得到所预期的PCR产物,其中第1对引物可以扩增出2条片段,分别为MALT1转录本1(包含第5、6、7、8、9外显子)和MALT1转录本2(包含第5、6、8、9外显子),第2对引物只能扩增出1条包含转录本1的片段,所有PCR产物均通过核苷酸序列分析证实。MALT1 2种转录本均在外周血中有表达,并且MALT1转录本2表达水平高于转录本1。通过灰度分析发现,在B-ALL中,MALT1转录本1的灰度与正常人相比显著增高(P<0.05),而MALT1转录本2显著降低(P<0.05);在B-CLL中,MALT1 2种转录本的灰度与正常人相比无显著差异(P>0.05)。此外,B-ALL中,MALT1 mRNA表达水平(中位数:1.253)低于正常人(中位数:1.976)(P=0.05);而B-CLL中,MALT1 mRNA的表达水平与正常人相比无显著差异(P>0.05)。结论:MALT1 2种转录本均表达于正常和B细胞白血病样本中,但B-ALL中两者的表达水平有所差异,同时,B-ALL的MALT1 mRNA表达水平也有所降低。B-ALL中MALT1基因表达的异常可能影响MALT1信号通路而与疾病的发生发展相关。

关键词：黏膜相关淋巴样组织淋巴瘤转位基因1 转录本白血病 B细胞基因表达

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以猪角膜脱细胞基质为载体培养人脐静脉内皮细胞构建实验性角膜后板层

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中国病理生理杂志 2013年第7期29卷 1288-1293页

作者：祁冰侯光辉李柳季青山吴静周清暨南大学附属第三医院珠海市人民医院眼科广东珠海519000 南昌大学附属第三医院南昌市第一医院眼科江西南昌330038 暨南大学附属第一医院眼科广东广州510630 暨南大学医学院眼科研究室广东广州510632

目的:探讨以异种后弹力膜/基质为载体诱导人脐静脉内皮细胞向角膜内皮细胞分化的可行性及移植术后在活体的生理功能。方法:体外分离培养脐静脉内皮细胞作为诱导移植的种子细胞;取当地质检合格的猪眼球以直径6.2 mm、厚100μm、冷冻脱水... 详细信息

目的:探讨以异种后弹力膜/基质为载体诱导人脐静脉内皮细胞向角膜内皮细胞分化的可行性及移植术后在活体的生理功能。方法:体外分离培养脐静脉内皮细胞作为诱导移植的种子细胞;取当地质检合格的猪眼球以直径6.2 mm、厚100μm、冷冻脱水进行角膜深板层载体的制备;接种经CM-DiI荧光标记的第2～3代人脐静脉内皮细胞于载体的后弹力层面,体外培养7～10 d行细胞形态、密度、组织学和扫描电镜观察,待细胞与后弹力层面融合形成单层后,用于兔角膜移植。受眼:正常健康新西兰大白兔24只(24眼),实验组(人脐静脉内皮细胞移植组)12眼,对照组(单纯猪角膜深板层移植组)12眼,全角膜范围去除术眼内皮细胞,实施移植手术。结果:人脐静脉内皮细胞在猪后弹力膜/基质载体上贴附生长,形成紧密连接的单层,形态近似六角形,呈铺路石状分布,具有正常兔角膜内皮细胞的超微结构。术后8周实验组角膜基本透明,周边角膜略有水肿。对照组单纯猪角膜深板层移植后,移植角膜明显水肿、混浊。结论:以异种角膜后弹力膜/基质为载体培养的人脐静脉内皮细胞,行异种异体移植后,能够在活体上成活,并能维持角膜透明,具有正常角膜内皮细胞的生物学功能。深板层角膜内皮移植术是体外培养血管内皮细胞移植的一种有效术式。

关键词：人脐静脉内皮细胞猪角膜脱细胞基质角膜内皮细胞移植

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CM-Dil与DAPI联合标记人羊膜上皮细胞的可行性研究

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眼科新进展 2013年第11期33卷 1001-1005页

作者：王黎周清杨艳陈剑徐锦堂暨南大学附属第一医院眼科广东省广州市510630 暨南大学医学院眼科研究室广东省广州市510632

目的建立人羊膜上皮细胞（human amniotic epithelial cell，HAEC）的体外培养方法，并探讨氯甲基苯甲酰胺（CM—Dil）与4’，6-二脒基-2-苯基吲哚（DAPI）对HAEC进行联合标记示踪的可行性。方法运用酶消化法获取HAEC，收集第2代细胞，... 详细信息

目的建立人羊膜上皮细胞（human amniotic epithelial cell，HAEC）的体外培养方法，并探讨氯甲基苯甲酰胺（CM—Dil）与4’，6-二脒基-2-苯基吲哚（DAPI）对HAEC进行联合标记示踪的可行性。方法运用酶消化法获取HAEC，收集第2代细胞，流式细胞仪检测CD29、CD34、CD44、CIM5和CD105的表达率，SP免疫化学法鉴定HAEC。CM—Dil与DAPI对HAEC进行体外标记，荧光倒置显微镜下观察1d、7d和14d的标记情况，台盼蓝染色检测细胞活力，CCK-8法检测细胞增殖以明确联合标记对体外培养HAEC生长特性的影响。结果HAEC贴壁培养后呈扁平多角形，CD29、CD34、CD44、CD45和CD105的阳性率分别为99．64％、2．21％、32．41％、0．84％、36．70％，细胞角蛋白Keratin阳性表达。HAEC在cM—Dil和DAPI联合标记1d后，荧光显微镜下可观察到细胞膜和细胞核分别在不同波长下呈红色和蓝色荧光，标记率为100％；14d后，经传代培养的HAEC荧光强度与1d时相近，细胞形态无改变。台盼蓝染色显示标记细胞存活率为96．8％-98．9％，CCK-8检测标记细胞的增殖力较未标记组差异无统计学意义（P〉0．05）。结论CM—Dil和DAPI可有效标记HAEC，染色简单、无细胞毒性，荧光衰减较慢，可作为HAEC的标记及示踪方法。

关键词：人羊膜上皮细胞氯甲基苯甲酰胺 4’ 6-二脒基-2-苯基吲哚标记示踪

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B-ALL患者外周血γδT细胞TCR亚家族谱系分布和增殖特点

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免疫学杂志 2013年第2期29卷 147-151页

作者：胡峻岩吴秀丽陈少华杨力建李萡王亮李扬秋暨南大学医学院血液病研究所广州510632 广州医学院第三附属医院急诊科 510150 暨南大学第一附属医院肿瘤科广州510632 再生医学教育部重点实验室

目的了解急性B淋巴细胞白血病(B-ALL)患者外周血T细胞的T细胞受体(TCR)Vγ和Vδ亚家族的T细胞谱系分布和克隆性增殖情况。方法利用反转录-多聚酶链反应(RT-PCR)方法检测14例B-ALL患者外周血单个核细胞中3个TCR Vγ和8个TCR Vδ亚家族基... 详细信息

目的了解急性B淋巴细胞白血病(B-ALL)患者外周血T细胞的T细胞受体(TCR)Vγ和Vδ亚家族的T细胞谱系分布和克隆性增殖情况。方法利用反转录-多聚酶链反应(RT-PCR)方法检测14例B-ALL患者外周血单个核细胞中3个TCR Vγ和8个TCR Vδ亚家族基因谱系的分布情况;进一步经荧光素标记和基因扫描分析TCR Vγ和TCR Vδ亚家族基因的互补决定区3(CDR3),以检测T细胞克隆性。10例健康成人外周血作为对照。结果 B-ALL患者外周血中TCR Vγ亚家族表达率降低,其中VγII亚家族表达率降低与健康对照组的差异具有统计学意义(P=0.006)。B-ALL患者外周血中Vδ1(57.1%)、Vδ2(42.9%)和Vδ3(14.3%)亚家族表达率均低于健康对照组,且差异有统计学意义(P=0.024,0.006,0.001)。此外,在B-ALL患者外周血中可以检测到在健康人中未检测到的Vδ4(14.3%)和Vδ5(14.3%)亚家族;且Vδ6(28.6%)、Vδ7(21.4%,)和Vδ8(35.7%)亚家族表达率也高于健康对照组。B-ALL患者外周血中存在克隆性增殖的Vγ和Vδ亚家族T细胞,其中,Vδ8亚家族T细胞寡克隆增殖的发生频率最高(35.7%),其次为Vδ6(28.6%)和Vδ7(21.4%)亚家族T细胞。结论 B-ALL患者外周血TCR Vγ和TCR Vδ亚家族T细胞出现限制性表达和克隆性增殖,其中高频率出现的寡克隆性增殖的Vδ亚家族T细胞可能与体内存在的白血病抗原相关。

关键词：急性B淋巴细胞白血病 γδT细胞 T细胞受体基因扫描克隆性

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人羊膜上皮细胞培养液抑制角膜炎症的实验研究

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器官移植 2013年第1期4卷 12-18页

作者：李彬斌周清姚敏张晓玲秦晓艳陈剑暨南大学附属第一医院眼科暨南大学医学院眼科研究室广州510630

目的探讨人羊膜上皮细胞(human amniotic epithelial cell,HAEC)培养液对角膜炎症反应的抑制作用及机制。方法体外培养及鉴定HAEC和兔角膜上皮细胞,制备HAEC培养液。根据培养兔角膜上皮细胞的培养液成分不同分为无血清改良杜氏培养基(Du... 详细信息

目的探讨人羊膜上皮细胞(human amniotic epithelial cell,HAEC)培养液对角膜炎症反应的抑制作用及机制。方法体外培养及鉴定HAEC和兔角膜上皮细胞,制备HAEC培养液。根据培养兔角膜上皮细胞的培养液成分不同分为无血清改良杜氏培养基(Dulbecco's modified Eagle's medium,DMEM)组(DMEM组)、无血清DMEM与HAEC培养液1∶1混合组(混合组)、HAEC培养液组(HAEC组)。传代的角膜上皮细胞贴壁24h后,用磷酸盐缓冲液润洗后按分组更换为上述3种培养液培养48h后收集细胞。应用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测HAEC培养液中白介素-1受体拮抗剂(interleukin-1 receptor antagonist,IL-1Ra)的含量。采用实时定量聚合酶链反应(PCR)检测3组培养液中兔角膜上皮细胞中的白介素(IL)-1β信使核糖核酸(messenger RNA,mRNA)的表达,采用八肽胆囊收缩素(cholecystokinin-octapeptide,CCK-8)法检测3组细胞的增殖情况。结果 HAEC和兔角膜上皮细胞的形态学观察符合上皮细胞特征。HAEC培养液中IL-1Ra的含量为(153.56±0.36)ng/L,无血清DMEM对照中未检出IL-1Ra。3组培养液中,兔角膜上皮细胞的IL-1β mRNA表达由低至高分别为HAEC组、混合组和DMEM组,3组的IL-1β mRNA表达差异均有统计学意义(均为P<0.05)。兔角膜上皮细胞分组培养24、48、72h后,HAEC组的兔角膜上皮细胞吸光值明显高于混合组和DMEM组,DMEM组的兔角膜上皮细胞吸光值在各时间点均低于混合组(均为P<0.05)。结论 HAEC可分泌IL-1Ra抑制角膜上皮细胞IL-1β的表达,减少炎症反应及移植排斥作用,并促进角膜上皮细胞增殖。

关键词：羊膜移植羊膜上皮细胞角膜上皮细胞白介素-1 白介素-1受体拮抗剂细胞增殖炎症免疫排斥

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T细胞-急性淋巴细胞白血病分子遗传学改变和靶向治疗新进展：第54届美国血液学会年会报道

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白血病．淋巴瘤 2013年第1期22卷 1-3,7页

作者：李扬秋谭获暨南大学医学院血液病研究所暨南大学再生医学教育部重点实验室广州510632 广州医学院第一附属医院肿瘤血液中心

T细胞一急性淋巴细胞白血病（T-ALL）恶性程度高、预后差。随着对T-ALL发生发展过程中癌基因和抑癌基因等遗传学改变特点及其相关分子机制研究的不断深化，对确定该病的治疗反应和预后的生物标志物很有帮助，对临床诊治也有重要指导意... 详细信息

T细胞一急性淋巴细胞白血病（T-ALL）恶性程度高、预后差。随着对T-ALL发生发展过程中癌基因和抑癌基因等遗传学改变特点及其相关分子机制研究的不断深化，对确定该病的治疗反应和预后的生物标志物很有帮助，对临床诊治也有重要指导意义。现主要介绍2012年第54届美国血液学会（ASH）年会有关早期前T细胞一急性淋巴细胞白血病的特点、TAL1和NOTCH1相关基因的分子改变特点及其靶向抑制效应的新进展。

关键词： T细胞一急性淋巴细胞白血病基因突变缺失基因过表达靶向治疗预后美国血液学会年会

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人羊膜上皮细胞培养液抑制角膜新生血管的实验研究

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中华实验眼科杂志 2012年第5期30卷 408-413页

作者：李彬斌杨筱曦周清何艳花陈剑暨南大学附属第一医院眼科暨南大学医学院眼科研究室广州510630

背景角膜新生血管（CNV）是一种常见的眼部病变，研究其发病机制及其抑制剂是眼科研究的热点和难点。目的研究人羊膜上皮细胞（AECs）培养液对CNV的抑制作用及机制。方法消化法培养及鉴定人AECs，并收集培养液，酶联免疫吸附试验（ELIS... 详细信息

背景角膜新生血管（CNV）是一种常见的眼部病变，研究其发病机制及其抑制剂是眼科研究的热点和难点。目的研究人羊膜上皮细胞（AECs）培养液对CNV的抑制作用及机制。方法消化法培养及鉴定人AECs，并收集培养液，酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测色素上皮衍生因子（PEDF）和白细胞介素1受体拮抗剂（IL-1Ra）在培养液中的质量浓度。兔角膜上皮细胞分离后分别用无血清DMEM培养基、人AECs培养液、混合培养液（DMEM＋人AECs培养液）培养48h，采用实时定量聚合酶链反应（QRT—PCR）法检测不同培养液培养的角膜上皮细胞中血管内皮生长因子（VEGF）及碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）的表达。用含质量分数10％胎牛血清的DMEM培养基培养人脐静脉血管内皮细胞（UVECs），并分别加入无血清DMEM、混合培养液和人AECs培养液，划痕法和细胞计数试剂盒8（CCK8）法检测各组培养液对人UVECs迁移的影响。分别在上述3种培养基中加入终质量浓度为50txg／L的bFGF，CCK8法检测各培养液中人UVECs的增生情况。在原子力显微镜（AFM）下观察人AECs培养液对人UVECs超微结构的影响。结果人羊膜培养和传代细胞角蛋白免疫组织化学染色阳性证实为人AECs。与无血清DMEM组相比，人AECs培养液组的兔角膜上皮细胞VEGFmRNA（1．00＋0．22VS．2．98_＋0．46）及bFGFmRNA（1．00＋0．36VS．2．55-＋0．48）的表达均明显下降，差异均有统计学意义（p_-0．001、0．002）；培养后不同时间人AECs培养液组人UVECs的增生吸光度（A）值明显下降，差异均有统计学意义（P〈0．05），人UVECs的迁移率下降，差异有统计学意义（P〈0．05）。AFM观察见人AECs培养液组的血管内皮细胞膜粗糙、表面颗粒紊乱，细胞间连接及伪足减少。ELISA法检测人AECs培养液中PEDF的质量浓度为（70．41±0．68）Ixg／L，IL-1Ra的质量浓度为（153．56±0．36）-s／L，无血清DMEM组中未检出。结论人AECs培养液可抑制角膜上皮VEGF及bFGF的表达，抑制血管内皮细胞的增生和迁移，细胞结构和功能改变，这可能是其抑制CNV的机制之一。

关键词：人羊膜上皮细胞角膜新生血管血管内皮生长因子人脐静脉血管内皮细胞碱性成纤维细胞生长因子超微结构

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