检索结果-内蒙古大学图书馆

中华实验眼科杂志 2012年第6期30卷 490-494页

作者：杨筱曦蔡小芳陈剑李彬斌何艳花张静辉暨南大学附属第一医院眼科暨南大学医学院眼科研究室广州510630 暨南大学化学系广州510630

背景丝裂霉素C（MMC）对人翼状胬肉成纤维细胞的生长和增生有明显的抑制作用，但关于其对细胞膜影响的研究很少。目的探讨MMC对翼状胬肉成纤维细胞膜理化特性及超微结构改变的干预。方法收集翼状胬肉手术切除标本15例，用组织块培养法... 详细信息

背景丝裂霉素C（MMC）对人翼状胬肉成纤维细胞的生长和增生有明显的抑制作用，但关于其对细胞膜影响的研究很少。目的探讨MMC对翼状胬肉成纤维细胞膜理化特性及超微结构改变的干预。方法收集翼状胬肉手术切除标本15例，用组织块培养法培养人成纤维细胞，以波形蛋白免疫组织化学染色法对培养细胞进行鉴定。取传3代后对数生长期细胞以5×10^3个／孔的密度接种于96孔板，将不同质量浓度0、50、100、200、300、400mg／LMMC加入培养孔中处理翼状胬肉成纤维细胞12h，用细胞计数试剂盒8（CCK-8）法检测培养细胞的活力，应用Annexin V—FICT／碘化丙啶（PI）法检测细胞凋亡的情况；利用原子力显微镜（AFM）观察不同质量浓度MMC作用后人成纤维细胞膜超微结构的改变；检测细胞上清液中丙二醛（MDA）的浓度以评价细胞的脂质过氧化程度；检测细胞外液中漏出的乳酸脱氢酶（LDH）含量以评估细胞膜的通透性变化；用Fluo-3／AM标记和流式细胞术检测培养细胞内游离钙离子的变化。结果组织块法原代培养贴壁1～2周可见大量长梭形细胞爬出，波形蛋白检测呈阳性反应。用MMC处理培养细胞12h后，人成纤维细胞的活力减弱，MMC对细胞增生的抑制作用呈剂量依赖性。0、50、100、200、300mg／LMMC处理组细胞凋亡百分比分别为4．2％、4．2％、5．4％、19．3％和25．8％。AFM下可见不同质量浓度MMC作用后人成纤维细胞膜超微结构的异常，不同质量浓度MMC处理组细胞外液中LDH活性及细胞上清液中MDA浓度明显高于对照组，且均随着MMC质量浓度的增加，LDH活性及细胞上清液中MDA浓度逐渐增加，组间两两比较，差异均有统计学意义（P〈0．05）。Fluo-3／AM标记和流式细胞术检测表明，培养细胞内游离钙离子增多。结论MMC能引起翼状胬肉成纤维细胞膜的理化性质改变，其作用呈剂量依赖性，细胞膜是其药效和毒性的作用靶点之一。

关键词：丝裂霉素C 翼状胬肉细胞毒性超微结构

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TCRζ缺陷的急性髓细胞白血病病人T细胞中Elf-1、Zap-70和FcεR Iγ基因的表达特点

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免疫学杂志 2012年第9期28卷 825-828页

作者：史丽陈少华杨力建吴秀丽李萡卢育洪郁志沈琦闫小娟李扬秋暨南大学医学院血液病研究所广州510632 暨南大学医学院第一附属医院血液科广州510632 暨南大学医学院再生医学教育部重点实验室广州510632

目的了解TCRζ缺陷的急性髓细胞白血病(acute myeloid leukemia,AML)病人外周血T细胞中Elf-1、Zap-70和FcεR Iγ基因的表达特点。方法采用SYBR GreenⅠ荧光定量PCR和相对定量分析法检测10例TCRζ缺陷的AML病人外周血CD3+T细胞中Zap-70... 详细信息

目的了解TCRζ缺陷的急性髓细胞白血病(acute myeloid leukemia,AML)病人外周血T细胞中Elf-1、Zap-70和FcεR Iγ基因的表达特点。方法采用SYBR GreenⅠ荧光定量PCR和相对定量分析法检测10例TCRζ缺陷的AML病人外周血CD3+T细胞中Zap-70、Elf-1和FcεR Iγ基因的表达情况。以β2微球蛋白基因(β2M)作为内参,10例健康成人作为对照;采用相对定量公式:2-△Ct×100%,计算Zap-70、Elf-1和FcεR Iγ基因的表达水平。结果 TCRζ缺陷的AML病人外周血T细胞中Elf-1基因的表达水平(中位数8.526%)明显低于健康对照组(中位数33.237%)(P<0.001),而FcεR Iγ基因的表达水平(中位数2.571%)则高于健康对照组(中位数0.958%)(P=0.019),Zap-70基因在两组中的表达水平没有显著性差异,但均与TCRζ基因的表达水平呈正相关。结论 TCRζ缺陷的AML病人T细胞中Elf-1基因的低表达可能是导致AML病人TCRζ基因缺陷性表达的原因之一,而FcεR Iγ基因的高表达则可能是在一定程度上缓解了TCRζ基因缺陷性表达所带来的T细胞免疫异常。

关键词： TCRζ缺陷急性髓细胞白血病 Elf-1 Zap-70 FcεR Iγ

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小环肽C＊HSDGIC＊对中波紫外线诱导的视网膜色素人上皮细胞凋亡的影响

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中国病理生理杂志 2012年第5期28卷 914-918页

作者：丁勇程欢欢余榕捷陈建苏暨南大学附属第一医院眼科广东广州510632 暨南大学生物工程研究所广东广州510632 暨南大学医学院眼科研究室广东广州510632

目的:探讨垂体腺苷酸环化酶激活多肽(PACAP)的衍生物小环肽C*HSDGIC*(CHC)对中波紫外线(UVB)诱导的人视网膜色素上皮(RPE)细胞凋亡的影响。方法:Western blotting检测人RPE细胞PACAP 1型受体(PAC1受体)表达;RPE细胞接受0.2 J/cm2UVB照射... 详细信息

目的:探讨垂体腺苷酸环化酶激活多肽(PACAP)的衍生物小环肽C*HSDGIC*(CHC)对中波紫外线(UVB)诱导的人视网膜色素上皮(RPE)细胞凋亡的影响。方法:Western blotting检测人RPE细胞PACAP 1型受体(PAC1受体)表达;RPE细胞接受0.2 J/cm2UVB照射,随后实验组给予含不同浓度CHC的无血清培养基培养,对照组给予无血清培养基培养;CCK-8法检测CHC对RPE细胞活性的影响;流式细胞术Annexin-V/PI双染检测RPE细胞凋亡情况,JC-1染色检测线粒体膜电位。结果:Western blotting显示RPE细胞表达PAC1受体,CCK-8法显示CHC促细胞活性的最佳浓度为100μmol/L,细胞活性比对照组增加(34.23±3.39)%(P<0.05),抗凋亡最佳浓度也为100μmol/L,细胞活性比对照组增加(20.10±1.48)%(P<0.05)。流式细胞仪分析显示,100μmol/L CHC能使UVB照射后凋亡细胞比例下降(5.63±1.49)%,线粒体去极化细胞比例下降(5.2±0.5)%(P<0.05)。结论:人RPE细胞存在PAC1受体,小环肽C*HSDGIC*对人RPE细胞有促进活性和拮抗凋亡的作用。

关键词： C＊HSDGIC＊紫外线B 细胞凋亡视网膜色素上皮

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体外诱导人羊膜上皮细胞分化为角膜上皮样细胞的初步研究

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眼科新进展 2012年第9期32卷 801-805页

作者：姚敏陈剑王文娟张晓玲杨筱曦周清徐锦堂暨南大学附属第一医院眼科广东省广州市510632 暨南大学医学院眼科研究室广东省广州市510632

目的探索以人永生化角膜上皮细胞( immortalized human corneal epithelial cells,ihCEC) 培养液体外模拟角膜上皮细胞微环境,诱导人羊膜上皮细胞( human corneal epithe-lial cells,hAEC) 分化为角膜上皮样细胞的可行性。方法取( 37 &#... 详细信息

目的探索以人永生化角膜上皮细胞( immortalized human corneal epithelial cells,ihCEC) 培养液体外模拟角膜上皮细胞微环境,诱导人羊膜上皮细胞( human corneal epithe-lial cells,hAEC) 分化为角膜上皮样细胞的可行性。方法取( 37 ± 1) 周剖宫产人羊膜组织,酶消化法提取 hAEC; 流式细胞仪测 CD29、CD90、CD105、CD34、HLA-DR 的表达。复苏培养 ihCEC,以 0 mg·L- 1、10 mg·L- 1、20 mg·L- 1、30 mg·L- 1、40 mg·L- 1丝裂霉素 37℃作用 2 h,吸去丝裂霉素,继续培养 72 h 后 CCK8 测吸光度并计算增殖抑制率。10 mg·L- 1、20 mg·L- 1丝裂霉素处理细胞后 12 h、24 h 收集细胞培养液培养 hAEC,CCK8 测吸光度绘制生长曲线; 收集 ihCEC 细胞培养液,制备条件培养基( CM) 培养 hAEC 10 d,倒置显微镜观察细胞形态,免疫荧光检测 CK12 的表达。结果 hAEC 可表达 CD29、CD90、D105,不表达 CD34、HLA-DR; 各浓度丝裂霉素组增殖抑制率分别为 10 mg·L- 1( 65. 48% ±1. 03) 、20 mg · L- 1( 77. 01% ± 0. 99) 、30 mg · L- 1( 75. 25% ± 0. 71) 、40 mg · L- 1( 76. 90% ±0. 97) ;20 mg·L- 1丝裂霉素培养 12 h 收集的细胞培养液对 hAEC 具有明显促增殖作用; 诱导分化后 hAEC 可表达 CK12。结论以 ihCEC 细胞培养液模拟的角膜上皮细胞微环境可诱导 hAEC 分化为角膜上皮样细胞。

关键词：人永生化角膜上皮细胞人羊膜上皮细胞丝裂霉素微环境组织工程

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单核细胞增多动物模型的制备

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广东医学 2012年第8期33卷 1082-1083页

作者：张婷吴静何艳花侯光辉陈剑徐锦堂暨南大学附属第一医院眼科广州510630 暨南大学医学院眼科研究室广州510632 广东省珠海市人民医院眼科 519000

目的探索一种制备单核细胞百分率增多动物模型的方法。方法在新西兰兔腹部植入异物,按照自身前后对照试验设计,采用配对t检验,比较在腹部植入异物手术干预前后兔单核细胞百分比的变化情况。结果经植入异物手术干预前后的单核细胞百分比... 详细信息

目的探索一种制备单核细胞百分率增多动物模型的方法。方法在新西兰兔腹部植入异物,按照自身前后对照试验设计,采用配对t检验,比较在腹部植入异物手术干预前后兔单核细胞百分比的变化情况。结果经植入异物手术干预前后的单核细胞百分比值比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论应用腹部植入异物的方法制备单核细胞增多的动物模型,是一种安全、可靠的方法,能有效达到实验目的。

关键词：植入异物单核细胞增多动物模型兔

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持续性角膜上皮缺损对骨髓间充质干细胞增殖能力的影响

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眼科新进展 2012年第8期32卷 701-704页

作者：齐文娟吴静侯光辉王观峰陈剑徐锦堂暨南大学附属第一医院眼科广东省广州市510632 暨南大学医学院眼科研究室广东省广州市510632 珠海市人民医院眼科广东省珠海市519000

目的建立持续性角膜上皮缺损模型,观察不同时相的角膜上皮缺损对骨髓间充质干细胞增殖能力的影响。方法取健康雄性Wistar大鼠40只,随机平均分为8组,按每天处死1组大鼠的先后顺序分别命名为缺损组(A、B、C、D、E、F、G)和空白对照组。对... 详细信息

目的建立持续性角膜上皮缺损模型,观察不同时相的角膜上皮缺损对骨髓间充质干细胞增殖能力的影响。方法取健康雄性Wistar大鼠40只,随机平均分为8组,按每天处死1组大鼠的先后顺序分别命名为缺损组(A、B、C、D、E、F、G)和空白对照组。对全部缺损组大鼠建立持续性角膜上皮缺损模型,每天对缺损组大鼠左眼行角膜上皮刮除术,第1次术后1d处死缺损组A组大鼠,然后对剩余缺损组大鼠左眼行角膜上皮刮除术;第2次术后1d处死缺损组B组大鼠,然后对剩余缺损组大鼠左眼行角膜上皮刮除术,依此类推连续7d,并在无菌条件下获取各组骨髓间充质干细胞,流式细胞技术检测各组细胞周期。结果骨髓间充质干细胞细胞周期检测结果显示:B、D组S期细胞百分数分别为16.76%±4.49%、17.95%±2.77%,明显高于其他缺损组和对照组(均为P<0.05),B、D组G1期细胞百分数分别为72.26%±8.81%、71.33%±5.30%,均低于其他缺损组和对照组(均为P<0.05);但B、D组S期细胞及G1期细胞百分数差异无统计学意义(均为P>0.05),A、C、E、F、G组及对照组间的S期细胞及G1期细胞百分数差异亦无统计学意义(均为P>0.05)。结论持续性角膜上皮缺损模型,在缺损持续的第3天和第5天骨髓间充质干细胞的增殖能力明显提高。

关键词：欁骨髓间充质干细胞细胞周期角膜上皮缺损动物模型

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TCRζ缺陷的急性髓细胞白血病病人T细胞中Elf-1、Zap-70和Fcε RIγ基因的表达特点

TCRζ缺陷的急性髓细胞白血病病人T细胞中Elf-1、Zap-70和Fcε RI...

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第八届全国免疫学学术大会

作者：史丽陈少华杨力建吴秀丽李萡卢育洪郁志沈琦闫小娟李扬秋暨南大学医学院血液病研究所暨南大学第一附属医院血液科暨南大学再生医学教育部重点实验室

研究背景:白血病病人常伴有严重的T细胞免疫缺陷,我们的前期研究显示急性髓细胞白血病(AML)病人T细胞亚家族存在明显缺失,胸腺近期输出功能低下,T细胞受体(TCR)信号传导分子TCRζ等表达低下。目的:了解TCRζ缺陷的AML病人外周血T细胞中E... 详细信息

研究背景:白血病病人常伴有严重的T细胞免疫缺陷,我们的前期研究显示急性髓细胞白血病(AML)病人T细胞亚家族存在明显缺失,胸腺近期输出功能低下,T细胞受体(TCR)信号传导分子TCRζ等表达低下。目的:了解TCRζ缺陷的AML病人外周血T细胞中Elf-1、Zap-70和Fcε R Iγ基因的表达特点。方法采用SYB R GreenⅠ荧光定量PCR和相对定量分析法检测10例TCRζ缺陷的AML病人外周血CD3+T细胞中Zap-70、Elf-1和Fcε R Iγ基因的表达情况。以β2微球蛋白基因(β2M)作为内参,10例健康成人作为对照;采用相对定量公式:2-△Ct×100%,计算Zap-70、Elf-1和Fcε R Iγ基因的表达水平。结果:所有样本均表达Elf-1、Zap-70和Fcε R Iγ基因,健康成人在所有基因中的表达水平比较集中,而AML病人的样本在同一基因中的表达水平差异较大;TCRζ缺陷的AML病人外周血T细胞中Elf-1基因的表达水平(中位数8.526%)明显低于健康对照组(中位数:33.237%)(P=0.000),Fcε R Iγ基因的表达水平(中位数:2.571%)则高于健康对照组(中位数:0.958%)(P=0.019),而在健康对照组中,Fcε R Iγ基因表达水平明显低于TCRζ基因的表达水平(P=0.000)。Zap-70基因在两组中的表达水平没有显著性差异(中位数:0.479%和0.781%;P=0.247);进一步采用相关性分析显示:在健康对照组中,Elf-1基因与TCRζ基因表达水平呈正相关(rs=0.636,P=0.048),在AML病人中,Elf-1基因与相对应的TCRζ基因表达水平也呈正相关趋势,但尚未有统计学意义(rs=0.624,P=0.054),Elf-1与Fcε R Iγ、Fcε R Iγ基因与TCRζ基因的表达水平在AML和健康组的相关性未有统计学意义,而Zap-70基因与TCRζ基因的表达水平在两组中则均呈正相关(rs=0.661,P=0.038;rs=0.697,P=0.025)结论:TCRζ缺陷的AML病人T细胞中Elf-1基因的低表达可能是导致AML病人TCRζ基因缺陷性表达的原因之一,而Fcε R Iγ基因的高表达则可能是在一定程度上缓解了TCRζ基因缺陷性表达所带来的T细胞免疫异常。

关键词：急性髓细胞白血病 TCRζ Elf-1 Zap-70 FcεR Iγ 基因表达

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TCRζ缺陷的急性髓细胞白血病病人T细胞中Elf-1、Zap-70和FcεR Iγ基因的表达特点

TCRζ缺陷的急性髓细胞白血病病人T细胞中Elf-1、Zap-70和FcεR I...

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第十五届全国临床肿瘤学大会暨2012年CSCO学术年会

作者：史丽李扬秋陈少华杨力建吴秀丽李萡卢育洪郁志沈琦闫小娟 510632 暨南大学医学院血液病研究所 510632 暨南大学医学院血液病研究所 510632暨南大学再生医学教育部重点实验室 510632 暨南大学第一附属医院血液科

本文旨在了解TCRζ缺陷的急性髓细胞白血病(AML)病人外周血T细胞中Elf-1、Zap-70和FcεR Iγ基因的表达特点.采用SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR和相对定量分析法检测10例TCRζ缺陷的AML病人外周血CD3+T细胞中Zap-70、Elf-1和FcεR Iγ基因... 详细信息

本文旨在了解TCRζ缺陷的急性髓细胞白血病(AML)病人外周血T细胞中Elf-1、Zap-70和FcεR Iγ基因的表达特点.采用SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR和相对定量分析法检测10例TCRζ缺陷的AML病人外周血CD3+T细胞中Zap-70、Elf-1和FcεR Iγ基因的表达情况.以β2微球蛋白基因(β2M)作为内参,10例健康成人作为对照;采用相对定量公式:2-△ctx 100％,计算Zap-70、Elf-1和FcεR Iγ基因的表达水平.试验表明TCRζ缺陷的AML病人T细胞中Elf-1基因的低表达可能是导致AML病人TCRζ基因缺陷性表达的原因之一，而FcεR Iγ基因的高表达则可能是在一定程度上缓解了TCRζ基因缺陷性表达所带来的T细胞免疫异常。

关键词：急性髓细胞白血病病理机制基因表达临床试验

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高浓度葡萄糖对培养兔角膜上皮细胞增殖活性的影响

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广东医学 2011年第10期32卷 1224-1226页

作者：宋子宣陈剑王彦平阮余霞陈建苏吴静唐光霞高松哲暨南大学附属第一医院眼科暨南大学医学院病理生理学教研室广州510630 暨南大学医学院眼科研究室广州510632

目的研究高浓度葡萄糖对体外培养兔角膜上皮细胞增殖活性的影响,建立糖尿病性兔角膜上皮细胞培养模型。方法按照析因设计方法将葡萄糖浓度(25、40、60 mmol/L)和培养时间(24、48、72 h)进行全面组合,应用SunBioTM Am-Blue细胞增殖与活... 详细信息

目的研究高浓度葡萄糖对体外培养兔角膜上皮细胞增殖活性的影响,建立糖尿病性兔角膜上皮细胞培养模型。方法按照析因设计方法将葡萄糖浓度(25、40、60 mmol/L)和培养时间(24、48、72 h)进行全面组合,应用SunBioTM Am-Blue细胞增殖与活性检测试剂检测兔角膜上皮细胞增殖活性,倒置显微镜观察细胞形态。结果高浓度葡萄糖对兔角膜上皮细胞增殖活性的影响有统计学意义(F=276.318,P<0.01),作用时间对细胞增殖活性的影响有统计学意义(F=38.727,P<0.01),葡萄糖浓度和作用时间之间有交互作用(F=2.687,P<0.05)。结论高浓度葡萄糖对体外培养兔角膜上皮细胞增殖活性有抑制作用,随时间的延长抑制作用加强。

关键词：高浓度葡萄糖角膜上皮细胞增殖活性兔

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人羊膜上皮细胞的体外培养及标记

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广东医学 2011年第5期32卷 555-558页

作者：阮余霞周清陈剑王彦平杨筱曦李红唐光霞吴静暨南大学附属第一医院眼科广州510630 暨南大学医学院病理生理学教研室广州510632 暨南大学附属第一医院病理科广州510630 暨南大学医学院眼科研究室广州510632

目的改良人羊膜上皮细胞的培养方法,检测生长特性,观察荧光染料4,-6-联脒-2-苯基吲哚(DAPI)标记人羊膜上皮细胞(HAECs)的效率。方法取足月剖宫产术后羊膜经胶原酶和胰蛋白酶消化获得上皮细胞。MTT法绘制细胞生长曲线、流式细胞仪检测细... 详细信息

目的改良人羊膜上皮细胞的培养方法,检测生长特性,观察荧光染料4,-6-联脒-2-苯基吲哚(DAPI)标记人羊膜上皮细胞(HAECs)的效率。方法取足月剖宫产术后羊膜经胶原酶和胰蛋白酶消化获得上皮细胞。MTT法绘制细胞生长曲线、流式细胞仪检测细胞的生长周期,免疫组化对细胞角蛋白进行鉴定。并用DAPI标记,测1、2周荧光阳性率。结果培养的HAECs多角形,生长分为缓滞期、对数增长期和平台期,近80%处于细胞周期的静止期G0。细胞角蛋白keratin阳性表达。DAPI标记1周标记率为100%;2周细胞形态好,标记率不变,荧光强度减弱。结论该实验方法成功培养人羊膜上皮细胞。DAPI短期标记效果理想。

关键词：人羊膜上皮细胞 4,6-联脒-2-苯基吲哚细胞培养

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