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解剖学报 2012年第3期43卷 312-316页

作者：张笑坛夏潮涌李艳王广王晓钰张兆龙文皓旻杨雪松暨南大学医学院组织学与胚胎学系再生医学教育部重点实验室广州510632

目的利用Sprouty2基因阻断成纤维细胞生长因子(FGF)信号,探讨FGF在早期鸡胚胎发育过程中对神经嵴细胞迁移的影响及其机制。方法通过体内培养的方法孵育鸡胚至HH9期,通过显微注射的方法将Sprouty2-绿色荧光蛋白(GFP)质粒注射入神经管腔... 详细信息

目的利用Sprouty2基因阻断成纤维细胞生长因子(FGF)信号,探讨FGF在早期鸡胚胎发育过程中对神经嵴细胞迁移的影响及其机制。方法通过体内培养的方法孵育鸡胚至HH9期,通过显微注射的方法将Sprouty2-绿色荧光蛋白(GFP)质粒注射入神经管腔内。实验侧使用电穿孔转染的方法转染胚胎半侧神经管,另一侧正常神经管设为对照侧。采用神经嵴细胞特异标记物HNK1免疫荧光的方法检测Sprouty2基因阻断FGF信号后是否影响胚胎头部和躯干部神经嵴细胞的迁移过程。随后,进一步通过检测神经细胞钙黏分子N-Cadherin的表达来观察细胞之间黏附作用的改变。结果 HNK1免疫荧光检测结果显示,Sprouty2转染侧即阻断FGF信号通路后,HNK1在早期鸡胚胎的头部和躯干部的表达量均比对照侧的表达量增多;而神经细胞钙黏分子N-Cadherin检测结果表明,Sprouty2转染侧和正常对照侧N-Cadherin在头部和躯干部神经管上表达量的差异均无显著性。结论 Sprouty2基因阻断FGF信号后,促进了早期鸡胚胎神经嵴细胞的迁移,但是FGF信号对此过程的影响可能不是由神经钙黏分子N-Cadherin介导的。

关键词： Sprouty2 成纤维细胞生长因子神经嵴细胞迁移电穿孔转染免疫荧光鸡胚

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PTEN抑制胚胎原肠胚形成期EMT的过程

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遗传 2011年第6期33卷 613-619页

作者：李艳王晓钰王丽京徐涛卢晓晔蔡冬青耿建国杨雪松暨南大学再生医学教育部重点实验室医学院组织与胚胎学系广州510632 广东药学院血管生物学实验室广州510224

PTEN(Phosphatase and tensin homolog)是一种重要的抑癌基因,具有非常广泛的生物学活性,例如在细胞的生长发育、迁移、凋亡和信号传导等均发挥重要作用。PTEN基因表达始于在胚胎早期的上胚层,而后主要出现在神经外胚层和胚胎中胚层结构... 详细信息

PTEN(Phosphatase and tensin homolog)是一种重要的抑癌基因,具有非常广泛的生物学活性,例如在细胞的生长发育、迁移、凋亡和信号传导等均发挥重要作用。PTEN基因表达始于在胚胎早期的上胚层,而后主要出现在神经外胚层和胚胎中胚层结构,表明PTEN可能参与胚胎早期发育过程的细胞迁移、增殖和分化。文章主要应用在体改变早期胚胎PTEN的表达水平来观察其对上胚层至中胚层细胞转换—EMT(Epithe-lial-mesenchymal transition)的作用。首先,原位杂交结果提示,内源性PTEN表达在原条以及之后的中胚层细胞结构如体节等。在体PTEN转染实验,体外培养至HH3期的鸡胚胎,转染Wt PTEN-GFP或移植Wt PTEN-GFP原条组织至未转染的同时期的宿主胚胎相同部位后,观察到PTEN转染细胞大都由上胚层迁移至原条并滞留于原条,不再参与中胚层细胞形成。移植实验也得到相似结果,发现在Wt PTEN-GFP阳性原条组织移植后很少细胞迁移出原条。另外在原肠胚期PTEN siRNA降调胚胎一侧PTEN基因后,降调侧中胚层细胞数明显少于正常侧。上述研究结果均提示PTEN基因在胚胎原肠胚期三胚层形成过程中可能具有抑制EMT的作用。

关键词： EMT PTEN 基因表达细胞迁移原肠胚形成

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小鼠睁眼前后角膜神经纤维长度与密度的变化及其意义

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中华实验眼科杂志 2012年第7期30卷 581-585页

作者：王存傅婷李志杰夏潮涌暨南大学一香港中文大学再生医学教育部重点实验室广州510600 暨南大学医学院组织学与胚胎学教研室广州510632

背景目前已有许多关于哺乳动物发育阶段角膜神经分布的研究，但是尚无对睁眼前后这几个时间段角膜神经分布的研究。目的了解小鼠睁眼前后角膜神经纤维长度与密度随着年龄增长的变化规律，为进一步的实验和临床研究提供依据。方法SPF级C5... 详细信息

背景目前已有许多关于哺乳动物发育阶段角膜神经分布的研究，但是尚无对睁眼前后这几个时间段角膜神经分布的研究。目的了解小鼠睁眼前后角膜神经纤维长度与密度随着年龄增长的变化规律，为进一步的实验和临床研究提供依据。方法SPF级C57BL／6小鼠分为出生后1d（P1d）、P7d、P13d（睁眼前1d）、P14d（半睁眼）、P17d（完全睁眼后1d）和P23d（完全睁眼后7d），各组均5只鼠10只眼。采用β-微管蛋白Ⅲ抗体进行整张角膜铺片免疫荧光染色，使用Delta Vision Core拍摄角膜背鼻侧、背颞侧、腹鼻侧和腹颞侧的神经纤维图像，根据体视学测量线性结构的原理，运用Image—Pro Plus5．1软件中的“手动测量-建立多边形特征”计算角膜面积，并且使用***曲线（间距为53μm）分别计算各组小鼠的角膜面积、神经纤维总长度以及各分区的神经纤维密度。结果C57／BL6小鼠P1、P7、P13、P14、P17、P23d的角膜面积分别为（0．404±O．007）、（1．362±0．154）、（1．573±O．080）、（1．603±0．046）、（1．8474±0．052）、（2．445±O．798）mm^2，神经纤维总长度值分别为（3．718±1．044）、（19．065±3．350）、（23．687±0．907）、（27．309±2．477）、（31．989±3．976）、（41．214±1．573）mm，神经纤维密度分别为（9．592±1．138）、（14．506±1．908）、（15．088±1．241）、（16．772±1．897）、（16．8214±2．102）、（17．660±1．216）mm／mm^2，均随鼠龄的增长而增加，差异均有统计学意义（F=22．906、0．424、2．375，P=0．000），角膜面积和神经纤维长度之间呈正相关（r=0．983，P〈0．01）。角膜4个分区的神经纤维密度随年龄的增长而增加（背鼻侧区：F=0．159，P=0．000；背颞侧区：F=2．172，P=0．001；腹鼻侧区：F=1．998，P=0．000；腹颞侧区：F=2．352，P=0．000）。其中从P13d到P14d，背鼻侧区的神经纤维密度减少了6．O％，差异无统计学意义（t=0．589，P=0．572）；而且从P14d到P17d，背颞侧区、腹鼻侧区和腹颞侧区的神经纤维密度分别减少了4．6％、5．5％和0．1％，差异均无统计学意义（t=0．549，P=0．596；t=0．701，P=0．501；t=-0．100，P=0．919）。结论小鼠睁眼过程对整个角膜或角膜各分区神经纤维的发育都有不同程度的影响。从P17d开始，小鼠角膜神经纤维呈追赶性增长，恢复增长趋势。

关键词：角膜神经纤维长度神经纤维密度 C57/BL6小鼠

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鸡胚早期发育过程中细胞迁移的基因调控

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中国细胞生物学学报 2011年第10期33卷 1069-1077页

作者：王广李艳杨雪松暨南大学医学院组织与胚胎教研室再生医学教育部重点实验室广州510632

鸡胚是发育生物学研究的经典动物模型,通过基因导入技术调节胚胎发育的基因功能,研究鸡胚早期发育过程中的细胞迁移,有助于更好地诠释相关先天性疾病的发生发展过程。在早期胚胎发育的过程中,原肠胚期三胚层的形成、心管的发生及神经嵴... 详细信息

鸡胚是发育生物学研究的经典动物模型,通过基因导入技术调节胚胎发育的基因功能,研究鸡胚早期发育过程中的细胞迁移,有助于更好地诠释相关先天性疾病的发生发展过程。在早期胚胎发育的过程中,原肠胚期三胚层的形成、心管的发生及神经嵴的发育都伴随着显著的细胞迁移过程。该文将结合近年来国内外对该过程的研究进展,介绍这三个不同时期细胞的迁移及相关基因调控。

关键词：细胞迁移基因调控原条心管神经嵴

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神经管过表达BRE基因促进体节形成和分化

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基础医学与临床 2011年第12期31卷 1309-1313页

作者：雷健王广李艳常青 Kenneth KH Lee John YH Chan 杨雪松暨南大学医学院组织与胚胎学教研室再生医学教育部重点实验室广东广州510632 香港中文大学解剖系

目的探讨BRE基因对鸡胚胎早期体节发育的作用。方法显微注射法将含有BRE基因的质粒注射入HH10期鸡胚神经管,活体胚胎细胞电穿孔方法转染半侧神经管,以另一侧为正常对照侧,原位杂交及免疫荧光法观察过表达BRE基因后体节的发育。结果 BRE... 详细信息

目的探讨BRE基因对鸡胚胎早期体节发育的作用。方法显微注射法将含有BRE基因的质粒注射入HH10期鸡胚神经管,活体胚胎细胞电穿孔方法转染半侧神经管,以另一侧为正常对照侧,原位杂交及免疫荧光法观察过表达BRE基因后体节的发育。结果 BRE基因在鸡胚表达始于神经板,而后高表达在脑泡、神经管及体节。过表达BRE基因后,神经管形态及PAX7和FGF8表达与对照侧相比无明显异常,而实验侧体节PAX7标记发现生皮肌节较大,FGF8表达与对照侧相比无明显异常。结论过表达BRE基因对体节的形成和分化有促进作用,其机制可能与PAX7相关。

关键词：神经管体节 BRE PAX7 FGF8

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扰乱昼夜节律对小鼠角膜创伤修复的影响

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中国病理生理杂志 2015年第3期31卷 499-504页

作者：刘鹏刘俊薛芸霞宋方王寒晴傅婷夏潮涌李志杰暨南大学再生医学教育部重点实验室广东广州510632 暨南大学医学院眼科研究所广东广州510632 暨南大学医学院组织学与胚胎学教研室广东广州510632

目的:本研究旨在观察昼夜节律对角膜创伤修复的影响。方法:选用C57BL/6雄性小鼠,在小鼠角膜中央直径为2 mm的圆形区域,用高尔夫样刀机械性去除其上皮层,使用荧光素钠显色创伤面积,动态观察上皮层修复的动力学,并观察白细胞、血小板和分... 详细信息

目的:本研究旨在观察昼夜节律对角膜创伤修复的影响。方法:选用C57BL/6雄性小鼠,在小鼠角膜中央直径为2 mm的圆形区域,用高尔夫样刀机械性去除其上皮层,使用荧光素钠显色创伤面积,动态观察上皮层修复的动力学,并观察白细胞、血小板和分裂细胞的动态变化。结果:全昼(12 h light/12 h light,LL)和全夜(12 h dark/12 h dark,DD)组角膜创伤修复速率小于对照组(12 h light/12 h dark,LD),表现为再上皮化延迟、上皮细胞数量降低、血管扩张直径增大、白细胞和血小板募集的发生延迟,但白细胞和血小板数目显著增多。结论:扰乱昼夜节律延迟炎症反应的发生,但加剧炎症反应;延迟再上皮化过程,最终显著抑制角膜创伤修复过程。

关键词：角膜昼夜节律创伤修复炎症反应

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PTEN基因对早期胚胎神经嵴细胞迁移的作用研究

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中国组织化学与细胞化学杂志 2012年第3期21卷 269-273页

作者：张兆龙李艳王广王晓钰张笑坛文皓旻马征来杨雪松暨南大学医学院组织胚胎教研室暨南大学再生医学教育部重点实验室广州510632

目的初步探讨PTEN基因在早期神经嵴细胞迁移中的作用。方法首先胚胎整体的原位杂交和免疫荧光方法检测鸡胚胎内源性的PTEN基因及蛋白水平的表达情况;其次,利用鸡胚胎体内半侧神经管转染的方法,使神经管一侧PTEN基因过表达,对侧神经管为... 详细信息

目的初步探讨PTEN基因在早期神经嵴细胞迁移中的作用。方法首先胚胎整体的原位杂交和免疫荧光方法检测鸡胚胎内源性的PTEN基因及蛋白水平的表达情况;其次,利用鸡胚胎体内半侧神经管转染的方法,使神经管一侧PTEN基因过表达,对侧神经管为正常对照侧;最后,通过Pax7的整体胚胎免疫荧光表达观察PTEN基因对其标记的部分神经嵴细胞迁移的影响。结果内源性PTEN基因在mRNA和蛋白水平表达显示,其在早期胚胎HH4期的神经板即开始明显的表达;通过半侧过表达PTEN基因后观察到过表达PTEN基因侧的头部神经嵴细胞迁移与对照侧相比明显受到抑制,但对躯干部的影响并不明显。结论 PTEN基因可能抑制早期胚胎头部神经嵴细胞的迁移。

关键词： PTEN Pax7 神经嵴细胞细胞迁移

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肾纤维囊作为载体培养角膜基质细胞的研究

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广东医学 2009年第1期30卷 23-25页

作者：唐光霞陈建苏徐锦堂夏潮涌丁勇暨南大学附属第一医院眼科广州510630 暨南大学医学院眼科研究室再生医学教育部重点实验室广州510632 暨南大学医学院组织学与胚胎学教研室广州510632

目的探索以脱细胞的肾纤维囊作为载体培养角膜基质细胞并研究培养角膜基质细胞特性。方法将培养扩增的兔角膜基质细胞分别接种到培养板和肾纤维囊上进行体外培养,采用倒置显微镜、免疫组化(波形蛋白)和免疫荧光(AO、PI和Hoechst)的方法... 详细信息

目的探索以脱细胞的肾纤维囊作为载体培养角膜基质细胞并研究培养角膜基质细胞特性。方法将培养扩增的兔角膜基质细胞分别接种到培养板和肾纤维囊上进行体外培养,采用倒置显微镜、免疫组化(波形蛋白)和免疫荧光(AO、PI和Hoechst)的方法进行检测,观察兔角膜基质细胞在培养板和肾纤维囊上的生长情况。结果倒置显微镜和免疫荧光显微镜观察结果显示角膜基质细胞在肾纤维囊上快速贴壁生长并增殖,细胞形态呈多角形树枝状,多次传代后细胞仍维持原有的形态和功能,细胞能长期培养。在培养板上培养的细胞呈长梭形,细胞贴壁生长和增殖情况稍差。在肾纤维囊上的活细胞较在培养板上培养的细胞多。结论角膜基质细胞在脱细胞的肾纤维囊载体上生长良好,细胞形态结构明显。本研究为角膜基质细胞的体外培养,提供了简单和高效的方法。

关键词：肾纤维囊角膜基质细胞细胞培养

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PTEN在胚胎早期心脏发育过程中的作用

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广东医学 2011年第2期32卷 137-140页

作者：马征来常青夏潮勇王丽京吴婷李艳杨雪松暨南大学医学院组织学与胚胎学教研室再生医学教育部重点实验室广州510632 广东药学院血管生物学实验室广州510224

目的通过过表达PTEN,探讨胚胎早期原肠胚形成期PTEN表达及在早期心脏发生发育过程的作用和意义。方法用改良滤纸鸡胚胎整体培养法取胚,37℃孵箱孵育待其发育到HH4期,对鸡胚心肌干细胞(Cardiac Stem Cell)进行PTEN电转染,转染成功后一部... 详细信息

目的通过过表达PTEN,探讨胚胎早期原肠胚形成期PTEN表达及在早期心脏发生发育过程的作用和意义。方法用改良滤纸鸡胚胎整体培养法取胚,37℃孵箱孵育待其发育到HH4期,对鸡胚心肌干细胞(Cardiac Stem Cell)进行PTEN电转染,转染成功后一部分鸡胚37℃孵箱继续培养30 h,待其发育形成心管,观察过表达PTEN对心管发生的影响;另一部分鸡胚在超净台内完成心肌干细胞的离体,体外培养使其分化发育成心肌组织,主要研究PTEN在细胞增殖、分化和凋亡过程中的作用。结果 30 h后鸡胚整体的免疫组织化学(N-cadherin)结果显示,PTEN-WT组和PTEN-G129E组鸡胚心管出现了反向环化、多囊化等畸形,GFP组和PTEN-C124S组心管发育受到的影响较小;转染后离体培养得到的心肌组织的跳动频率与GFP组下降的速度加快,且维持时间缩短,GFP组与PTEN-WT组差异有显著性(P<0.05),PTEN-WT组与PTEN-C124S组、PTEN-G129E组差异无显著性(P>0.05)。结论 PTEN蛋白酯酶可能参与早期胚胎心肌干细胞之间黏附分子的表达从而调节细胞迁移、分化发育,并加速了心肌组织的衰老。

关键词： PTEN 原肠胚心肌干细胞 N-cadherin 心肌分化

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小鼠出生前后角膜神经分布的变化

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眼科新进展 2012年第6期32卷 505-508页

作者：王存薛芸霞杨亚兵傅婷李志杰夏潮涌暨南大学-香港中文大学再生医学教育部重点实验室广东省广州市510632 暨南大学医学院组织学与胚胎学教研室广东省广州市510632

目的了解小鼠出生前后角膜神经纤维密度与总长度的变化。方法 20只C57/BL6小鼠根据出生前后不同时期分为4组,分别为胚胎期17d(E17d)组、胚胎期20d(E20d)组、出生当天(P0d)组、出生后3d(P3d)组,每组5只鼠10只角膜。采用β-微管蛋白Ⅲ抗... 详细信息

目的了解小鼠出生前后角膜神经纤维密度与总长度的变化。方法 20只C57/BL6小鼠根据出生前后不同时期分为4组,分别为胚胎期17d(E17d)组、胚胎期20d(E20d)组、出生当天(P0d)组、出生后3d(P3d)组,每组5只鼠10只角膜。采用β-微管蛋白Ⅲ抗体对不同组别的小鼠角膜进行整铺片免疫荧光染色。使用荧光显微镜显示各年龄组的角膜神经分布;使用DeltaVisionCore拍摄角膜背鼻侧、背颞侧、腹鼻侧和腹颞侧的神经纤维图像,分别计算并比较不同组别小鼠的角膜表面积、角膜神经纤维密度与总长度以及角膜各分区的神经纤维密度。结果 E17d组、E20d组、P0d组和P3d组小鼠的角膜表面积分别为(0.34±0.03)mm2、(0.39±0.03)mm2、(0.46±0.06)mm2和(0.51±0.01)mm2,角膜表面积随年龄的增长而逐渐增大,但是相邻年龄组间差异均无统计学意义(均为P>0.05)。E17d组、E20d组、P0d组和P3d组的角膜神经纤维密度分别为(9.11±0.65)mm·mm-2、(13.04±1.83)mm·mm-2、(9.02±0.45)mm·mm-2和(12.87±1.04)mm·mm-2;E17d组、E20d组、P0d组和P3d组的角膜神经纤维总长度分别为(3.10±0.59)mm、(5.09±1.03)mm、(4.15±0.46)mm和(6.56±1.11)mm。除了E20d组到P0d组,其余相邻年龄组间的角膜神经纤维密度和总长度都随年龄的增长而增加(P<0.05)。角膜4个分区的神经纤维密度变化趋势与整个角膜的神经纤维密度变化趋势一致。结论小鼠出生前后角膜神经纤维有变化,出生当天小鼠的角膜神经纤维密度与总长度低于出生前,随后出现追赶性增长。

关键词： C57/BL6小鼠角膜神经纤维长度神经纤维密度

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