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去乙酰化酶抑制剂TSA对间充质干细胞C3H10T1/2增殖和成脂分化的影响

暨南大学学报（自然科学与医学版） 2011年第3期32卷 328-333页

作者：吴伟季菊玲王奎栋李智耀龚雨琴季煜华暨南大学生命科学技术学院组织移植与免疫实验中心广东广州510632 南通大学医学院病理教研室江苏南通226001

采用MTT和流式细胞术分别检测不同浓度的TSA对C3H10T1/2细胞活性和细胞周期分布的影响;油红O染色检测TSA对其成脂分化的影响,实时定量PCR检测TSA对成脂分化的关键转录因子PPAR-γ,以及成脂分化标志物Fabp4和Adipoq mRNA转录的影响.研究... 详细信息

采用MTT和流式细胞术分别检测不同浓度的TSA对C3H10T1/2细胞活性和细胞周期分布的影响;油红O染色检测TSA对其成脂分化的影响,实时定量PCR检测TSA对成脂分化的关键转录因子PPAR-γ,以及成脂分化标志物Fabp4和Adipoq mRNA转录的影响.研究去乙酰化酶抑制剂TSA对间充质干细胞C3H10T1/2增殖和成脂分化的影响及其可能的作用机制.结果显示TSA浓度为1、10和30 nmol/L呈浓度依赖性地抑制C3H10T1/2细胞活性,改变细胞形态,并将其细胞周期抑制在G0/G1期;TSA浓度为10nmol/L明显抑制C3H10T1/2细胞的成脂分化作用,并呈浓度依赖性地抑制PPAR-γ、Fabp4和Adipoq mRNA的转录.表明TSA呈剂量依赖性地抑制间充质干细胞C3H10T1/2的增殖和成脂分化,除转录水平调控外,非组蛋白如细胞骨架相关蛋白可能也参与TSA的抑制作用.

关键词：曲古抑菌素A 间充质干细胞成脂分化增殖

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丙戊酸钠对人外周血T淋巴细胞细胞因子表达的影响(英文)

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中国病理生理杂志 2011年第6期27卷 1199-1205页

作者：耿梅王飞鹏欧阳东云徐丽慧陈清张延亭何贤辉暨南大学生命科学技术学院组织移植与免疫实验中心广东广州510632 暨南大学生命科学技术学院再生医学教育部重点实验室广东广州510632

目的:研究丙戊酸钠(VPA)对人外周血T淋巴细胞的活化、凋亡及细胞因子表达的影响。方法:双色荧光抗体染色结合流式细胞术分析VPA对多克隆刺激剂二丁酸佛波酯(PDB)和离子霉素(Ion)刺激下的人外周血T细胞CD69表达的影响,DiOC6(3)染色检测VP... 详细信息

目的:研究丙戊酸钠(VPA)对人外周血T淋巴细胞的活化、凋亡及细胞因子表达的影响。方法:双色荧光抗体染色结合流式细胞术分析VPA对多克隆刺激剂二丁酸佛波酯(PDB)和离子霉素(Ion)刺激下的人外周血T细胞CD69表达的影响,DiOC6(3)染色检测VPA对T细胞凋亡的影响。利用胞内细胞因子染色检测T细胞IL-2、IL-4、IFN-γ和TNF-α的表达,以探讨VPA的保护机制。结果:VPA(1和5 mmol/L)对PDB和Ion诱导的人外周血T细胞CD69的表达具有明显的促进作用(P<0.01)。DiOC6(3)染色结果表明VPA(1和5 mmol/L)可以增强线粒体膜电势,抑制T细胞活化诱导的凋亡,高浓度则作用相反。胞内细胞因子染色分析显示,VPA在低浓度时能明显促进IL-2表达而高浓度时则抑制。同时,VPA能显著促进IFN-γ和TNF-α的表达(P<0.05),并呈剂量依赖性,而对IL-4表达的影响较小。结论:VPA对多克隆刺激剂诱导的人外周血T细胞的活化和凋亡具有双向调节作用,诱导IL-2、IFN-γ和TNF-α的表达。

关键词：丙戊酸 CD69 细胞凋亡细胞因子类淋巴细胞

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脂多糖对蜕膜NK细胞表达NKG2D水平的促进作用

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现代免疫学 2011年第6期31卷 482-485页

作者：余琴梅林羿狄静芳秦晓黎赵晓明上海交通大学医学院附属仁济医院生殖医学科上海200001 上海交通大学医学院附属仁济医院妇产科学研究所上海200001 暨南大学组织移植与免疫研究中心广州510632

为探讨脂多糖(LPS)及其受体TLR4相互作用并影响蜕膜NK细胞的可能机制,在孕E6.5给BALB/c×C57BL/6孕鼠腹腔注射LPS,而E10.5采用流式细胞术检测小鼠蜕膜NKG2D+TGF-β-NK细胞构成比,计算小鼠胚胎吸收率。此外,采用磁珠亲和细胞分选术纯... 详细信息

为探讨脂多糖(LPS)及其受体TLR4相互作用并影响蜕膜NK细胞的可能机制,在孕E6.5给BALB/c×C57BL/6孕鼠腹腔注射LPS,而E10.5采用流式细胞术检测小鼠蜕膜NKG2D+TGF-β-NK细胞构成比,计算小鼠胚胎吸收率。此外,采用磁珠亲和细胞分选术纯化E10.5小鼠蜕膜NK细胞并培养,用LPS刺激所培养的细胞,并观察刺激后NK细胞表达NKG2D水平的变化。研究发现,在体内和体外实验中LPS刺激均可显著增高BALB/c×C57BL/6孕鼠蜕膜NK细胞NKG2D的表达水平,其中腹腔注射可显著增高胚胎吸收率。在体外细胞培养实验中,预先在培养基中加入抗TLR4抗体,则LPS刺激后细胞NKG2D表达水平无显著升高。这些结果提示,LPS与TLR4相互作用可增强小鼠蜕膜NK细胞NKG2D的表达,而NKG2D的过高表达不利于同种异基因妊娠成功。

关键词：动物模型细胞信息转导免疫调节妊娠耐受

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白介素10可保持蜕膜NKG2D^+TGF-β^-NK细胞低水平并有利于妊娠成功

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现代免疫学 2011年第2期31卷 139-142页

作者：余琴梅陈琳琳王文静赵晓明林羿上海交通大学医学院附属仁济医院生殖医学科上海200001 暨南大学组织移植与免疫研究中心广州512000 上海交通大学医学院附属仁济医院妇产科学研究所上海200001

为探讨白介素10(IL-10)及其受体IL-10R相互作用并调节妊娠耐受的可能机制,在孕E4.5、E6.5和E8.5给BALB/c×C57BL/6孕鼠腹腔注射抗IL-10R抗体,而给NOD×C57BL/6孕鼠腹腔注射重组小鼠IL-10。在E10.5检测小鼠蜕膜NKG2D+TGF-β-NK... 详细信息

为探讨白介素10(IL-10)及其受体IL-10R相互作用并调节妊娠耐受的可能机制,在孕E4.5、E6.5和E8.5给BALB/c×C57BL/6孕鼠腹腔注射抗IL-10R抗体,而给NOD×C57BL/6孕鼠腹腔注射重组小鼠IL-10。在E10.5检测小鼠蜕膜NKG2D+TGF-β-NK细胞构成比和胚胎吸收率。研究发现,注射抗小鼠IL-10R抗体可显著增高BALB/c×C57BL/6孕鼠蜕膜NKG2D+TGF-β-NK细胞构成比,并相应地显著增高胚胎吸收率。相反,注射外源性IL-10可显著降低NOD×C57BL/6孕鼠蜕膜NKG2D+TGF-β-NK细胞百分率,达到接近于BALB/c×C57BL/6孕鼠生理状态下同源细胞的水平,并可显著降低NOD×C57BL/6小鼠胚胎吸收率。这些结果提示,IL-10和IL-10R相互作用可调节小鼠蜕膜NKG2D+TGF-β-NK细胞百分率,并使其保持在较低水平,而这种状态有利于同种异基因妊娠成功。

关键词：动物模型免疫调节免疫缺陷妊娠耐受

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H2O2促进子痫前期外周免疫细胞活化

H2O2促进子痫前期外周免疫细胞活化

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2011中国妇产科学术会议暨浙江省计划生育与生殖医学学术年会暨生殖健康讲习班

作者：钱中清曾耀英王才智汪洪涛姚春艳蚌埠医学院免疫学教研室安徽省感染免疫重点实验室暨南大学组织移植与免疫实验中心蚌埠医学院第一附属医院产科

目的探讨子痫前期患者血清中HO与中性粒细胞及T淋巴细胞活化的关系。方法①荧光标记抗体全血染色后,流式细胞仪分别检测正常非孕妇组,正常孕妇组及子痫前期患者组外周血CD3/HLA-D,CD3/CD62L细胞百分率,及粒细胞区CD62L细胞百分率;②40μ... 详细信息

目的探讨子痫前期患者血清中HO与中性粒细胞及T淋巴细胞活化的关系。方法①荧光标记抗体全血染色后,流式细胞仪分别检测正常非孕妇组,正常孕妇组及子痫前期患者组外周血CD3/HLA-D,CD3/CD62L细胞百分率,及粒细胞区CD62L细胞百分率;②40μmol/L HO体外刺激正常孕妇PBMCs 24h,流式细胞仪检测CD3/HLA-DR,CD3/CD62L细胞百分率;③40μmol/L HO体外刺激正常孕妇外周血来源中性粒细胞6h,HDCFDA荧光探针染色,流式细胞仪检测平均荧光强度水平;④贴壁分离法去除贴壁细胞的正常孕妇外周血来源PBMCs,与经40μmol/L HO体外刺激6h的中性粒细胞继续共培养24h,流式细胞仪检测CD3/HLA-DR细胞百分率。结果①子痫前期患者组外周血CD3/HLA-DR细胞百分率（61.64±10.48,n=16）,与正常非孕妇组（10.37±6.01,n=12）及正常孕妇组（25.26±11.72,n=19）比较均显著升高,具有统计学意义（P<0.01）;子痫前期患者组CD3/CD62细胞百分率（63.04±14.34,n=16）与正常非孕妇组（48.46±13.03,n=12）或正常孕妇组（80.58±17.89,n=19）比较均显著降低,具有统计学意义（P<0.01）;②与正常非孕妇外周血粒细胞区高表达CD62L细胞区的平均荧光强度值（213.46±10.24,n=19）比较,正常孕妇（363.86±11.31,n=12）及子痫前期患者（288.51±8.76,n=16）均显著升高,具有统计学意义（P<0.01）;③40μmol/L HO体外刺激正常孕妇PBMCs 24h后,CD3/CD62L细胞百分率分别为（16.57±2.11）和（69.11±6.72）,分别与空白对照组（17.19±1.93）及（73.19±5.77）比较,均无统计学意义（P>0.05,n=12）。④40μmol/L HO体外刺激正常孕妇中性粒细胞6h后,其胞内ROS探针平均荧光强度为（86.42±5.13）,与对照组（54.23±3.57）比较有统计学意义（P<0.01,n=12）;⑤正常孕妇PBMCs与经40μmol/L HO预处理的正常孕妇中性粒细胞共培养24h后,CD3/HLA-DR细胞百分率明显升高（P<0.01,n=12）,去除贴壁细胞可显著降低这一效应（P<0.01,n=12）。结论子痫前期患者血清高水平HO可通过活化中性粒细胞促进外周T淋巴细胞的活化,并需贴壁细胞的参与。

关键词：子痫前期过氧化氢中性粒细胞 T淋巴细胞

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P7抑制bFGF诱导的3T3细胞增殖的作用机制

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药学学报 2010年第3期45卷 314-317页

作者：王聪林绍强李校堃吴晓萍暨南大学组织移植与免疫实验中心广东广州510632 暨南大学医学院广东广州510632 温州医学院药学院浙江温州325035

研究从噬菌体随机七肽库中筛选得到的新型bFGF拮抗肽(P7)抑制bFGF诱导的Balb/c3T3细胞增殖的作用机制。采用倒置显微镜观察不同浓度P7对细胞形态的影响;流式细胞术分析P7对细胞周期的影响;Western blotting检测P7对bFGF刺激的Balb/c3T3... 详细信息

研究从噬菌体随机七肽库中筛选得到的新型bFGF拮抗肽(P7)抑制bFGF诱导的Balb/c3T3细胞增殖的作用机制。采用倒置显微镜观察不同浓度P7对细胞形态的影响;流式细胞术分析P7对细胞周期的影响;Western blotting检测P7对bFGF刺激的Balb/c3T3细胞中MAPK通路的MEK、Erk1/2信号分子活化水平的影响。结果显示,在检测的浓度范围内,P7对Balb/c3T3细胞形态无显著影响;P7可改变bFGF刺激下Balb/c3T3的细胞周期,减少S期细胞比率,使细胞阻滞在G0/G1期;并以剂量依赖的方式下调bFGF激活的MEK、Erk1/2信号分子的磷酸化水平。P7可能通过阻滞细胞在G0/G1期,下调MAPK通路信号分子的活化水平,从而抑制bFGF诱导的Balb/c3T3细胞增殖。

关键词： bFGF 拮抗肽细胞周期 MAPK通路

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单羰基姜黄素衍生物的合成、晶体结构、体外抗菌及抗肿瘤活性研究

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有机化学 2010年第6期30卷 884-889页

作者：吴建章王聪蔡跃飘杨树林郑晓咏仇佩虹彭景吴晓萍梁广李李堃温州医学院药学院温州325035 南京理工大学化工学院南京210094 暨南大学组织移植与免疫实验中心广州510632

以姜黄素为先导化合物合成了两个对称的单羰基姜黄素类似物和五个查尔酮类单羰基姜黄素类似物,结构经IR,1HNMR及ESI-MS确认,用11种临床常用耐药株对其进行了体外抗菌活性筛选,同时采用MTT法测定了它们对3种人体肿瘤细胞株的细胞毒活性.... 详细信息

以姜黄素为先导化合物合成了两个对称的单羰基姜黄素类似物和五个查尔酮类单羰基姜黄素类似物,结构经IR,1HNMR及ESI-MS确认,用11种临床常用耐药株对其进行了体外抗菌活性筛选,同时采用MTT法测定了它们对3种人体肿瘤细胞株的细胞毒活性.其中化合物A5的体外抗肿瘤活性与姜黄素相当,并且A5对部分临床耐药菌也有一定的抑菌活性.通过单晶培养得到了A5的晶体结构,经测定表明其结构属于正交晶系,空间群Fdd2.晶胞参数a=26.085(3),b=28.248(3),c=7.9615(9),α=90.00°,β=90.00°,γ=90.00°,V=5866.4(12)3,Z=16,DX=1.288Mg/m3,μ=0.09mm-1,F(000)=324,最终偏离因子R=0.047,wR=0.112.

关键词：单羰基姜黄素衍生物查尔酮合成抗肿瘤抗菌活性晶体结构

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子痫前期患者系统性氧化应激反应的检测

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基础医学与临床 2010年第4期30卷 343-347页

作者：钱中清曾耀英朱斌季煜华何芳暨南大学组织移植与免疫实验中心广东广州510632 蚌埠医学院免疫学教研室安徽蚌埠233030 广州市何贤纪念医院产科广东广州510632

目的研究子痫前期系统性氧化应激检测方法。方法组织化学染色检测胎盘组织缺氧表现;用胞内活性氧(ROS)探针H2DCFDA及全血染色方法检测中性粒细胞(PMN)胞内ROS水平;用H2O2检测试剂盒检测血清中H2O2水平。结果与正常妊娠胎盘组织比较,子... 详细信息

目的研究子痫前期系统性氧化应激检测方法。方法组织化学染色检测胎盘组织缺氧表现;用胞内活性氧(ROS)探针H2DCFDA及全血染色方法检测中性粒细胞(PMN)胞内ROS水平;用H2O2检测试剂盒检测血清中H2O2水平。结果与正常妊娠胎盘组织比较,子痫前期患者胎盘组织合胞体细胞显著增多;血管破坏,结构不清,局部血管有纤维钙化特征;非孕妇女、正常妊娠妇女及子痫前期患者PMN胞内ROS水平分别为:45.61±12.20、51.02±13.60(P<0.01)、85.10±16.30(P<0.01);而血清H2O2浓度分别为:(24.57±5.17)μmol/L、(26.61±3.25)μmol/L、(39.84±9.67)μmol/L。结论对子痫前期系统性氧化应激进行定性和定量检测结果与疾病发生和发展一致。

关键词：子痫前期氧化应激胎盘中性粒细胞

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IL-22参与介导NOD小鼠自发性胚胎丢失

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现代免疫学 2010年第5期30卷 370-374页

作者：许洁涵陈琳琳赵晓明陈翃王文静林羿上海交通大学医学院附属仁济医院生殖医学中心上海200001 暨南大学组织移植与免疫研究中心广州510632 上海交通大学医学院附属仁济医院妇产科学研究所上海200001

为研究IL-22与NOD小鼠自发性胚胎吸收率增高的关系,多次腹腔注射中和抗体抑制IL-22,采用流式细胞术检测子宫CD4+IL-22+细胞百分率,并观察NOD×C57BL/6小鼠交配组合中孕鼠胚胎吸收率的变化。结果显示,NOD×C57BL/6孕鼠子宫CD4+IL... 详细信息

为研究IL-22与NOD小鼠自发性胚胎吸收率增高的关系,多次腹腔注射中和抗体抑制IL-22,采用流式细胞术检测子宫CD4+IL-22+细胞百分率,并观察NOD×C57BL/6小鼠交配组合中孕鼠胚胎吸收率的变化。结果显示,NOD×C57BL/6孕鼠子宫CD4+IL-22+细胞百分率显著高于BALB/c×C57BL/6孕鼠(52.4%±2.1%与14.3%±4.4%,P<0.01)。多次腹腔注射中和抗体可显著降低NOD×C57BL/6孕鼠子宫内CD4+IL-22+细胞数量(18.7%±2.8%;与未抑制组相比,P<0.01),并可显著降低这些小鼠孕12.5 d的胚胎吸收率(4.8%±2.0%与19.1%±5.1%,P<0.05)。线性相关-回归分析显示,胚胎吸收率与子宫CD4+IL-22+细胞百分率呈正相关。提示妊娠子宫内CD4+IL-22+细胞相对数量过多是妊娠不利因素,可能是造成NOD×C57BL/6孕鼠胚胎吸收率增高的原因之一。

关键词：流产母-胎界面免疫调节免疫耐受

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自然杀伤细胞对异基因骨髓移植中移植排斥和造血及免疫重建的影响(英文)

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中国组织工程研究与临床康复 2010年第49期14卷 9303-9306页

作者：杨志刚熊丹曾耀英梁亮李庆华吴国才广东医学院附属医院血液科广东省湛江市524001 暨南大学组织移植与免疫研究中心广东省广州市510632

背景:近几年,自然杀伤细胞与异基因骨髓移植的关系备受关注。目的:探讨自然杀伤细胞在小鼠异基因骨髓移植中对移植排斥、造血及免疫重建的影响。方法:以C57BL/6(H-2b)小鼠为供鼠、BALB/c(H-2d)小鼠为受鼠,分别在致死剂量和非致死剂量(≤... 详细信息

背景:近几年,自然杀伤细胞与异基因骨髓移植的关系备受关注。目的:探讨自然杀伤细胞在小鼠异基因骨髓移植中对移植排斥、造血及免疫重建的影响。方法:以C57BL/6(H-2b)小鼠为供鼠、BALB/c(H-2d)小鼠为受鼠,分别在致死剂量和非致死剂量(≤7.0Gy)全身照射的预处理条件下进行异基因骨髓移植,移植同时输注供鼠外周T细胞和(或)自然杀伤细胞。结果与结论:在致死剂量全身照射的移植中,输注自然杀伤细胞与不输注自然杀伤细胞的移植组比较,存活率显著增高;白细胞计数、CD19+细胞表达及骨髓CD34+细胞计数恢复快;H-2Kb+细胞的表达水平高。移植后28d,输注自然杀伤细胞组CD3+细胞表达水平明显低于不输注自然杀伤细胞组,60d两组比较差异无显著性意义(P>0.05)。在非致死剂量全身照射的移植中,移植30d,异基因骨髓组H-2Kb+细胞表达百分率明显下降,60d已下降至移植前水平;而输注高浓度和低浓度自然杀伤细胞的两组在移植后60d仍能检测到80%以上的H-2Kb+细胞表达。提示,在小鼠异基因骨髓移植中,同种异基因反应性自然杀伤细胞可以抑制移植排斥,提高造血干细胞的植入水平,促进造血及免疫重建并增加移植受鼠的生存率。

关键词：自然杀伤细胞天然骨髓移植全身照射同种异基因反应性

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