检索结果-内蒙古大学图书馆

暨南大学学报（自然科学与医学版） 2010年第4期31卷 331-335页

作者：耿梅陈清徐丽慧张延亭何贤辉暨南大学生命科学技术学院组织移植与免疫实验中心广东广州510632 暨南大学再生医学教育部重点实验室广东广州510632 暨南大学生命科学技术学院生物工程研究所广东广州510632

目的:构建重组人白细胞介素7(rhIL-7)的原核表达载体,在大肠杆菌中表达并鉴定。方法:以RT-PCR方法扩增编码IL-7的cDNA片段,插入至pET-3d载体中,构建rhIL-7的原核表达载体,阳性克隆经测序鉴定,转化至大肠杆菌BL21(DE3),优化rhIL-7表达条... 详细信息

目的:构建重组人白细胞介素7(rhIL-7)的原核表达载体,在大肠杆菌中表达并鉴定。方法:以RT-PCR方法扩增编码IL-7的cDNA片段,插入至pET-3d载体中,构建rhIL-7的原核表达载体,阳性克隆经测序鉴定,转化至大肠杆菌BL21(DE3),优化rhIL-7表达条件,利用免疫印迹鉴定重组蛋白。结果:重组载体经DNA测序显示包含正确的rhIL-7编码序列,重组载体转入大肠杆菌后,经IPTG诱导后外源蛋白表达,相对分子质量为17 400,与IL-7理论分子质量一致;免疫印迹显示,外源蛋白可以被人IL-7特异性抗体识别,表明在原核表达的外源蛋白是rhIL-7。rhIL-7主要表达于包涵体中,包涵体表达优化条件为:温度为37℃、IPTG浓度为0.4 mmol/L、诱导时间为4h。结论:成功的构建了rhIL-7的原核表达载体。

关键词：白细胞介素7 原核表达载体包涵体表达免疫印迹

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银屑病患者外周血T细胞CD69和CD134表达的研究

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中国实用医刊 2010年第11期37卷 8-11页

作者：刘毅蔡小嫦曾耀英北京协和医学院皮肤病研究所中国医学科学院 210042 暨南大学附属第一医院皮肤科暨南大学生命科学技术学院组织移植与免疫实验中心

目的了解银屑病患者外周血T细胞CD69和CD134的表达情况及多克隆刺激剂对其表达的影响.方法取银屑病患者与健康志愿者外周血全血培养,佛波醇脂(PMA)联合Ionomycin刺激使T细胞体外活化;在刺激第0、6、12、24 h,用三色免疫荧光标记流式... 详细信息

目的了解银屑病患者外周血T细胞CD69和CD134的表达情况及多克隆刺激剂对其表达的影响.方法取银屑病患者与健康志愿者外周血全血培养,佛波醇脂(PMA)联合Ionomycin刺激使T细胞体外活化;在刺激第0、6、12、24 h,用三色免疫荧光标记流式细胞术检测T细胞CD69、CD134的表达.结果银屑病患者组和健康对照组各11例纳入研究,结果显示:①银屑病患者组新鲜血标本T细胞CD134、CD69表达率均明显高于健康对照组(P<0.01); ②PMA联合Ionomycin刺激第6、12、24 h,银屑病患者组与健康对照组外周血T细胞CD69表达率仅在第24 h差异具有统计学意义(P<0.05); ③在刺激第6、12、24 h,银屑病患者组外周血T细胞CD134表达率均较健康对照组显著升高(P<0.001).结论银屑病患者外周血T细胞存在异常活化.在体外活化的外周血T细胞上,银屑病患者组CD134的表达显著高于健康对照组.

关键词：银屑病患者外周血流式细胞术检测 CD69 表达率 T lymphocytes peripheral blood T cells controls 对照组健康志愿者 results 刺激体外活化 PMA 免疫荧光标记 plus whole blood significant 统计学意义

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中华实用诊断与治疗杂志 2010年第5期24卷 426-428,432页

作者：刘毅徐丽慧何贤辉孙建方中国医学科学院北京协和医学院皮肤病研究所南京市210042 暨南大学生命科学技术学院生物工程研究所广州市510632 暨南大学生命科学技术学院组织移植与免疫实验中心广州市510632

目的:构建负载人恶性黑素瘤相关抗原gp100抗原肽的HLA-A*2402四聚体并进行鉴定,为分析gp100抗原肽诱发的特异性细胞免疫应答创造条件。方法:以羧基端融合生物素化酶BirA底物肽的HLA-A*2402重链胞外域融合蛋白、人β2-微球蛋白、gp100 VY... 详细信息

目的:构建负载人恶性黑素瘤相关抗原gp100抗原肽的HLA-A*2402四聚体并进行鉴定,为分析gp100抗原肽诱发的特异性细胞免疫应答创造条件。方法:以羧基端融合生物素化酶BirA底物肽的HLA-A*2402重链胞外域融合蛋白、人β2-微球蛋白、gp100 VYFFLPDHL抗原肽、PE-链亲和素为材料,制备HLA-A*2402/VYF四聚体;非还原SDS-PAGE鉴定四聚体四聚化程度;三色免疫荧光标记流式细胞术分析HLA-A*2402+健康志愿者外周血gp100特异性CD8+T细胞的频率。结果:HLA-A*2402/VYF四聚体形成率为83%,所制备的四聚体具有与HLA-A*2402+供者抗原特异性CD8+T细胞的结合活性,特异性CD8+T细胞的频率为外周血总CD8+T细胞的0.02%～0.06%。结论:成功制备HLA-A*2402/VYF四聚体并用于检测gp100特异性CD8+T细胞,为研究HLA-A*2402+黑素瘤患者免疫治疗的机制及疗效监测创造了条件。

关键词：恶性黑素细胞瘤 MHC四聚体 HLA-A^＊2402 gp100

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活化大鼠肝星状细胞的蛋白质表达谱

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中华肝脏病杂志 2009年第12期17卷 921-924页

作者：季菊玲张锦生王雪晴季煜华南通大学医学院病理学教研室 226001 复旦大学上海医学院病理学系暨南大学组织移植与免疫中心

目的用在线二维纳升高效液相结合串联质谱（2D nanoLC—MS／MS）技术分析体外培养大鼠原代肝星状细胞（HSC）的蛋白质表达谱。方法分离培养大鼠原代HSC，取体外培养第10天自动活化的大鼠HSC总蛋白质，通过2D nanoLC—MS／MS对酶解所获... 详细信息

目的用在线二维纳升高效液相结合串联质谱（2D nanoLC—MS／MS）技术分析体外培养大鼠原代肝星状细胞（HSC）的蛋白质表达谱。方法分离培养大鼠原代HSC，取体外培养第10天自动活化的大鼠HSC总蛋白质，通过2D nanoLC—MS／MS对酶解所获肽段进行分离和鉴定，并对鉴定的蛋白质进行细胞定位和功能分类。结果从50μg HSC总蛋白质中鉴定出1014种蛋白质，相对分子质量范围为7832～588364；主要分布于细胞核、细胞骨架、线粒体、内质网，分别占25％、17％、13％、13％。蛋白质功能主要与核酸代谢、细胞器组装、信号传导、能量代谢等生理进程有关，分别占17％、14％、10％、9％；其中细胞骨架蛋白α-平滑肌肌动蛋白、波形蛋白和结蛋白是活化大鼠HSC特异性表达的蛋白质。结论本研究获得了目前较为全面的活化大鼠原代HSC的蛋白喷表达谱，为深入研究HSC的活化机制奠定了基础。

关键词：肝星状细胞蛋白质组串联质谱分析二维纳升高效液相

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补阳还五汤预先干预对大鼠脑死亡后肾脏炎症细胞因子表达的影响

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中药材 2009年第12期32卷 1855-1860页

作者：陈洁曾耀英曾慧兰陈孝银苏泽轩刘嘉雯王乔峰李伟吴文燕暨南大学咐属第一医院泌尿外科/器官移植科广东广州510632 暨南大学组织移植与免疫中心广东广州510632 暨南大学附属第一医院血液科广东广州510632 暨南大学医学院中医系广东广州510632

目的:观察补阳还五汤预先干预对大鼠脑死亡后肾脏炎症细胞因子表达及外周血中性粒细胞内活性氧族(ROS)水平的影响,探讨其可能的机制。方法:雄性Wistar大鼠30只随机分成3组:正常对照组、模型组、补阳还五汤组。模型组与补阳还五汤组脑死... 详细信息

目的:观察补阳还五汤预先干预对大鼠脑死亡后肾脏炎症细胞因子表达及外周血中性粒细胞内活性氧族(ROS)水平的影响,探讨其可能的机制。方法:雄性Wistar大鼠30只随机分成3组:正常对照组、模型组、补阳还五汤组。模型组与补阳还五汤组脑死亡诱导成功后6 h,如平均动脉压>80 mmHg,则作为脑死亡供体,获取大鼠肾脏、外周血,用RT-PCR检测肾脏TNF-α与IL-1βmRNA表达,Western blot测定肾脏TNF-α与IL-1β蛋白及磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)表达,流式细胞仪检测外周血中性粒细胞内ROS水平。结果:与正常对照组比较,模型组大鼠肾脏组织TNF-α与IL-1βmRNA、蛋白以及磷酸化p38MAPK蛋白表达均较对照组显著增加(P<0.01)。补阳还五汤组大鼠以上指标较模型组显著降低(P<0.05),但仍较对正常对照组显著增加(P<0.01)。肾脏磷酸化p38MAPK蛋白表达与TNF-α、IL-1βmRNA及蛋白表达关系密切。模型组ROS水平较对照组显著上调(P<0.05);而补阳还五汤组ROS水平较模型组显著下调(P<0.05),与正常对照组比较无明显差异(P>0.05)。结论:补阳还五汤预先干预能显著抑制脑死亡大鼠肾脏炎症细胞因子与ROS表达,其机制可能与阻断p38MAPK信号通路多层次多靶点有关。补阳还五汤预先干预可望成为改善移植前脑死亡供体肾脏质量的一种理想途径。

关键词：补阳还五汤脑死亡肾脏炎症细胞因子 p38丝裂原活化蛋白激酶

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nmhaFGF对大鼠缺血再灌注损伤心肌的保护作用

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中国药科大学学报 2009年第2期40卷 161-165页

作者：许华李校堃黄亚东郑青苏志坚吴晓萍赵专友暨南大学药学院广州510632 暨南大学医药生物技术研究开发中心广州510632 暨南大学组织移植与免疫实验中心广州510632 天津药物研究院药理室天津300193

目的:研究非促分裂型酸性成纤维细胞生长因子(nmhaFGF)对缺血再灌注损伤心肌的保护作用。方法:大鼠冠脉左前降支闭塞30min后再灌注3h,再灌注前10min尾静脉注射不同剂量nmhaFGF。测定各组大鼠室性心动过速(VT)和心室颤动(VF)的潜伏期、... 详细信息

目的:研究非促分裂型酸性成纤维细胞生长因子(nmhaFGF)对缺血再灌注损伤心肌的保护作用。方法:大鼠冠脉左前降支闭塞30min后再灌注3h,再灌注前10min尾静脉注射不同剂量nmhaFGF。测定各组大鼠室性心动过速(VT)和心室颤动(VF)的潜伏期、持续时间和发生率,评定心律失常分数;再灌注24h后,测定血清AST、LDH、CK-MB含量,并计算大鼠心肌梗死面积。结果:静脉注射nmhaFGF(20,40,80μg/kg)能明显抑制缺血再灌注引起的心肌损伤。和模型组相比,nmhaFGF各组大鼠的VT和VF发生率减少,出现心律失常的潜伏期延迟,持续时间缩短;另外心肌梗死区占左室面积的百分比及梗死区占危险区百分比均有所降低;此外,血清心肌酶含量AST、LDH、CK-MB显著降低;以80μg/kgnmhaFGF作用较明显,其作用强度与8mg/kg普萘洛尔相当。结论:nmhaFGF对大鼠缺血再灌损伤心肌具有保护作用。

关键词： nmhaFGF 缺血再灌注心肌损伤

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nanoLC-ESI/MS/MS在ECV304细胞蛋白质组学研究中的应用

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中国病理生理杂志 2009年第1期25卷 205-208页

作者：李菊玲曾耀英季煜华杜彬复旦大学上海医学院病理学系上海200032 南通大学医学院病理学教研室江苏南通226001 暨南大学组织移植与免疫中心广东广州510632 暨南大学医学院广东广州510632

目的:应用纳升液联用技术(nanoLC-ESI/MS/MS)对ECV304细胞蛋白质组学进行初步分析。方法:提取ECV304细胞总蛋白,经变性、还原、烷基化和酶解,nanoLC-ESI/MS/MS对酶解后的肽段进行分析,数据库(Swissprot)检索鉴定蛋白质,生物信息学工具... 详细信息

目的:应用纳升液联用技术(nanoLC-ESI/MS/MS)对ECV304细胞蛋白质组学进行初步分析。方法:提取ECV304细胞总蛋白,经变性、还原、烷基化和酶解,nanoLC-ESI/MS/MS对酶解后的肽段进行分析,数据库(Swissprot)检索鉴定蛋白质,生物信息学工具对所鉴定的蛋白质进行细胞定位和功能分类。结果:从8μg细胞总蛋白中鉴定了120种蛋白质,所鉴定蛋白质的分子质量(MW)范围从6 648 D至280 739 D,MW<20 kD的蛋白质占24.2%,MW>100 kD的蛋白质占5.0%;主要位于细胞质、细胞骨架、细胞核和细胞膜,分别为27.8%、19.0%、15.2%和10.1%;大多为结构蛋白质和催化活性的蛋白质,分别为36.4%和34.1%,具有信号转导活性的占11.4%;其中角蛋白8、18和vimentin等为内皮细胞特异表达的蛋白质。结论:本研究建立了nanoLC-ESI/MS/MS分析ECV304细胞的蛋白质组学方法,为内皮细胞及内皮细胞损伤机制的蛋白质组学研究奠定了实验基础。

关键词： nanoLC—ESI/MS/MS技术 ECV304细胞蛋白质组

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雷公藤多甙和FK506滴眼防治大鼠角膜移植免疫排斥反应的比较

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国际眼科杂志 2009年第3期9卷 440-443页

作者：邓宏伟陈建苏李辰姚晓明赵松滨狄静芳暨南大学附属深圳眼科医院中国广东省深圳市518001 暨南大学医学院眼科中国广东省广州市510632 暨南大学医学院组织移植免疫中心中国广东省广州市510632

目的:观察雷公藤多甙(tripterygiitotorum,TⅡ)及FK506滴眼液局部应用对大鼠角膜移植免疫排斥反应的影响。方法:建立大鼠角膜移植模型,随机按局部滴用药物分组成A,B,C组,用裂隙灯记录及比较各组移植排斥指数,并比较角膜排斥发生时间。... 详细信息

目的:观察雷公藤多甙(tripterygiitotorum,TⅡ)及FK506滴眼液局部应用对大鼠角膜移植免疫排斥反应的影响。方法:建立大鼠角膜移植模型,随机按局部滴用药物分组成A,B,C组,用裂隙灯记录及比较各组移植排斥指数,并比较角膜排斥发生时间。分别于术后15d及30d行常规病理学检查。并通过免疫组化检查CD25,CD5+4在角膜植片基质中的表达。结果:0.3g/LTⅡ及0.5g/LFK506抑制角膜移植免疫排斥反应的效应均有效,两者相比效果无显著性差异。HE染色及免疫组化分析可见15d时各有效组角膜植片厚度基本正常,基质中仅有少量CD25,CD5+4阳性细胞表达、淋巴细胞浸润,新生血管少见。结论:TⅡ与FK506疗效近似。具有抑制高危角膜移植免疫排斥反应发生的临床应用价值。

关键词：雷公藤多甙(TII) 角膜移植移植物排斥

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bFGF特异性结合噬菌体的活性研究

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中国生物工程杂志 2009年第1期29卷 23-26页

作者：颜秋霞吴晓萍黄慧贤聂昌君聂燕芳柯实肖健李校堃温州医学院药学院/浙江省生物技术制药工程重点实验室温州325035 暨南大学医药生物技术研究开发中心广州510632 暨南大学组织移植与免疫实验中心广州510632

研究从噬菌体随机7肽库中筛选的bFGF特异性结合噬菌体的活性。采用ELISA检测3轮淘选后得到的阳性噬菌体克隆对bFGF的结合曲线。通过竞争抑制实验,分析bFGF结合噬菌体与bFGF的竞争结合活性。采用MTT法检测bFGF结合噬菌体对由bFGF诱导的Ba... 详细信息

研究从噬菌体随机7肽库中筛选的bFGF特异性结合噬菌体的活性。采用ELISA检测3轮淘选后得到的阳性噬菌体克隆对bFGF的结合曲线。通过竞争抑制实验,分析bFGF结合噬菌体与bFGF的竞争结合活性。采用MTT法检测bFGF结合噬菌体对由bFGF诱导的Balb/c3T3细胞增殖的影响。从噬菌体肽库中淘选获得的阳性噬菌体克隆能够特异地与bFGF结合,并呈剂量依赖性,其与固相bFGF的结合能被游离的bFGF竞争抑制,并可抑制由bFGF诱导的Balb/c3T3细胞增殖。bFGF特异性噬菌体可拮抗bFGF的活性,为开发针对bFGF的抗肿瘤短肽类新药提供基础。

关键词：噬菌体展示肽库碱性成纤维细胞生长因子 bFGF结合噬菌体

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CD40配体-受体载体介导的CpG ODN靶向脐血B淋巴细胞的特异传递及其免疫效应(英文)

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中国组织工程研究与临床康复 2009年第5期13卷 974-978页

作者：曾慧兰蒋建伟郑梅珍古晨韩新爱曾耀英狄静芳严玉霞暨南大学附属第一医院广东省广州市510632 暨南大学医学院生化教研室广东省广州市510632 中山大学中山医学院临床医学系广东省广州市510632 暨南大学组织移植与免疫研究中心广东省广州市510632

背景:CpG寡核苷酸是一种高效低毒的免疫佐剂,在许多疾病的基因治疗中具有广阔的应用价值,但存在种属和细胞特异性,细胞摄取率低,易被酶降解,成为临床应用的障碍。目的:拟验证CpG寡核苷酸通过CD40配体-受体载体系统对脐血B淋巴细胞特异... 详细信息

背景:CpG寡核苷酸是一种高效低毒的免疫佐剂,在许多疾病的基因治疗中具有广阔的应用价值,但存在种属和细胞特异性,细胞摄取率低,易被酶降解,成为临床应用的障碍。目的:拟验证CpG寡核苷酸通过CD40配体-受体载体系统对脐血B淋巴细胞特异靶向传递及其免疫效应的增强作用。设计、时间及地点:观察对比实验,于2004-04/2007-10在广州暨南大学附属第一医院血液科、儿科完成。材料:取健康新生儿的肝素抗凝新鲜脐血,事先征得父母知情同意并获医院伦理委员会审核批准。方法:制备CD40配体-碳二亚胺-多聚左旋赖氨酸-CpG寡核苷酸交联复合物,与脐血单个核细胞共培养。分别于24,48,72,96h应用流式细胞仪检测单个核细胞对FAM标记CpG寡核苷酸的摄取率及平均摄入强度;培养96h后用直接免疫荧光标记法标记CD19,CD20,CD22单抗,以流式细胞仪检测阳性表达率;细胞悬液加入96孔板,3组分别加入CD40配体-碳二亚胺-多聚左旋赖氨酸-CpG寡核苷酸、单纯CpG寡核苷酸及ddH2O,培养92h,以四甲基偶氮唑盐比色法测细胞增殖能力;以酶联免疫吸附法测以上3组细胞培养上清IgG水平。主要观察指标:单个核细胞对CpG寡核苷酸的摄取率及平均摄入强度,淋巴细胞亚群的表达,细胞增殖能力,培养上清IgG水平。结果:与单纯CpG寡核苷酸未交联组相比,单个核细胞对交联复合物摄取率更高(>98%),达摄取峰值时间更早。共培养后CD19+,CD22+,CD20+细胞表达升高,细胞增殖量及上清IgG水平均高于对照组(P<0.05)。结论:CD40配体-受体载体系统有助于CpG寡核苷酸特异高效的B细胞靶向投递,并增强其免疫效应。

关键词： CD40配体 CPG寡核苷酸 B淋巴细胞靶向投递

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