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中国病理生理杂志 2002年第7期18卷 774-777页

作者：万建勣曾耀英何贤辉徐丽慧蔡小嫦暨南大学医学院第一附属医院皮肤科暨南大学组织移植与免疫研究中心广东广州510632

目的 :探讨正常人外周血自然杀伤T (NKT)细胞的数量以及体外活化后表达CD6 9、IFN -γ和IL - 4的规律并与CD3+ T细胞进行比较。方法 :取正常成人外周血 ,直接三色荧光标记后溶血获取有核细胞 ,或以佛波醇酯 (PDB) +离子霉素 (Ion)刺激... 详细信息

目的 :探讨正常人外周血自然杀伤T (NKT)细胞的数量以及体外活化后表达CD6 9、IFN -γ和IL - 4的规律并与CD3+ T细胞进行比较。方法 :取正常成人外周血 ,直接三色荧光标记后溶血获取有核细胞 ,或以佛波醇酯 (PDB) +离子霉素 (Ion)刺激并培养 6h ,经三色荧光标记后溶血并获取有核细胞 ,以流式细胞术分析NKT细胞和T细胞的数量以及表达CD6 9和IL - 4、IFN -γ的情况。结果 :NKT细胞约占外周血T淋巴细胞总数的 (1 34± 0 4 2 ) %( x±s) ;PDB +Ion活化 6h后NKT细胞CD6 9表达率为 (96 71± 1 33) % ,明显高于对照组 (11 4 7± 2 86 ) % (P <0 0 5 ) ;同样条件下CD3+ T细胞CD6 9表达率分别为 (98 6 0± 0 4 7) %和 (1 0 7± 0 4 5 ) % (P <0 0 5 ) ;当莫能菌素 (mon ensin)存在时以PDB +Ion刺激 6h后 ,IL - 4阳性NKT细胞的百分比为 4 8 6 2± 2 4 4 ,明显高于对照组 31 5 7± 3 31(P<0 0 5 ) ;IFN -γ阳性NKT细胞百分比为 4 6 6 5± 11 91,也高于对照组 13 4 5± 6 2 9(P <0 0 1)。CD3+ T细胞在刺激后表达IL - 4和IFN -γ均明显升高 ,但IL - 4表达率远远低于NKT细胞 ;而且对照组CD3+ T细胞两种细胞因子表达率都明显低于NKT细胞。结论 :正常成人外周血含有少量的NKT细胞 ,这些细胞IL - 4和IFN -γ?

关键词：天然杀伤细胞细胞活素类流式细胞术 CD3^+T细胞

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外伤性视神经损伤后视神经及视网膜形态的动态观察

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中国病理生理杂志 2002年第10期18卷 1268-1270,T007页

作者：史剑波狄静芳徐锦堂沈伟哉暨南大学医学院眼科教研室暨南大学生命科学院组织移植与免疫中心暨南大学医学院解剖学教研室广东广州510632

目的 :了解外伤性视神经损伤后的病理变化、溃变特点与时相间的关系。方法 :参照Allen脊髓损伤法 ,造成视神经眶尖段间接 6 0 0gcm力冲击、挤压伤。伤后对视神经和视网膜行形态学动态观察。结果 :①伤后 4 8h ,视神经轻度肿胀和空泡反应... 详细信息

目的 :了解外伤性视神经损伤后的病理变化、溃变特点与时相间的关系。方法 :参照Allen脊髓损伤法 ,造成视神经眶尖段间接 6 0 0gcm力冲击、挤压伤。伤后对视神经和视网膜行形态学动态观察。结果 :①伤后 4 8h ,视神经轻度肿胀和空泡反应 ;1周时损伤处视神经出现溃变 ,神经胶质细胞增生 ,视网膜神经节细胞 (retinalganglioncells,RGCs)形态改变不明显 ;2周时神经纤维轴束间空泡样改变 ,局灶性坏死 ,RGCs核固缩和细胞数量减少。术后 3月 ,视神经损伤部位直径缩小 ,形成胶质疤痕 ,RGCs数量明显减少 ,核固缩细胞增多。②RGCs数量于术后 4 8h、1周、2周、1月和 3月分别比正常对照组低 3 35 %、13 2 3%、19 74 %、2 3 2 0 %、2 9 2 8%。③视网膜细胞在 4 8h内出现凋亡。结论 :本实验模型可造成明确的视神经和视网膜损伤 ,神经元的损伤程度从节细胞、中间神经元、感光细胞的次序依次递减。视网膜和视神经损伤的严重程度与时间呈相关性。RGCs数量在 4 8h至 1周时下降速率最快。

关键词：视神经创伤损伤视网膜神经节细胞病理学

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TNFα和IL-10在巨细胞病毒感染人胚肺成纤维细胞中的作用

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中国病理生理杂志 2002年第3期18卷 265-268页

作者：江振友曹艳英林晨暨南大学医学院微生物学与免疫学教研室广东广州510632 暨南大学组织移植与免疫实验中心广东广州510632

目的 :研究TNFα和IL - 1 0对人巨细胞病毒 (HCMV)感染人胚肺成纤维细胞 (HEL)的影响 ,以及感染细胞产生TNFα的变化 ,探讨有关细胞因子在HCMV感染免疫中的作用。方法 :用不同浓度的TNFα和IL - 1 0作用于HEL ,2 4h后感染病毒 ,研究TNF... 详细信息

目的 :研究TNFα和IL - 1 0对人巨细胞病毒 (HCMV)感染人胚肺成纤维细胞 (HEL)的影响 ,以及感染细胞产生TNFα的变化 ,探讨有关细胞因子在HCMV感染免疫中的作用。方法 :用不同浓度的TNFα和IL - 1 0作用于HEL ,2 4h后感染病毒 ,研究TNFα和IL - 1 0对HCMV感染HEL的影响。用HCMV感染HEL ,感染后 (4、2 4、48、72、96h)分别收集培养上清液 ,用ELISA法检测TNFα含量。结果 :在病毒感染前 ,中、高浓度TNFα或低、中浓度IL - 1 0可抑制HCMV在HEL内的增殖。HCMV感染HEL后 ,细胞产生TNFα的量无明显改变。结论 :TNFα和IL - 1 0在HCMV感染免疫过程中起作用。

关键词：巨细胞病毒细胞活素类肺成纤维细胞 TNFα IL-10

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免疫治疗对母胎交界面NK细胞表面CD69表达水平的影响及其与鼠胚和鼠仔预后的关系(英文)

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中国病理生理杂志 2002年第3期18卷 282-287页

作者：林羿曾耀英曾山何贤辉狄静芳詹美意关洁宾肇静娴全世明暨南大学组织与免疫移植中心广东广州510632 暨南大学医学院病理教研室广东广州510632 暨南大学动物中心广东广州510632

目的 :研究反复自然流产 (recurrentspontaneousabortion ,RSA)模型CBA/J×DBA/ 2小鼠母胎交界面NK细胞表面CD69分子的表达水平 ,并评价淋巴细胞免疫治疗 (lymphocyteimmunotherapy,LIT)对CD69表达水平的影响及其与鼠胚和鼠仔预后... 详细信息

目的 :研究反复自然流产 (recurrentspontaneousabortion ,RSA)模型CBA/J×DBA/ 2小鼠母胎交界面NK细胞表面CD69分子的表达水平 ,并评价淋巴细胞免疫治疗 (lymphocyteimmunotherapy,LIT)对CD69表达水平的影响及其与鼠胚和鼠仔预后的关系。方法 :评价CBA/J×DBA/ 2、C57BL/ 6×DBA/ 2和BALB/c×DBA/ 2小鼠胚胎和鼠仔的预后 ,绘制出生后 1 - 2 1d鼠仔离乳前生长曲线和Kaplan -Meier生存分析曲线。并且采用PE -CD69和FITC -DX5双色流式细胞术检测在有或无LIT的情况下 ,母胎交界面NK细胞表面CD69分子的表达水平。此外 ,对CD1 6/CD32 +NK细胞亚群等也进行检测。结果 :在孕期母鼠体重平均增长幅度、平均每窝产仔数、新生鼠仔出生第 1d平均体重和胚胎吸收率等方面 ,CBA/J×DBA/ 2小鼠与生殖力正常的对照组相比均有显著差异。在CBA/J×DBA/ 2小鼠中 ,代表活化型NK细胞的CD69+ DX5+ 细胞比率也显著高于对照组。而有效的LIT能够显著降低CD69在母胎交界面NK细胞表面的表达水平 ,并相应地显著降低胚胎吸收率。结论 :CD69+ DX5+ 细胞在胚胎被排斥的机制中可能具有重要作用。

关键词：小鼠习惯性流产天然杀伤细胞 NK细胞 CD69 影响鼠胚鼠仔预后免疫治疗

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应用磁珠细胞分离仪从母血中分离胎儿细胞的研究

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中国实用妇科与产科杂志 2002年第5期18卷 288-290页

作者：陈小蔓黄艳仪胡冬贵曾耀英孙荭广州医学院附属广州市第二人民医院妇产科 510150 暨南大学组织移植和免疫实验中心

目的　研究利用免疫磁珠细胞分离仪分离孕妇血中胎儿细胞的效率。方法　孕妇血采自孕龄为 2 1～40周 ,初孕的孕男性单胎正常孕妇 16例。脐血来自胎龄 38～ 40周的男性新生儿 10例。标本根据CD71抗体的效价标记磁珠后放在磁场中进行磁珠... 详细信息

目的　研究利用免疫磁珠细胞分离仪分离孕妇血中胎儿细胞的效率。方法　孕妇血采自孕龄为 2 1～40周 ,初孕的孕男性单胎正常孕妇 16例。脐血来自胎龄 38～ 40周的男性新生儿 10例。标本根据CD71抗体的效价标记磁珠后放在磁场中进行磁珠细胞分离。分离后的脐血标本在流式细胞仪上检测分离效率 ,孕妇血标本经套式PCR方法鉴定男性SRY基因片段。根据CD71-FITC抗体效价标记脐血中的单个核细胞。同时利用流式细胞仪检测和分离脐血中的胎儿细胞。结果　利用磁珠细胞分离仪分离孕妇血中的胎儿有核红细胞 ,经套式PCR技术寻找男性胎儿SRY基因片段。经第一次扩增有效率 87 5 % ,第二次扩增有效率 10 0 0 %。脐血中胎儿有核红细胞在分离前占 5 3 2 %～ 74 9% ;分离后 ,流式细胞仪富集为 99 2 %～ 99 8% ,免疫磁珠细胞分离仪富集为 97 3%～ 99.4%。结论　免疫磁珠细胞分离仪可富集到 98 3%的胎儿有核红细胞 ,经套式PCR技术在分离后的孕妇血中可确定 10 0 %的男性胎儿SRY基因片段。该项技术简单 ,价廉。

关键词：免疫磁珠细胞分离仪有核红细胞产前诊断 CD71抗体肥儿细胞细胞分离

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黄连素对T淋巴细胞活化和增殖的抑制作用

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中国病理生理杂志 2002年第10期18卷 1183-1186页

作者：何贤辉曾耀英徐丽慧邱海霞蔡小嫦暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室广东广州510632 暨南大学生物工程研究所广东广州510632 暨南大学医学院第一附属医院皮肤科广东广州510632

目的 :研究黄连素 (Ber)对T细胞体外活化和增殖的影响及作用机制。方法 :正常人外周血全血培养 ,以植物血凝素 (PHA)或佛波醇酯 (PDB)加离子霉素 (Ion)刺激活化淋巴细胞 ,双荧光染色及溶血获取有核细胞后 ,以流式细胞仪分析T细胞表达活... 详细信息

目的 :研究黄连素 (Ber)对T细胞体外活化和增殖的影响及作用机制。方法 :正常人外周血全血培养 ,以植物血凝素 (PHA)或佛波醇酯 (PDB)加离子霉素 (Ion)刺激活化淋巴细胞 ,双荧光染色及溶血获取有核细胞后 ,以流式细胞仪分析T细胞表达活化抗原CD6 9和CD2 5的水平 ,并以碘化丙锭染色分析细胞周期分布 ,7-AAD活染分析细胞死亡率。结果 :浓度为 10 0 μmol/L和 5 0 μmol/L的Ber对PDB +Ion或PHA激活T细胞表达CD6 9有明显抑制 ,而 2 5 μmol/L的Ber抑制效应无显著性 ;随时间延长 ,对CD6 9表达的抑制程度下降 ;对于CD2 5表达 ,上述 3个浓度的Ber抑制作用均有显著性 ,且呈剂量依赖性。同时 ,这 3个浓度的Ber均能明显阻止淋巴细胞进入S期和G2 /M ,对细胞周期的抑制作用没有时相特异性。活染分析显示Ber对淋巴细胞无明显细胞毒性。结论 :Ber通过干扰早期活化信号转导通路而抑制T细胞活化和增殖 ,发挥其免疫抑制作用。

关键词：黄连素 T淋巴细胞活化抗原细胞周期

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巨噬细胞毒素用于降低CBA/J×DBA/2小鼠胚胎吸收率

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暨南大学学报（自然科学与医学版） 2002年第1期23卷 93-98页

作者：林羿曾耀英曾山狄静芳詹美意关洁宾全世明暨南大学组织移植与免疫研究中心广东广州510632 暨南大学医学院病理教研室广东广州510632 暨南大学医学院实验动物中心广东广州510632

目的 :研究巨噬细胞毒素降低反复自然流产模型CBA/J×DBA/ 2小鼠胚胎吸收率的免疫机制 .方法 :在小鼠交配前腹腔注射变性蛋白质包被的二氧化硅颗粒 ,做为巨噬细胞毒素以去除巨噬细胞 ,观察胚胎吸收率和淋巴细胞亚群变化 ,进而分析... 详细信息

目的 :研究巨噬细胞毒素降低反复自然流产模型CBA/J×DBA/ 2小鼠胚胎吸收率的免疫机制 .方法 :在小鼠交配前腹腔注射变性蛋白质包被的二氧化硅颗粒 ,做为巨噬细胞毒素以去除巨噬细胞 ,观察胚胎吸收率和淋巴细胞亚群变化 ,进而分析淋巴细胞浸润与妊娠结局的关系 .结果 :二氧化硅预处理组平均每窝活胎数显著增多 (6 3± 1 5vs 3 5± 1 0 ,P <0 0 1) ,胚胎吸收率则显著下降 (18 2 %vs .38 2 %,P <0 0 5 ) .与此相应 ,CD3+ CD6 9+ 、CD3+ CD71+ 细胞比率和CD4 5 +MHC -II+ 、CD80 + MHC -II+ 细胞比率均显著降低 .结论 :体内注射巨噬细胞毒素可以显著降低CBA/J×DBA/ 2小鼠母胎交界面活化型T细胞和某些巨噬细胞亚型的比率 ,并且这种变化与胚胎吸收率的下降相联系 .

关键词：巨噬细胞毒素 BA/J×DBA/2小鼠胚胎吸收率反复自然流产淋巴细胞亚群母胎交界面动物模型免疫机制

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载脂蛋白B-100 3500精氨酸→色氨酸突变的简便快速诊断

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岭南心血管病杂志 2002年第1期8卷 10-12页

作者：冯铮狄静芳曾山冯建生暨南大学组织移植免疫中心广州市510632 暨南大学医学院生化教研室广州市510632

目的　建立一个简便快速方法 ,用于诊断家族性载脂蛋白B 10 0缺陷症R35 0 0W。方法　设计一对寡核苷酸引物 ,其上游引物为突变引物。以PCR扩增目的DNA顺序 ,产物用限制酶Nco1酸解 ,酶解体系中加入含Nco1切口的DNA片段作内参照物 ,以排... 详细信息

目的　建立一个简便快速方法 ,用于诊断家族性载脂蛋白B 10 0缺陷症R35 0 0W。方法　设计一对寡核苷酸引物 ,其上游引物为突变引物。以PCR扩增目的DNA顺序 ,产物用限制酶Nco1酸解 ,酶解体系中加入含Nco1切口的DNA片段作内参照物 ,以排除酶切时假阴性的出现。结果　所设计引物能成功地用于PCR以扩增目的DNA片段 ,长 14 4碱基对。产物与限制酶Nco1保温 ,正常基因产物不被切割 ,突变基因产物则由于引入一个人工限制酶切口而被切割 ,产生 117碱基对的片段 ,这两长度不同的片段可被 2 %琼脂糖凝胶电泳所分离。利用这一方法 ,于 16 2例高血浆胆固醇患者中检出两例杂合R35 0 0W突变基因携带者。结论　本突变引物PCR法成功地检出ApoB 10 0R35 0 0W突变基因 ,方法可靠。

关键词：载脂蛋白B 高胆固醇血症聚合酶链反应基因诊断家族性载脂蛋白B-100缺陷症 3500精氨酚突变色氨酸

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山茱萸总甙滴眼液眼内药代动力学及药效学的实验研究

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暨南大学学报（自然科学与医学版） 2002年第4期23卷 5-10页

作者：孟晶李辰陈建苏赵松滨狄静芳杨皓庄张穗梅暨南大学医学院第一附属医院眼科广东广州510630 暨南大学组织移植与免疫研究中心暨南大学医学院病理生理学教研室广东广州510632

目的 :研制出山茱萸总甙 (COG)滴眼液 ,对该滴眼液的药代动力学进行研究 ,并观察其局部应用对角膜移植免疫排斥反应的影响。方法 :用高效液相色谱法对该滴眼液的药代动力学参数进行研究。建立封闭群大鼠角膜移植模型 ,随机分为 4组 :A... 详细信息

目的 :研制出山茱萸总甙 (COG)滴眼液 ,对该滴眼液的药代动力学进行研究 ,并观察其局部应用对角膜移植免疫排斥反应的影响。方法 :用高效液相色谱法对该滴眼液的药代动力学参数进行研究。建立封闭群大鼠角膜移植模型 ,随机分为 4组 :A组为空白对照组 ,B、C、D组分别为使用质量分数 0 5 %、1%和 2 %COG滴眼液组。用裂隙灯显微镜记录及比较各组角膜排斥反应发生时间。结果 :COG滴眼液在新西兰白兔眼内为一室模型 ,主要药代动力学参数为 :A =4 316 μg/mL ,Ke=2 0 5 6h- 1,Ka=2 5 79h- 1,LagTime =0 198h ,t1/ 2 ,Ka=0 0 2 3h ,t1/ 2 ,Ke=0 2 5 7h ,Tmax=0 986h ,ρmax=1 2 94 μg/mL ,AUC =1 6 0 1μg·h/mL ,其拟合的动力学方程为 ρ(t) =10 6 0 5×Dose×(e- 2 0 56× (t- 0 198) -e- 2 579× (t- 0 198) )。术后各组发生角膜移植排斥时间 ,A组与B、C、D组、B组与C、D组、C组与D组间两两比较均有显著性差异 (P <0 0 1)。其中作用最强的为C组。结论 :COG滴眼液能有效地防治角膜移植免疫排斥反应。COG滴眼液眼内有效峰浓度出现在点药后 0 986h 。

关键词：实验研究山茱萸总甙滴眼液药代动力学角膜移植免疫排斥

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银杏叶提取物对实验大鼠脑外伤后神经细胞凋亡的影响

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广东医学 2002年第3期23卷 242-243页

作者：卓文燕徐安定苗海锋曾子华黄志雄郑佩娥狄静芳暨南大学医学院第一附属医院神经内科广州510630 暨南大学医学院第一附属医院医学院病理科广州510630 广东省南海市人民医院神经外科 528200 暨南大学医学院第一附属医院医学院生命科学院组织移植与免疫中心广州510630

目的　观察银杏叶提取物 (EGb761)对实验大鼠脑外伤后神经细胞凋亡的影响 ,探讨EGb761对脑外伤的治疗作用。方法　采用Feeney法自由落体撞击脑损伤动物模型 ,将 90只大鼠随机分为研究组及对照组 ,在损伤后15min ,60min及 2 4h分别腹腔注... 详细信息

目的　观察银杏叶提取物 (EGb761)对实验大鼠脑外伤后神经细胞凋亡的影响 ,探讨EGb761对脑外伤的治疗作用。方法　采用Feeney法自由落体撞击脑损伤动物模型 ,将 90只大鼠随机分为研究组及对照组 ,在损伤后15min ,60min及 2 4h分别腹腔注射EGb761及生理盐水。第 5天用TUNEL法测定神经细胞原位凋亡、大脑半球含水量、光镜下观察细胞形态学改变。结果　与对照组比较 ,大鼠脑外伤后 15min及 60min给予EGb761能显著降低神经细胞凋亡率和脑组织含水量 (P <0 0 5 ) ,外伤后 2 4h给药 ,神经细胞凋亡率和脑组织含水量差异无显著性 (P >0 0 5 )。结论　EGb761有抗大鼠脑外伤后神经细胞凋亡及减轻脑水肿的作用。

关键词：银杏叶提取物脑外伤神经细胞凋亡

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