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中国药理学通报 2013年第6期29卷 802-808页

作者：王睿朱玮玮林熙孙燕暨南大学医学院药理学系广东广州510632 中山大学中山医学院药理学教研室广东广州510080

目的从蝰蛇(缅甸亚种)毒分离纯化一种促凝—纤溶双相活性组分FⅥbb,并研究其理化性质和生物活性。方法应用CM-Sephadex C-50阳离子交换层析Sephadex G-150(超细)凝胶过滤层析Chelating Sepharose Fast Flow金属离子螯合亲和层析分离纯... 详细信息

目的从蝰蛇(缅甸亚种)毒分离纯化一种促凝—纤溶双相活性组分FⅥbb,并研究其理化性质和生物活性。方法应用CM-Sephadex C-50阳离子交换层析Sephadex G-150(超细)凝胶过滤层析Chelating Sepharose Fast Flow金属离子螯合亲和层析分离纯化蛇毒,反相HPLC检测组分FⅥbb纯度,采用MALDI质谱测定法测定分子量,以发色底物法、纤维平板法和SDS-PAGE测定FⅥbb的酶学特征和生物活性。结果从蝰蛇(缅甸亚种)毒分离得到的促凝—纤溶双相活性组分FⅥbb为单体蛋白,相对分子质量为59 138,最适温度为40℃,最适pH为10.0,为金属蛋白酶。结论应用CM-Sephadex C-50阳离子交换层析和Chelating Sepha-rose Fast Flow金属离子螯合亲和层析等方法可以从蝰蛇(缅甸亚种)毒纯化出促凝—纤溶双相活性组分FⅥbb,具有促凝—纤溶双相活性。

关键词：蝰蛇 FⅥbb促凝活性纤溶活性金属蛋白酶蛋白分离

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血栓通注射液对LPS诱导的兔弥散性血管内凝血的拮抗作用

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中国病理生理杂志 2013年第4期29卷 682-687页

作者：黄振华朱玮玮林熙祁洁珍邱鹏新陈家树陈琪中山大学中山医学院药理学教研室广东广州510080 暨南大学医学院药理学系广东广州510632 广东省食品药品检验所药理室广东广州510180

目的:研究血栓通注射液对脂多糖(LPS)诱导的兔弥散性血管内凝血(DIC)的影响。方法:对兔耳缘静脉持续滴注LPS以建立兔DIC模型,记录各组动物在24 h后的生存率;全自动血浆分析仪测定丙氨酸氨基转移酶(ALT)和血尿素氮(BUN);用全自动凝血分... 详细信息

目的:研究血栓通注射液对脂多糖(LPS)诱导的兔弥散性血管内凝血(DIC)的影响。方法:对兔耳缘静脉持续滴注LPS以建立兔DIC模型,记录各组动物在24 h后的生存率;全自动血浆分析仪测定丙氨酸氨基转移酶(ALT)和血尿素氮(BUN);用全自动凝血分析仪检测活化部分凝血活酶时间(APTT)和凝血酶原时间(PT);用凝固法测定纤维蛋白原含量;全自动血细胞分析仪进行血小板计数;发色底物法测定蛋白C和抗凝血酶Ⅲ的活性;ELISA法检测血浆中肿瘤坏死因子α(TNF-α)的含量。结果:持续从兔耳缘静脉滴注LPS后,DIC模型组动物大量死亡,ALT和BUN显著升高,APTT和PT显著延长,蛋白C和抗凝血酶Ⅲ的活性明显降低,血小板计数明显减少,血浆中TNF-α的含量显著升高。注射血栓通注射液后,动物的死亡率明显下降,ALT和BUN明显下降,APTT和PT明显缩短,血小板计数明显上升,纤维蛋白原含量显著提高,蛋白C和抗凝血酶Ⅲ活性明显提升;血浆TNF-α的含量明显降低。结论:血栓通注射液对LPS所诱导的兔DIC有良好的拮抗作用。

关键词：血栓通注射液脂多糖类弥散性血管内凝血肿瘤坏死因子

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蝰蛇（缅甸亚种）毒促凝一纤溶双相活性组分FⅥbb的分离纯化及生物活性

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中国药理学通报 2013年第6期29卷 802-808页

作者：王睿朱玮玮林熙孙燕暨南大学医学院药理学系　　广东广州　　（510632）中山大学中山医学院药理学教研室　　广东广州　　（510080）

目的从蝰蛇（缅甸亚种）毒分离纯化一种促凝-纤溶双相活性组分FⅥbb，并研究其理化性质和生物活性。方法应用CM-SephadexC-50阳离子交换层析SephadexG-150（超细）凝胶过滤层析ChelatingSepharoseFastFlow金属离子螯合亲和层析分离纯化... 详细信息

目的从蝰蛇（缅甸亚种）毒分离纯化一种促凝-纤溶双相活性组分FⅥbb，并研究其理化性质和生物活性。方法应用CM-SephadexC-50阳离子交换层析SephadexG-150（超细）凝胶过滤层析ChelatingSepharoseFastFlow金属离子螯合亲和层析分离纯化蛇毒，反相HPLC检测组分FVIbb纯度，采用MALDI质谱测定法测定分子量，以发色底物法、纤维平板法和SDS-PAGE测定FⅥbb的酶学特征和生物活性。结果从蝰蛇（缅甸亚种）毒分离得到的促凝-纤溶双相活性组分FⅥbb为单体蛋白，相对分子质量为59138，最适温度为40℃，最适pH为10．0，为金属蛋白酶。结论应用CM-SephadexC-50阳离子交换层析和ChelatingSepha-roseFastFlow金属离子螯合亲和层析等方法可以从蝰蛇（缅甸亚种）毒纯化出促凝一纤溶双相活性组分FⅥbb，具有促凝一纤溶双相活性。

关键词：蝰蛇 FⅥbb促凝活性纤溶活性金属蛋白酶蛋白分离

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蝰蛇(缅甸亚种)毒凝血因子Ⅹ激活物FⅤe-1的分离纯化与理化活性的研究(英文)

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中山大学学报（医学科学版） 2012年第2期33卷 141-148页

作者：林熙辛淑波祈洁珍梁秀霞陈家树邱鹏新颜光美暨南大学医学院药理学系广东广州510632 汕头中心医院临床药理学室广东汕头515031 中山大学中山医学院药理教研室广东广州510080

【目的】从蝰蛇(缅甸亚种)毒分离纯化一种凝血活性因子Ⅹ激活物FⅤe-1,并研究其理化性质、序列测定以及凝血活性。【方法】应用阳离子交换层析、分子凝胶过滤层析分离纯化蛇毒,采用MALDI质谱测定法测定分子质量,等电聚焦电泳测定等电点,... 详细信息

【目的】从蝰蛇(缅甸亚种)毒分离纯化一种凝血活性因子Ⅹ激活物FⅤe-1,并研究其理化性质、序列测定以及凝血活性。【方法】应用阳离子交换层析、分子凝胶过滤层析分离纯化蛇毒,采用MALDI质谱测定法测定分子质量,等电聚焦电泳测定等电点,Edman降解法测定蛋白N末端氨基酸序列,发色底物法和SDS-PAGE等方法测定FⅤe-1的酶学特征和凝血活性。【结果】从蝰蛇(缅甸亚种)毒分离得到的FⅤe-1为单体蛋白,相对分子质量为13 808,等电点4.6,0.5 mg FⅤe-1的凝血活性与1.5625 u的凝血酶或与54.93 ng RVVⅩ的凝血活性相当;可激活FⅩ,但对凝血酶和纤维蛋白原无作用;酶活性的适宜pH为6.5～7.5,适宜温度为25～60℃;为钙依赖性,凝血活性可被EDTA和DTT抑制;FⅤe-1的N端序列为NH2-N-L-Y-Q-F-G-E-M-I-N;具有呈剂量依赖性的促血浆凝固作用。【结论】从蝰蛇(缅甸亚种)毒纯化出一种FⅤe-1是一个凝血因子Ⅹ的激活物,可激活凝血因子Ⅹ,但对凝血酶和纤维蛋白原的作用微弱。

关键词：蛇毒蝰蛇凝血因子Ⅹ激活物

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D-半乳糖亚急性衰老大鼠模型的建立及评价

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中国老年学杂志 2012年第4期32卷 742-745页

作者：张常娥魏伟刘英华谢静广州医学院病理生理学教研室广东广州510182 广州医学院药理学教研室暨南大学医学院病理生理学教研室华中科技大学同济医学院附属协和医院耳鼻喉科

目的建立D-半乳糖致大鼠亚急性衰老模型,对该模型进行探讨和评价。方法健康青年SD大鼠共60只,雌雄各半。分别分为2组,半乳糖组大鼠皮下每天注射半乳糖400 mg/kg,对照组每天注射等量生理盐水;老年鼠20只,雌雄各半,不做处理。实验开始后,... 详细信息

目的建立D-半乳糖致大鼠亚急性衰老模型,对该模型进行探讨和评价。方法健康青年SD大鼠共60只,雌雄各半。分别分为2组,半乳糖组大鼠皮下每天注射半乳糖400 mg/kg,对照组每天注射等量生理盐水;老年鼠20只,雌雄各半,不做处理。实验开始后,每周记录体重变化情况,第7周末测试大鼠空间学习能力,第8周末测试大鼠空间记忆能力,计算大鼠胸腺、脾脏、睾丸和卵巢的脏器系数,测定血清超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量。结果半乳糖注射4 w后,雄性大鼠的体重比对照组显著性降低(P<0.05),注射6 w后,体重差异非常显著性降低(P<0.01);半乳糖组雌雄大鼠的空间学习能力和记忆能力较对照组显著性降低(P<0.05),听力阈值显著增加(P<0.05),胸腺指数非常显著性降低(P<0.01),雄性大鼠睾丸系数显著性降低(P<0.05),血清SOD活性显著性降低(P<0.05),MDA含量显著性增高(P<0.05);其余实验结果组间比较差异没有显著性(P>0.05)。结论 D-半乳糖皮下注射8 w可以复制出与24月龄老年大鼠自然衰老程度相似的亚急性衰老模型,雄性大鼠优于雌性大鼠。

关键词： D-半乳糖亚急性衰老模型大鼠

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五步蛇毒纤溶组分FⅨcaⅠ的分离纯化和生物活性的测定

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中国药理学通报 2011年第11期27卷 1550-1555页

作者：杨亚萍刘涛陈家树林熙暨南大学分析测试中心广东广州510632 中山大学医学院药理学教研室广东广州510080 暨南大学医学院药理学系广东广州510632

目的从五步蛇(安徽产)毒分离纯化一种具有纤溶活性的组分FⅨcaⅠ,并研究其理化性质和生物活性。方法应用DEAE-Sephadex A-50阴离子交换层析、Sephadex G-75凝胶层析、Chelating Sepharose Fast Flow金属离子螯合亲和层析和Sephadex G-5... 详细信息

目的从五步蛇(安徽产)毒分离纯化一种具有纤溶活性的组分FⅨcaⅠ,并研究其理化性质和生物活性。方法应用DEAE-Sephadex A-50阴离子交换层析、Sephadex G-75凝胶层析、Chelating Sepharose Fast Flow金属离子螯合亲和层析和Sephadex G-50凝胶层析四步分离纯化目的组分FⅨcaⅠ;纤维蛋白平板法和SDS-PAGE测定FⅨcaⅠ的生物活性;通过小鼠皮下注射不同剂量的FⅨcaⅠ,测量皮下出血斑的面积并求出最小出血剂量。结果从五步蛇毒分离纯化的FⅨcaⅠ组分为单体蛋白,相对分子量23 ku,等电点为4.8。FⅨcaⅠ可降解纤维蛋白和纤维蛋白原,优先降解α链,呈时效、量效关系。蛇毒纤溶酶FⅨcaⅠ最小出血剂量为54.9μg,为非出血性蛇毒纤溶酶。结论从五步蛇(安徽产)毒分离纯化的FⅨcaⅠ是一种分子量较小,比较稳定,纤溶活性强,可直接降解纤维蛋白且非出血性的新蛇毒纤溶酶。

关键词：五步蛇 FⅨcaⅠ 蛇毒纤溶活性纯化金属蛋白酶

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调节性容积减小过程中Ca^(2+)和pH对钾通道的调控

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中国病理生理杂志 2011年第2期27卷 394-397页

作者：杨林杰王立伟陈丽新暨南大学医学院药理学教研室广东广州510632 暨南大学医学院生理学教研室广东广州510632

动物细胞在低渗环境中容积胀大时可以发生保护性的调节性容积减小(regulatory volume decrease,RVD),K+通道的开放所介导的K+外流是这一过程的重要机制。然而,由于研究技术和方法的限制,对于离子通道活动的研究往往会破坏细胞的完整性... 详细信息

动物细胞在低渗环境中容积胀大时可以发生保护性的调节性容积减小(regulatory volume decrease,RVD),K+通道的开放所介导的K+外流是这一过程的重要机制。然而,由于研究技术和方法的限制,对于离子通道活动的研究往往会破坏细胞的完整性和调节能力,因此RVD过程中整体细胞水平的K+通道活动调节仍需进一步探讨。

关键词：调节性容积减少钙瞬时受体电位通道 pH 钾通道

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远志皂苷元对新生大鼠皮质神经元的营养作用

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中国药理学与毒理学杂志 2011年第1期25卷 40-44页

作者：皮婷薛小燕林炼峰苏钜年程欣罗焕敏暨南大学医学院药理学系广东广州510632 暨南大学医学院组胚教研室广东广州510632 暨南大学药学院神经药理研究室广东广州510632 暨南大学-香港大学脑功能与健康联合实验室广东广州510632

目的研究远志皂苷元(senegenin)对新生大鼠皮质神经元的神经营养作用。方法原代培养新生24 h内SD大鼠皮质神经元,采用0.4%B27+DMEM/F12培养基制备营养缺乏模型。远志皂苷元0.5,1和2μmol.L-1及阳性对照组碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)10... 详细信息

目的研究远志皂苷元(senegenin)对新生大鼠皮质神经元的神经营养作用。方法原代培养新生24 h内SD大鼠皮质神经元,采用0.4%B27+DMEM/F12培养基制备营养缺乏模型。远志皂苷元0.5,1和2μmol.L-1及阳性对照组碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)10μg.L-1。倒置显微镜下观察各组皮质神经元的形态及平均突起生长情况;免疫荧光染色法观察远志皂苷元的营养作用,检测神经元平均突起长度;另外在营养缺乏培养条件下,通过MTT法检测神经元的存活情况。结果分别加入药物作用3d后,远志皂苷元0.5,1及2μmol.L-1均可以促进神经元突起生长,从溶媒对照组(152±46)μm分别增加至186±51,188±34及(193±43)μm,其中远志皂苷元2μmol.L-1最为显著(P<0.01),稍弱于bFGF组(203±40)μm。营养缺乏培养条件下细胞存活率显著下降,从正常培养条件下(100.0±5.4)%降至(90.8±4.6)%(P<0.01)。远志皂苷元0.5,1及2μmol.L-1可明显改善营养缺乏引起的细胞死亡,细胞存活率分别为(109.7±3.2)%,(111.3±1.6)%及(112.9±4.8)%,且有一定的浓度依赖性(r=0.784,P<0.01)。结论远志皂苷元可以促进神经元的存活,并可促进皮质神经元突起生长,具有神经营养作用。

关键词：远志皂苷元皮质神经元神经营养因子突起生长

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三种阿尔茨海默病小鼠模型的建立和比较

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中国老年学杂志 2011年第19期31卷 3749-3752页

作者：程欣马刘红徐建兵陈彦罗焕敏暨南大学医学院组胚系广东广州510632 暨南大学医学院临床医学系暨南大学医学院药理学系暨南大学-香港大学脑功能与健康联合实验室

目的建立并比较3种阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)小鼠模型的各自特点。方法 90只昆明小鼠随机分组,分别采用侧脑室Aβ25-35注射、侧脑室AlCl3注射、海马物理损伤的方法复制出3种不同的小鼠AD模型,通过Morris水迷宫检测小鼠... 详细信息

目的建立并比较3种阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)小鼠模型的各自特点。方法 90只昆明小鼠随机分组,分别采用侧脑室Aβ25-35注射、侧脑室AlCl3注射、海马物理损伤的方法复制出3种不同的小鼠AD模型,通过Morris水迷宫检测小鼠学习记忆能力,组织切片观察海马的形态学改变,Aβ1-40免疫组化染色观察海马CA1区老年斑形成情况。结果侧脑室注射AlCl3组和海马物理损伤组小鼠学习记忆能力比对照组明显降低(P<0.05,P<0.01),物理损伤组小鼠海马神经元丢失明显,Aβ1-40免疫组化染色阴性;侧脑室注射AlCl3组小鼠海马CA1区偶见神经元排列稀疏,在神经元胞体和突起周围可见Aβ1-40免疫组化反应阳性的棕黄色斑块;侧脑室注射Aβ25-35组小鼠学习记忆能力、海马CA1区形态均与对照组无明显差异,海马区可观察到Aβ1-40免疫组化反应阳性的细小斑块。结论上述三种模型均为AD研究常用,但各自模拟AD的侧重点不同,技术要求、成本价格、造模时间、持续时间等也不尽相同,研究中需灵活选择。

关键词：阿尔茨海默病小鼠模型 Aβ25-35 AlCl3 物理损伤

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复方丹参注射液抗脂多糖诱导的兔弥漫性血管内凝血

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中国病理生理杂志 2011年第3期27卷 464-468页

作者：林熙祈洁珍邱鹏新陈家树暨南大学医学院医学药理学系广东广州510632 中山大学中山医学院药理教研室广东广州510080

目的:研究复方丹参注射液对脂多糖(LPS)诱导的兔弥漫性血管内凝血(DIC)的作用。方法:用LPS诱导兔DIC模型。凝固法测定纤维蛋白原含量,全自动凝血分析仪检测活化部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶原时间(PT)和纤维蛋白原含量;全自动血细胞... 详细信息

目的:研究复方丹参注射液对脂多糖(LPS)诱导的兔弥漫性血管内凝血(DIC)的作用。方法:用LPS诱导兔DIC模型。凝固法测定纤维蛋白原含量,全自动凝血分析仪检测活化部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶原时间(PT)和纤维蛋白原含量;全自动血细胞分析仪进行血小板计数;全自动血浆分析仪测定谷丙转氨酶(ALT)以及血尿素氮(BUN);发色底物法测定蛋白C及抗凝血酶Ⅲ的活性。观察复方丹参注射液对LPS诱导的兔DIC的拮抗作用。结果:兔耳缘静脉持续滴注LPS,观察到:APTT和PT显著延长;血小板计数和纤维蛋白原含量明显减少;ALT和BUN显著升高;蛋白C和抗凝血酶Ⅲ的活性明显降低。给予复方丹参注射液后,APTT和PT的延长明显缩短;血小板计数和纤维蛋白原的含量均明显恢复;ALT和BUN显著下降;蛋白C及抗凝血酶Ⅲ的活性显著改善。结论:复方丹参注射液对LPS诱导的兔DIC有良好的拮抗作用。

关键词：复方丹参注射液肝素脂多糖类纤维蛋白原血小板

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