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暨南大学学报（自然科学与医学版） 2011年第4期32卷 379-382页

作者：闫小娟查显丰沈琦陈少华杨力健李萡李扬秋暨南大学医学院血液病研究所广东广州510632 暨南大学再生医学教育部重点实验室广东广州510632

目的:在慢性粒细胞白血病病人(CML),CD3ζ链表达明显下降,分析与CD3ζ存在互补关系的FcεRⅠγ基因在CML患者中表达水平,以了解T细胞免疫中TCR信号转导的变化情况。方法:利用SYBR GreenⅠ实时荧光定量RT-PCR法测定CML患者和健康人各20... 详细信息

目的:在慢性粒细胞白血病病人(CML),CD3ζ链表达明显下降,分析与CD3ζ存在互补关系的FcεRⅠγ基因在CML患者中表达水平,以了解T细胞免疫中TCR信号转导的变化情况。方法:利用SYBR GreenⅠ实时荧光定量RT-PCR法测定CML患者和健康人各20例的外周血单个核细胞(PBMCs)的FcεRⅠγ基因表达水平,以β2微球蛋白基因(β2MG)作为内参照,采用相对定量公式:2-ΔCt×100%,计算FcεRⅠγ链的相对mRNA表达量。结果:CML患者PBMCs中FcεRⅠγ基因表达水平明显高于健康对照组(P<0.001)。FcεRⅠγ表达水平变化与病人外周血CD3+T细胞比例无相关性。结论:CML病人中FcεRⅠγ表达上升,提示FcεRⅠγ可能在一定程度调节CD3ζ链缺陷所带来的T细胞免疫异常。

关键词：慢性粒细胞性白血病 FcεRⅠγ CD3ζ 基因表达实时荧光定量RT-PCR

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血液肿瘤病人TCR/CD3信号缺陷及其治疗策略

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暨南大学学报（自然科学与医学版） 2011年第4期32卷 357-361页

作者：李扬秋杨力建陈少华李萡暨南大学医学院血液病研究所广东广州510632 暨南大学再生医学教育部重点实验室广东广州510632

T细胞免疫缺陷导致机体监测恶性转化细胞不力,是血液肿瘤发生发展的重要原因,T细胞受体信号分子CD3复合物尤其是CD3ζ表达下降或缺失严重影响T细胞的活化功能,本文主要综述近年对血液肿瘤中T细胞受体信号传导分子CD3ζ的缺陷及其可能的... 详细信息

T细胞免疫缺陷导致机体监测恶性转化细胞不力,是血液肿瘤发生发展的重要原因,T细胞受体信号分子CD3复合物尤其是CD3ζ表达下降或缺失严重影响T细胞的活化功能,本文主要综述近年对血液肿瘤中T细胞受体信号传导分子CD3ζ的缺陷及其可能的治疗策略的研究进展。

关键词：血液肿瘤 CD3链基因基因表达免疫缺陷

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稳定表达HLA-A＊1101蛋白的K562细胞株的建立

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中国实验血液学杂志 2011年第5期19卷 1112-1116页

作者：査显丰周羽竝杨力建陈少华李萡闫小娟李扬秋暨南大学医学院血液病研究所广东广州510632 暨南大学医学院生化教研室广东广州510632 暨南大学医学院再生医学教育部重点实验室广东广州510632

本研究目的是建立稳定表达HLA-A*1101分子的K562细胞株,为研究慢性髓系白血病(CML)HLA-I限制性抗原特异T细胞的细胞毒作用提供靶细胞。利用RT-PCR从CML患者外周血单个细胞中扩增HLA-A*1101基因全长序列;利用重组PCR将2A肽连接子(D-V-E-X... 详细信息

本研究目的是建立稳定表达HLA-A*1101分子的K562细胞株,为研究慢性髓系白血病(CML)HLA-I限制性抗原特异T细胞的细胞毒作用提供靶细胞。利用RT-PCR从CML患者外周血单个细胞中扩增HLA-A*1101基因全长序列;利用重组PCR将2A肽连接子(D-V-E-X-N-P-G-P)基因连接到HLA-A*1101的3'端,并将其定向克隆入带有增强型绿色荧光蛋白基因的真核表达载体pEGFP-N3,构成HLA-A*1101-T2A-EGFP转录盒的重组表达载体;利用电穿孔技术将pEGFP-N3或重组质粒转染入K562细胞,利用荧光显微镜监测绿色荧光蛋白的表达,通过G418筛选出有效转染pEGFP-N3或HLA-A*1101-T2A-EGFP载体的K 562细胞株;利用RT-PCR和流式细胞术检测HLA-A*1101基因和蛋白的表达情况。结果表明,成功构建了以2A肽基因为连接子的HLA-A*1101-T2A-EGFP真核表达载体;重组质粒转染的K562细胞经G418筛选2个月后,获得2株表达绿色荧光蛋白的K562稳定细胞株HLA-A*1101+K562和pEGFP-N3+K562。RT-PCR检测证明,HLA-A*1101+K562细胞表达HLA-A*1101基因,而pEGFP-N3+K562细胞则不表达HLA-A*1101;流式细胞术分析显示,HLA-A*1101和GFP蛋白双阳性HLA-A*1101+K562细胞占88.5%,明显高于pEGFP-N3+K562细胞(0.698%)。结论:建立了一个简单有效地筛选HLA-A*1101+K562细胞株的方法,并成功地建立了膜稳定表达HLA-A*1101蛋白的K562细胞株,为进一步研究CML的特异性细胞免疫提供工具细胞。

关键词：慢性髓系白血病 K562细胞 HLA-A＊1101 基因克隆基因转导

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职业铅接触工人外周血T细胞Vβ基因谱系明显缺失

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细胞与分子免疫学杂志 2011年第12期27卷 1322-1324页

作者：刘思初李萡牛宇哲刘薇薇杨志前陈少华杨力建李扬秋暨南大学医学院血液病研究所广东广州510632 暨南大学医学院教育部再生医学重点实验室广东广州510632 广州市第十二人民医院广东广州510620

目的:分析职业铅接触工人外周血中T细胞受体Vβ基因(TCR Vβ)谱系分布和克隆性特点,进一步了解铅接触后对T细胞免疫的影响。方法:利用RT-PCR分别检测6例职业铅接触工人和6例健康体检者的外周血中各TCR Vβ亚家族的表达情况;阳性产物经... 详细信息

目的:分析职业铅接触工人外周血中T细胞受体Vβ基因(TCR Vβ)谱系分布和克隆性特点,进一步了解铅接触后对T细胞免疫的影响。方法:利用RT-PCR分别检测6例职业铅接触工人和6例健康体检者的外周血中各TCR Vβ亚家族的表达情况;阳性产物经荧光素标记和基因扫描分析其CDR3长度以了解T细胞克隆性。结果:所有健康体检者均可检测到24个Vβ亚家族并呈多克隆,而6例职业铅接触工人外周血TCR Vβ亚家族表现明显的限制性利用,仅能检测到1～7个,并且多数所检测到的Vβ亚家族T细胞呈现为寡克隆或双克隆增殖,发生克隆性改变的亚家族主要集中在Vβ1和Vβ16。结论:职业铅接触可能在不同程度上影响机体TCR Vβ谱系的利用和克隆性改变,可能与铅的免疫毒性有关。

关键词：铅 TCR Vβ基因基因扫描 T细胞克隆性

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pIRES2-EGFP-BCL11B真核表达载体体外表达的动态分析

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中国病理生理杂志 2011年第5期27卷 944-950页

作者：陈思黄欣杨力建陈少华郑海涛沈琦李萡李扬秋暨南大学医学院血液病研究所深圳大学医学院免疫学教研室广东深圳518060 教育部再生医学重点实验室广东广州510632

目的:研究真核表达载体pIRES2-EGFP-BCL11B(B细胞白血病/淋巴瘤11B基因)在K293(人胚肾细胞株)和Raji(人Burkitt淋巴瘤细胞株)细胞中的表达情况。方法:分别利用脂质体和核转染技术将真核表达载体pIRES2-EGFP-BCL11B(pBCL11B)转染至K293和... 详细信息

目的:研究真核表达载体pIRES2-EGFP-BCL11B(B细胞白血病/淋巴瘤11B基因)在K293(人胚肾细胞株)和Raji(人Burkitt淋巴瘤细胞株)细胞中的表达情况。方法:分别利用脂质体和核转染技术将真核表达载体pIRES2-EGFP-BCL11B(pBCL11B)转染至K293和Raji细胞中,并设立空质粒组(pI2)和空转染组(MOCK)作为对照。通过荧光显微镜和流式细胞仪检测转染后48 h各组EGFP的表达,确定转染效率。通过荧光实时定量PCR(Taqman)技术检测转染后24 h各组BCL11B mRNA的表达情况,通过Western blotting技术检测转染后48 h各组BCL11B蛋白的表达情况。高分辨率活细胞成像系统动态观察转染后36-72 h重组质粒在Raji细胞增殖过程中的表达。结果:K293细胞pBCL11B、pI2和MOCK组的转染效率分别为(71.23±4.62)%、(70.45±3.58)%和(0.30±0.10)%,而Raji细胞各组的转染效率分别为(23.12±5.94)%、(22.48±6.25)%和(0.30±0.10)%。实时定量PCR和Western blotting结果显示转染后pBCL11B组在mRNA和蛋白水平均能检测到BCL11B基因的有效表达,BCL11B的表达量均明显高于pI2组和MOCK组(P<0.05)。活细胞追踪显示转染后36-72 h重组质粒在细胞中可稳定表达且转染后的细胞可以正常分裂增殖。结论:系统分析了真核表达载体pIRES2-EGFP-BCL11B转染至K293和Raji细胞的表达变化特点,转染后可以检测到该基因的有效上调,研究结果为下一步转染正常人T细胞奠定了基础。

关键词：基因,BCL11B 真核表达载体 K293细胞 Raji细胞

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抗原特异TCR α和β链基因克隆及分子空间结构预测

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第三军医大学学报 2011年第4期33卷 349-352页

作者：尹青松谭获陈少华杨力建李萡叶静梅李扬秋河南省肿瘤医院郑州450008 暨南大学医学院血液病研究所广州510632 广州医学院第一附属医院肿瘤血液中心广州510260 暨南大学再生医学教育部重点实验室

目的扩增弥漫大B细胞淋巴瘤(diffuse large B cell lymphoma,DLBCL)相关抗原特异T细胞克隆的全长TCRα和β链基因序列,并对其三维空间结构进行预测。方法从已鉴定的2例伴有克隆性增殖TCR Vα6和Vβ13亚家族T细胞的DLBCL患者外周血中克... 详细信息

目的扩增弥漫大B细胞淋巴瘤(diffuse large B cell lymphoma,DLBCL)相关抗原特异T细胞克隆的全长TCRα和β链基因序列,并对其三维空间结构进行预测。方法从已鉴定的2例伴有克隆性增殖TCR Vα6和Vβ13亚家族T细胞的DLBCL患者外周血中克隆全长TCRα和β基因序列,利用Primer Premier 5.0分析软件推算其相应的氨基酸序列,并通过自动化蛋白质模建服务器SWISS-MODEL进行三维空间结构预测。然后利用蛋白质三维图像分析软件Rasmol对所获得的TCR三维空间结构进行显示和分析。结果获得DLBCL相关抗原特异TCRα6和β13全长基因序列及其氨基酸序列。2例患者的TCR Vα6的空间结构与PDB ID:3ffcD模型相似,序列同源性分别为92.16%和91.71%;而2个TCR Vβ13也均具有同一个空间结构模型PDB ID:2ialD,序列同源性分别为92.95%和92.18%。结论来自不同DLBCL患者外周血中克隆性增殖的TCR Vα6或Vβ13亚家族T细胞的TCR具有高度同源性的空间结构,提示其可能识别相同的肿瘤抗原表位。

关键词： T细胞受体 CDR3区同源建模弥漫大B细胞淋巴瘤

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职业性三氯乙烯药疹样皮炎患者周围血T细胞抗原受体Vβ谱系多样性初探

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中国职业医学 2011年第1期38卷 24-27页

作者：左璨粲梁赵佳孙润陆李萡刘薇薇陈少华杨力健陈嘉榆余卫李扬秋暨南大学医学院血液病研究所广东广州510632 暨南大学再生医学教育部重点实验室 510632 广州市第十二人民医院 510620

目的了解职业性三氯乙烯（TCE）药疹样皮炎（OMLDT）患者周围血T细胞抗原受体（TCR）Vβ亚家族基因谱系及其克隆性增殖情况。方法利用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）分别检测10名健康人和5例OMLDT患者周围血中24个TCR Vβ基因的互补决定... 详细信息

目的了解职业性三氯乙烯（TCE）药疹样皮炎（OMLDT）患者周围血T细胞抗原受体（TCR）Vβ亚家族基因谱系及其克隆性增殖情况。方法利用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）分别检测10名健康人和5例OMLDT患者周围血中24个TCR Vβ基因的互补决定区3（CDR3）。PCR产物进一步经荧光标记和基因扫描分析CDR3长度而确定T细胞的克隆性。结果 10名健康人可检出所有24个TCR Vβ亚家族,5例OMLDT患者周围血仅检出1~6个Vβ亚家族阳性产物,平均表达（2.8±1.9）个Vβ亚家族,β亚家族检出数显著少于健康人（P〈0.01）。OMLDT患者周围血中存在克隆性增殖T细胞,其中以Vβ16亚家族出现克隆性增殖的频率较高。结论 OMLDT患者周围血中TCR Vβ谱系发生改变,这可能是接触TCE后机体细胞免疫功能的异常变化。

关键词：职业性三氯乙烯药疹样皮炎(OMLDT) TCRVβ基因 T细胞亚家族克隆性T细胞

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从炎症调节因子到肿瘤抑制因子——A20的特点及其在淋巴细胞肿瘤发生中的作用

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循证医学 2011年第1期11卷 54-59页

作者：李扬秋杨力建陈少华李萡暨南大学医学院血液病研究所广州510632 暨南大学再生医学教育部重点实验室广州510632

A20是炎症信号传导的中心调节因子—NF-κB抑制因子,而近年研究发现A20更重要的功能是作为一个肿瘤抑制因子,其缺失在淋巴细胞肿瘤的发生中有重要的作用。综述近年所报道的A20生物学功能、分子机制及其在淋巴细胞肿瘤中调节作用的研究... 详细信息

A20是炎症信号传导的中心调节因子—NF-κB抑制因子,而近年研究发现A20更重要的功能是作为一个肿瘤抑制因子,其缺失在淋巴细胞肿瘤的发生中有重要的作用。综述近年所报道的A20生物学功能、分子机制及其在淋巴细胞肿瘤中调节作用的研究进展。

关键词：淋巴细胞肿瘤 A20 肿瘤抑制因子

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A20的免疫调节作用及其临床意义

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中国实验血液学杂志 2011年第4期19卷 851-856页

作者：李扬秋暨南大学医学院血液病研究所暨南大学教育部再生医学重点实验室广东广州510632

A20最初是作为肿瘤坏死因子α(TNFα)诱导蛋白3(TNFA IP3)而鉴定的,它是炎症信号传导的中心调节因子———NF-κB抑制因子,在天然免疫和过继性免疫调节中发挥了重要作用。近期研究提示,A20是一个肿瘤抑制因子。A20缺失与炎症介导的自身... 详细信息

A20最初是作为肿瘤坏死因子α(TNFα)诱导蛋白3(TNFA IP3)而鉴定的,它是炎症信号传导的中心调节因子———NF-κB抑制因子,在天然免疫和过继性免疫调节中发挥了重要作用。近期研究提示,A20是一个肿瘤抑制因子。A20缺失与炎症介导的自身免疫性疾病和淋巴细胞肿瘤的发生发展关系密切。近期有关A20在免疫细胞中的表达特点和生物学功能,在天然免疫、体液和细胞免疫中的调节作用,在淋巴细胞肿瘤中缺失情况以及在自身免疫性疾病中的异常表达等等的研究进展提示:有必要深入认识A20的临床意义和探讨其在诱导免疫耐受、肿瘤免疫调节治疗和抗病毒治疗等方面的应用价值。

关键词： A20 NF-κB抑制因子免疫调节淋巴细胞肿瘤自身免疫性疾病肿瘤抑制因子

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T-ALL中TCR位点相关的异常基因重排鉴定

T-ALL中TCR位点相关的异常基因重排鉴定

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第13届全国实验血液学会议

作者：郑海涛陈少华杨力建李萡李扬秋暨南大学医学院血液病研究所暨南大学再生医学教育部重点实验室

随着分子遗传学研究方法的不断提高,大约已在35%左右的T-ALL中发现具有染色体易位并形成融合基因,一些染色体易位可能与白血病的不同细胞形态和免疫表型相关,同时也与疾病的预后相关。易位的特点主要是基因位置的改变,包括将一个癌基因... 详细信息

随着分子遗传学研究方法的不断提高,大约已在35%左右的T-ALL中发现具有染色体易位并形成融合基因,一些染色体易位可能与白血病的不同细胞形态和免疫表型相关,同时也与疾病的预后相关。易位的特点主要是基因位置的改变,包括将一个癌基因放置于一个强调节元件的控制下,而使一个沉默的原癌基因异常活化,或者通过产生融合基因和癌基因融合蛋白,导致细胞分化阻滞和诱导细胞转化,而引起系列的肿瘤发生作用。在T细胞发育过程中,由于TCR基因重排等特点,TCR的启动子和增强子非常活跃,TCR基因片段与原癌基因并置导致原癌基因的异常活化。本研究首先利用精细定位的寡核苷酸阵列比较基因组杂交(fine-tiling array comparative genomic

关键词：基因重排染色体易位 TCR T-ALL 点相关

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