检索结果-内蒙古大学图书馆

中国病理生理杂志 2011年第5期27卷 944-950页

作者：陈思黄欣杨力建陈少华郑海涛沈琦李萡李扬秋暨南大学医学院血液病研究所深圳大学医学院免疫学教研室广东深圳518060 教育部再生医学重点实验室广东广州510632

目的:研究真核表达载体pIRES2-EGFP-BCL11B(B细胞白血病/淋巴瘤11B基因)在K293(人胚肾细胞株)和Raji(人Burkitt淋巴瘤细胞株)细胞中的表达情况。方法:分别利用脂质体和核转染技术将真核表达载体pIRES2-EGFP-BCL11B(pBCL11B)转染至K293和... 详细信息

目的:研究真核表达载体pIRES2-EGFP-BCL11B(B细胞白血病/淋巴瘤11B基因)在K293(人胚肾细胞株)和Raji(人Burkitt淋巴瘤细胞株)细胞中的表达情况。方法:分别利用脂质体和核转染技术将真核表达载体pIRES2-EGFP-BCL11B(pBCL11B)转染至K293和Raji细胞中,并设立空质粒组(pI2)和空转染组(MOCK)作为对照。通过荧光显微镜和流式细胞仪检测转染后48 h各组EGFP的表达,确定转染效率。通过荧光实时定量PCR(Taqman)技术检测转染后24 h各组BCL11B mRNA的表达情况,通过Western blotting技术检测转染后48 h各组BCL11B蛋白的表达情况。高分辨率活细胞成像系统动态观察转染后36-72 h重组质粒在Raji细胞增殖过程中的表达。结果:K293细胞pBCL11B、pI2和MOCK组的转染效率分别为(71.23±4.62)%、(70.45±3.58)%和(0.30±0.10)%,而Raji细胞各组的转染效率分别为(23.12±5.94)%、(22.48±6.25)%和(0.30±0.10)%。实时定量PCR和Western blotting结果显示转染后pBCL11B组在mRNA和蛋白水平均能检测到BCL11B基因的有效表达,BCL11B的表达量均明显高于pI2组和MOCK组(P<0.05)。活细胞追踪显示转染后36-72 h重组质粒在细胞中可稳定表达且转染后的细胞可以正常分裂增殖。结论:系统分析了真核表达载体pIRES2-EGFP-BCL11B转染至K293和Raji细胞的表达变化特点,转染后可以检测到该基因的有效上调,研究结果为下一步转染正常人T细胞奠定了基础。

关键词：基因,BCL11B 真核表达载体 K293细胞 Raji细胞

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ITP中T细胞活化信号分子c-Cbl和Cbl-b的表达变化

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暨南大学学报（自然科学与医学版） 2016年第6期37卷 472-475页

作者：钟隽陈少华郁志陆帅谭家雄杨力建李萡李扬秋暨南大学附属第一医院血液科广东广州510632 暨南大学医学院血液病研究所广东广州510632 暨南大学再生医学教育部重点实验室广东广州510632

目的:分析免疫性血小板减少症(ITP)中T细胞活化信号通路相关分子Cbl-b和c-Cbl基因的表达情况.方法:利用SYBR Green实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)方法检测18例ITP患者外周血单个核细胞(PBMC)中Cbl-b和c-Cbl基因的表达水平,20例健... 详细信息

目的:分析免疫性血小板减少症(ITP)中T细胞活化信号通路相关分子Cbl-b和c-Cbl基因的表达情况.方法:利用SYBR Green实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)方法检测18例ITP患者外周血单个核细胞(PBMC)中Cbl-b和c-Cbl基因的表达水平,20例健康成人作为对照.结果:ITP组Cbl-b的表达水平(中位数为0.091%)与健康成人组Cbl-b的表达水平(中位数为0.366%)相比,明显降低(P<0.001);而c-Cbl基因在ITP组中的表达水平(中位数为0.372%)与健康成人组的表达水平(中位数为0.298%)相比没有统计学差异,但c-Cbl基因在ITP女性患者样本中的表达水平(中位数为0.236%)明显低于男性患者样本c-Cbl的表达水平(中位数为0.479%)(P=0.039).结论:ITP患者外周血中Cbl-b表达下调,可能是其T细胞免疫异常活化的原因之一.

关键词：免疫性血小板减少症 Cbl-b c-Cbl 基因表达

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驱铅治疗后铅中毒患者CD3γ和CD3δ及CD3ε链mRNA水平的变化

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细胞与分子免疫学杂志 2016年第4期32卷 508-511页

作者：郭理杏肖彦凯刘思初李萡杨志前张伊利刘薇薇李扬秋暨南大学医学院血液病研究所广东广州510632 再生医学教育部重点实验室广东广州510632 广州市第十二人民医院广东广州510620

目的了解驱铅治疗后铅中毒患者外周血中T细胞受体信号转导分子CD3γ、CD3δ、CD3ε链表达情况。方法采用实时荧光定量PCR分别检测9例健康人及16例铅中毒患者临床上进行驱铅治疗前后外周血单个核细胞中CD3γ、CD3δ、CD3ε链mRNA水平,以... 详细信息

目的了解驱铅治疗后铅中毒患者外周血中T细胞受体信号转导分子CD3γ、CD3δ、CD3ε链表达情况。方法采用实时荧光定量PCR分别检测9例健康人及16例铅中毒患者临床上进行驱铅治疗前后外周血单个核细胞中CD3γ、CD3δ、CD3ε链mRNA水平,以β2微球蛋白(β2M)基因为内参基因,根据相对定量公式2-△Ct×100%计算各基因表达水平。采用Spearman秩相关分析健康人和铅中毒患者驱铅治疗前后CD3γ、CD3δ、CD3ε链mRNA水平相关性。结果铅中毒患者驱铅治疗前后CD3γ链mRNA水平与健康人相比无明显差异;驱铅治疗前后CD3δ链mRNA水平均显著低于健康人,驱铅治疗后CD3δ链mRNA水平较治疗前更低;驱铅治疗前CD3ε链mRNA水平与健康人相比显著升高,驱铅治疗后CD3ε链mRNA水平有所恢复。健康人中CD3γ链与CD3δ链、CD3γ链与CD3ε链、CD3δ链与CD3ε链均无相关性;铅中毒患者驱铅治疗前CD3γ链与CD3δ链,CD3γ链与CD3ε链,CD3δ链与CD3ε链均呈显著正相关,驱铅治疗后仅CD3δ链与CD3ε链呈显著正相关。结论铅中毒患者CD3γ、CD3δ、CD3ε链mRNA水平呈不同趋势的改变,提示铅中毒后对机体免疫系统有一定影响并且在不同基因之间存在差异;驱铅治疗后体内铅负荷降低,CD3δ链表达水平仍然与健康人不同,说明驱铅治疗后机体的免疫功能仍存在异常。

关键词：铅荧光定量PCR CD3γ链 CD3δ链 CD3ε链 mRNA水平

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PML-RARα245与hGM-CSF双基因DNA疫苗的构建与表达

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江苏医药 2013年第8期39卷 878-881,F0002页

作者：胡刚周羽竝岑东芝杨力建陈少华李扬秋惠东县人民医院内二科广东省516300 暨南大学医学院血液病研究所暨南大学医学院生化教研室暨南大学再生医学教育部重点实验室

目的采用长度为245bp的急性早幼粒细胞白血病PML-RARα融合基因片段构建新的PML-RARα与hGM-CSF真核双表达载体。方法用RT-PCR技术从NB4细胞的RNA中扩增长度为245bp的PML-RARα基因片段,PCR技术从pORF-hGM-CSF质粒中扩增出hGM-CSF基因,... 详细信息

目的采用长度为245bp的急性早幼粒细胞白血病PML-RARα融合基因片段构建新的PML-RARα与hGM-CSF真核双表达载体。方法用RT-PCR技术从NB4细胞的RNA中扩增长度为245bp的PML-RARα基因片段,PCR技术从pORF-hGM-CSF质粒中扩增出hGM-CSF基因,分别将两基因片段连接到pIRES质粒的多克隆位点A和B中,构建真核双表达载体。用酶切和序列分析方法验证所构建载体的正确性。将重组质粒转染K562细胞,利用RT-PCR和点杂交技术检测重组质粒在真核细胞中的转录和翻译情况。结果双酶切结果证明重组质粒中含有相应大小的PML-RARα基因片段及hGM-CSF基因,序列分析证明重组质粒中插入片段的碱基序列完全正确。该重组质粒能够在真核细胞中正常转录和翻译。结论成功构建了含有PML-RARα245及hGM-CSF的双表达载体,为筛选合适的抗原片段用于构建治疗急性早幼粒细胞白血病的PML-RARαDNA疫苗提供重要资料。

关键词： PML-RARα融合基因 hGM-CSF基因急性早幼粒细胞白血病 DNA疫苗

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职业苯接触后外周血中T细胞FcεRIγ基因表达下调

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细胞与分子免疫学杂志 2012年第7期28卷 743-744页

作者：范静婧陈云玉王婧薷李萡杨力建陈少华巫进明李扬秋暨南大学医学院血液病研究所广东广州510632 广州市第十二人民医院广东广州510620 暨南大学再生医学教育部重点实验室广东广州510632

目的:了解职业苯接触及慢性苯中毒工人外周血中T细胞受体信号传导通路FcεRIγ基因的表达情况。方法:利用实时荧光定量PCR法分别检测22例职业苯接触工人、12例慢性苯中毒工人及9例正常人外周血单个核细胞(PBMC)中FcεRIγ基因表达情况... 详细信息

目的:了解职业苯接触及慢性苯中毒工人外周血中T细胞受体信号传导通路FcεRIγ基因的表达情况。方法:利用实时荧光定量PCR法分别检测22例职业苯接触工人、12例慢性苯中毒工人及9例正常人外周血单个核细胞(PBMC)中FcεRIγ基因表达情况。结果:正常人、职业苯接触及慢性苯中毒工人FcεRIγ基因表达水平的中位数分别为37.50%、12.65%、7.41%,职业苯接触及慢性苯中毒工人FcεRIγ基因表达与正常成人相比均显著下降(P<0.05);尽管慢性苯中毒工人外周血中FcεRIγ基因表达水平降低程度较职业苯接触更为明显,但二者之间无统计学意义(P>0.05)。结论:职业苯接触及慢性苯中毒工人外周血中T细胞FcεRIγ基因表达水平均下调,这种表达异常可能与接触苯后机体细胞免疫功能障碍有关。

关键词：苯 FcεRIγ基因表达实时定量PCR

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抗原特异TCR α和β链基因克隆及分子空间结构预测

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第三军医大学学报 2011年第4期33卷 349-352页

作者：尹青松谭获陈少华杨力建李萡叶静梅李扬秋河南省肿瘤医院郑州450008 暨南大学医学院血液病研究所广州510632 广州医学院第一附属医院肿瘤血液中心广州510260 暨南大学再生医学教育部重点实验室

目的扩增弥漫大B细胞淋巴瘤(diffuse large B cell lymphoma,DLBCL)相关抗原特异T细胞克隆的全长TCRα和β链基因序列,并对其三维空间结构进行预测。方法从已鉴定的2例伴有克隆性增殖TCR Vα6和Vβ13亚家族T细胞的DLBCL患者外周血中克... 详细信息

目的扩增弥漫大B细胞淋巴瘤(diffuse large B cell lymphoma,DLBCL)相关抗原特异T细胞克隆的全长TCRα和β链基因序列,并对其三维空间结构进行预测。方法从已鉴定的2例伴有克隆性增殖TCR Vα6和Vβ13亚家族T细胞的DLBCL患者外周血中克隆全长TCRα和β基因序列,利用Primer Premier 5.0分析软件推算其相应的氨基酸序列,并通过自动化蛋白质模建服务器SWISS-MODEL进行三维空间结构预测。然后利用蛋白质三维图像分析软件Rasmol对所获得的TCR三维空间结构进行显示和分析。结果获得DLBCL相关抗原特异TCRα6和β13全长基因序列及其氨基酸序列。2例患者的TCR Vα6的空间结构与PDB ID:3ffcD模型相似,序列同源性分别为92.16%和91.71%;而2个TCR Vβ13也均具有同一个空间结构模型PDB ID:2ialD,序列同源性分别为92.95%和92.18%。结论来自不同DLBCL患者外周血中克隆性增殖的TCR Vα6或Vβ13亚家族T细胞的TCR具有高度同源性的空间结构,提示其可能识别相同的肿瘤抗原表位。

关键词： T细胞受体 CDR3区同源建模弥漫大B细胞淋巴瘤

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职业性三氯乙烯药疹样皮炎患者周围血T细胞抗原受体Vβ谱系多样性初探

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中国职业医学 2011年第1期38卷 24-27页

作者：左璨粲梁赵佳孙润陆李萡刘薇薇陈少华杨力健陈嘉榆余卫李扬秋暨南大学医学院血液病研究所广东广州510632 暨南大学再生医学教育部重点实验室 510632 广州市第十二人民医院 510620

目的了解职业性三氯乙烯（TCE）药疹样皮炎（OMLDT）患者周围血T细胞抗原受体（TCR）Vβ亚家族基因谱系及其克隆性增殖情况。方法利用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）分别检测10名健康人和5例OMLDT患者周围血中24个TCR Vβ基因的互补决定... 详细信息

目的了解职业性三氯乙烯（TCE）药疹样皮炎（OMLDT）患者周围血T细胞抗原受体（TCR）Vβ亚家族基因谱系及其克隆性增殖情况。方法利用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）分别检测10名健康人和5例OMLDT患者周围血中24个TCR Vβ基因的互补决定区3（CDR3）。PCR产物进一步经荧光标记和基因扫描分析CDR3长度而确定T细胞的克隆性。结果 10名健康人可检出所有24个TCR Vβ亚家族,5例OMLDT患者周围血仅检出1~6个Vβ亚家族阳性产物,平均表达（2.8±1.9）个Vβ亚家族,β亚家族检出数显著少于健康人（P〈0.01）。OMLDT患者周围血中存在克隆性增殖T细胞,其中以Vβ16亚家族出现克隆性增殖的频率较高。结论 OMLDT患者周围血中TCR Vβ谱系发生改变,这可能是接触TCE后机体细胞免疫功能的异常变化。

关键词：职业性三氯乙烯药疹样皮炎(OMLDT) TCRVβ基因 T细胞亚家族克隆性T细胞

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B-ALL患者外周血γδT细胞TCR亚家族谱系分布和增殖特点

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免疫学杂志 2013年第2期29卷 147-151页

作者：胡峻岩吴秀丽陈少华杨力建李萡王亮李扬秋暨南大学医学院血液病研究所广州510632 广州医学院第三附属医院急诊科 510150 暨南大学第一附属医院肿瘤科广州510632 再生医学教育部重点实验室

目的了解急性B淋巴细胞白血病(B-ALL)患者外周血T细胞的T细胞受体(TCR)Vγ和Vδ亚家族的T细胞谱系分布和克隆性增殖情况。方法利用反转录-多聚酶链反应(RT-PCR)方法检测14例B-ALL患者外周血单个核细胞中3个TCR Vγ和8个TCR Vδ亚家族基... 详细信息

目的了解急性B淋巴细胞白血病(B-ALL)患者外周血T细胞的T细胞受体(TCR)Vγ和Vδ亚家族的T细胞谱系分布和克隆性增殖情况。方法利用反转录-多聚酶链反应(RT-PCR)方法检测14例B-ALL患者外周血单个核细胞中3个TCR Vγ和8个TCR Vδ亚家族基因谱系的分布情况;进一步经荧光素标记和基因扫描分析TCR Vγ和TCR Vδ亚家族基因的互补决定区3(CDR3),以检测T细胞克隆性。10例健康成人外周血作为对照。结果 B-ALL患者外周血中TCR Vγ亚家族表达率降低,其中VγII亚家族表达率降低与健康对照组的差异具有统计学意义(P=0.006)。B-ALL患者外周血中Vδ1(57.1%)、Vδ2(42.9%)和Vδ3(14.3%)亚家族表达率均低于健康对照组,且差异有统计学意义(P=0.024,0.006,0.001)。此外,在B-ALL患者外周血中可以检测到在健康人中未检测到的Vδ4(14.3%)和Vδ5(14.3%)亚家族;且Vδ6(28.6%)、Vδ7(21.4%,)和Vδ8(35.7%)亚家族表达率也高于健康对照组。B-ALL患者外周血中存在克隆性增殖的Vγ和Vδ亚家族T细胞,其中,Vδ8亚家族T细胞寡克隆增殖的发生频率最高(35.7%),其次为Vδ6(28.6%)和Vδ7(21.4%)亚家族T细胞。结论 B-ALL患者外周血TCR Vγ和TCR Vδ亚家族T细胞出现限制性表达和克隆性增殖,其中高频率出现的寡克隆性增殖的Vδ亚家族T细胞可能与体内存在的白血病抗原相关。

关键词：急性B淋巴细胞白血病 γδT细胞 T细胞受体基因扫描克隆性

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靶向抑制Molt-4 T细胞增殖的Smo-siRNA:筛选和评价

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中国组织工程研究 2018年第13期22卷 2104-2108页

作者：朱华民王旭徐艳杨力建陈少华吴秀丽李扬秋南方医科大学深圳医院广东省深圳市518102 暨南大学医学院血液病研究所广东省广州市510632 暨南大学再生医学教育部重点实验室广东省广州市510632

背景:研究表明,T淋巴细胞白血病的发生发展与Hedgehog通路的异常有关。Smo基因是该信号通路中的关键基因,控制着Hedgehog信号向细胞膜内的传递。目的:筛选一种可以高效抑制Molt-4细胞株增殖和诱导凋亡的小干扰RNA(Smo-siRNA)。方法:(1)... 详细信息

背景:研究表明,T淋巴细胞白血病的发生发展与Hedgehog通路的异常有关。Smo基因是该信号通路中的关键基因,控制着Hedgehog信号向细胞膜内的传递。目的:筛选一种可以高效抑制Molt-4细胞株增殖和诱导凋亡的小干扰RNA(Smo-siRNA)。方法:(1)根据siRNA设计原理,设计并化学合成Smo-siRNA 1,2,3以及无关干扰序列的阴性对照siRNA;(2)利用Nuclefector^(TM)核转染仪将以上Smo-siRNA分别转入人T淋巴细胞白血病细胞株(Molt-4细胞),分别在转染24,48,72 h采用qRT-PCR检测Smo mRNA相对表达水平,CCK-8法检测细胞生长抑制率,Hoechst33258染色观察细胞凋亡形态,流式细胞仪(Annexin V/PI法)检测细胞凋亡率。结果与结论:(1)利用Nuclefector^(TM)核转染仪成功将Smo-siRNA转入Molt-4细胞,Smo-siRNA 1沉默效果最佳,有效降低Molt-4细胞Smo mRNA表达水平(P<0.05),并且以48 h作用效果最明显;(2)转染后24 h,Smo-siRNA可明显抑制Molt-4细胞生长(P<0.05);(3)Hoechst染色证实Molt-4细胞符合凋亡的细胞形态学变化;(4)与对照组比较,Smo-siRNA1组细胞的凋亡率明显增加(P<0.05);(5)结果表明,小干扰RNA下调Molt-4细胞Smo基因表达可明显抑制Molt-4细胞增殖,并促进凋亡,提示Smo-siRNA具有作为T细胞白血病靶向基因治疗或者协同治疗的潜能。

关键词：干细胞小干扰RNA Smo基因 Molt-4细胞细胞凋亡细胞增殖

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系统性红斑狼疮中A20表达特点的研究

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中国病理生理杂志 2015年第3期31卷 518-523页

作者：张帆朱丽花王旭陈少华杨力建吴秀丽李萡周毅李扬秋广东药学院生命科学与生物制药学院广东省生物技术候选药物研究重点实验室广东广州510006 暨南大学医学院血液病研究所广东广州510632 暨南大学医学院血液病研究所广东广州510632 暨南大学第一附属医院风湿免疫科广东广州510632 暨南大学再生医学教育部重点实验室广东广州510632

目的:了解系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血中肿瘤坏死因子α诱导蛋白3(TNFAIP3,也称A20)、核因子κB(NF-κB)、黏膜相关淋巴瘤易位基因1(MALT1)及其转录本1(MALT1V1)的mRNA表达特点。方法:采用real-time PCR法检测21例SLE患者(其中合并... 详细信息

目的:了解系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血中肿瘤坏死因子α诱导蛋白3(TNFAIP3,也称A20)、核因子κB(NF-κB)、黏膜相关淋巴瘤易位基因1(MALT1)及其转录本1(MALT1V1)的mRNA表达特点。方法:采用real-time PCR法检测21例SLE患者(其中合并硬皮症2例,合并类风湿关节炎1例,合并淋巴瘤1例)及31例健康人外周血单个核细胞(PBMC)中MALT1、A20、NF-κB和MALT1V1 mRNA的表达情况。结果:SLE样本中,A20 mRNA表达水平较健康人明显降低(P<0.01),MALT1和NF-κB也较健康人降低(P<0.01)。在健康人组,A20和NF-κB mRNA的表达水平未呈现明显相关性,MALT1和NF-κB则呈正相关(P<0.05);而在SLE组中,A20和NF-κB mRNA则显示出显著正相关(P<0.05),MALT1和NF-κB则不存在相关性。SLE中MALT1V1表达量显著低于正常人(P<0.05),相关性研究还显示,健康人中A20和MALT1V1存在正相关关系(P<0.01),在SLE中则不存在(P>0.05)。结论:本研究首先提供了MALT1-A20-NF-κB通路在SLE中的表达特点。SLE患者异常低表达A20,这可能与患者低免疫耐受相关,其与NF-κB表达的正相关性情况可能与其它因素的调控有关,有待进一步证实。

关键词：系统性红斑狼疮 A20 MALT1 NF-κB

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