检索结果-内蒙古大学图书馆

研究背景:Elf-1(E74-like factor 1)是Ets转录因子家族中的一员,为T细胞特异的转录因子,调节T细胞受体信号通路关键分子CD3ζ等基因的表达,在多种自身免疫系统疾病表达异常。目的:本研究目的主要在于了解再生障碍性贫血(AA)患者外周血中T细胞特异性转录因子Elf-1基因表达情况。方法:利用SYB R GreenⅠ荧光定量PCR分别检测21例AA患者和20例健康人外周血单个核细胞的Elf-1基因表达情况,以β2微球蛋白基因(β2m)作为内参,根据相对定量公式(2-△Ct)分别计算AA患者和健康人Elf-1基因表达水平。结果:AA患者和健康人外周血中Elf-1基因表达水平分别为3.95±3.56和2.04±1.32,与健康人相比,AA患者外周血中Elf-1基因表达水平显著高于健康人(P<0.05)。结论:本研究首次报道AA患者外周血中Elf-1基因表达水平的变化,Elf-1基因表达上调可能通过影响TCR信号传导而导致T细胞异常活化,与AA的发生有一定相关性。

关键词：再生障碍性贫血 Elf-1基因

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再生障碍性贫血患者外周血T细胞中CD3ζ基因3′-UT R剪接体表达及单核苷酸多态性研究

再生障碍性贫血患者外周血T细胞中CD3ζ基因3′-UT R剪接体表达及...

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第八届全国免疫学学术大会

作者：方苏李萡牛宇哲杨力建陈少华李扬秋暨南大学医学院血液病研究所暨南大学再生医学教育部重点实验室

研究背景:再生障碍性贫血(AA)是功异异常活化T细胞介导的以造血组织为靶器官的自身免疫性疾病。T细胞受体(TCR)和CD3分子形成的复合物将细胞外的抗原刺激通过信号传导途径转化为T细胞功能活化。CD3ζ链由于其含有3个ITAM基序,因而在整个... 详细信息

研究背景:再生障碍性贫血(AA)是功异异常活化T细胞介导的以造血组织为靶器官的自身免疫性疾病。T细胞受体(TCR)和CD3分子形成的复合物将细胞外的抗原刺激通过信号传导途径转化为T细胞功能活化。CD3ζ链由于其含有3个ITAM基序,因而在整个TCR信号传导过程中起重要作用。3′端非编码区(3′-UT R)在基因表达的转录后调控方面起了重要的作用,包括调节mRNA向胞浆中转运、控制翻译效率和mRNA的稳定性等。CD3ζ基因3′-UT R发生可变性剪切形成2种不同剪接体:344 bp大小的可变剪切型和906 bp大小的野生型剪接体。目的:基于前期研究发现AA患者中CD3ζ基因表达水平明显高于健康人,本研究进一步分析影响CD3ζ分子稳定性的3′-UT R的选择性表达及单核苷酸多态性情况。方法:利用 RT-PCR方法扩增20例AA患者和14例健康人外周血单个核细胞中CD3ζ基因3′-UT R的不同剪接体,经琼脂糖凝胶检测PCR目的片段,同时按照凝胶回收试剂盒操作说明进行PCR产物的纯化后并对目的片段进行核苷酸序列分析。结果:14例健康人中均可检测到CD3基因3′-UT R中2种不同的剪接体,而在AA患者中,有4例患者未检测到344 bp可变剪切型3’-UT R。核苷酸序列分析显示有8例AA患者外周血中CD3基因3′-UT R可检测到(1481T>A)位点基因单核苷酸多态性。结论:本研究率先提供了AA患者外周血中CD3基因3′-UT R不同类型剪接体表达以及单核苷酸位点多态性情况,研究结果提示AA患者TCR信号传导异常可能与参与调控相关信号传导分子的影响因素有关。进一步的研究将比较野生型和1481T>A型样本之间T细胞相关基因表达和病人T细胞免疫状态的异同性。

关键词：再生障碍性贫血 CD3ζ基因 3′-UTR 单核苷酸多态性

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慢性粒细胞性白血病中TCRζ相关的基因表达研究

慢性粒细胞性白血病中TCRζ相关的基因表达研究

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第八届全国免疫学学术大会

作者：闫小娟査显丰沈琦吴秀丽陈少华李萡杨力建李扬秋暨南大学医学院血液病研究所暨南大学再生医学教育部重点实验室

研究背景和目的:慢性粒细胞性白血病(CML)病人常伴有免疫功能缺陷,前期研究发现病人T细胞亚家族谱系缺陷、胸腺输出功能低下和T细胞活化缺陷等,同时,病人T细胞中TCRζ链基因表达明显下降,本研究进一步分析调控TCRζ基因相关的3′端非编... 详细信息

研究背景和目的:慢性粒细胞性白血病(CML)病人常伴有免疫功能缺陷,前期研究发现病人T细胞亚家族谱系缺陷、胸腺输出功能低下和T细胞活化缺陷等,同时,病人T细胞中TCRζ链基因表达明显下降,本研究进一步分析调控TCRζ基因相关的3′端非编码区(3′-UT R)的选择性表达和可变剪接因子(ASF/SF-2)表达情况,探讨ASF/SF-2在TCRζ3′-UT R表达过程中的作用;以及与TCRζ存在互补关系的Fcε RIγ基因及其下游ZAP-70基因的表达情况和相关性。方法利用 RT-PCR技术扩增检测14例正常人、40例CML患者、22例缓解期CML病人(CML-CR)的外周血单个核细胞(PBMCs)的TCRζ3′-UT R的表达和不同剪接体存在情况。采用SYB R Green I实时荧光定量PCR检测各组样本TCRζ链基因、Fcε RIγ基因、ASF/SF-2和ZAP-70基因的表达情况,根据公式2-△Ct对各个基因的表达水平进行相对定量分析,并分析各基因表达水平之间的关系。结果:正常人中,均可检测到包含两种剪接体的TCRζ3′-UT R,即野生型TCRζ3′-UT R(906bp)和可变型TCRζ3′-UT R(344 bp),而在CML中,35%样本仅含906 bp的野生型TCRζ3′-UT R,与全部含有两种剪接体的正常人和CML-CR样本均有显著性差异。CML患者PBMCs的TCRζ基因表达水平明显低于正常人和CML-CR的患者,与之具有互补关系的Fcε RIγ链基因表达水平则相应增高,同时,伴随着可变剪接因子ASF/SF-2的表达水平高于正常人和CML-CR患者。根据CML病人所含有TCRζ3′-UT R类型特点,将病人分为两个亚组,仅含野生型TCRζ3′-UT R的WT+AS-CML组和同时含有两种TCRζ3′-UT R剪接体的WT+AS+CML组。与WT+AS+CML组比较,WT+ASCML组的ASF/SF-2和Fcε RIγ链基因的表达水平均明显较高,而WT+AS-CML的TCRζ链和ZAP-70基因的表达数平也较WT+AS+CML高,,但未有统计学意义。结论:CML病人TCRζ表达缺陷,可能与可变性剪接因子ASF/SF-2高表达而调控可变性TCRζ3′-UT R表达相关。Fcε RIγ基因表达上调在一定程度上可能自身调节TCRζ表达缺陷情况。

关键词：慢性粒细胞白血病 TCRζ3′-UTR ASF/SF-2基因 FcεRIγ基因 ZAP-70基因

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CML抗原相关TCR Vα13/β21和Vα18/Vβ21基因修饰T细胞的研究

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第八届全国免疫学学术大会

作者：査显丰陈少华杨力建郁志卢育洪吴秀丽李萡李扬秋暨南大学医学院血液病研究所暨南大学再生医学教育部重点实验室

研究背景:肿瘤患者体内存在肿瘤相关抗原特异的CTL,鉴定和克隆其T细胞受体(TCR)基因,将其转染至正常T细胞中,能够赋予正常T细胞特异的识别和杀伤肿瘤细胞功能。前期我们从慢性粒细胞白血病(CML)患者外周血中克隆出寡克隆性TCR Vα13、V... 详细信息

研究背景:肿瘤患者体内存在肿瘤相关抗原特异的CTL,鉴定和克隆其T细胞受体(TCR)基因,将其转染至正常T细胞中,能够赋予正常T细胞特异的识别和杀伤肿瘤细胞功能。前期我们从慢性粒细胞白血病(CML)患者外周血中克隆出寡克隆性TCR Vα13、Vα18和Vβ21基因,并成功地构建TCR Vα13-I RES-Vβ21和TCR Vα18-I RES-Vβ21真核双基因表达载体。目的:本研究目的是分析慢性粒细胞白血病(CML)相关抗原特异性TCR基因修饰T细胞后体外特异性细胞毒活性。方法:收集HLA-A11阳性正常人外周血单个核细胞,利用磁珠分选法分选出CD3+T细胞;利用核转染技术将TCR重组质粒转染至正常人T细胞,流式细胞术检测TCR基因修饰T细胞中外源TCRα和β链基因的表达情况;利用Calein-AM释放试验检测TCR基因修饰T细胞的特异性细胞杀伤作用;利用实时荧光定量PCR技术检测与靶细胞混合培养后转基因修饰T细胞的颗粒酶和穿孔素基因的表达情况;利用ELISPOT检测INF-γ的分泌情况。结果:TCR Vα13-I RES-Vβ21和TCR Vα18-I RES-Vβ21质粒转染正常人T细胞培养24h后,流式细胞术检测结果显示TCR Vα13/Vβ21表达率为(43.4±10.3)%,TCR Vα18/Vβ21表达率为(39.6±5.0)%;细胞毒性试验结果显示TCR Vα13/Vβ21+T细胞对HLA-A11+K562细胞杀伤效率显著性高于对p EGFP-N3+K562细胞(p=0.002)和HLA-A11+K293细胞(p=0.001)的杀伤效率;对HLA-A11+K562细胞杀伤效率TCR Vα13/Vβ21+T细胞显著高于TCR Vα18/Vβ21+T细胞(p=0.005)和p I RES+T细胞(p=0.003);与HLA-A11+K562细胞混合培养后,TCR Vα13/Vβ21+T细胞颗粒酶和穿孔素基因的表达率明显高于TCR Vα18/Vβ21+T细胞和p I RES+T细胞;HLA-A11+K562细胞刺激后转染重组质粒T细胞INF-γ的分泌水平:TCR Vα13/Vβ21+T细胞(168±5.8/2×104细胞)>TCR Vα18/Vβ21+T细胞(100±12.3/2×104细胞)>p I RES+T细胞(58±1.8/2×104细胞)(p<0.05)。结论:TCR Vα13/β21基因修饰T细胞对CML细胞株HLA-A11+K562细胞显示出特异的细胞毒活性,为探讨CML相关或特异性抗原为基础的特异性TCR转基因修饰T细胞的抗CML免疫治疗提供基础资料。

关键词：慢性粒细胞白血病 T细胞受体基因转导抗白血病免疫

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H111.慢性髓性白血病中TCRζ相关的基因表达研究

H111.慢性髓性白血病中TCRζ相关的基因表达研究

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中华医学会第十二次全国血液学学术会议

作者：闫小娟查显丰沈琦吴秀丽陈少华李萡杨力建李扬秋暨南大学医学院血液病研究所 510632 暨南大学再生医学教育部重点实验室

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H114.再生障碍性贫血患者外周血中Elf-1基因的表达

H114.再生障碍性贫血患者外周血中Elf-1基因的表达

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中华医学会第十二次全国血液学学术会议

作者：李萡李扬秋方苏刘思初牛宇哲沈琦杨力建陈少华暨南大学再生医学教育部重点实验室 510632 暨南大学医学院血液病研究所

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H113.再生障碍性贫血患者外周血T细胞中CD3ζ基因3′-UTR剪接体表达及单核苷酸多态性研究

H113.再生障碍性贫血患者外周血T细胞中CD3ζ基因3′-UTR剪接体表...

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中华医学会第十二次全国血液学学术会议

作者：李萡李扬秋方苏查显丰刘思初牛宇哲闫小娟杨力建陈少华暨南大学再生医学教育部重点实验室 510632 暨南大学医学院血液病研究所

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中华医学会第十二次全国血液学学术会议

作者：查显丰陈少华杨力建郁志卢育洪吴秀丽李萡李扬秋暨南大学医学院血液病研究所广州 510632 暨南大学再生医学教育部重点实验室

目的：分析慢性髓性白血病(CML)相关抗原特异性TCR基因修饰T细胞后体外特异性细胞毒活性。方法：利用核转染技术将TCR重组质粒转染至HLA-A11阳性正常人T细胞中，流式细胞术检测外源TCR的表达情况;利用Ca-lein-AM释放试验检测TCR基因修饰... 详细信息

目的：分析慢性髓性白血病(CML)相关抗原特异性TCR基因修饰T细胞后体外特异性细胞毒活性。方法：利用核转染技术将TCR重组质粒转染至HLA-A11阳性正常人T细胞中，流式细胞术检测外源TCR的表达情况;利用Ca-lein-AM释放试验检测TCR基因修饰T细胞的特异性细胞杀伤作用，实时荧光定量PCR技术检测T细胞的颗粒酶和穿孔素基因的表达情况和ELISPOT检测INF-γ的分泌情况。

关键词：慢性髓性白血病 TCR基因修饰T细胞细胞毒活性实时荧光定量PCR技术

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