检索结果-内蒙古大学图书馆

中国实验血液学杂志 2011年第5期19卷 1112-1116页

作者：査显丰周羽竝杨力建陈少华李萡闫小娟李扬秋暨南大学医学院血液病研究所广东广州510632 暨南大学医学院生化教研室广东广州510632 暨南大学医学院再生医学教育部重点实验室广东广州510632

本研究目的是建立稳定表达HLA-A*1101分子的K562细胞株,为研究慢性髓系白血病(CML)HLA-I限制性抗原特异T细胞的细胞毒作用提供靶细胞。利用RT-PCR从CML患者外周血单个细胞中扩增HLA-A*1101基因全长序列;利用重组PCR将2A肽连接子(D-V-E-X... 详细信息

本研究目的是建立稳定表达HLA-A*1101分子的K562细胞株,为研究慢性髓系白血病(CML)HLA-I限制性抗原特异T细胞的细胞毒作用提供靶细胞。利用RT-PCR从CML患者外周血单个细胞中扩增HLA-A*1101基因全长序列;利用重组PCR将2A肽连接子(D-V-E-X-N-P-G-P)基因连接到HLA-A*1101的3'端,并将其定向克隆入带有增强型绿色荧光蛋白基因的真核表达载体pEGFP-N3,构成HLA-A*1101-T2A-EGFP转录盒的重组表达载体;利用电穿孔技术将pEGFP-N3或重组质粒转染入K562细胞,利用荧光显微镜监测绿色荧光蛋白的表达,通过G418筛选出有效转染pEGFP-N3或HLA-A*1101-T2A-EGFP载体的K 562细胞株;利用RT-PCR和流式细胞术检测HLA-A*1101基因和蛋白的表达情况。结果表明,成功构建了以2A肽基因为连接子的HLA-A*1101-T2A-EGFP真核表达载体;重组质粒转染的K562细胞经G418筛选2个月后,获得2株表达绿色荧光蛋白的K562稳定细胞株HLA-A*1101+K562和pEGFP-N3+K562。RT-PCR检测证明,HLA-A*1101+K562细胞表达HLA-A*1101基因,而pEGFP-N3+K562细胞则不表达HLA-A*1101;流式细胞术分析显示,HLA-A*1101和GFP蛋白双阳性HLA-A*1101+K562细胞占88.5%,明显高于pEGFP-N3+K562细胞(0.698%)。结论:建立了一个简单有效地筛选HLA-A*1101+K562细胞株的方法,并成功地建立了膜稳定表达HLA-A*1101蛋白的K562细胞株,为进一步研究CML的特异性细胞免疫提供工具细胞。

关键词：慢性髓系白血病 K562细胞 HLA-A＊1101 基因克隆基因转导

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pIRES2-EGFP-BCL11B真核表达载体体外表达的动态分析

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中国病理生理杂志 2011年第5期27卷 944-950页

作者：陈思黄欣杨力建陈少华郑海涛沈琦李萡李扬秋暨南大学医学院血液病研究所深圳大学医学院免疫学教研室广东深圳518060 教育部再生医学重点实验室广东广州510632

目的:研究真核表达载体pIRES2-EGFP-BCL11B(B细胞白血病/淋巴瘤11B基因)在K293(人胚肾细胞株)和Raji(人Burkitt淋巴瘤细胞株)细胞中的表达情况。方法:分别利用脂质体和核转染技术将真核表达载体pIRES2-EGFP-BCL11B(pBCL11B)转染至K293和... 详细信息

目的:研究真核表达载体pIRES2-EGFP-BCL11B(B细胞白血病/淋巴瘤11B基因)在K293(人胚肾细胞株)和Raji(人Burkitt淋巴瘤细胞株)细胞中的表达情况。方法:分别利用脂质体和核转染技术将真核表达载体pIRES2-EGFP-BCL11B(pBCL11B)转染至K293和Raji细胞中,并设立空质粒组(pI2)和空转染组(MOCK)作为对照。通过荧光显微镜和流式细胞仪检测转染后48 h各组EGFP的表达,确定转染效率。通过荧光实时定量PCR(Taqman)技术检测转染后24 h各组BCL11B mRNA的表达情况,通过Western blotting技术检测转染后48 h各组BCL11B蛋白的表达情况。高分辨率活细胞成像系统动态观察转染后36-72 h重组质粒在Raji细胞增殖过程中的表达。结果:K293细胞pBCL11B、pI2和MOCK组的转染效率分别为(71.23±4.62)%、(70.45±3.58)%和(0.30±0.10)%,而Raji细胞各组的转染效率分别为(23.12±5.94)%、(22.48±6.25)%和(0.30±0.10)%。实时定量PCR和Western blotting结果显示转染后pBCL11B组在mRNA和蛋白水平均能检测到BCL11B基因的有效表达,BCL11B的表达量均明显高于pI2组和MOCK组(P<0.05)。活细胞追踪显示转染后36-72 h重组质粒在细胞中可稳定表达且转染后的细胞可以正常分裂增殖。结论:系统分析了真核表达载体pIRES2-EGFP-BCL11B转染至K293和Raji细胞的表达变化特点,转染后可以检测到该基因的有效上调,研究结果为下一步转染正常人T细胞奠定了基础。

关键词：基因,BCL11B 真核表达载体 K293细胞 Raji细胞

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超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素A对活化T细胞端粒长度影响及其相关机制研究

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实用医学杂志 2011年第22期27卷 4015-4017页

作者：秦雅楠王冠明张鹏林晨高永鹏田红霞李扬秋暨南大学医学院微生物学与免疫学教研室广州市510632 暨南大学医学院血液病研究所广州市510632

目的:研究超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA)对T细胞端粒长度的作用及机制。方法:SEA、K562细胞、SEA联合K562细胞以及抗CD3单克隆抗体分别刺激脐带血单核细胞,SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测端粒、hTERT及IL-7R表达。结果:SEA组、K562细... 详细信息

目的:研究超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA)对T细胞端粒长度的作用及机制。方法:SEA、K562细胞、SEA联合K562细胞以及抗CD3单克隆抗体分别刺激脐带血单核细胞,SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测端粒、hTERT及IL-7R表达。结果:SEA组、K562细胞组、SEA联合K562细胞组及抗CD3单抗组活化T细胞的端粒相对长度比值为1.63±0.08、1.06±0.06、3.24±0.61、1.37±0.07;hTERT的表达差异倍数为1.88±0.07、1.95±0.05、3.93±0.23、1.30±0.06;IL-7R表达差异倍数为6.61±0.52、12.81±0.34、17.42±0.50、4.87±0.66;SEA联合K562细胞组均明显高于其他3组(P<0.01),SEA组对端粒长度影响大于单纯K562细胞组。结论:超抗原SEA可以直接刺激T细胞的端粒酶活性及上调表达IL-7R,联合特异性抗原K562细胞株诱导T细胞活化上调效果更明显。

关键词：白血病髓系慢性 BCR-ABLB阳性肠毒素类端粒长度 IL-7R hTERT

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长期培养人脐带间充质干细胞的生物活性及其限制性

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中国组织工程研究与临床康复 2011年第10期15卷 1750-1754页

作者：许超廖继东柳菁毛文哲李扬秋暨南大学医学院田家炳医学实验中心广东省广州市510632 暨南大学医学院生化教研室广东省广州市510632 暨南大学医学院血液病研究所广东省广州市510632

背景:间充质干细胞具有多向分化能力、免疫调节能力,并可在体外进行长期培养扩增,但其体外长期培养的生物学活性变化特点及其限制性仍不十分清晰。目的:观察体外长期培养人脐带间充质干细胞的生物活性变化特点及其限制性。方法:无菌收... 详细信息

背景:间充质干细胞具有多向分化能力、免疫调节能力,并可在体外进行长期培养扩增,但其体外长期培养的生物学活性变化特点及其限制性仍不十分清晰。目的:观察体外长期培养人脐带间充质干细胞的生物活性变化特点及其限制性。方法:无菌收集剖宫产新生儿脐带,经胶原酶Ⅱ消化后,用黏附生长选择法获取人脐带间充质干细胞,胰酶消化传代;取第3代细胞进行流式分析,脂肪和成骨诱导鉴定;收集不同代的细胞分别用MTT法、流式细胞仪和爬片分析法检测细胞增殖活性、细胞周期、凋亡率及黏附能力。结果与结论:人脐带间充质干细胞的细胞表型CD105+/CD29+/CD44+/CD31-/CD34-/CD45-/HLADR-,可诱导分化为脂肪细胞和成骨细胞;传代培养第3～23代细胞形态无明显变化,生长曲线基本一致,第28代后细胞增长缓慢;流式分析发现第33代细胞较第3代G0/G1减少17.9%、S+G2/M增加103.4%、细胞凋亡率增加316.7%,差异均有显著性意义(P<0.01),第3～18代细胞间G0/G1、S+G2/M、细胞凋亡率和黏附细胞数差异均无显著性意义(P>0.05)。提示在体外长期培养环境中,随着传代次数的递增,人脐带间充质干细胞的增殖及黏附能力下降,细胞凋亡率增加,总的生物活性呈逐渐下降趋势,其最佳生物活性期出现在培养第3～18代之间。

关键词：人脐带间充质干细胞培养生物活性限制性脐带

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胎鼠间充质干细胞对心脏自然衰老的影响

胎鼠间充质干细胞对心脏自然衰老的影响

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第13届全国实验血液学会议

作者：祝爱珍刘成成李军周艳华刘革修颜亮王彦平暨南大学医学院血液病研究所暨南大学医学院病理生理教研室

目的:观察胎鼠间充质干细胞(MSCs)对小鼠心脏自然衰老进程的影响,进一步了解MSCs的生物学特性。方法:从胎龄13.5天胎鼠中提取间充质干细胞,经过形态、免疫标记及成骨成脂分化鉴定。将15月龄的BALB/c雌鼠随机分为实验组和对照组,实验组小鼠

关键词：间充质干细胞成脂分化

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稳定表达HLA-A11蛋白的K562细胞株的建立

稳定表达HLA-A11蛋白的K562细胞株的建立

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第13届全国实验血液学会议

作者：查显丰周羽竝杨力建陈少华李萡闫小娟李扬秋暨南大学医学院血液病研究所暨南大学医学院生化教研室暨南大学再生医学教育部重点实验室

目的:肿瘤的免疫监视主要是依靠细胞毒性淋巴细胞(CTL)完成的。肿瘤细胞表面表达人类白细胞抗原(human leucocyte antigen,HLA)分子是机体识别和杀伤肿瘤细胞的关键。CTL通过T细胞受体(T cell receptor,TCR)特芹性识别HLA-Ⅰ-抗原肽复... 详细信息

目的:肿瘤的免疫监视主要是依靠细胞毒性淋巴细胞(CTL)完成的。肿瘤细胞表面表达人类白细胞抗原(human leucocyte antigen,HLA)分子是机体识别和杀伤肿瘤细胞的关键。CTL通过T细胞受体(T cell receptor,TCR)特芹性识别HLA-Ⅰ-抗原肽复合体来行使肿瘤杀伤的功能。由于TCR识别肿瘤抗原时受到MHC类分子限制,所以在研究T细胞CTL效应时很难找到HLA分子相同的细胞株。慢性粒细胞白血病细胞株K562细胞

关键词： HLA-A11 细胞株稳定表达

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上调BCL11B表达对T细胞白血病株Hut-78和CCRF-CEM细胞增殖的影响

上调BCL11B表达对T细胞白血病株Hut-78和CCRF-CEM细胞增殖的影响

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第13届全国实验血液学会议

作者：杨力建查显丰沈琦陈少华李萡周羽竝李扬秋暨南大学医学院血液病研究所暨南大学医学院生化教研室暨南大学再生医学教育部重点实验室

BCL11B基因是近年新发现的BCL家族基因,表达于T细胞、胸腺细胞和脑组织中,它在胸腺细胞发育和T细胞分化及存活中均发挥重要作用。前期研究发现,T细胞肿瘤与BCL11B表达异常、基因突变及发生重排有关。我们的前期研究发现不同T细胞白血病... 详细信息

BCL11B基因是近年新发现的BCL家族基因,表达于T细胞、胸腺细胞和脑组织中,它在胸腺细胞发育和T细胞分化及存活中均发挥重要作用。前期研究发现,T细胞肿瘤与BCL11B表达异常、基因突变及发生重排有关。我们的前期研究发现不同T细胞白血病细胞株表达BCL11B基因水平不同,其中,Molt-4和Jurkat细胞中BCL11B呈高表达状态,而Hut-78和CCRF-CEM则相对低表达。对于高表达BCL11B的T细胞株,

关键词：细胞增殖白血病 CCRF-CEM Hut-78 BCL11B

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TCRζ真核表达载体的构建及其体外表达研究

TCRζ真核表达载体的构建及其体外表达研究

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第13届全国实验血液学会议

作者：查显丰杨力建陈少华闫小娟李萡周羽竝李扬秋暨南大学医学院血液病研究所暨南大学医学院生化教研室暨南大学再生医学教育部重点实验室

目的:TCR/CD3复合物是T细胞特异性识别抗原的关键分子,它由TCRα/β链和TCR信号分子TCRζ及CD3的其他分子γ、δ、ε和η共同组成,CD3分子的5条肽链在胞质内部分较TCR为长,它们共含有10个介导免疫受体酪氨酸活化基序(ITAM)结构,这一结构... 详细信息

目的:TCR/CD3复合物是T细胞特异性识别抗原的关键分子,它由TCRα/β链和TCR信号分子TCRζ及CD3的其他分子γ、δ、ε和η共同组成,CD3分子的5条肽链在胞质内部分较TCR为长,它们共含有10个介导免疫受体酪氨酸活化基序(ITAM)结构,这一结构是CD3分子介导细胞内信号转导的基础,其中2条ζ链共含有6个ITAM,正是由于ζ链的这种结构特点使其在T细胞信号转导中处于中心位置。本研究目的

关键词：真核表达载体体外表达 TCR

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超抗原SEA对活化T细胞端粒长度影响及其相关机制研究

超抗原SEA对活化T细胞端粒长度影响及其相关机制研究

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第13届全国实验血液学会议

作者：秦雅楠王冠明张鹏林晨高永鹏田红霞李扬秋暨南大学医学院微生物学与免疫学教研室暨南大学医学院血液病研究所

目的:研究超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA)对T细胞端粒长度的作用及机制。方法:常规分离4例脐带血单核细胞,分别与单纯SEA、单纯K562细胞、SEA联合K562细胞以及抗CD3单克隆抗体共培养,诱导T细胞活化增殖。刺激培养48h后收集各组细胞提... 详细信息

目的:研究超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA)对T细胞端粒长度的作用及机制。方法:常规分离4例脐带血单核细胞,分别与单纯SEA、单纯K562细胞、SEA联合K562细胞以及抗CD3单克隆抗体共培养,诱导T细胞活化增殖。刺激培养48h后收集各组细胞提取mRNA并合成cDNA,采用SYBRGreenⅠ荧光定量PCR定量检测T细胞的端粒、hTERT及IL-7R表达情况,以β2微球蛋白基因(β2M)作为内参,根据相对定量公式:2～△△ct计算检测基因的表达差异倍数,并通过T/S比值计算端粒的相对长度。结果:SEA组、K562细胞组、SEA联合K562细胞组及抗CD3单抗组中,活化T细胞的端粒相对长度的比

关键词：端粒长度相关机制 SEA

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T-ALL中Notch1基因突变和高表达特点

T-ALL中Notch1基因突变和高表达特点

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第13届全国实验血液学会议

作者：林春兰郑海涛王春燕杨力建陈少华李萡周羽竝谭获李扬秋暨南大学医学院生化教研室暨南大学医学院血液病研究所广州医学院第一附属医院肿瘤血液中心暨南大学再生医学教育部重点实验室

Notch1信号通路在T细胞的发育过程起重要作用,对T细胞发育的各个阶段进行精细调节,Notch1表达失调可使得T淋巴细胞的发育阻断在双阳性阶段。近年来,不少研究报道了T-ALL/淋巴瘤中Notch1基因突变和异常表达情况,有认为可以作为T-ALL预后... 详细信息

Notch1信号通路在T细胞的发育过程起重要作用,对T细胞发育的各个阶段进行精细调节,Notch1表达失调可使得T淋巴细胞的发育阻断在双阳性阶段。近年来,不少研究报道了T-ALL/淋巴瘤中Notch1基因突变和异常表达情况,有认为可以作为T-ALL预后的一个指标。本研究利用RT-PCR和核苷酸序列分析分析了13例T-ALL病人中Notch1基因突变及其表达水平变化特点。研究发现,3例T-ALL中出现Notch1基因突变,

关键词：基因突变高表达 Notchl T-ALL Notch1

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