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第11次中国实验血液学会议

作者：尹青松李扬秋杨力建陈少华周羽竝暨南大学医学院血液病研究所暨南大学医学院血液病研究所暨南大学医学院血液病研究所暨南大学医学院血液病研究所暨南大学医学院生物化学教研室

Y 多发性骨髓瘤(multiple myeloma MM)是恶性浆细胞病中最常见的一种类型,临床疗效及预后不良。近年来国外有研究者通过检测 MM 患者初诊时外周血中信号结合 T 细胞受体重排删除 DNA 环(sjTRECs)的水平高低来了解机体细胞免疫功能重建... 详细信息

Y 多发性骨髓瘤(multiple myeloma MM)是恶性浆细胞病中最常见的一种类型,临床疗效及预后不良。近年来国外有研究者通过检测 MM 患者初诊时外周血中信号结合 T 细胞受体重排删除 DNA 环(sjTRECs)的水平高低来了解机体细胞免疫功能重建的能力和潜能,从而评估患者的临床疗效和预后情况。但该项检测指标是表示胸腺

关键词：多发性骨髓瘤亚家族 TcR V 外周血细胞水平

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超抗原SEA对PML-RARα多肽抗原活化外周血T淋巴细胞分泌细胞因子的影响

超抗原SEA对PML-RARα多肽抗原活化外周血T淋巴细胞分泌细胞因子...

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第11次中国实验血液学会议

作者：白雪林晨陈少华杨力建李扬秋暨南大学医学院微生物学与免疫学教研室暨南大学医学院微生物学与免疫学教研室暨南大学医学院血液病研究所暨南大学医学院血液病研究所暨南大学医学院血液病研究所

目的：观察超抗原 SEA 与 PML-RARα多肽抗原联合应用诱导正常人外周血 T 淋巴细胞后, 活化 T 细胞分泌细胞因子情况,以期寻找能有效增强 PML-RARα免疫原性的方法,为 APL 免疫治疗和开发特异性高效价的抗 APL 基因疫苗提供研究数据。

关键词：多肽抗原 PML-RAR SEA 分泌细胞 RAR

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超抗原SEA对PML-RARα融合多肽体外诱导T细胞TCRζ链基因表达的作用

超抗原SEA对PML-RARα融合多肽体外诱导T细胞TCRζ链基因表达的作...

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第11次中国实验血液学会议

作者：高珂白雪林晨陈少华杨力建李扬秋暨南大学医学院微生物学与免疫学教研室暨南大学医学院微生物学与免疫学教研室暨南大学医学院微生物学与免疫学教研室暨南大学医学院血液病研究所暨南大学医学院血液病研究所暨南大学医学院血液病研究所

目的：实时定量 PCR 检测 T 细胞信号传导分子 TCRζ链基因表达情况,比较超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素 A(SEA)对 PML-RARα融合多

关键词：体外诱导 PML-RAR 基因表达 SEA TCR RAR

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实时定量PCR检测白血病中BCL11B基因的表达水平

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免疫学杂志 2006年第4期22卷 463-465页

作者：李扬秋陈少华杨力建陈青山暨南大学医学院血液病研究所广州510632 暨南大学医学院流行病学教研室广州510632

目的建立BCL11B基因的定量检测方法,并分析其在白血病中的表达水平。方法利用实时定量RTPCR分析TALL(12例)、BALL(8例)、BCLL(6例)、AML(7例)和正常对照(10例)外周血单个核细胞(PBMC)中BCL11B基因的表达水平,以β2微球蛋白(β2M)基因表... 详细信息

目的建立BCL11B基因的定量检测方法,并分析其在白血病中的表达水平。方法利用实时定量RTPCR分析TALL(12例)、BALL(8例)、BCLL(6例)、AML(7例)和正常对照(10例)外周血单个核细胞(PBMC)中BCL11B基因的表达水平,以β2微球蛋白(β2M)基因表达水平作为内对照。结果TALL患者PBMC中BCL11B表达水平(553.84±564.01拷贝105β2M拷贝)明显高于正常对照和其他白血病患者(P=0.006,P=0.013,P=0.031,P=0.020);而AML组BCL11B表达水平(0.02±0.04拷贝105β2M拷贝)则明显低于正常对照组(P=0.000)、BALL组(P=0.006)和TALL组(P=0.020);BALL(1.99±1.59拷贝105β2M拷贝)和BCLL(2.26±3.57拷贝105β2M拷贝)中BCL11B表达水平与正常对照(2.20±1.01拷贝105β2M拷贝)无显著差别。结论建立了实时定量RTPCR检测BCL11B方法,TALL中BCL11B高表达可能与其发病有一定关系。

关键词： BCL11B基因白血病实时定量PCR

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独特型TCR Vβ2 DNA疫苗的构建和体外表达检测

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中国病理生理杂志 2006年第7期22卷 1320-1323页

作者：周羽竝黄梅娟杨力建陈少华李扬秋暨南大学医学院生物化学教研室广东广州510632 暨南大学医学院血液病研究所广东广州510632

目的:构建抗淋巴细胞白血病的独特型TCRVβ2DNA疫苗,并检测其转染K562细胞和体外表达情况。方法:利用RT-PCR扩增表达TCRVβ2的Molt-4细胞株的独特型TCRVβ2基因片段,定向克隆于pIREs表达载体中,重组质粒转染至K562细胞中,利用间接免疫... 详细信息

目的:构建抗淋巴细胞白血病的独特型TCRVβ2DNA疫苗,并检测其转染K562细胞和体外表达情况。方法:利用RT-PCR扩增表达TCRVβ2的Molt-4细胞株的独特型TCRVβ2基因片段,定向克隆于pIREs表达载体中,重组质粒转染至K562细胞中,利用间接免疫荧光法、SDS-PAGE和Westernblotting等检测其表达情况。结果:经PCR检测证实成功构建pIREs-TCRVβ2重组子,转染至K562细胞后,利用Vβ2单抗可检测到K562细胞表面表达TCRVβ2,SDS-PAGE分离检测为15kD的蛋白质,并经Vβ2特异抗体Westernblotting鉴定为TCRVβ2蛋白。结论:成功构建pIREs-TCRVβ2DNA疫苗,并可以在K562细胞株中表达特异蛋白。

关键词：基因,TCR Vβ 疫苗,DNA 印迹法,蛋白质 K562细胞

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小鼠胚胎神经干细胞的体外生长特性和相关基因的表达

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中国临床康复 2006年第5期10卷 19-21,i0002页

作者：山爱景郭国庆孙艳沈伟哉暨南大学医学院解剖教研室广东省广州市510630 暨南大学血液病研究所广东省广州市510630

目的:观察小鼠胚胎神经干细胞的体外生长特性并检测其相关基因的表达。方法:实验于2005-02/06在暨南大学医学院中心实验室进行。①取妊娠13.5d昆明小鼠分离胚胎大脑中的神经干细胞,用添加碱性成纤维细胞生长因子的无血清培养基进行体外... 详细信息

目的:观察小鼠胚胎神经干细胞的体外生长特性并检测其相关基因的表达。方法:实验于2005-02/06在暨南大学医学院中心实验室进行。①取妊娠13.5d昆明小鼠分离胚胎大脑中的神经干细胞,用添加碱性成纤维细胞生长因子的无血清培养基进行体外培养,取培养3d的神经球接种于多聚赖氨酸包被的培养瓶,用含血清的培养基诱导分化。②免疫细胞化学检测细胞表面抗原。③四甲基偶氮唑盐法绘制生长曲线。④流式细胞术检测细胞周期。⑤反转录-聚合酶链反应和免疫细胞化学技术对神经干细胞进行鉴定。结果:①胚胎神经干细胞及其分化细胞的抗原表达:血清诱导8h,分化细胞中(8.9±5.6)%细胞呈Tubulin阳性,(87.5±7.4)%细胞胞浆呈胶质纤维酸性蛋白阳性表达。未诱导细胞近100%呈巢蛋白阳性,仅有极少数细胞Tubulin阳性或胶质纤维酸性蛋白阳性。②胚胎神经干细胞的细胞周期:从小鼠胚胎大脑获取的神经干细胞3d左右进入指数生长期;原代培养细胞83.8%处于静止期/DNA合成前期。③原代与传代细胞均表达巢蛋白mRNA,聚集形成的神经球巢蛋白阳性。血清诱导4h胚胎神经干细胞开始转录神经元相关基因Tau和胶质细胞相关基因胶质纤维酸性蛋白。结论:从小鼠胚胎大脑可成功分离获得大量胚胎神经干细胞,并在含碱性成纤维细胞生长因子的条件培养基中迅速增殖,血清诱导下分化生成神经元和星型胶质细胞。

关键词：干细胞/细胞学细胞分化脑/胚胎学细胞培养的流式细胞术逆转录聚合酶链反应

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PML-RARα/pIRES和PML-RARα/pSecTag重组载体的构建和鉴定

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现代临床医学生物工程学杂志 2006年第3期12卷 280-283页

作者：汤冀李扬秋周羽竝杨力建陈少华胡刚罗更新暨南大学医学院血液病研究所广州510623 暨南大学医学院生化教研室广州510623

目的构建PML-RARα基因重组表达质粒,为发展PML-RARα基因疫苗提供实验依据。方法利用RT-PCR方法从急性早幼粒细胞白血病细胞株NB4细胞中扩增出465bp的位于PML-RARα融合基因的框内结构的片段,克隆至真核表达载体pIRES和分泌载体pSecTag... 详细信息

目的构建PML-RARα基因重组表达质粒,为发展PML-RARα基因疫苗提供实验依据。方法利用RT-PCR方法从急性早幼粒细胞白血病细胞株NB4细胞中扩增出465bp的位于PML-RARα融合基因的框内结构的片段,克隆至真核表达载体pIRES和分泌载体pSecTag后,经酶切和序列分析鉴定重组质粒的构建情况。结果经酶切鉴定和序列测定表明,PML-RARα目的基因已正确插入真核表达载体中,构成了目的重组载体。结论成功构建了PML-RARα/pIRES和PML-RARα/pSecTag重组真核表达质粒,可进一步用于PML-RARα基因疫苗的实验研究。

关键词： PML-RARα基因克隆重组载体急性早幼粒细胞白血病

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Nucleofection转染过程对Jurkat细胞BCL11b水平的影响

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现代临床医学生物工程学杂志 2006年第1期12卷 1-3页

作者：李扬秋杨力建陈少华陈青山暨南大学医学院血液病研究所暨南大学医学院流行病学教研室广州510632

目的了解核转染(Nucleofection)过程对Jurkat细胞中BCL11b基因表达水平的影响情况。方法利用实时定量PCR方法检测分析经不同程序Nucleofection过程和不同时间培养的Jurkat细胞的BCL11b基因的表达水平。结果经Nucleofector的C-16、S-18和... 详细信息

目的了解核转染(Nucleofection)过程对Jurkat细胞中BCL11b基因表达水平的影响情况。方法利用实时定量PCR方法检测分析经不同程序Nucleofection过程和不同时间培养的Jurkat细胞的BCL11b基因的表达水平。结果经Nucleofector的C-16、S-18和G-10+siRNA程序处理后,C-16与S-18组细胞培养2h的BCL11b水平明显升高(p<0.05),C-16、S-18和G-10+siRNA三组细胞培养10h后BCL11b水平均高于对照组(p<0.05)。对照组、C-16和S-18组细胞随着培养时间延长(在2～24h之间),BCL11b水平降低(p<0.05),而在G-10+siRNA处理组,直到培养48hBCL11b水平才有所下降。结论Nucleofection处理过程对Jurkat细胞BCL11b表达有一定的影响,但有一定的时效性。

关键词： BCL11b基因核转染(Nucleofaction) 实时定量PCR

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Ficoll分离和MACs分选对T细胞BCL11b表达水平的影响

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现代临床医学生物工程学杂志 2006年第1期12卷 3-5页

作者：李扬秋杨力建陈少华陈青山暨南大学医学院血液病研究所暨南大学医学院流行病学教研室广州510632

目的了解Ficoll分离和MACs分选过程对T细胞中BCL11b基因表达水平的影响情况。方法利用Ficoll分离3例正常人外周血单个核细胞(PBMC),进一步经MACs负性分选CD3+T细胞。分别收集培养0、6和20h的PBMC和CD3+T细胞,利用实时定量PCR方法检测各... 详细信息

目的了解Ficoll分离和MACs分选过程对T细胞中BCL11b基因表达水平的影响情况。方法利用Ficoll分离3例正常人外周血单个核细胞(PBMC),进一步经MACs负性分选CD3+T细胞。分别收集培养0、6和20h的PBMC和CD3+T细胞,利用实时定量PCR方法检测各组样本中BCL11b基因的表达水平。结果经Ficoll分离的PBMC和MACs分选后CD3+T细胞在3个时间点BCL11b的表达水平无显著性差异(p>0.05),根据CD3+T细胞%标化后,各组BCL11b表达水平也均无显著性差异。结论Ficoll分离和MACs负性分选过程不影响T细胞中BCL11b表达水平,提示其不会影响T细胞的活化。

关键词： BCL11b基因免疫磁珠分选法实时定量PCR

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PML-RARα多肽诱导脐血TCR VβT细胞增殖研究

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肿瘤防治研究 2005年第9期32卷 529-532页

作者：汤冀李扬秋杨力建陈少华周羽竝暨南大学医学院血液病研究所广州510632 暨南大学医学院生化教研室广州510632

目的了解PMLRARα多肽诱导脐血T细胞的T细胞受体(TCR)Vβ谱系表达和克隆性情况。方法以不同浓度(16.7μg/mL,33.3μg/mL或50μg/mL)的PMLRARα多肽联合IL2、抗CD3单抗以及抗CD28单抗诱导脐血T细胞增殖,利用RTPCR基因扫描技术分析诱导后... 详细信息

目的了解PMLRARα多肽诱导脐血T细胞的T细胞受体(TCR)Vβ谱系表达和克隆性情况。方法以不同浓度(16.7μg/mL,33.3μg/mL或50μg/mL)的PMLRARα多肽联合IL2、抗CD3单抗以及抗CD28单抗诱导脐血T细胞增殖,利用RTPCR基因扫描技术分析诱导后第3、6、9、12天后的脐血TCRVβ亚家族的利用和克隆性增殖的特点。结果限制性表达和克隆性增殖TCRVβ亚家族T细胞可见于PMLRARα多肽诱导后脐血T细胞。结论PMLRARα多肽可在体外诱导脐血T细胞呈克隆性增殖,此优势增殖的克隆性T细胞可能具有特异性细胞毒作用。

关键词：脐血急性早幼粒细胞白血病 T细胞受体克隆性

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