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中国病理生理杂志 2011年第5期27卷 944-950页

作者：陈思黄欣杨力建陈少华郑海涛沈琦李萡李扬秋暨南大学医学院血液病研究所深圳大学医学院免疫学教研室广东深圳518060 教育部再生医学重点实验室广东广州510632

目的:研究真核表达载体pIRES2-EGFP-BCL11B(B细胞白血病/淋巴瘤11B基因)在K293(人胚肾细胞株)和Raji(人Burkitt淋巴瘤细胞株)细胞中的表达情况。方法:分别利用脂质体和核转染技术将真核表达载体pIRES2-EGFP-BCL11B(pBCL11B)转染至K293和... 详细信息

目的:研究真核表达载体pIRES2-EGFP-BCL11B(B细胞白血病/淋巴瘤11B基因)在K293(人胚肾细胞株)和Raji(人Burkitt淋巴瘤细胞株)细胞中的表达情况。方法:分别利用脂质体和核转染技术将真核表达载体pIRES2-EGFP-BCL11B(pBCL11B)转染至K293和Raji细胞中,并设立空质粒组(pI2)和空转染组(MOCK)作为对照。通过荧光显微镜和流式细胞仪检测转染后48 h各组EGFP的表达,确定转染效率。通过荧光实时定量PCR(Taqman)技术检测转染后24 h各组BCL11B mRNA的表达情况,通过Western blotting技术检测转染后48 h各组BCL11B蛋白的表达情况。高分辨率活细胞成像系统动态观察转染后36-72 h重组质粒在Raji细胞增殖过程中的表达。结果:K293细胞pBCL11B、pI2和MOCK组的转染效率分别为(71.23±4.62)%、(70.45±3.58)%和(0.30±0.10)%,而Raji细胞各组的转染效率分别为(23.12±5.94)%、(22.48±6.25)%和(0.30±0.10)%。实时定量PCR和Western blotting结果显示转染后pBCL11B组在mRNA和蛋白水平均能检测到BCL11B基因的有效表达,BCL11B的表达量均明显高于pI2组和MOCK组(P<0.05)。活细胞追踪显示转染后36-72 h重组质粒在细胞中可稳定表达且转染后的细胞可以正常分裂增殖。结论:系统分析了真核表达载体pIRES2-EGFP-BCL11B转染至K293和Raji细胞的表达变化特点,转染后可以检测到该基因的有效上调,研究结果为下一步转染正常人T细胞奠定了基础。

关键词：基因,BCL11B 真核表达载体 K293细胞 Raji细胞

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SEA对PML-RARα多肽体外诱导外周血单个核细胞TCRζ链表达的作用

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暨南大学学报（自然科学与医学版） 2008年第4期29卷 347-350页

作者：高珂林晨白雪陈少华杨力建陈思 B.N.Selvakumar 李扬秋暨南大学医学院微生物学与免疫学教研室广东广州510632 暨南大学医学院血液病研究所广东广州510632

目的:了解金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA)联合PML-RARα融合多肽体外诱导正常人外周血T细胞活化TCRζ链基因表达情况。方法:利用T细胞液体培养法分别与正常人外周血淋巴细胞加入PML-RARα融合多肽、SEA和SEA联合PML-RARα多肽诱导培养T细胞... 详细信息

目的:了解金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA)联合PML-RARα融合多肽体外诱导正常人外周血T细胞活化TCRζ链基因表达情况。方法:利用T细胞液体培养法分别与正常人外周血淋巴细胞加入PML-RARα融合多肽、SEA和SEA联合PML-RARα多肽诱导培养T细胞,其中SEA刺激包括培养初始或培养第5天加入SEA两组(PS、PSI),并设空白对照组(不加多肽及SEA)。分别收集各组培养20 d后细胞提取mRNA并合成cDNA,采用SYBR G reenⅠ荧光定量PCR和相对定量检测TCRζ链在不同组别T淋巴细胞中的表达情况,以β2微球蛋白基因(β2M)作为内参,根据相对定量公式:2-△△C t分析TCRζ链表达差异。结果:与空白组相比,联合诱导组在培养初始加入SEA及第5天加入SEA的培养T细胞中TCRζ链表达上升,而单独SEA诱导组的TCRζ链表达下降。结论:超抗原SEA联合PML-RARα多肽体外诱导T细胞可使TCRζ链基因表达水平升高,有望为研制急性早幼粒细胞白血病疫苗提供新的切入点。

关键词： T细胞受体ζ链实时定量PCR 金黄色葡萄球菌肠毒素A T细胞受体 PML-RARα融合多肽

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TCR Vβ2链独特型DNA疫苗诱发小鼠特异性免疫效应研究

TCR Vβ2链独特型DNA疫苗诱发小鼠特异性免疫效应研究

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第11次中国实验血液学会议

作者：岑东芝周羽竝杨力建陈少华黄梅娟李扬秋暨南大学医学院血液病研究所暨南大学医学院生化教研室暨南大学医学院血液病研究所暨南大学医学院生化教研室暨南大学医学院血液病研究所暨南大学医学院生化教研室暨南大学医学院血液病研究所暨南大学医学院生化教研室暨南大学医学院血液病研究所暨南大学医学院生化教研室暨南大学医学院血液病研究所暨南大学医学院生化教研室

目的：观察所构建的 TCR Vβ2(441 bp)重组质粒诱导 BALB/c 小鼠特异性体液和细胞免疫效应。方法：18只6～8周的健康纯系雄性 BALB/ c 小鼠随机均分为3组(每组6只),每侧40μl, 各小鼠分别于第1周、2周、4周各免疫1次, 共3次。①A 组：... 详细信息

目的：观察所构建的 TCR Vβ2(441 bp)重组质粒诱导 BALB/c 小鼠特异性体液和细胞免疫效应。方法：18只6～8周的健康纯系雄性 BALB/ c 小鼠随机均分为3组(每组6只),每侧40μl, 各小鼠分别于第1周、2周、4周各免疫1次, 共3次。①A 组：每次于股四头肌肌内注射 pIRES 200μg;②B 组：每次于股四头肌肌内注射 pIRES-TCR VB2 200μg;②C 组：每次于股四头肌肌内注射生理盐水200μg。于2次免疫和末次

关键词：独特型特异性免疫 TCR V DNA 效应研究

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SEA联合K562细胞体外诱导正常人脐带血单核细胞TCRζ链表达的作用

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暨南大学学报（自然科学与医学版） 2010年第2期31卷 154-157页

作者：高永鹏林晨田红霞高珂郜世隽江振友陈少华沈琦李扬秋暨南大学医学院微生物学与免疫学教研室广东广州510632 暨南大学医学院血液病研究所广东广州510632

目的:研究金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA)对K562细胞体外诱导脐血T细胞活化TCRζ链基因表达情况。方法:常规分离4例脐带血单核细胞,分别与抗CD3单克隆抗体、单纯K562细胞、SEA以及SEA联合K562细胞共培养,诱导T细胞活化增殖,并设空白对照组... 详细信息

目的:研究金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA)对K562细胞体外诱导脐血T细胞活化TCRζ链基因表达情况。方法:常规分离4例脐带血单核细胞,分别与抗CD3单克隆抗体、单纯K562细胞、SEA以及SEA联合K562细胞共培养,诱导T细胞活化增殖,并设空白对照组。刺激培养48 h后收集各组细胞提取mRNA并合成cD-NA,采用SYBR GreenⅠ荧光定量PCR和相对定量检测TCRζ链在不同组别T淋巴细胞中的表达情况,以β2微球蛋白基因(β2M)作为内参,根据相对定量公式:2-ΔΔCt计算TCRζ链表达差异倍数。结果:抗CD3单抗组、K562细胞组、SEA组、SEA联合K562细胞组诱导培养T细胞中TCRζ链表达差异倍数分别是(4.52±0.96)、(1.65±0.26)、(1.43±0.44)、(3.41±0.30),表明各组均有活化T细胞的作用,但各组TCRζ链表达水平有差异,其中SEA联合k562细胞组的T细胞ζ链基因表达均明显高于单纯k562组及单纯SEA组(P<0.01)。结论:超抗原SEA有助于增强K562细胞体外诱导T细胞活化作用。

关键词：金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA) 脐带血 T细胞受体ζ链实时定量PCR BCR-ABL融合蛋白慢性粒细胞白血病

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胎肝Sca-1^+细胞治疗STZ诱导小鼠糖尿病的实验研究

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暨南大学学报（自然科学与医学版） 2005年第2期26卷 156-161页

作者：林晨张洹廖继东赵欣姜铧余卫暨南大学医学院微生物学与免疫学教研室广东广州510632 暨南大学医学院血液病研究所广东广州510632 暨南大学医学院中心实验室广东广州510632

目的:探讨小鼠胎肝组织中的干细胞抗原1阳性的细胞(Sca - 1+细胞)治疗链脲佐菌素(STZ)诱导糖尿病鼠的潜能。方法:取14 5d的C5 7BL/6J小鼠胎肝,制作细胞悬液,用单克隆免疫磁珠细胞分离技术分离Sca - 1+细胞,将2×10 5个雄性小鼠Sca ... 详细信息

目的:探讨小鼠胎肝组织中的干细胞抗原1阳性的细胞(Sca - 1+细胞)治疗链脲佐菌素(STZ)诱导糖尿病鼠的潜能。方法:取14 5d的C5 7BL/6J小鼠胎肝,制作细胞悬液,用单克隆免疫磁珠细胞分离技术分离Sca - 1+细胞,将2×10 5个雄性小鼠Sca - 1+细胞输注到STZ诱导的C5 7BL/6J雌性小鼠体内,以后每7d定时测定小鼠血糖,第38d处死受体小鼠取胰腺组织固定、切片,免疫组化观察胰腺组织中胰岛素阳性的β细胞变化。结果:小鼠胎肝Sca 1+细胞能够有效抑制STZ诱导小鼠血糖的持续升高,明显降低糖尿病鼠的死亡率。受体小鼠胰岛细胞结构清楚,其中可见表达胰岛素的β细胞,荧光原位杂交显示小鼠胰岛内有Y染色体阳性杂交点。结论:小鼠胎肝Sca -

关键词：干细胞链脲佐菌素糖尿病

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超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素A对活化T细胞端粒长度影响及其相关机制研究

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实用医学杂志 2011年第22期27卷 4015-4017页

作者：秦雅楠王冠明张鹏林晨高永鹏田红霞李扬秋暨南大学医学院微生物学与免疫学教研室广州市510632 暨南大学医学院血液病研究所广州市510632

目的:研究超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA)对T细胞端粒长度的作用及机制。方法:SEA、K562细胞、SEA联合K562细胞以及抗CD3单克隆抗体分别刺激脐带血单核细胞,SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测端粒、hTERT及IL-7R表达。结果:SEA组、K562细... 详细信息

目的:研究超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA)对T细胞端粒长度的作用及机制。方法:SEA、K562细胞、SEA联合K562细胞以及抗CD3单克隆抗体分别刺激脐带血单核细胞,SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测端粒、hTERT及IL-7R表达。结果:SEA组、K562细胞组、SEA联合K562细胞组及抗CD3单抗组活化T细胞的端粒相对长度比值为1.63±0.08、1.06±0.06、3.24±0.61、1.37±0.07;hTERT的表达差异倍数为1.88±0.07、1.95±0.05、3.93±0.23、1.30±0.06;IL-7R表达差异倍数为6.61±0.52、12.81±0.34、17.42±0.50、4.87±0.66;SEA联合K562细胞组均明显高于其他3组(P<0.01),SEA组对端粒长度影响大于单纯K562细胞组。结论:超抗原SEA可以直接刺激T细胞的端粒酶活性及上调表达IL-7R,联合特异性抗原K562细胞株诱导T细胞活化上调效果更明显。

关键词：白血病髓系慢性 BCR-ABLB阳性肠毒素类端粒长度 IL-7R hTERT

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硒化麒麟菜多糖抑制人喉癌细胞株Hep-2增殖的作用

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肿瘤防治研究 2007年第4期34卷 249-252页

作者：白雪林晨江振友袁桂秀沈伟哉李扬秋唐渝暨南大学医学院微生物学与免疫学教研室广州510632 暨南大学医学院人体解剖学教研室广州510632 暨南大学医学院血液病研究所广州510632 暨南大学医学院生命科学院化学系广州510632

目的通过比较研究海藻麒麟菜多糖粗提物、无机硒化合物-亚硒酸钠(Na2SeO3)及其共价化合物-硒化麒麟菜多糖对人喉癌细胞株Hep-2的作用,探索新的具有抗肿瘤活性的有机硒化合物。方法应用不同剂量的样品作用于Hep-2细胞株后,用MTT比色分析... 详细信息

目的通过比较研究海藻麒麟菜多糖粗提物、无机硒化合物-亚硒酸钠(Na2SeO3)及其共价化合物-硒化麒麟菜多糖对人喉癌细胞株Hep-2的作用,探索新的具有抗肿瘤活性的有机硒化合物。方法应用不同剂量的样品作用于Hep-2细胞株后,用MTT比色分析法计算肿瘤抑制率。结果硒化多糖对Hep-2细胞的抑制率高于相同多糖浓度的麒麟菜多糖和相同硒浓度的亚硒酸钠(P<0.05)。硒化多糖的抑制率可高达71.53%,其多糖IC50与硒IC50分别为1805μg/ml和7.0μmol/L,分别低于麒麟菜多糖的多糖IC50(3034μg/ml)和亚硒酸钠的硒IC50(9.0μmol/L)。结论硒化麒麟菜多糖具有抗Hep-2细胞增殖的活性,其抑制作用明显优于亚硒酸钠及天然麒麟菜多糖的抗肿瘤活性。

关键词：硒化麒麟菜多糖亚硒酸钠 HEp-2 抗肿瘤

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PML-RARα245与hGM-CSF双基因DNA疫苗的构建与表达

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江苏医药 2013年第8期39卷 878-881,F0002页

作者：胡刚周羽竝岑东芝杨力建陈少华李扬秋惠东县人民医院内二科广东省516300 暨南大学医学院血液病研究所暨南大学医学院生化教研室暨南大学再生医学教育部重点实验室

目的采用长度为245bp的急性早幼粒细胞白血病PML-RARα融合基因片段构建新的PML-RARα与hGM-CSF真核双表达载体。方法用RT-PCR技术从NB4细胞的RNA中扩增长度为245bp的PML-RARα基因片段,PCR技术从pORF-hGM-CSF质粒中扩增出hGM-CSF基因,... 详细信息

目的采用长度为245bp的急性早幼粒细胞白血病PML-RARα融合基因片段构建新的PML-RARα与hGM-CSF真核双表达载体。方法用RT-PCR技术从NB4细胞的RNA中扩增长度为245bp的PML-RARα基因片段,PCR技术从pORF-hGM-CSF质粒中扩增出hGM-CSF基因,分别将两基因片段连接到pIRES质粒的多克隆位点A和B中,构建真核双表达载体。用酶切和序列分析方法验证所构建载体的正确性。将重组质粒转染K562细胞,利用RT-PCR和点杂交技术检测重组质粒在真核细胞中的转录和翻译情况。结果双酶切结果证明重组质粒中含有相应大小的PML-RARα基因片段及hGM-CSF基因,序列分析证明重组质粒中插入片段的碱基序列完全正确。该重组质粒能够在真核细胞中正常转录和翻译。结论成功构建了含有PML-RARα245及hGM-CSF的双表达载体,为筛选合适的抗原片段用于构建治疗急性早幼粒细胞白血病的PML-RARαDNA疫苗提供重要资料。

关键词： PML-RARα融合基因 hGM-CSF基因急性早幼粒细胞白血病 DNA疫苗

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独特型TCR Vβ2 DNA疫苗的构建和体外表达检测

独特型TCR Vβ2 DNA疫苗的构建和体外表达检测

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第10届全国实验血液学会议

作者：周羽鷟黄梅娟杨力建陈少华李扬秩暨南大学医学院生化教研室暨南大学医学院血液病研究所暨南大学医学院血液病研究所暨南大学医学院血液病研究所暨南大学医学院血液病研究所

本研究目的在于构建独特型TCR Vβ2 DNA疫苗,并检测其体外表达情况。利用RT-PCR、基因扫描和序列分析技术检测T细胞株Molt-4细胞cDNA中TCR Vβ基因序列,根据其序列设计引物,并经RT-PCR获得Vβ2基因片段,将该Vβ2基因片段定向克隆至pIER... 详细信息

本研究目的在于构建独特型TCR Vβ2 DNA疫苗,并检测其体外表达情况。利用RT-PCR、基因扫描和序列分析技术检测T细胞株Molt-4细胞cDNA中TCR Vβ基因序列,根据其序列设计引物,并经RT-PCR获得Vβ2基因片段,将该Vβ2基因片段定向克隆至pIERs表达载体中,用PEI转染K562细胞株,用SDS-PAGE检测分离蛋白质,利用特异Vβ2抗体和western blot及化学发光法检测其所表达蛋白分量大小及特异性。研究结果显示经RT-PCR检测证实成功构建pIER-molt4

关键词：独特型 TCR V 体外表达 DNA

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组胺H_2受体阻滞剂对免疫介导再生障碍性贫血小鼠血清IFN-γ、TNF-α和IL-2水平的影响

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中华血液学杂志 2001年第10期22卷 542-543页

作者：廖继东汪明春马秀君李明万军梅赵忻林晨江振友暨南大学医学院中心实验室广州510632 深圳市血液病研究所深圳市第二人民医院血液科暨南大学医学院微生物教研室

目的观察颅内动脉瘤血管内栓塞治疗后近期及远期效果。方法　对173例颅内动脉瘤血管内栓塞治疗后的病人进行临床随访，了解栓塞治疗后3～24个月内临床症状恢复情况，部分病人用数字减影脑血管造影的方法，了解颅内动脉瘤栓塞后复发情况... 详细信息

目的观察颅内动脉瘤血管内栓塞治疗后近期及远期效果。方法　对173例颅内动脉瘤血管内栓塞治疗后的病人进行临床随访，了解栓塞治疗后3～24个月内临床症状恢复情况，部分病人用数字减影脑血管造影的方法，了解颅内动脉瘤栓塞后复发情况及复发的原因。结果　经对173例病人的临床随访，均未见再出血，临床症状逐步恢复，其中56例动眼神经麻痹病人，1例于1周内恢复，52例于1年内恢复，3例于1.5年内恢复。10例视力下降病人，6个月后视力均有不同程度的恢复。其中84例病人行脑血管造影复查，5例复发，其中2例因可脱性弹簧圈吸收造成复发，3例因弹簧圈移位，瘤蒂显影，无一例再发生蛛网膜下腔出血。结论　颅内动脉瘤行血管内栓塞治疗，因其创伤小、疗效显著、并发症少而成为可靠的治疗手段。

关键词：再生障碍性贫血组胺 H2受体阻滞剂免疫介导血清 IFN-γ TFN-αIL-2

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