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暨南大学学报（自然科学与医学版） 2011年第2期32卷 194-198,208页

作者：丁晖潘运龙覃莉陈茜暨南大学附属第一医院普外科广东广州510630 暨南大学医学院组织与胚胎学教研室广东广州510632 暨南大学理工学院化学系广东广州510632

目的：利用原子力显微镜（AFM）在单细胞水平分析正常人脐静脉内皮细胞的形貌特征和机械性质,为了解内皮细胞结构与功能的关系奠定基础。方法：新鲜人脐静脉内灌注质量分数为0.25%胰蛋白酶消化,获得人脐静脉内皮细胞（HUVECs）,M199培... 详细信息

目的：利用原子力显微镜（AFM）在单细胞水平分析正常人脐静脉内皮细胞的形貌特征和机械性质,为了解内皮细胞结构与功能的关系奠定基础。方法：新鲜人脐静脉内灌注质量分数为0.25%胰蛋白酶消化,获得人脐静脉内皮细胞（HUVECs）,M199培养基进行培养,免疫细胞化学检测内皮细胞第Ⅷ因子的表达。将体外培养的HUVECs用质量分数为4%多聚甲醛固定,空气中干燥后用原子力显微镜进行观察。结果：HUVECs体外生长3~4d后可铺满单层,细胞呈长梭形,蛋白水平高表达第Ⅷ因子。细胞周期显示77.7%细胞处于G1期。AFM形貌图显示细胞呈长梭形,长径是45~55μm、短径是23~28μm、高度是280-400 nm。AFM分析细胞膜表面超微结构的几何参数,高低差（Rp-v）是（150.40±11.26）nm,均方根粗糙度（Rq）是（36.17±5.58）nm,平均粗糙度（Ra）是（26.80±5.54）nm,平均高度（M eantH t）是（144.2±13.35）nm。利用AFM高空间分辨率的力位移曲线测量系统,测出细胞膜表面的黏附力约为800 pN,硬度是（1.12±0.24）mN/m。结论：AFM能对内皮细胞表面的超微结构进行成像并提供准确而客观的信息,有助于加深对内皮细胞结构与功能关系的理解。

关键词：人脐静脉内皮细胞原子力显微镜形貌机械性质

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聚碳酸亚丙酯/壳聚糖纳米纤维三维多孔支架复合骨髓间充质干细胞修复兔骨缺损

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中国组织工程研究与临床康复 2011年第16期15卷 2889-2894页

作者：郇松玮查振刚姚平吴昊刘宁赵剑豪熊高鑫佘国荣暨南大学骨科疾病研究所骨科疾病研究所暨南大学附属第一医院骨科暨南大学医学院生理学教研室暨南大学理工学院材料系广东省广州市510632

背景:骨组织工程细胞移植技术是近年来的研究热点,支架材料是其重要组成部分,同时也是三大要素中最有望取得突破性进展的环节,随着组织工程材料工艺的革新,有望为更好地修复骨缺损带来新的希望。目的:评价聚碳酸亚丙酯/壳聚糖纳米纤维(p... 详细信息

背景:骨组织工程细胞移植技术是近年来的研究热点,支架材料是其重要组成部分,同时也是三大要素中最有望取得突破性进展的环节,随着组织工程材料工艺的革新,有望为更好地修复骨缺损带来新的希望。目的:评价聚碳酸亚丙酯/壳聚糖纳米纤维(propylene carbonate/chitosan nanofibers,PPC/CSNF)三维多孔支架复合骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cell,BMSCs)修复兔股骨髁部骨缺损的能力。方法:二次相分离法制作PPC/CSNF复合三维多孔支架,将第3代的BMSCs种植到复合材料上。36只新西兰大白兔右侧股骨髁制作直径6mm深10mm骨缺损,于缺损处实验组植入复合BMSCs的PPC/CSNF多孔支架,对照组植入单纯PPC/CSNF多孔支架,标准组于兔髂后上棘取自体松质骨移植于缺损部位,空白组不做处理。术后第4,8,12周取材,通过大体观察、放射学检查和组织学检查等方法评价其修复缺损情况。结果与结论:实验组放射学评价与标准组无显著差异,两组结果均优于对照组(P<0.05);实验组大体标本与标准组基本一致;实验组组织学检查新骨生成速度、生成量优于对照组(P<0.05);空白组不能自行修复骨缺损,最后缺损由纤维组织充填。结果显示PPC/CSNF多孔支架具有较好的细胞和组织相容性,复合兔BMSCs能加速新骨形成,可用于修复兔股骨髁部骨缺损。

关键词：聚碳酸亚丙酯骨髓间充质干细胞骨缺损壳聚糖纳米纤维

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白介素2与梅毒螺旋体膜蛋白Gpd双价核酸疫苗的免疫活性及保护作用研究

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中华皮肤科杂志 2011年第10期44卷 688-692页

作者：余坚赵飞骏张晓红顾伟鸣刘双全曾铁兵张跃军裴瑞青吴移谋南华大学病原生物研究所湖南衡阳421001 南华大学医学院组胚教研室上海市皮肤病医院检验科南华大学附属第一医院检验科

目的探讨白介素2（IL-2）基因与梅毒螺旋体（Treponema pallidum，Tp）Gpd抗原编码基因融合构建双价核酸疫苗免疫新西兰兔后的免疫应答效果及感染Tp后的保护作用。方法定向克隆构建真核表达重组体pcDNA3．1（＋）／Gpd—IL-2，与先期构... 详细信息

目的探讨白介素2（IL-2）基因与梅毒螺旋体（Treponema pallidum，Tp）Gpd抗原编码基因融合构建双价核酸疫苗免疫新西兰兔后的免疫应答效果及感染Tp后的保护作用。方法定向克隆构建真核表达重组体pcDNA3．1（＋）／Gpd—IL-2，与先期构建的pcDNA3．1（＋）／Gpd真核表达重组体分别设为两个疫苗实验组，同时设pcDNA3．1（＋）空质粒对照组及PBS对照组，共4组，每组18只雄性新西兰兔，肌肉多点注射初次免疫，于初次免疫后第10周各实验组兔皮下接种Tp标准株进行感染实验，酶联免疫吸附试验（ELISA）检测不同时间点免疫兔特异性抗体产生水平和脾细胞IL-2及干扰素γ（IFN-γ）诱导水平，噻唑蓝法检测兔脾淋巴细胞增殖水平。结果用pcDNA3．1（＋）／Gpd—IL-2融合双价疫苗和pcDNA3．1（＋），Gpd单基因疫苗在免疫期间和感染期间均能检测到高滴度的IgG特异性抗体，最高滴度分别可达1：4096和1：1024（P值均〈0．01）；两疫苗组之间在免疫及感染期间不同时间点比较差异也有统计学意义（P值均〈0．01）；免疫后第8周双价融合核酸疫苗组及单基因核酸疫苗组兔脾细胞培养上清中IFN-γ分别为（447±22．4）μg／L、（225±17．6）μg／L，IL-2分别为（167±15．7）μg／L、（110±12．6）μg／L，均高于空质粒对照组和空白对照组（P值均〈0．01）；感染期间不同时间点兔脾细胞受相应蛋白刺激均有明显增殖反应，检测指标均显著高于空质粒对照组和空白对照组（P值均〈0．01）。早期感染皮损观察显示双价融合核酸疫苗组较之单基因疫苗组有着更低的皮损Tp检测阳性率（17．5％）、溃疡病灶发生率（15％）以及更短的皮损愈合时间。结论用pcDNA3．1（＋）／Gpd—IL-2双基因融合疫苗在兔体内能更有效地诱导保护性体液免疫和细胞免疫应答。

关键词：密螺旋体,苍白疫苗,DNA 白细胞介素2 Gpd

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2,3,7,8-四氯苯二噁英宫内暴露对子鼠肾细胞及其亚细胞结构的毒性影响

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解剖学研究 2011年第5期33卷 321-322,330,F0003页

作者：袁红海潘三强宿宝贵李素梅康举龄暨南大学医学院人体解剖学教研室广东广州510632 暨南大学附属第一医院

目的探讨妊娠早期母鼠接触2,3,7,8-四氯苯二噁英(TCDD)后对子代新生鼠肾的毒性影响。方法妊娠13 d的SD雌性大鼠随机分为对照组、玉米油组和染毒组(每组6只),观察3组大鼠出生3 d雌性鼠的肾细胞及其亚细胞结构差异。结果对照组子鼠和玉米... 详细信息

目的探讨妊娠早期母鼠接触2,3,7,8-四氯苯二噁英(TCDD)后对子代新生鼠肾的毒性影响。方法妊娠13 d的SD雌性大鼠随机分为对照组、玉米油组和染毒组(每组6只),观察3组大鼠出生3 d雌性鼠的肾细胞及其亚细胞结构差异。结果对照组子鼠和玉米油组子鼠的肾,不论是细胞结构还是亚细胞结构均未见病理改变。染毒组中,5 ng/kgTCDD的子鼠肾小管扩张,上皮细胞胞质内线粒体水肿。随着染毒剂量的加大,出现肾小囊扩大,并有血细胞漏出,肾小管上皮细胞内细胞器,尤其是线粒体结构严重破坏。结论 TCDD宫内暴露使子鼠的肾结构产生明显的病理性损伤,该损伤随着染毒剂量的增加而加重。

关键词： 2,3,7,8-四氯苯二噁英宫内暴露肾

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T-ALL中Notch1基因突变和高表达特点

T-ALL中Notch1基因突变和高表达特点

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第13届全国实验血液学会议

作者：林春兰郑海涛王春燕杨力建陈少华李萡周羽竝谭获李扬秋暨南大学医学院生化教研室暨南大学医学院血液病研究所广州医学院第一附属医院肿瘤血液中心暨南大学再生医学教育部重点实验室

Notch1信号通路在T细胞的发育过程起重要作用,对T细胞发育的各个阶段进行精细调节,Notch1表达失调可使得T淋巴细胞的发育阻断在双阳性阶段。近年来,不少研究报道了T-ALL/淋巴瘤中Notch1基因突变和异常表达情况,有认为可以作为T-ALL预后... 详细信息

Notch1信号通路在T细胞的发育过程起重要作用,对T细胞发育的各个阶段进行精细调节,Notch1表达失调可使得T淋巴细胞的发育阻断在双阳性阶段。近年来,不少研究报道了T-ALL/淋巴瘤中Notch1基因突变和异常表达情况,有认为可以作为T-ALL预后的一个指标。本研究利用RT-PCR和核苷酸序列分析分析了13例T-ALL病人中Notch1基因突变及其表达水平变化特点。研究发现,3例T-ALL中出现Notch1基因突变,

关键词：基因突变高表达 Notchl T-ALL Notch1

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实时定量PCR检测BK病毒时尿样本的优化处理

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第二军医大学学报 2010年第4期31卷 438-441页

作者：林春兰卢育洪陈少华李扬秋朱康儿张涛暨南大学医学院生物化学教研室广州510632 暨南大学附属第一医院血液科广州510632 暨南大学医学院血液研究所广州510632

目的建立简便有效的样本处理方法,提高实时荧光定量PCR法检测尿液中BK病毒载量的敏感性和准确性。方法任意选择24例BK病毒阳性样本,每一样本进行4种不同的处理:原尿、原尿病毒DNA提纯、1:10稀释尿液、1:100稀释尿液,实时荧光定量PCR法... 详细信息

目的建立简便有效的样本处理方法,提高实时荧光定量PCR法检测尿液中BK病毒载量的敏感性和准确性。方法任意选择24例BK病毒阳性样本,每一样本进行4种不同的处理:原尿、原尿病毒DNA提纯、1:10稀释尿液、1:100稀释尿液,实时荧光定量PCR法检测各组样本BK病毒载量,所测数据用SPSS11.0进行统计学分析。结果4种不同的处理方法对实时荧光定量PCR法检测尿液中BK病毒载量有明显的影响:原尿阴性3例,病毒载量在4组中的最低值占66.7%;1:100稀释尿阴性2例,病毒载量在4组中的最高值占79.2%,但中位值和1:10稀释组差异无统计学意义;DNA纯化组与1:10稀释尿液病毒检出率相当,均为100%,但DNA纯化组目标基因的流失量较明显。结论在临床尿液中BK病毒载量检测时,1:10稀释尿在实时荧光定量PCR检测BK病毒时DNA损失小,效率高,且处理过程简便、成本低,是一种较好的尿样本处理方法。

关键词： BK病毒尿实时荧光定量PCR 病毒载量

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关节置换术治疗膝关节色素沉着绒毛结节性滑膜炎伴关节软骨破坏1例

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临床骨科杂志 2011年第2期14卷 240-240页

作者：苗贵强查振刚吴昊刘宁林宏生姚平张嘉晴李劼若暨南大学骨科疾病研究所暨南大学附属第一医院骨科广东广州510630 暨南大学医学院生理教研室广东广州510632 暨南大学医学院生化教研室广东广州510632

1病例资料患者,女,62岁,7年前在无明显诱因的情况下出现左膝关节肿胀,经休息和理疗症状好转,后又反复发作。近1年多症状逐渐加重,膝关节肿胀明显,影响生活。在当地医院反复做膝关节穿刺,每次抽出约100 ml暗红色液体,抽液后症状明显缓解。

关键词：膝关节滑膜炎,色素绒毛结节性关节成形术,置换,膝

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纳米金与VEGF_(165)分子作用的原子力显微镜研究

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中国病理生理杂志 2010年第12期26卷 2295-2300页

作者：潘运龙邱思远覃莉王存川丁晖程欣杜彬暨南大学附属第一医院普外科广东广州510630 暨南大学医学院组织与胚胎学教研室广东广州510630 暨南大学附属第一医院病理科广东广州510630

目的:用原子力显微镜(AFM)从分子水平、可视化角度研究纳米金(GNP)与血管内皮生长因子(VEGF165)的分子作用。方法:GNP与VEGF165作用前后,用AFM表征粒子大小和形貌,光谱学检测GNP紫外吸收光谱变化,粒径分析仪检测粒径分布变化;用VEGF165... 详细信息

目的:用原子力显微镜(AFM)从分子水平、可视化角度研究纳米金(GNP)与血管内皮生长因子(VEGF165)的分子作用。方法:GNP与VEGF165作用前后,用AFM表征粒子大小和形貌,光谱学检测GNP紫外吸收光谱变化,粒径分析仪检测粒径分布变化;用VEGF165刺激无血清培养液的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)增殖,在GNP干预前后,用AFM观察HUVECs细胞表面超微结构变化。MTT法观察纳米金对HUVECs增殖的影响。结果:GNP与VEGF165作用后,其吸收峰发生红移;粒径分析表明GNP粒径的主要分布从20 nm变成30 nm;AFM表征下,单个GNP粒径22.05 nm±1.52 nm,呈椭圆形,边界清晰,加入VEGF165后,平均粒径变成33.91 nm±2.61 nm,边界模糊,形状不甚规则,表明GNP与VEGF165结合;在AFM观察到VEGF165作用的HUVECs细胞出现伪足、细胞膜孔洞、细胞膜颗粒化和细胞连接增多等表现,而GNP可以明显抑制这一现象,MTT法表明GNP抑制VEGF165介导的HUVECs增殖。结论:GNP可与VEGF165通过化学键连接,形成以GNP为核、VEGF165为壳的GNP-VEGF165复合物,使VEGF165与其受体结合的位点失活或被阻断,抑制VEGF165的信号转导,从而抑制HUVECs增殖。

关键词：纳米金血管内皮生长因子原子力显微镜人脐静脉内皮细胞

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大鼠CRMP1基因siRNA的筛选

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暨南大学学报（自然科学与医学版） 2010年第6期31卷 560-564页

作者：张忠其李斌陈万群张文斌龚晓兵郭国庆暨南大学医学院人体解剖学教研室暨南大学医学院生物化学教研室广东广州510632 暨南大学附属第一医院外科暨南大学附属第一医院消化内科人工肝室广东广州510630

目的:筛选有效抑制大鼠CRMP1基因表达的siRNA序列。方法:化学合成3对针对大鼠CRMP1基因的特异性siRNA,用脂质转染胺(lipofectamine)LTX转染大鼠海马神经元,通过流式细胞仪检测转染效率,使用RT-PCR与实时PCR检测CRMP1基因mRNA的表达,从... 详细信息

目的:筛选有效抑制大鼠CRMP1基因表达的siRNA序列。方法:化学合成3对针对大鼠CRMP1基因的特异性siRNA,用脂质转染胺(lipofectamine)LTX转染大鼠海马神经元,通过流式细胞仪检测转染效率,使用RT-PCR与实时PCR检测CRMP1基因mRNA的表达,从而筛选抑制效率最高的siRNA。结果:流式细胞仪检测转染效率为52.5%。通过RT-PCR的初步检测和实时PCR的定量检测结果显示,与对照组相比,所设计的3对siRNA均能不同程度抑制CRMP1基因mRNA的表达,其中CRMP1-249 siRNA抑制效果最佳,抑制率达84.3%。结论:成功筛选出1对能有效抑制大鼠CRMP1基因表达的siRNA序列。

关键词：小干扰RNA 坍塌反应调节蛋白1 实时荧光定量PCR 大鼠

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同型半胱氨酸对血管内皮细胞骨架与内皮细胞功能的影响

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临床心血管病杂志 2010年第11期26卷 859-863页

作者：彭红艳常青唐海兰李自成武汉科技大学附属天佑医院超声影像科武汉430064 暨南大学医学院组胚教研室暨南大学实验技术中心暨南大学第一临床学院心内科

目的:通过动态观察同型半胱氨酸(Homocysteine,Hcy)作用后的血管内皮细胞功能的变化,以及对内皮细胞骨架肌动蛋白G-actin和F-actin的定量分析,探讨骨架肌动蛋白在Hcy损伤内皮中的作用及机制。方法:将体外培养的人脐静脉内皮细胞株(ECV-3... 详细信息

目的:通过动态观察同型半胱氨酸(Homocysteine,Hcy)作用后的血管内皮细胞功能的变化,以及对内皮细胞骨架肌动蛋白G-actin和F-actin的定量分析,探讨骨架肌动蛋白在Hcy损伤内皮中的作用及机制。方法:将体外培养的人脐静脉内皮细胞株(ECV-304)分为正常对照组、低剂量Hcy组(0.1mmol/L)、中剂量Hcy组(0.5mmol/L)和高剂量Hcy组(1.0mmol/L),观察各组细胞培养24h时其细胞骨架和相关功能的变化;中剂量Hcy组及高剂量Hcy组还观察了6h、12h时的相应变化。分别采用硝酸还原酶法、硫代巴比妥酸法检测各组条件培养基中一氧化氮(NO)、脂质过氧化代谢产物丙二醛(MDA)的含量。用Rhodamine-Phalloidin标记纤维状肌动蛋白(F-actin),Alexa Flour488-DnaseⅠ标记球状肌动蛋白单体(G-actin),激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)检测内皮细胞骨架G-actin、F-actin含量,并计算G/F比值。结果:随着Hcy作用时间的延长或剂量的增大,NO含量总体呈下降趋势,而MDA含量增高;G-actin、F-actin总体含量及G/F比值上升,并呈一定的时间、剂量相关性。结论:Hcy可通过改变骨架蛋白G-actin和F-actin含量,以及G/F比值引致内皮细胞功能的损伤,这也可能是其诱导动脉粥样硬化早期变化的重要机制之一。

关键词：细胞骨架内皮,血管同型半胱氨酸肌动蛋白定量分析

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