检索结果-内蒙古大学图书馆

华南理工大学学报（自然科学版） 2001年第12期29卷 61-64页

作者：李校堃吴晓萍郑青黄亚东许华姚成灿赵文暨南大学医药生物技术研究开发中心广东广州510632

构建能高效表达人酸性成纤维细胞生长因子 (haFGF)的基因工程菌 ,优化产物分离纯化条件 ,并对纯化产物进行理化性质鉴定 .采用PCR方法扩增haFGFcDNA ,将该cDNA片段插入表达载体 pET3c的表达框架中 ,筛选得到了重组质粒pET3c_haFGF ,转... 详细信息

构建能高效表达人酸性成纤维细胞生长因子 (haFGF)的基因工程菌 ,优化产物分离纯化条件 ,并对纯化产物进行理化性质鉴定 .采用PCR方法扩增haFGFcDNA ,将该cDNA片段插入表达载体 pET3c的表达框架中 ,筛选得到了重组质粒pET3c_haFGF ,转化大肠杆菌BL2 1(DE3) ,构建了表达菌株BL2 1(DE3) / pET3c_haFGF .IPTG诱导表达 ,通过离子交换、肝素亲和两步层析的方法分离纯化产物 .用MTT法测定产物的活性 .haFGF的表达量约为 2 0 % .经过两步层析纯化 ,获得了电泳纯的haFGF样品 .纯化haFGF样品的比活性为ED50 小于 4 .0ng/mL .BL2 1(DE3) / pET3c表达系统能高效表达haFGF ,经过纯化得到了理化性质及生物活性与天然haFGF对照品一致的重组人酸性成纤维细胞生长因子 .

关键词：人酸性成纤维细胞生长因子诱导表达分离纯化基因工程氨基酸残基理化性质生物活性

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重组人碱性成纤维细胞生长因子突变体[Ser^(69,87)]的表达、纯化及其稳定性研究

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中国药科大学学报 2005年第2期36卷 168-172页

作者：吴晓萍冯辉李校堃苏志坚郑青黄亚东暨南大学医药生物技术研究开发中心广州510632

目的:对野生型人碱性成纤维细胞生长因子(hbFGF)进行突变改造以提高其稳定性。方法:采用PCR突变方法,将hbFGFcDNA第6 9位和87位的Cys密码子突变为Ser密码子,所得的突变片断插入表达载体pET3c的表达框架中,构建了表达菌株BL2 1(DE3) /pET... 详细信息

目的:对野生型人碱性成纤维细胞生长因子(hbFGF)进行突变改造以提高其稳定性。方法:采用PCR突变方法,将hbFGFcDNA第6 9位和87位的Cys密码子突变为Ser密码子,所得的突变片断插入表达载体pET3c的表达框架中,构建了表达菌株BL2 1(DE3) /pET3c [Ser69,87]hbFGF ,IPTG诱导表达。通过离子交换、肝素亲和两步层析的方法分离纯化突变体蛋白[Ser69,87]hbFGF。MTT法测定重组蛋白的促分裂活性。并对突变体蛋白的抗蛋白酶水解能力、热稳定性及其酸碱稳定性进行了检测。结果:所构建的表达菌株,其[Ser69,87]hbFGF的表达量占菌体总蛋白的30 %以上。经两步层析纯化,获得了纯度达98%的突变体[Ser69,87]hbFGF。纯化的样品促Balb/c 3T3细胞增殖的活性与野生型hbFGF相当。突变体[Ser69,87]hbFGF抗胰蛋白酶水解的能力较野生型hbFGF强;热稳定性和酸碱稳定性也较野生型hbFGF高。结论:突变体[Ser69,87]hbFGF的生物学活性与野生型hbFGF相当,其稳定性明显高于野生型hbFGF。

关键词：人碱性成纤维细胞生长因子突变体稳定性

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截断型人酸性成纤维细胞生长因子的表达及活性鉴定(英文)

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中国药科大学学报 2004年第5期35卷 470-473页

作者：吴晓萍苏志坚郑青黄亚东李校堃暨南大学医药生物技术研究开发中心广州510632

目的 :稳定且具有活性的截断型人酸性成纤维细胞生长因子 (shaFGF)的构建、表达及纯化。方法 :以含全长人酸性成纤维细胞生长因子cDNA的质粒pUC haFGF为模板 ,设计一对引物 ,PCR扩增获得shaFGFcDNA ,将其克隆到表达载体pET3c中 ,重组质... 详细信息

目的 :稳定且具有活性的截断型人酸性成纤维细胞生长因子 (shaFGF)的构建、表达及纯化。方法 :以含全长人酸性成纤维细胞生长因子cDNA的质粒pUC haFGF为模板 ,设计一对引物 ,PCR扩增获得shaFGFcDNA ,将其克隆到表达载体pET3c中 ,重组质粒转化大肠杆菌BL2 1(DE3) ,0 5mmol/LIPTG诱导表达 ,通过离子交换和肝素亲和层析纯化目标蛋白 ,MTT法检测促分裂活性。结果 :shaFGF的表达量约为 2 5 % ,纯化的shaFGF的促分裂活性与haFGF标准品相当。结论 :BL2 1(DE3) /pET3c表达系统能高效表达shaFGF ,纯化得到的shaFGF可供下一步的药学研究。

关键词： FGF 酸性成纤维细胞生长因子表达系统纯化活性鉴定肝素亲和层析药学研究 IPTG 高效表达诱导表达

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人参三醇组甙抗辐射作用的研究

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中药材 2002年第11期25卷 805-808页

作者：李校坤林灼锋黄亚东邓青许华暨南大学医药生物技术研究开发中心广州510632

目的:探讨人参三醇组甙(panaxatriol)的辐射防护作用,为开发相关的护肤产品提供实验依据。方法:小鼠接受X射线照射前用人参三醇组甙灌胃,照射后3h取小鼠骨髓细胞制备染色体标本,观察骨髓细胞染色单体型和染色体型畸变以及畸变细胞数。结... 详细信息

目的:探讨人参三醇组甙(panaxatriol)的辐射防护作用,为开发相关的护肤产品提供实验依据。方法:小鼠接受X射线照射前用人参三醇组甙灌胃,照射后3h取小鼠骨髓细胞制备染色体标本,观察骨髓细胞染色单体型和染色体型畸变以及畸变细胞数。结果:辐照前给予人参二醇组甙200～400 mg/kg可降低辐射诱发染色体和细胞的畸变;给药剂量和给药时间与防护效应呈正相关,照射剂量与防护效应呈负相关。结论:人参三醇组甙对骨髓细胞染色体具有较好的辐射防护作用。

关键词：人参三醇组甙染色体畸变辐射防护

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抗菌肽和人酸性成纤维细胞生长因子融合蛋白在毕赤酵母中的表达及其活性鉴定

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中国药科大学学报 2005年第1期36卷 63-68页

作者：苏志坚吴晓萍郑青黄亚东庞实锋冯雅李校堃暨南大学药学院暨南大学医药生物技术研究开发中心广州510632

目的 :构建和表达一种抗菌肽和人酸性成纤维细胞生长因子的融合蛋白 ,在创伤皮肤表面应用时能裂解成有功能的抗菌肽和人酸性成纤维细胞生长因子 ,预防伤口感染和促进皮肤修复。方法 :利用PCR技术分别扩增出带有凝血酶切割位点的天蚕素... 详细信息

目的 :构建和表达一种抗菌肽和人酸性成纤维细胞生长因子的融合蛋白 ,在创伤皮肤表面应用时能裂解成有功能的抗菌肽和人酸性成纤维细胞生长因子 ,预防伤口感染和促进皮肤修复。方法 :利用PCR技术分别扩增出带有凝血酶切割位点的天蚕素杂合肽基因和人酸性成纤维细胞生长因子基因。再将两者作为模板 ,用PCR方法扩增出编码融合蛋白的DNA。将该DNA片段插入到载体pPICZαA中 ,并利用电转法将质粒转入毕赤酵母smd116 8中 ,Zeocin抗性筛选重组转化子。甲醇诱导 96h ,SDS PAGE电泳检测融合蛋白的表达 ,并用Western blot杂交检测融合蛋白的免疫原性。利用肝素亲和层析纯化融合蛋白 ,同时检测融合蛋白的抑菌和促3T3Bal/b细胞分裂活性。结果 :筛选出能表达相对分子质量约为 19kD融合蛋白的重组转化株 ,SDS PAGE电泳检测显示甲醇诱导 96h后 ,融合蛋白表达量达到最高 ,且能与人酸性成纤维细胞生长因子抗体产生免疫反应。融合蛋白没有抑菌活性 ,而裂解产物则具有抑菌活性。此外 ,融合蛋白的促细胞分裂活性与野生型人酸性成纤维细胞生长因子相比没有明显的降低。结论 :获得含凝血酶切割位点的抗菌肽和人酸性成纤维细胞生长因子的融合蛋白 ,并在毕赤酵母中实现了表达。融合蛋白的裂解产物具有抑菌活性。

关键词：抗菌肽人酸性成纤维细胞生长因子融合蛋白毕赤酵母构建表达

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茶色素对紫外线照射致小鼠皮肤光老化的防护效应

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中药材 2002年第1期25卷 29-31页

作者：张素慧吕俊华李校堃郑青暨南大学医学院广州510632 暨南大学医药生物技术研究开发中心广州510632

目的:研究茶色素对紫外线照射致小鼠皮肤光老化的防护效应。方法:用比色法测定小鼠皮肤组织的总抗氧化能力与脂质过氧化产物——丙二醛的含量。结果:灌胃和外涂茶色素均能明显提高经紫外线照射的小鼠皮肤组织总抗氧化能力(P<0.05),... 详细信息

目的:研究茶色素对紫外线照射致小鼠皮肤光老化的防护效应。方法:用比色法测定小鼠皮肤组织的总抗氧化能力与脂质过氧化产物——丙二醛的含量。结果:灌胃和外涂茶色素均能明显提高经紫外线照射的小鼠皮肤组织总抗氧化能力(P<0.05),明显降低组织中丙二醛的含量(P<0.05)。结论:茶色素能防治紫外线照射引起的自由基损伤,减缓皮肤光老化。

关键词：茶色素光老化总抗氧化能力丙二醛紫外线照射皮肤防护效应

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一种合成人血小板因子4基因的简便有效方法(英文)

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中国药科大学学报 2005年第6期36卷 590-593页

作者：吴晓萍苏志坚郑青吴思娴许华赵文李校堃暨南大学药学院广州510632 暨南大学医药生物技术研究开发中心广州510632

目的:用一种简便有效的方法合成hPF4基因,并在大肠杆菌BL21(DE3)中进行高效表达。方法:根据hPF4基因的序列,用touch-down PCR的方法合成hPF4基因,将合成的基因片断克隆到表达载体pGEX-4T-1中,构建了重组质粒pGEX-4T-1-hPF4,并将之转化... 详细信息

目的:用一种简便有效的方法合成hPF4基因,并在大肠杆菌BL21(DE3)中进行高效表达。方法:根据hPF4基因的序列,用touch-down PCR的方法合成hPF4基因,将合成的基因片断克隆到表达载体pGEX-4T-1中,构建了重组质粒pGEX-4T-1-hPF4,并将之转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达由谷胱甘肽转移酶和hPF4组成的融合蛋白。结果:用touch-down PCR的方法成功合成了hPF4基因。融合蛋白形成包含体,表达量约为全菌体蛋白的30%。结论:Touch-down PCR方法可作为合成其它目的基因的简便有效方法。BL21(DE3)/pGEX-4T-1表达系统能高效表达合成的hPF4基因,为下一步hPF4的纯化与生物学活性研究打下了基础。

关键词：人血小板因子4 基因合成基因表达

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一种缺失核定位信号区的hbFGF的表达及纯化(英文)

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中国药科大学学报 2005年第3期36卷 272-275页

作者：吴晓萍苏志坚郑青吴思娴冯雅曲红艳许华李校堃暨南大学药学院广州510632 暨南大学医药生物技术研究开发中心广州510632

目的:为了研究缺失核定位信号区的人碱性成纤维细胞生长因子(hbFGF)独特的转运机制,在大肠杆菌BL21(DE3)中高效表达和纯化了缺失核定位信号区的hbFGF。方法:将PCR扩增得到的hbFGFcDNA片断克隆到表达载体pET3c中,重组质粒转化大肠杆菌BL2... 详细信息

目的:为了研究缺失核定位信号区的人碱性成纤维细胞生长因子(hbFGF)独特的转运机制,在大肠杆菌BL21(DE3)中高效表达和纯化了缺失核定位信号区的hbFGF。方法:将PCR扩增得到的hbFGFcDNA片断克隆到表达载体pET3c中,重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,通过离子交换和肝素亲和层析从菌体上清中纯化目标蛋白,MTT法检测促分裂活性。结果:hbFGF的表达量约为全菌体蛋白的20%,纯化的缺失核定位信号区的hbFGF的促分裂活性与缺失核定位信号区的hbFGF标准品相当。结论:BL21(DE3)/pET3c表达系统能高效表达缺失核定位信号区的hbFGF,纯化得到的hbFGF可用于进一步的研究。

关键词：人碱性成纤维细胞生长因子核定位信号纯化

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haFGF和nm-haFGF过表达对乳腺肿瘤细胞增殖及c-fos、c-jun mRNA表达的影响

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中国药理学通报 2006年第4期22卷 402-407页

作者：郑青彭菲苏志坚吴晓萍许华李校堃暨南大学药学院广东广州510632 暨南大学医药生物技术研究开发中心广东广州510632

目的研究非促分裂人酸性成纤维细胞生长因子(non-mitogenetic human acidic fibroblast growth factor,nm-haF-GF)和人酸性成纤维细胞生长因子(haFGF)对恶性肿瘤细胞的增殖作用及其与对c-fos、c-jun mRNA表达的影响,探讨nm-haFGF在治疗神经系统疾病和心血管疾病等方面的临床应用安全性。方法构建细胞内真核表达载体pIRES/haF-GF、pIRES/nm-haFGF,分泌型真核表达载体pSectag/haFGF、pSectag/nm-haFGF。转染乳腺癌细胞MCF-7,Western blot鉴定细胞内及上清中aFGF的表达。用流式细胞技术分析细胞周期(G0/G1,S期,G2/M)。用半定量RT-PCR检测立早基因c-fos、c-jun mRNA的表达。结果nm-haFGF和haFGF在MCF-7细胞中能够过量表达。转染nm-haFGF组的S期和G2/M细胞比率与对照组差异无显著性,而转染haFGF组差异有显著性。转染haFGF后,c-fos、c-jun mRNA的表达明显升高,转染nm-aFGF后却与未转染组无差别。结论与haFGF相比,nm-haFGF消除了促肿瘤细胞增殖活性,基本不会诱导细胞c-fos、c-jun原癌基因的转录与表达。

关键词： haFGF 增殖活性 c-fos c-jun

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噬菌体展示技术筛选bFGF模拟短肽

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中国生物工程杂志 2006年第5期26卷 7-10页

作者：黄慧贤邱斌吴晓萍蔡绍晖李校堃暨南大学医药生物技术研究开发中心广州510632

目的:通过噬菌体展示技术筛选得到与FGFR结合的bFGF模拟短肽,为bFGF肽类抑制剂的研发提供实验基础。方法:以Balb/c3T3细胞为靶标,以COS-7细胞作消减,对噬菌体随机七肽库进行4轮生物淘洗,再采用ELISA检测单克隆噬菌体对Balb/c3T3亲和性... 详细信息

目的:通过噬菌体展示技术筛选得到与FGFR结合的bFGF模拟短肽,为bFGF肽类抑制剂的研发提供实验基础。方法:以Balb/c3T3细胞为靶标,以COS-7细胞作消减,对噬菌体随机七肽库进行4轮生物淘洗,再采用ELISA检测单克隆噬菌体对Balb/c3T3亲和性和特异性,选取阳性克隆进行DNA测序分析。结果:从富集的噬菌体中获得12个阳性克隆,获得一组疏水性七肽及共同基序PR。结论:利用肽类新药开发的重要工具———噬菌体展示技术,得到2段bFGF的受体结合模拟肽,可望作为bFGF抑制剂的先导肽。

关键词：碱性成纤维细胞生长因子(bFGF) 成纤维细胞生长因子受体(FGFR) 噬菌体展示技术七肽

来源：评论

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