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中华口腔医学研究杂志（电子版） 2010年第3期4卷 24-26页

作者：叶志佳舒建昌朱海燕吴海恩邓亮暨南大学医学院附属广州市红十字会医院口腔科广州510220 暨南大学医学院附属广州市红十字会医院消化内科广州510220

目的探讨姜黄素对体外培养人舌鳞癌Tca8113细胞凋亡的形态学影响。方法以30、40、50μmol/L的姜黄素溶液处理体外培养的人舌鳞癌Tca8113细胞,倒置显微镜下观察细胞生长状态,吖啶橙荧光染色和透射电镜观察细胞形态学变化。结果倒置显微... 详细信息

目的探讨姜黄素对体外培养人舌鳞癌Tca8113细胞凋亡的形态学影响。方法以30、40、50μmol/L的姜黄素溶液处理体外培养的人舌鳞癌Tca8113细胞,倒置显微镜下观察细胞生长状态,吖啶橙荧光染色和透射电镜观察细胞形态学变化。结果倒置显微镜下可观察到细胞皱缩成圆形,核染色质浓集呈球形;激光共聚焦显微镜(吖啶橙染色)可见凋亡细胞的多种形态学改变;透射电镜见核染色质浓缩并沿核膜排列,可见凋亡小体。结论姜黄素作用于人舌鳞癌Tca8113细胞后可出现细胞凋亡的形态学改变。

关键词：姜黄素癌鳞状细胞细胞凋亡

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人源化抗肝癌噬菌体单链抗体二聚体的构建、表达与鉴定

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中华肝脏病杂志 2009年第6期17卷 466-467页

作者：别彩群杨冬华刘浏暨南大学附属第一医院消化科广州510630

抗肝癌单链抗体（scFv）的肿瘤靶向治疗是目前治疗肝癌的一个新策略，但由于其存在亲和力低、稳定性较差、体内清除过快等不足，使它的广泛应用受到一定限制。改变scFv连接肽的长度而得到多价、高亲和力的新型小分子抗体，由于克服了以... 详细信息

抗肝癌单链抗体（scFv）的肿瘤靶向治疗是目前治疗肝癌的一个新策略，但由于其存在亲和力低、稳定性较差、体内清除过快等不足，使它的广泛应用受到一定限制。改变scFv连接肽的长度而得到多价、高亲和力的新型小分子抗体，由于克服了以上不足，较scFv具有诸多优势，其中以二聚体的功能最好。本研究将我室已获得的人源化抗肝癌噬菌体scFvHBM的连接肽缩短至3～5个氨基酸，构建高亲和力的人源化抗体二聚体，在大肠杆菌中可溶性表达，并鉴定其生物学活性，以期获得具有临床应用前景的肿瘤靶向治疗抗体。

关键词：癌,肝细胞抗体亲和力单链抗体二聚体

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超声与X线引导内镜胆道引流术的临床研究

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中华消化杂志 2009年第9期29卷 529-532页

作者：江向武杨冬华杨见权黄卫汤绍辉暨南大学附属第一医院消化科广州510630

目的比较分析超声与X线引导内镜胆道引流术的置管成功率、疗效及手术并发症。方法比较62例超声引导内镜胆道引流术（超声引导组）和54例X线引导内镜胆道引流术（X线引导组）患者手术前后血清胆红素、胆总管内径和临床症状的变化情况。... 详细信息

目的比较分析超声与X线引导内镜胆道引流术的置管成功率、疗效及手术并发症。方法比较62例超声引导内镜胆道引流术（超声引导组）和54例X线引导内镜胆道引流术（X线引导组）患者手术前后血清胆红素、胆总管内径和临床症状的变化情况。结果超声引导组62例中54例置管成功，手术前与术后1周患者血清直接胆红素分别为（205．41±115．27）μmol／L及（106．47±82．16）μmol／L（P〈0．05），胆总管内径分别为（12．6±7．1）mm及（8．5±3．1）mm（P〈0．05）。X线引导组54例中51例置管成功，手术前与术后1周患者血清直接胆红素分别为（211．14±106．25）μmol／L及（110．89±59．47）μmol／L（P〈0．05），胆总管内径分别为（13．1±7．0）mm及（8．8±3．2）mm（P〈0．05）。超声引导组术后无腹痛、发热、淀粉酶升高等早期并发症，X线引导组术后有3例（5．9％）出现上述并发症。结论X线仍然是内镜胆道引流术最有效的引导方法。超声引导可避免X线辐射、造影剂过敏等不利因素，且具有实时显示、移动方便，可进行床边急诊、内镜下诊治等优点，可替代X线用于引导所有胆道结石以及狭窄不甚严重的肿瘤患者行鼻胆管引流术和胆道塑料支架引流术。

关键词：胰胆管造影术,内镜逆行超声 X线

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卵巢癌、结肠癌、胰腺导管内乳头状黏液腺癌三原发癌一例

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中华内科杂志 2009年第9期48卷 774-775页

作者：姚艳芳杨冬华汤绍辉甘思远冯淑芬暨南大学附属第一医院消化科广州510630

患者女，54岁。因“腹痛、恶心6h”于2008年9月2日入院。患者6h前晚餐后腹痛，始为上腹部，渐弥散至全腹，呈阵发性绞痛，无发热、呕吐及腹泻，2h前曾排便。既往史：15年前曾因卵巢癌行卵巢癌根治术，术后应用铂类制剂静脉化疗；高血压... 详细信息

患者女，54岁。因“腹痛、恶心6h”于2008年9月2日入院。患者6h前晚餐后腹痛，始为上腹部，渐弥散至全腹，呈阵发性绞痛，无发热、呕吐及腹泻，2h前曾排便。既往史：15年前曾因卵巢癌行卵巢癌根治术，术后应用铂类制剂静脉化疗；高血压病史5年，血压控制可。无吸烟、酗酒史，家族史无特殊。

关键词：卵巢癌根治术三原发癌黏液腺癌结肠癌乳头状导管内胰腺餐后腹痛

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人端粒酶逆转录酶慢病毒载体的构建及人肝细胞的初步筛选

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中国病理生理杂志 2009年第4期25卷 826-829页

作者：梁旭竞陈小佳金玲李丽玲汤绍辉陈友鹏杨冬华暨南大学附属第一医院消化科暨南大学生物工程研究所广东广州510632 暨南大学附属第一医院眼科暨南大学附属第一医院感染科

目的:构建人端粒酶逆转录酶(hTERT)慢病毒表达载体,将其转染人肝细胞L02并且通过杀稻瘟筛选出阳性克隆细胞。方法:以PBABE-puro-hTERT质粒为模板PCR法获取目的基因attB1-hTERT-attB2,通过BP反应克隆至pDONR221;采用LR重组酶将pDONR221-h... 详细信息

目的:构建人端粒酶逆转录酶(hTERT)慢病毒表达载体,将其转染人肝细胞L02并且通过杀稻瘟筛选出阳性克隆细胞。方法:以PBABE-puro-hTERT质粒为模板PCR法获取目的基因attB1-hTERT-attB2,通过BP反应克隆至pDONR221;采用LR重组酶将pDONR221-hTERT和pLenti6/V5-DEST进行重组反应,形成pLenti6/V5-DEST-hTERT。将重组载体pLenti6/V5-DEST-hTERT与包装质粒充分混合,利用脂质体共转染293FT细胞,获得重组慢病毒颗粒。将其感染人肝细胞L02,通过杀稻瘟筛选获得阳性克隆。结果:测序发现入门载体pDONR221包含的目的基因hTERT 1547位点存在点突变(原碱基A变成G),通过定点突变技术成功诱变并鉴定慢病毒表达载体pLenti6/V5-DEST-hTERT成功构建。重组慢病毒滴度为1×108TU/L,获得20株稳定抗性的单克隆细胞。结论:成功构建人端粒酶逆转录酶的慢病毒表达载体,获得稳定抗性的单克隆肝细胞,为进一步建立永生化肝细胞系奠定了基础。

关键词：端粒酶逆转录酶慢病毒载体肝细胞

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选择性环氧合酶-2抑制剂对HSC-T6细胞增殖的抑制作用

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中华肝脏病杂志 2009年第5期17卷 346-349页

作者：何雅军潘洁舒建昌沈雁吕霞方力暨南大学医学院附属广州红十字会医院中心实验室广州510220 暨南大学医学院附属广州红十字会医院消化科广州510220 暨南大学医学院附属广州红十字会医院创伤研究所广州510220 暨南大学医学院附属广州红十字会医院病理科广州510220 暨南大学第一临床学院

目的观察选择性环氧合酶-2抑制剂NS398对肝星状细胞系HSC-T6细胞增殖的抑制作用，并探讨其可能的机制。方法采用不同浓度的NS398作用于HSC-T6，四甲基偶氮唑盐法检测HSC—T6细胞增殖情况，乳酸脱氢酶法检测NS-398对HSC-T6细胞的毒性作... 详细信息

目的观察选择性环氧合酶-2抑制剂NS398对肝星状细胞系HSC-T6细胞增殖的抑制作用，并探讨其可能的机制。方法采用不同浓度的NS398作用于HSC-T6，四甲基偶氮唑盐法检测HSC—T6细胞增殖情况，乳酸脱氢酶法检测NS-398对HSC-T6细胞的毒性作用、流式细胞仪检测HSCT6细胞周期的改变，以EliVision^TM plus细胞免疫化学法检测HSC—T6中COX-2、增殖细胞核抗原（PCNA）蛋白表达的变化。多组数据间的比较采用单因素方差分析或独立样本丁检验，计数资料采用χ^2检验。结果在20～160mol／L浓度范围内，NS398以剂量和时间依赖性地抑制HSC—T6增殖（P〈0．01）。90、120、150umol／L的NS-398作用HSCT648h后，细胞周期分析结果显示S期细胞稍增多，Gz／M期细胞显著增加，各组之间细胞周期构成差异具有统计学意义（χ^2=12．35，P〈0．05）。以120μmol／LNS398作用HSC—T648h后，PCNA阳性细胞百分比为28．91％±0．11％，与对照组（85．99％±0．13％）比较，差异具有统计学意义（P〈0．01）；COX-2的阳性细胞百分比为13．80％±0．43％，与对照组（14．07％±0．59％）比较，差异无统计学意义（P〉0．05）。结论NS-398可以显著抑制HSC-T6增殖，使其发生G2／M期阻滞，其作用具有剂量与时间依赖性，NS398可能通过抑制HSC中PCNA的表达而抑制其增殖，但不影响COX-2的表达。

关键词：环氧合酶-2 NS-398 肝星状细胞增殖细胞周期

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特异性抗肝癌单链抗体二聚体在毕赤酵母中的表达、纯化及生物学活性鉴定

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世界华人消化杂志 2009年第36期17卷 3729-3733页

作者：别彩群杨冬华汤绍辉丁世华广州医学院附属深圳沙井医院消化科广东省深圳市518104 暨南大学附属第一医院消化科广东省广州市510630 深圳市第二人民医院消化科广东省深圳市518000

目的:实现特异性抗肝癌单链抗体二聚体在毕赤酵母中高效表达、纯化并鉴定其生物学活性.方法:构建酵母表达载体pGAPZαA-BDM,转化感受态大肠杆菌DH5α,选择测序正确的阳性克隆进行扩增后,电转化酵母细胞,表达抗体二聚体,对表达抗体进行... 详细信息

目的:实现特异性抗肝癌单链抗体二聚体在毕赤酵母中高效表达、纯化并鉴定其生物学活性.方法:构建酵母表达载体pGAPZαA-BDM,转化感受态大肠杆菌DH5α,选择测序正确的阳性克隆进行扩增后,电转化酵母细胞,表达抗体二聚体,对表达抗体进行纯化、浓度检测,并鉴定其对肝癌细胞的结合活性,免疫组织化学检测二聚体对肝癌组织抗原的特异性.结果:测序显示成功构建酵母表达载体pGAPZαA-BDM,表达96h抗体收获量最大,二聚体表达量为30mg/L菌液,为大肠杆菌的300倍.抗肝癌单链抗体二聚体BDM与三种肝癌细胞结合,而与正常肝细胞不结合,结合效价为1:128.免疫组织化学显示二聚体与肝癌组织结合的阳性率比肝硬化、胃癌、正常肝组织高,差异有统计学意义.结论:成功制备了高表达量、高特异性、较好的活性及稳定性的抗肝癌单链抗体二聚体BDM,为制备免疫纳米颗粒及开展肝癌的放射免疫诊断和靶向治疗奠定了基础.

关键词：肝癌抗体二聚体毕赤酵母结合活性特异性

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人端粒酶反转录酶和绿色荧光蛋白融合基因慢病毒表达载体的构建

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中国组织工程研究与临床康复 2009年第15期13卷 2931-2936页

作者：梁旭竞陈小佳金玲李丽玲汤绍辉陈友鹏杨冬华暨南大学附属第一医院消化科广东省广州市510632 暨南大学生物工程研究所广东省广州市510632 暨南大学附属第一医院眼科广东省广州市510632 暨南大学附属第一医院感染科广东省广州市510632

背景:外源性端粒酶反转录酶的表达可重建端粒酶活性,诱导细胞永生化。目的:采用慢病毒载体作为基因转移载体,克隆人端粒酶反转录酶的编码区全序列,同时选用绿色荧光蛋白作为目的基因表达标志物,构建人端粒酶反转录酶慢病毒表达载体。设... 详细信息

背景:外源性端粒酶反转录酶的表达可重建端粒酶活性,诱导细胞永生化。目的:采用慢病毒载体作为基因转移载体,克隆人端粒酶反转录酶的编码区全序列,同时选用绿色荧光蛋白作为目的基因表达标志物,构建人端粒酶反转录酶慢病毒表达载体。设计、时间及地点:开放性实验,单一样本观察,于2007-06/2008-03在暨南大学生物工程研究所及暨南大学附属第一医院中心实验室完成。材料:pBABE-puro-hTERT质粒由Robert Weinberg教授惠赠,质粒pDONR221,pLenti6/V5-DEST,ccdBSurvival,Stbl3及293FT细胞由暨南大学生物工程研究所提供。方法:以pBABE-puro-hTERT质粒为模板聚合酶链反应法获取目的基因人端粒酶反转录酶(包含酶切位点BglⅡ、HindⅢ),通过BP反应克隆至pDONR221,以质粒pEGFP-N1为模板,以聚合酶链反应法获取目的基因增强型绿色荧光蛋白(包含酶切位点HindⅢ,BgⅢ),通过酶切及连接反应形成pDONR221-hTERT-EGFP。采用LR重组酶将pDONR221-hTERT-EGFP和pLenti6/V5-DEST进行重组反应,形成pLenti6/V5-DEST-hTERT-EGFP。将pLenti6/V5-DEST-hTERT-EGFP与包装质粒混合,利用脂质体共转染293FT细胞。主要观察指标:通过酶切、聚合酶链式反应及测序验证重组质粒pDONR221-hTERT-EGFP和pLenti6/V5-DEST-hTERT-EGFP是否构建成功。包装重组慢病毒,应用荧光显微镜观察报告基因绿色荧光蛋白在293FT细胞中的表达情况。结果:测序发现慢病毒入门载体pDONR221包含目的基因hTERT1547位点存在点突变(原碱基A变成G),通过定点突变技术成功诱变并鉴定慢病毒表达载体pLenti6/V5-DEST-hTERT-EGFP成功构建。转染后的293FT细胞在荧光显微镜下观察可见强绿色荧光。结论:实验成功构建了人端粒酶反转录酶和绿色荧光蛋白融合基因的慢病毒表达载体,为人端粒酶反转录酶稳定转染提供快速、简洁的方法。

关键词：端粒酶反转录酶绿色荧光蛋白慢病毒载体

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Annexin V FITC/PI流式细胞术检测姜黄素诱导的肝星状细胞凋亡

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实用医学杂志 2009年第1期25卷 28-30页

作者：何雅军舒建昌吕霞沈雁暨南大学医学院附属广州市红十字会医院检验科 510220 暨南大学医学院附属广州市红十字会医院消化内科 510220 暨南大学医学院附属广州市红十字会医院创伤研究所 510220

目的:探讨Annexin V FITC/PI流式细胞术在检测姜黄素诱导的肝星状细胞(HSC)凋亡中的应用。方法:不同浓度姜黄素作用肝星状细胞株HSC-T6 24h,用Annexin V FITC/PI流式细胞术检测HSC凋亡。结果:姜黄素浓度为10μmol/L时,早期凋亡细胞开始... 详细信息

目的:探讨Annexin V FITC/PI流式细胞术在检测姜黄素诱导的肝星状细胞(HSC)凋亡中的应用。方法:不同浓度姜黄素作用肝星状细胞株HSC-T6 24h,用Annexin V FITC/PI流式细胞术检测HSC凋亡。结果:姜黄素浓度为10μmol/L时,早期凋亡细胞开始增多,至30μmol/L时,坏死细胞开始增多,随姜黄素浓度增高,各组凋亡细胞随之增多。0、10、20、30、40μmol/L5组的凋亡率分别是(3.81±0.64)%、(6.52±1.88)%、(11.61±2.79)%、(52.03±4.38)%、(87.11±12.62)%,与0μmol/L组比较,20、30、40μmol/L3组的凋亡率差异有统计学意义(P<0.05)。结论:Annexin V FITC/PI流式细胞术可定量检测姜黄素诱导的HSC早期凋亡。

关键词：细胞凋亡流式细胞术姜黄素 Annexin V 肝星状细胞

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高频电凝固术与氩等离子凝固术治疗短段Barrett食管的对比研究

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现代消化及介入诊疗 2009年第2期14卷 77-79页

作者：袁帅舒建昌刘胜雄南方医科大学附属小榄医院消化科 528415 暨南大学医学院附属广州红十字会医院消化科 510220 广东医学院附属韶关医院消化科 512000

目的对比研究高频电凝术(HFE)与氩等离子凝固术(APC)对短段Barrett食管(SSBE)的疗效。方法经胃镜和组织病理学检查确诊SSBE患者55例,其中30例接受HFE治疗,25例接受APC治疗,术后常规服用质子泵抑制剂,半年后复查胃镜和组织病理学检查,了... 详细信息

目的对比研究高频电凝术(HFE)与氩等离子凝固术(APC)对短段Barrett食管(SSBE)的疗效。方法经胃镜和组织病理学检查确诊SSBE患者55例,其中30例接受HFE治疗,25例接受APC治疗,术后常规服用质子泵抑制剂,半年后复查胃镜和组织病理学检查,了解病灶愈合情况,对比两种方法的疗效、并发症和治疗费用。结果所有患者均无穿孔、大出血、狭窄等严重并发症。不良反应发生率在HFE组为26.67%(8例),APC组为24%(6例),两组差异无统计学意义(P>0.05)。半年后复查,HFE组有4例复发,治疗有效率为86.67%;APC组有3例复发,治疗有效率为88%,两组差异无统计学意义(P>0.05)。HFE组平均每例费用为(355.93±33.00)元,APC组平均每例费用(716.00±69.76)元,两组费用差异有统计学意义(P<0.01)。结论HFE与APC均为治疗SSBE的安全、有效方法,APC安全性高、易于操作,而高频电凝固术具有廉价和易于普及的优势。

关键词：短段Barrett食管高频电凝固术氩等离子凝固术

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