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中国病理生理学会炎症发热感染低温专业委员会、中医专业委员会第15次联合学术交流会

作者：甘丹卉李安黄翠芹李勤范冲竹赵佳仪陆大祥暨南大学医学院病理生理学教研室广东广州 510632

目的：构建wnt3a重组过表达腺病毒pAd-GV314,并感染小鼠骨髓间充质干细胞中建立能够高表达wnt3a的治疗干细胞。方法：利用腺病毒穿梭质粒pAd-GV314构建载有wnt3a基因的穿梭质粒pAd-GV314-wnt3a载体,并通过基因测序鉴定载体序列正确。将... 详细信息

目的：构建wnt3a重组过表达腺病毒pAd-GV314,并感染小鼠骨髓间充质干细胞中建立能够高表达wnt3a的治疗干细胞。方法：利用腺病毒穿梭质粒pAd-GV314构建载有wnt3a基因的穿梭质粒pAd-GV314-wnt3a载体,并通过基因测序鉴定载体序列正确。将载体用PmeⅠ酶切线性化,与Ad Easy-BJ5183感受态细胞进行基因同源重组。将重组后的腺病毒载体经PacⅠ酶切线性化后,转染到HEK293细胞中进行包裹,根据增强绿色荧光蛋白(enhance green fluorescent protein,EGFP)的表达判断重组腺病毒的包装情况。通过反复离心和低温裂解细胞提取wnt3a重组表达腺病毒。

关键词：重组腺病毒转染 wnt3a 骨髓间充干细胞

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APP/PS1转基因小鼠原代神经元的氧化损伤改变

APP/PS1转基因小鼠原代神经元的氧化损伤改变

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中国病理生理学会炎症发热感染低温专业委员会、中医专业委员会第15次联合学术交流会

作者：甘丹卉李安黄翠芹李勤范冲竹赵佳仪陆大祥暨南大学医学院病理生理学教研室广东广州 510632

目的：对来源于APP/PS1转基因小鼠的原代皮质神经元进行验证,观察以线粒体功能障碍为主的氧化损伤改变,建立阿尔茨海默症(Alzheimer's disease,AD)的体外细胞模型。

关键词：阿尔茨海默症 APP/PS1 氧化损伤线粒体功能障碍

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番茄红素抑制叔丁基过氧化氢诱导的原代皮质神经元损伤

番茄红素抑制叔丁基过氧化氢诱导的原代皮质神经元损伤

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中国病理生理学会炎症发热感染低温专业委员会、中医专业委员会第15次联合学术交流会

作者：黄翠芹李勤李安甘丹卉范冲竹赵佳仪陆大祥暨南大学医学院病理生理学教研室广东广州510632

目的：观察番茄红素(Lycopene)对叔丁基过氧化氢(t-BHP)处理的原代皮质神经元的保护效应并探讨其作用机制。方法：用免疫荧光染色法检测神经微管结合蛋白(MAP-2)的表达来鉴定原代皮质神经元;将神经元随机分为正常组、t-BHP组、t-BHP+Lyc... 详细信息

目的：观察番茄红素(Lycopene)对叔丁基过氧化氢(t-BHP)处理的原代皮质神经元的保护效应并探讨其作用机制。方法：用免疫荧光染色法检测神经微管结合蛋白(MAP-2)的表达来鉴定原代皮质神经元;将神经元随机分为正常组、t-BHP组、t-BHP+Lycopene组、Lycopene组,培养24h,采用MTT法检测不同浓度t-BHP处理的神经元活性;DCFH-DA为荧光探针用流式细胞技术检测活性氧(ROS)的水平;免疫印迹方法检测Bax、Bcl-2、caspase3、cleaved-caspase3、细胞色素C、Akt和p-Akt蛋白的变化。

关键词：番茄红素皮质神经元叔丁基过氧化氢氧化损伤

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C57/BL6小鼠骨髓间充质干细胞的优化培养及鉴定

C57/BL6小鼠骨髓间充质干细胞的优化培养及鉴定

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中国病理生理学会炎症发热感染低温专业委员会、中医专业委员会第15次联合学术交流会

作者：李勤黄翠芹甘丹卉李安范冲竹赵佳仪陆大祥暨南大学医学院病理生理学教研室广东广州 510632

目的：寻找一种操作简单，高效的提取小鼠骨髓间充质干细胞的方法。方法：20只健康4～6周龄C57小鼠，以一侧胫骨为实验组，另一侧作为对照组，用全骨髓法分离培养。在P0代，实验组细胞增加换液次数，为每8h更换一次;对照组24～48h更换一... 详细信息

目的：寻找一种操作简单，高效的提取小鼠骨髓间充质干细胞的方法。方法：20只健康4～6周龄C57小鼠，以一侧胫骨为实验组，另一侧作为对照组，用全骨髓法分离培养。在P0代，实验组细胞增加换液次数，为每8h更换一次;对照组24～48h更换一次;P1代后，两组传代换液方法一致;倒置光学显微镜观察两组细胞的形态;至P4-P6代时，每一代细胞均采用流式细胞术鉴定两组细胞的标致性表面抗原。

关键词： C57/BL6小鼠骨髓间充质干细胞细胞培养鉴定

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泛素样蛋白蛋白酶体系统对单耐异烟肼结核杆菌耐药性的影响研究

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石河子大学学报（自然科学版） 2017年第2期35卷 163-168页

作者：张帅吴芳吴江东章乐朱荟云张大龙武青青张万江石河子大学医学院病理生理学教研室/新疆地方与民族高发病教育部重点实验室新疆石河子832003 石河子大学医学院第一附属医院重症医学科新疆石河子832002

为探讨泛素样蛋白蛋白酶体系统对单耐异烟肼结核杆菌耐药性的影响及其机制。采用刃天青显色法,比较单耐异烟肼结核杆菌(对照组)与4种基因(Pup基因、Dop基因、PafA基因、Mpa基因)过表达的单耐异烟肼结核杆菌菌株和4种相同基因缺失突变的... 详细信息

为探讨泛素样蛋白蛋白酶体系统对单耐异烟肼结核杆菌耐药性的影响及其机制。采用刃天青显色法,比较单耐异烟肼结核杆菌(对照组)与4种基因(Pup基因、Dop基因、PafA基因、Mpa基因)过表达的单耐异烟肼结核杆菌菌株和4种相同基因缺失突变的单耐异烟肼结核杆菌菌株异烟肼最低抑菌浓度(MIC)值的差异;比较在应用外排泵抑制剂后,单耐异烟肼结核杆菌(对照组)与4种基因(Pup基因、Dop基因、PafA基因、Mpa基因)过表达的单耐异烟肼结核杆菌菌株和4种相同基因缺失突变的单耐异烟肼结核杆菌菌株异烟肼MIC差值间的差异。结果显示:(1)与单耐异烟肼结核杆菌相比,过表达PafA基因的该菌株异烟肼的MIC值增加了1.03μg/m L,过表达Dop、Mpa基因的该菌株异烟肼的MIC值分别降低了1.03μg/m L、0.68μg/m L,差异均无统计学意义(P>0.05);与单耐异烟肼结核杆菌相比,过表达Pup基因的该菌株异烟肼的MIC值增加了8μg/m L,缺失Pup、Dop、PafA、Mpa基因的该菌株异烟肼的MIC值分别降低了4.82、4.98、4.99、4.9μg/m L,差异均有统计学意义(P<0.05)。(2)与在应用外排泵抑制剂后单耐异烟肼结核杆菌相比,过表达Pup基因的该菌株异烟肼的MIC差值增加了8μg/m L,缺失Pup、Dop、PafA、Mpa基因的该菌株异烟肼的MIC差值分别降低4.65、4.81、4.83、4.75μg/m L,差异均有统计学意义(P<0.05);与在应用外排泵抑制剂后单耐异烟肼结核杆菌相比,过表达Dop、PafA、Mpa基因的该菌株异烟肼的MIC差值分别降低了1、0.99、0.65μg/m L,差异均无统计学意义(P>0.05)。由此可知,结核杆菌泛素样蛋白蛋白酶体系统对单耐异烟肼结核杆菌耐药性的产生有调控作用,其作用机制可能是通过调控单耐异烟肼结核杆菌外排泵的功能来调控其耐药性的产生。

关键词：结核杆菌泛素样蛋白-蛋白酶体系统耐药性异烟肼机制

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T淋巴细胞及连接蛋白43在自发性高血压和正常血压大鼠肾脏的表达差异

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中华高血压杂志 2016年第5期24卷 451-456页

作者：张海超潘立君张亮李新芝李丽司军强马克涛石河子大学医学院生理学教研室新疆石河子832002 新疆地方与民族高发病教育部重点实验室中国石油乌鲁木齐石化公司职工医院内一科石河子大学医学院病理生理学教研室

目的观察T淋巴细胞亚群及连接蛋白43(Cx43)在自发性高血压大鼠(SHR)和WKY大鼠肾脏的表达差异及其与高血压肾损伤的关系。方法 16~17周龄成年雄性SHR和WKY大鼠,各12只,监测尾动脉血压后,分别测定大鼠24h尿蛋白、β_2微球蛋白、24h尿微量... 详细信息

目的观察T淋巴细胞亚群及连接蛋白43(Cx43)在自发性高血压大鼠(SHR)和WKY大鼠肾脏的表达差异及其与高血压肾损伤的关系。方法 16~17周龄成年雄性SHR和WKY大鼠,各12只,监测尾动脉血压后,分别测定大鼠24h尿蛋白、β_2微球蛋白、24h尿微量白蛋白、血肌酐、尿素氮及尿酸含量,并通过苏木素-伊红(HE)染色进行大鼠肾脏病理学检查,应用流式细胞术检测肾脏中T淋巴细胞亚群以及CD4^+Cx43和CD8^+Cx43的表达比例。结果与WKY大鼠比较,SHR收缩压、24h尿蛋白、β_2微球蛋白、血肌酐、尿素氮和尿酸均明显升高。HE染色结果显示,SHR肾脏血管壁增厚,肾小球出现轻度萎缩,小管上皮细胞出现空泡及颗粒变性,肾间质被炎性细胞浸润等肾损伤现象。与WKY大鼠比较,SHR肾脏中CD4^+和CD8^+T淋巴细胞的比例显著升高,分别为(4.5±0.5)%比(3.2±0.3)%,(4.1±0.3)%比(2.9±0.4)%(均P<0.05);但两种大鼠之间CD4^+/CD8^+的差异无统计学意义(P>0.05)。WKY大鼠和SHR肾脏中CD4^+Cx43占CD4^+T淋巴细胞的比例差异无统计学意义(P>0.05);但SHR肾脏中CD8^+Cx43占CD8^+T淋巴细胞比例高于WKY大鼠[(53.5±5.7)%比(36.5±3.3)%,P<0.05]。结论 SHR肾损伤伴随着肾脏中T淋巴细胞亚群比例上调,且Cx43在CD8^+T淋巴细胞的表达增加。

关键词：连接蛋白43 T淋巴细胞亚群自发性高血压大鼠肾损伤

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急性应激大鼠的海马DG区兴奋性氨基酸在空间学习记忆中的变化

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中国实验诊断学 2017年第5期21卷 893-896页

作者：金美玉吴建龙金清华李英顺吉林大学校医院内科吉林长春130012 延边大学医学院生理学与病理生理学教研室吉林延吉133002 北京华图宏阳教育问卷发展股份有限公司吉林分公司吉林长春130061

目的观察海马齿状回(DG)区两种兴奋性氨基酸在急性应激模型大鼠空间学习记忆中的变化,初步探讨应激影响空间学习记忆的部分神经化学机制。方法本实验采用束缚大鼠2h的方法制备急性应激模型,观察大鼠空间学习记忆能力和海马DG区的谷氨酸(... 详细信息

目的观察海马齿状回(DG)区两种兴奋性氨基酸在急性应激模型大鼠空间学习记忆中的变化,初步探讨应激影响空间学习记忆的部分神经化学机制。方法本实验采用束缚大鼠2h的方法制备急性应激模型,观察大鼠空间学习记忆能力和海马DG区的谷氨酸(Glu)和天冬氨酸(Asp)的含量变化,分别利用Morris水迷宫和脑部微量透析法和高效液相色谱法。结果 1)在Morris水迷宫的定位航行实验中,急性应激组的平均逃避潜伏期明显长于对照组(P<0.05);而在空间探索实验中,穿越原站台区次数两组间无显著性差异(P>0.05)。2)在MWM训练第二天,海马DG区Asp含量在对照组有增加趋势,而在急性应激组有下降趋势,两组间比较有统计学意义(P<0.05);两组大鼠海马DG区Glu的含量均未出现明显的变化。结论急性应激降低大鼠的空间学习能力,这可能与海马DG区Asp的降低相关。

关键词：急性应激海马齿状回空间学习和记忆兴奋性氨基酸

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氯沙坦钾对自发性高血压大鼠左心室肥厚心肌线粒体蛋白的影响

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上海交通大学学报（医学版） 2016年第10期36卷 1425-1431页

作者：孟超金贤王晓玲夏立蔡军方宁远上海交通大学医学院附属仁济医院老年病科上海200001 上海交通大学基础医学院病理生理学教研室上海200025 上海交通大学基础医学院病理中心上海200025

目的·探讨自发性高血压大鼠(SHR)左心室肥厚心肌线粒体蛋白谱的改变及氯沙坦钾降压治疗对SHR左心室肥厚心肌线粒体蛋白的影响。方法·20周龄SHR(SHR组)随机分为8周氯沙坦钾降压组(治疗组,28周龄)及未用药组(对照组,28周龄),并... 详细信息

目的·探讨自发性高血压大鼠(SHR)左心室肥厚心肌线粒体蛋白谱的改变及氯沙坦钾降压治疗对SHR左心室肥厚心肌线粒体蛋白的影响。方法·20周龄SHR(SHR组)随机分为8周氯沙坦钾降压组(治疗组,28周龄)及未用药组(对照组,28周龄),并以20周龄Wistar-Kyoto(WKY)大鼠作为SHR组的对照(WKY组)。应用荧光定量蛋白质组学的方法检测各组大鼠左心室组织线粒体蛋白质表达谱,同时测定各组大鼠血压及心肌直径。结果·与WKY组比较,SHR组大鼠左心室心肌线粒体的蛋白质表达谱共有13个蛋白质点发生改变,变化均在1.3倍以上;将这些点从预制胶上切下后进行消化和质谱分析,许多点被鉴定出是同一种蛋白,所鉴定出的5种蛋白均涉及线粒体的能量代谢。降压治疗8周后,与对照组比较,治疗组左心室心肌线粒体蛋白表达谱未发现新的差异点;治疗组收缩压和舒张压均明显降低(P=0.000,P=0.002),增大的左心室心肌细胞直径显著缩短(P=0.000)。结论·SHR高血压心肌肥厚存在线粒体能量代谢障碍,氯沙坦钾能明显改善SHR的血压并部分逆转左心室肥厚,但对线粒体能量代谢蛋白无明显影响。提示这些线粒体差异蛋白可能并非由高血压后负荷所致。

关键词：线粒体自发性高血压大鼠左心室肥厚氯沙坦钾降压治疗

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澳門非小細胞肺癌EGFR基因突變研究

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镜湖医学 2016年第1期16卷 9-12页

作者：陳建勇黃香婷冼麗芳葉玉清鍾雪雲文劍明澳門鏡湖醫院病理科中國廣州暨南大學醫學院病理教研室

目的檢測澳門非小細胞肺癌(NSCLC)表皮生長因子受體(EGFR)基因變異狀態,探討EGFR突變與臨床病理特征的關係。方法收集NSCLC 127例。肺癌組織DNA採用石蠟組織試劑盒抽提,EGFR突變採用蠍形探針擴增阻滯系統PCR檢測。分析EGFR突變與患者年... 详细信息

目的檢測澳門非小細胞肺癌(NSCLC)表皮生長因子受體(EGFR)基因變異狀態,探討EGFR突變與臨床病理特征的關係。方法收集NSCLC 127例。肺癌組織DNA採用石蠟組織試劑盒抽提,EGFR突變採用蠍形探針擴增阻滯系統PCR檢測。分析EGFR突變與患者年齡、性別、吸煙史、淋巴結轉移、腫瘤分級、臨床分期的關係。結果127例NSCLC中,EGFR突變53例(41.7%),其中1例18外顯子、27例19外顯子、4例20外顯子、20例21外顯子,1例同時出現18和20外顯子突變。女性患者EGFR突變率明顯高於男性,非吸煙者突變率明顯高於吸煙者,腺癌EGFR突變率為44.5%,其他類型均無突變。TTF-1陽性病例突變率明顯高於陰性病例。EGFR突變率在不同年齡組、組織學分級、臨床分期、有否淋巴結轉移的差異無統計學意義。結論澳門非小細胞肺癌EGFR突變主要發生在女性、非吸煙、腺癌患者及TTF-1陽性病例。胸水癌細胞EGFR突變檢測有利於晚期肺癌患者獲得靶向治療機會。

关键词：非小細胞肺癌表皮生長因子受體實時PCR

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Zacopride缺血后适应抑制大鼠缺血/再灌注性心律失常

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中国病理生理杂志 2016年第11期32卷 1921-1927页

作者：李瑜杨迎郭云飞曹晓娜张研翟旭雯刘清华北京体育大学医院北京100084 山西医科大学病理生理教研室山西太原030001 山西医科大学细胞生理学省部共建教育部重点实验室山西太原030001

目的：探讨心肌内向整流钾通道（Kir）激动剂zacopride缺血后适应对大鼠缺血/再灌注性心律失常的影响及可能的电生理学机制。方法：SD大鼠Langendorff离体灌流心脏和在体麻醉大鼠冠状动脉左前降支结扎15 min后松扎15 min诱发缺血/再灌... 详细信息

目的：探讨心肌内向整流钾通道（Kir）激动剂zacopride缺血后适应对大鼠缺血/再灌注性心律失常的影响及可能的电生理学机制。方法：SD大鼠Langendorff离体灌流心脏和在体麻醉大鼠冠状动脉左前降支结扎15 min后松扎15 min诱发缺血/再灌注性心律失常。在冠状动脉左前降支松扎前3 min给予zacopride,观察缺血后适应对再灌注性心律失常的影响。胶原酶法分离大鼠单个心室肌细胞,应用全细胞膜片钳技术观察zacopride对心室肌细胞缺氧/复氧致延迟后除极的影响和对细胞膜表面ATP敏感性钾通道（KATP）的影响。结果：大鼠离体心脏再灌注时预先给予0.1～10μmol/L zacopride可有效抑制再灌注性心律失常的发生。其中0.1μmol/L zacopride为最大效应浓度,可使期前收缩数减少,室速和室颤发生率均下降,持续时间均缩短;再灌前3 min将1μmol/L BaCl2和0.1μmol/L zacopride同时灌流心脏,BaCl2可部分逆转zacopride的保护效应（P〈0.01）,表明zacopride的后适应保护与其增强Kir电流的作用有关。在1.5～5μg/kg剂量范围内,zacopride对大鼠在体再灌注诱发的室速和室颤有明显抑制效应,但对期前收缩数无明显影响。1.5μg/kg zacopride抗心律失常的效应与阳性对照药利多卡因（7.5 mg/kg）相似。进一步研究发现zacopride可有效抑制缺氧/复氧所致心室肌细胞延迟后除极,降低其发生率（P〈0.01）。Zacopride的上述效应与K（ATP）无关。结论：Zacopride对大鼠缺血/再灌注性心律失常的抑制作用是由激活心肌细胞Kir介导的。激活Kir并消除延迟后除极所诱发的触发性活动可能是zacopride缺血后适应的主要机制。

关键词： Zacopride 心律失常后适应内向整流钾通道延迟后除极

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