检索结果-内蒙古大学图书馆

中华皮肤科杂志 2004年第7期37卷 410-412页

作者：冯军邓列华赵刚陆涛蒋光愉夏潮湧刘洁林泽暨南大学附属第一医院皮肤科暨南大学附属第一医院病理科广州510630 暨南大学附属第一医院组胚教研组广州510630

目的探讨基质金属蛋白酶-9(MMP-9)及其组织抑制物-1(TIMP-1)在皮肤鳞状细胞癌(SCC)中的表达及其与肿瘤浸润转移的关系。方法免疫组化SP法检测MMP-9和TIMP-1蛋白在65例皮肤SCC(Bowen病17例,SCC48例)和5例正常表皮石蜡切片的表达,采用图... 详细信息

目的探讨基质金属蛋白酶-9(MMP-9)及其组织抑制物-1(TIMP-1)在皮肤鳞状细胞癌(SCC)中的表达及其与肿瘤浸润转移的关系。方法免疫组化SP法检测MMP-9和TIMP-1蛋白在65例皮肤SCC(Bowen病17例,SCC48例)和5例正常表皮石蜡切片的表达,采用图像分析技术对免疫组化结果进行定量分析。结果MMP-9和TIMP-1蛋白均弥漫表达于皮肤SCC,分布于SCC癌巢及癌巢周围间质细胞,而在正常人皮肤仅见MMP-9和TIMP-1的弱阳性表达。SCC组MMP-9蛋白的表达水平及MMP-9/TIMP1比值高于Bowen病组(t值分别为2.33、2.36,P<0.05),SCC中淋巴结转移组MMP-9/TIMP1的比值高于无淋巴结转移组(t=2.46,P<0.05)。结论MMP-9、TIMP-1蛋白的表达与SCC的侵袭性有关,MMP-9/TIMP1比值升高(MMP-TIMP失衡)预示了SCC肿瘤细胞较高的侵袭转移潜能。

关键词：基质金属蛋白酶-9 基质金属蛋白酶-9组织抑制物-1 皮肤鳞状细胞癌肿瘤浸润肿瘤转移

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CTLA4-EGFP融合蛋白在K562细胞中的表达及其亚细胞定位研究

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细胞与分子免疫学杂志 2004年第2期20卷 135-139页

作者：何贤辉徐丽慧刘毅蔡小嫦曾耀英暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室广东广州510632 暨南大学第一附属医院皮肤科广东广州510632

目的 :构建增强型绿色荧光蛋白 (EGFP)与CTLA4融合蛋白真核表达载体 ,分析其在K562细胞中的表达和亚细胞定位。方法 :以RT PCR方法克隆人CTLA4基因 ,构建CTLA4 EGFP融合蛋白的表达载体。以其转染K562细胞后 ,以流式细胞仪和激光共聚焦... 详细信息

目的 :构建增强型绿色荧光蛋白 (EGFP)与CTLA4融合蛋白真核表达载体 ,分析其在K562细胞中的表达和亚细胞定位。方法 :以RT PCR方法克隆人CTLA4基因 ,构建CTLA4 EGFP融合蛋白的表达载体。以其转染K562细胞后 ,以流式细胞仪和激光共聚焦显微镜分析融合蛋白的表达及其亚细胞定位。结果 :从人外周血细胞中克隆到CTLA4基因的cDNA。通过PCR方法在起始位点前加入Kozak序列并删除终止密码 ,成功地构建CTLA4 EGFP融合蛋白表达载体。以该质粒转染K562细胞 2 4h后 ,CTLA4和EGFP双阳性细胞的百分率为 16%。表达的融合蛋白主要分布于胞内 ,细胞膜上分布较少。相反 ,转染空载体的细胞仅表达EGFP ,且其在细胞内呈弥散样分布。以佛波醇酯加离子霉素刺激后 ,CTLA4 EGFP融合蛋白在细胞表面表达水平升高到 2 9% ,且分布于胞内的融合蛋白向细胞膜靠近并与质膜融合 ;而转染空载体的细胞内EGFP的分布无明显改变。结论 :成功地构建CTLA4 EGFP融合蛋白表达载体 ,并在K562细胞中得到表达。

关键词： CTLA4 绿色荧光蛋白融合蛋白共聚焦显微术

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白念珠菌菌丝相随机扩增多态性DNA分析

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中国皮肤性病学杂志 2004年第9期18卷 516-517页

作者：金艳张宏乔建军现在青岛市立医院皮肤科山东青岛266011 暨南大学附属第一医院皮肤科广东广州510632

目的　以白念珠菌菌丝相为研究对象 ,比较对氟康唑敏感程度不同的白念珠菌之间随机扩增多态性DNA(RAPD)图谱的差异。方法　用随机引物 5′ TCACCACGGT 3′对同一亲本来源的 16株白念珠菌菌丝相基因组DNA进行扩增 ,扩增产物进行变性聚丙... 详细信息

目的　以白念珠菌菌丝相为研究对象 ,比较对氟康唑敏感程度不同的白念珠菌之间随机扩增多态性DNA(RAPD)图谱的差异。方法　用随机引物 5′ TCACCACGGT 3′对同一亲本来源的 16株白念珠菌菌丝相基因组DNA进行扩增 ,扩增产物进行变性聚丙烯酰胺凝胶电泳并拍照。结果　菌株CA 1～CA 13的电泳带型一致 ,均有 6条电泳带 ;CA 14～CA 17的电泳带型一致 ,均有 7条电泳带 ;CA 14～CA 17比CA 1～CA 13多 1条约 45 0bp的电泳带。

关键词：白念珠茵茵丝相随机扩增多态性DNA图谱

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菌丝相和酵母相白念珠菌ERG1 1基因部分序列差异性的研究(英文)

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中国现代医学杂志 2004年第1期14卷 44-46,49页

作者：石婧张宏暨南大学附属华侨医院皮肤科广东广州510632

目的　研究白念珠菌菌丝相和酵母细胞氟康唑作用的靶酶编码基因 (ERG11)碱基序列上的差异 ,从而探讨两相细胞之间的差异性。方法　分别抽提 7株来自同一母体、依次对氟康唑逐渐耐药的白念珠菌菌丝和酵母相的基因组DNA ,根据ERG11编码序... 详细信息

目的　研究白念珠菌菌丝相和酵母细胞氟康唑作用的靶酶编码基因 (ERG11)碱基序列上的差异 ,从而探讨两相细胞之间的差异性。方法　分别抽提 7株来自同一母体、依次对氟康唑逐渐耐药的白念珠菌菌丝和酵母相的基因组DNA ,根据ERG11编码序列设计一对引物 ,对ERG11基因的第 4 0 3位点至第 70 1位点的 2 98的碱基序列进行PCR扩增 ,经PCR产物直接测序比较两相ERG11基因碱基序列上的差异。结果　 7株白念珠菌的菌丝相与酵母相细胞间的ERG11基因碱基序列在该片断上无差异。结论　菌丝相和在酵母相白念珠菌ERG11基因的部分碱基序列是无差异的。

关键词：白念珠菌菌丝相酵母相差异 ERG11基因

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人PD-L2基因克隆及其在大肠杆菌中的表达

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免疫学杂志 2004年第5期20卷 346-349页

作者：何贤辉徐丽慧刘毅蔡小嫦曾耀英暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室广东广州510632 暨南大学第一附属医院皮肤科广东广州510632

目的　克隆人PD L2基因并构建PD L2胞外区的原核表达载体 ,在大肠杆菌中进行表达。方法　以RT PCR方法从活化的人外周血单个核细胞总RNA中克隆PD L2基因的cDNA ,构建PD L2胞外区的原核表达载体 ,在大肠杆菌BL2 1(ED3)中进行表达并鉴定... 详细信息

目的　克隆人PD L2基因并构建PD L2胞外区的原核表达载体 ,在大肠杆菌中进行表达。方法　以RT PCR方法从活化的人外周血单个核细胞总RNA中克隆PD L2基因的cDNA ,构建PD L2胞外区的原核表达载体 ,在大肠杆菌BL2 1(ED3)中进行表达并鉴定。结果　克隆到PD L2基因cDNA编码区全长序列 ,经DNA测序证明其与已报道的序列一致。进而构建了PD L2胞外区的原核表达载体 ,并在大肠杆菌表达 ,免疫印迹分析表明在IPTG诱导后表达PD L2胞外区蛋白 ,相对分子质量Mr 为 2 2 0 0 0 ,与理论值大小相符。结论　成功克隆PD L2基因 ,其胞外区蛋白在大肠杆菌中获得表达 ,为进一步研究PD L2功能提供了条件。

关键词： PD-L2 基因克隆大肠杆菌重组蛋白

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IDO-EGFP表达载体的构建及其在人软骨细胞中的表达

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免疫学杂志 2004年第3期20卷 172-176页

作者：何贤辉徐丽慧刘毅江逊蔡小嫦曾耀英暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室广东广州510632 暨南大学第一附属医院皮肤科广东广州510632

目的　克隆人吲哚胺双加氧酶 (IDO)基因并构建IDO与增强型绿色荧光蛋白 (EGFP)融合蛋白哺乳动物细胞表达载体。方法　利用RT PCR方法从人白细胞克隆IDO基因并构建IDO EGFP融合蛋白表达载体。通过细胞核转染仪将表达载体转入人软骨细胞... 详细信息

目的　克隆人吲哚胺双加氧酶 (IDO)基因并构建IDO与增强型绿色荧光蛋白 (EGFP)融合蛋白哺乳动物细胞表达载体。方法　利用RT PCR方法从人白细胞克隆IDO基因并构建IDO EGFP融合蛋白表达载体。通过细胞核转染仪将表达载体转入人软骨细胞进行瞬时表达 ,以共聚焦显微镜对表达的绿色荧光进行分析。结果　从活化的人白细胞中克隆到IDO基因编码区全长 ,并构建了IDO EGFP融合蛋白表达载体。以该表达载体转染原代人软骨细胞 ,表达的融合蛋白较均匀地分布于整个细胞。结论　成功构建了IDO EGFP哺乳动物细胞表达载体。

关键词：吲哚胺双加氧酶绿色荧光蛋白融合蛋白软骨细胞共聚焦显微术

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氟康唑对白念珠菌菌丝相与酵母相体外药物敏感性差异的比较

氟康唑对白念珠菌菌丝相与酵母相体外药物敏感性差异的比较

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第6次全国微生物学与免疫学大会

作者：石婧张宏乔建军李克俭暨南大学附属第一医院皮肤科暨南大学附属第一医院皮肤科暨南大学附属第一医院皮肤科暨南大学附属第一医院皮肤科

目的:以一系列同一亲本来源的7株白念珠菌为对象,研究氟康唑对其菌丝相与酵母相抗菌活性的差异。方法:参照NCCLS M27-A方案测定氟康唑对7株白念珠菌菌丝相与酵母相的MIC值,比较氟康唑对白念珠菌两相MIC值的差异。结果:氟康唑对白念珠菌... 详细信息

目的:以一系列同一亲本来源的7株白念珠菌为对象,研究氟康唑对其菌丝相与酵母相抗菌活性的差异。方法:参照NCCLS M27-A方案测定氟康唑对7株白念珠菌菌丝相与酵母相的MIC值,比较氟康唑对白念珠菌两相MIC值的差异。结果:氟康唑对白念珠菌菌丝相与酵母相的药物敏感性不同,

关键词：白念珠菌酵母相菌丝相氟康唑药物敏感性试验差异

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HLA—A0201与EGFP融合蛋白表达载体的构建及其在K562细胞的表达和定位

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中国病理生理杂志 2004年第5期20卷 705-710页

作者：何贤辉徐丽慧刘毅蔡小嫦曾耀英暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室第一附属医院皮肤科广东广州510632

目的 :构建增强型绿色荧光蛋白 (EGFP)与HLA -A 0 2 0 1(A 0 2 0 1)融合蛋白哺乳动物细胞表达载体 ,分析其在K5 6 2细胞中的表达和亚细胞定位。方法 :以RT -PCR方法克隆A 0 2 0 1cDNA ,构建A 0 2 0 1-EGFP融合蛋白表达载体 ,转染K5 6 2... 详细信息

目的 :构建增强型绿色荧光蛋白 (EGFP)与HLA -A 0 2 0 1(A 0 2 0 1)融合蛋白哺乳动物细胞表达载体 ,分析其在K5 6 2细胞中的表达和亚细胞定位。方法 :以RT -PCR方法克隆A 0 2 0 1cDNA ,构建A 0 2 0 1-EGFP融合蛋白表达载体 ,转染K5 6 2细胞 ,以流式细胞仪和激光共聚焦显微镜分析融合蛋白的表达及其亚细胞定位。结果 :从两个HLA -A2阳性供者外周血细胞中克隆到A 0 2 0 1cDNA编码区全长序列。通过PCR方法在起始位点前加入Kozak序列并删除终止密码 ,成功构建A 0 2 0 1-EGFP融合蛋白表达载体。以该质粒转染K5 6 2细胞 ,5h后A 0 2 0 1和EGFP的表达百分率分别为 2 5 12± 2 2 6、2 7 37± 3 5 9,2 4h后表达水平无明显提高。表达的融合蛋白主要分布于细胞膜上 ,胞内分布较少。相反 ,转染空载体的细胞不表达A 0 2 0 1分子 ,仅表达EGFP ,且其在细胞内呈弥散样分布。结论 :成功构建A 0 2 0 1-EGFP融合蛋白表达载体 ,并在K5 6 2细胞中得到表达 ,表达产物主要分布于细胞膜表面 ,提示表达该融合蛋白的K5 6 2细胞是潜在的人工抗原提呈细胞。

关键词： HKA—A2抗原绿色荧光蛋白质类融合蛋白质类显微镜检查共焦

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白念珠菌ERG11基因启动子部分序列分析

白念珠菌ERG11基因启动子部分序列分析

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第6次全国微生物学与免疫学大会

作者：乔建军张宏暨南大学附属第一医院皮肤科暨南大学附属第一医院皮肤科

目的探讨菌丝相与酵母相白念珠菌ERG11基因部分启动子(-440～-1)碱基序列的差异以及ERG11基因启动子突变与白念珠菌对氟康唑敏感性的关系。方法分别提取从同一亲本来源对氟康唑敏感性不同的白念珠菌菌丝相与酵母相基因组DNA,根据ERG11... 详细信息

目的探讨菌丝相与酵母相白念珠菌ERG11基因部分启动子(-440～-1)碱基序列的差异以及ERG11基因启动子突变与白念珠菌对氟康唑敏感性的关系。方法分别提取从同一亲本来源对氟康唑敏感性不同的白念珠菌菌丝相与酵母相基因组DNA,根据ERG11基因启动子序列及其编码序列设计一对引物,对ERG11基因上游启动子部分DNA序列(-503～53)进行PCR扩增,经PCR产物直接测序比较菌丝相与酵母相白念珠菌ERG11基因启动子序列(-440～-1)的差异以及对氟康唑敏感性不同的白念珠菌ERG11基因启动子序列的碱基差异。结果菌丝相与酵母相白念珠菌ERG11启动子序列未发现差异。氟康唑敏感株白念珠菌ERG11基因启动子的-365、-353、-328、-310、-308、-

关键词：菌丝相酵母相差异念珠菌白色 ERGll 启动子 DNA突变氟康唑敏感性

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SARS-CoV Sars7a和EGFP融合蛋白真核表达载体构建及其表达

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中国病毒学 2004年第3期19卷 209-213,i001页

作者：何贤辉徐丽慧刘毅蔡小嫦曾耀英暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室广东广州510632 暨南大学第一附属医院皮肤科广东广州510632

根据SARS-CoVsars7a基因设计并化学合成部分重叠引物,经二轮PCR获得sars7a基因片段,以此片段为模板并利用一对带有Kozak序列及删除终止密码的引物进行PCR,获得产物与pEGFP-N1载体连接,使sars7a基因位于EGFP的基因上游,得到含编码Sars7a-... 详细信息

根据SARS-CoVsars7a基因设计并化学合成部分重叠引物,经二轮PCR获得sars7a基因片段,以此片段为模板并利用一对带有Kozak序列及删除终止密码的引物进行PCR,获得产物与pEGFP-N1载体连接,使sars7a基因位于EGFP的基因上游,得到含编码Sars7a-EGFP融合蛋白基因的哺乳动物细胞表达载体。采用细胞核转染技术将重组表达载体转染K562细胞,以流式细胞仪和共聚焦显微镜分析,可检测到EGFP的绿色荧光,表明Sars7a-EGFP得到表达,该蛋白分布于整个细胞,提示Sars7a并非膜蛋白,更可能是胞浆蛋白。此外,该蛋白的表达对K562细胞凋亡无明显影响。

关键词：严重急性呼吸综合征冠状病毒 Sars7a 绿色荧光蛋白融合蛋白表达

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