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复旦学报（医学版） 2017年第2期44卷 213-216,230页

作者：王正洋李晓波殷莲华复旦大学基础医学院生理与病理生理学系上海200032

肝脏在机体内发挥着重要作用,包括糖和脂质代谢,血浆蛋白的合成和对内外源性毒物的解毒作用等。目前肝脏的慢性疾病是导致人类死亡的重要原因。肝脏依靠肝细胞的自我更新和肝卵圆细胞的增殖分化两大途径参与肝损伤的修复。然而,我们对... 详细信息

肝脏在机体内发挥着重要作用,包括糖和脂质代谢,血浆蛋白的合成和对内外源性毒物的解毒作用等。目前肝脏的慢性疾病是导致人类死亡的重要原因。肝脏依靠肝细胞的自我更新和肝卵圆细胞的增殖分化两大途径参与肝损伤的修复。然而,我们对肝卵圆细胞的起源、特异性标志物、信号通路的调控等方面依然尚未完全阐明。最近一些研究通过运用新的分离技术和基因系谱追踪技术对肝卵圆细胞的起源和生物学功能有新的发现。本文较详尽地对以上内容进行了综述。

关键词：肝卵圆细胞肝损伤标志物信号通路

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激素敏感性脂肪酶HSL对生殖系统的整合调控

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生理科学进展 2015年第1期46卷 1-5页

作者：王威仪徐国恒北京大学基础医学院生理学与病理生理学系北京100191

激素敏感性脂肪酶被认为是经典的脂肪分解限速酶,可特异水解甘油三酯,受儿茶酚胺等激素调控。近年来研究表明:HSL作用底物不仅有甘油三酯,还包括甘油二酯、甘油一酯、胆固醇酯等。然而,脂肪酶在生殖系统的功能并不清楚,基因敲除小鼠为证... 详细信息

激素敏感性脂肪酶被认为是经典的脂肪分解限速酶,可特异水解甘油三酯,受儿茶酚胺等激素调控。近年来研究表明:HSL作用底物不仅有甘油三酯,还包括甘油二酯、甘油一酯、胆固醇酯等。然而,脂肪酶在生殖系统的功能并不清楚,基因敲除小鼠为证实HSL广泛存在于生殖系统提供良好模型,提示其可能在生殖系统生理及病理生理过程发挥重要调节作用,本文将着重介绍生殖系统中HSL基因与蛋白质结构并总结其在生殖系统的功能。

关键词：激素敏感性脂肪酶生殖系统睾丸脂肪组织脂肪分解

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吸入脂多糖诱导小鼠急性肺炎模型的建立

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北京大学学报（医学版） 2009年第2期41卷 226-229页

作者：郭玲李文静徐明江王宪北京大学基础医学院生理学与病理生理学系北京100191

目的:用吸入脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)的方法建立简便、经济、稳定的小鼠急性肺炎模型。方法:将正常BALB/c小鼠麻醉后仰位固定,行LPS(50μL,1g/L)吸入,于不同时间点获取支气管肺泡灌洗液(bron-choalveolar lavage fluid,BALF)后... 详细信息

目的:用吸入脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)的方法建立简便、经济、稳定的小鼠急性肺炎模型。方法:将正常BALB/c小鼠麻醉后仰位固定,行LPS(50μL,1g/L)吸入,于不同时间点获取支气管肺泡灌洗液(bron-choalveolar lavage fluid,BALF)后取肺组织制备匀浆,对支气管肺泡灌洗液进行细胞染色分类计数,用ELISA的方法检测肺组织匀浆和支气管肺泡灌洗液白介素-1β((interleukin-1β,IL-1β)的含量。再取肺组织固定、切片,用HE染色鉴定炎症程度。结果:LPS吸入2～4h后,支气管肺泡灌洗液和肺组织匀浆中IL-1β水平即明显增加。2h时肺内就开始出现炎性细胞浸润,12～24h炎症加剧甚至形成脓肿。支气管肺泡灌洗液中中性粒细胞增多最早出现,从2h即开始增加,巨噬细胞和淋巴细胞则在1d后开始明显增加,一直持续3d。结论:用LPS吸入的方法可以建立快速、稳定、典型的小鼠急性肺炎模型。

关键词：脂多糖类肺炎模型,动物小鼠

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长非编码RNA(lncRNA)与心血管疾病

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生理科学进展 2014年第3期45卷 172-176页

作者：王楠罗雨虹邓嘉成冯娟王宪北京大学基础医学院生理学与病理生理学系北京100191

心血管疾病严重威胁人类健康。有关心血管疾病的研究一直是基础医学的一个重点研究方向。随着遗传学和医学信息学研究的发展,曾被认为无用的非编码基因序列受到到广大研究者越来越多关注。占非编码RNA(ncRNA)大多数的长非编码RNA(lncRNA... 详细信息

心血管疾病严重威胁人类健康。有关心血管疾病的研究一直是基础医学的一个重点研究方向。随着遗传学和医学信息学研究的发展,曾被认为无用的非编码基因序列受到到广大研究者越来越多关注。占非编码RNA(ncRNA)大多数的长非编码RNA(lncRNA)的相关研究正在兴起。虽然对lncRNA功能和作用机制的研究尚处于起步阶段,但已有不少证据表明lncRNA与心血管疾病有着密切联系。本文介绍lncRNA的功能和特点,并在已有研究的基础上综述lncRNA与心血管疾病的关系,这些研究进展将为进一步理解心血管疾病发生发展的分子医学基础提供依据。

关键词：心血管疾病 lncRNA

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中枢IL-1β参与新奇应激大鼠的运动行为调控

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北京大学学报（医学版） 2004年第3期36卷 244-247页

作者：郑瑞茂邹长江祝世功北京大学基础医学院生理学与病理生理学系北京100083

目的 :观察中枢白细胞介素 1β (interleukin 1β ,IL 1β)在新奇应激 (noveltystress)诱发的大鼠运动行为 (mo torbehavior)反应中的作用。方法 :利用大鼠新奇环境应激箱诱发新奇应激 ;用大鼠脑立体定位技术与侧脑室埋管技术进行药物... 详细信息

目的 :观察中枢白细胞介素 1β (interleukin 1β ,IL 1β)在新奇应激 (noveltystress)诱发的大鼠运动行为 (mo torbehavior)反应中的作用。方法 :利用大鼠新奇环境应激箱诱发新奇应激 ;用大鼠脑立体定位技术与侧脑室埋管技术进行药物侧脑室微量注射 ,用行为遥感监测系统监测清醒大鼠运动行为反应 ,用行为学指标为描述大鼠静止行为 (immobility)的“静止行为平均百分数”(meanpercentimmobility ,MPI)。结果 :新奇应激可明显降低大鼠的MPI;非应激情况下 ,侧脑室预注射IL 1β特异性抗体不影响大鼠MPI;侧脑室预注射抗IL 1β抗体可拮抗新奇应激导致的大鼠MPI降低 ;新奇应激时 ,侧脑室预注射非特异性抗体分子IgG不影响大鼠MPI。结论 :中枢IL 1β参与调节新奇应激过程中大鼠运动行为反应的中枢调控。

关键词：中枢IL-1β 应激大鼠运动行为应激反应抗体

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骨桥蛋白下调对乳腺癌细胞生物学行为及MMP-2表达的影响

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肿瘤 2007年第12期27卷 939-943页

作者：焦南林王娟郑杰东南大学基础医学院病理与病理生理学系南京210009

目的:研究下调骨桥蛋白(osteopontin,OPN)对乳腺癌MDA-MB-231细胞生物学行为及基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)表达的影响。方法:采用重组的OPN mRNA干扰质粒转染MDA-MB-231细胞,建立稳定转染细胞株。RT-PCR和Western印迹法检测细胞中OPN和MMP-2的表达,MTT法、流式细胞仪检测和软琼脂生长实验观察OPN下调对细胞生长、细胞周期分布和瘤细胞恶性表型的影响,酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞培养液中MMP-2的分泌水平。结果:与MDA-MB-231细胞相比,建立的转染细胞株M-OPNS1和M-OPNS2细胞的OPN mRNA及其蛋白表达均显著下调,细胞生长受到抑制,在细胞周期上表现为S期阻滞;OPN下调的细胞在软琼脂上的生长能力明显下降,MMP-2表达也明显降低。结论:RNA干扰介导的OPN下调能抑制MDA-MB-231细胞增殖、下调细胞恶性程度和MMP-2的表达,这可能为将来乳腺癌治疗提供新的方法。

关键词：乳腺肿瘤骨桥蛋白 RNA,小分子干扰表型基质金属蛋白酶类

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大鼠在体钙化心血管和离体钙化平滑肌细胞模型的制备

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北京大学学报（医学版） 2005年第6期37卷 656-658页

作者：郭玲齐永芬北京大学基础医学院生理学与病理生理学系北京100083

目的应用药理学方法建立在体大鼠的心血管钙化模型和体外培养的大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)钙化模型。方法每日8时给予大鼠肌注维生素D3(300000U/kg体重)和尼古丁(25mg/kg体重,混入花生油2mL中)灌胃,18时再灌胃1次。对照组动物肌注生理盐... 详细信息

目的应用药理学方法建立在体大鼠的心血管钙化模型和体外培养的大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)钙化模型。方法每日8时给予大鼠肌注维生素D3(300000U/kg体重)和尼古丁(25mg/kg体重,混入花生油2mL中)灌胃,18时再灌胃1次。对照组动物肌注生理盐水和单纯花生油灌胃,方法同钙化组。两组动物以相同饲料饲养4周后进行心功能指标检测。取动脉血检测钙含量,并摘取心脏和主动脉血管称重,用von Kossa染色方法检测钙沉积。培养的大鼠胸主动脉平滑肌细胞用β-磷酸甘油丙酮酸钠处理,培养14天后收集,检测钙含量并用vonKossa染色方法检测钙沉积。结果维生素D3和尼古丁诱导的心血管组织钙化大鼠(VDN组大鼠)体重比对照组轻(P<0.01),左心室重与体重比值高(P<0.01),血浆钙水平差异无统计学意义(P>0.05),但心肌和主动脉钙含量均高于对照组(P<0.01);心肌和主动脉碱性磷酸酶活性也高于对照组(P<0.05和P<0.01);VDN组大鼠vonKossa染色见心脏血管组织有大量钙盐的沉积。VDN大鼠平均动脉压(MBP)、心率(HR)和左心室舒张末期压(LVEDP)并无明显变化(P>0.05),左心室内压变化速率即+LVdp/dtmax和-LVdp/dtmax均较对照组低(P<0.05和P<0.01)。体外培养诱导钙化VSMC与对照相比较,钙化VSMC用von Kossa染色见有大量棕黑色颗粒沉积,钙化VSMC的钙含量、45Ca2+摄入及碱性磷酸酶活性均增加(P<0.01)。结论用药理学方法于在体和离体水平均可以建立简便、经济、可靠、稳定、重现性好的钙化模型。

关键词：钙质沉着症心肌肌细胞,平滑肌疾病模型,动物大鼠

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昼夜节律变化对RORs表达及RORs激动剂SR1078对角膜上皮创伤修复的影响

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中华实验眼科杂志 2022年第2期40卷 118-125页

作者：徐鹏洋李志杰薛芸霞暨南大学基础医学院病理生理学系广州510632 暨南大学基础医学院眼科研究所广州510632

目的探讨昼夜节律变化对视黄酸相关孤儿受体(RORs)表达量及RORs激动剂SR1078对角膜上皮创伤修复的影响。方法选取SPF级6~8周龄C57BL/6雌性小鼠228只,采用随机数表法将其中180只小鼠分为昼夜节律正常组、全昼组、全夜组、昼夜颠倒12 h组... 详细信息

目的探讨昼夜节律变化对视黄酸相关孤儿受体(RORs)表达量及RORs激动剂SR1078对角膜上皮创伤修复的影响。方法选取SPF级6~8周龄C57BL/6雌性小鼠228只,采用随机数表法将其中180只小鼠分为昼夜节律正常组、全昼组、全夜组、昼夜颠倒12 h组和昼夜颠倒3周组,每组36只。将剩余48只小鼠采用随机数表法随机分为磷酸盐缓冲液(PBS)对照组和SR1078组,每组24只。按照分组,将小鼠置于可控制光照(光照强度300 lx)及黑暗时间的节律箱中,其中昼夜节律正常组、PBS对照组和SR1078组节律箱的光照时间为7:00~19:00,黑暗时间为19:00~次日7:00。根据Zeitgeber Time计时法,以开始光照时间7:00记为ZT0,以关闭光照时间19:00记为ZT12。采用实时荧光定量PCR法检测昼夜节律正常组、全夜组、全昼组、昼夜颠倒12 h组和昼夜颠倒3周组ZT1、ZT5、ZT9、ZT13、ZT17、ZT21各时间点RORα和RORγmRNA相对表达量。PBS对照组和SR1078组采用高尔夫样刀建立小鼠角膜上皮损伤模型并按照分组情况用相应试剂点眼,每隔6 h给药1次。采用Adobe Photoshop CC2019软件测量角膜上皮缺损面积,计算并比较2个组角膜上皮缺损率。分析昼夜节律正常组、全昼组、全夜组、昼夜颠倒12 h组和昼夜颠倒3周组小鼠角膜上皮RORα和RORγmRNA相对表达量与PBS对照组和SR1078组角膜上皮缺损率的相关性。采用全角膜铺片及免疫荧光染色法观察角膜上皮修复情况,计算并比较PBS对照组和SR1078组小鼠角膜上皮分裂细胞数量。结果与昼夜节律正常组比较,全昼组、全夜组、昼夜颠倒12 h组和昼夜颠倒3周组小鼠RORα/RORγmRNA相对表达量整体呈减少趋势。造模后不同时间点PBS对照组和SR1078组小鼠角膜上皮缺损率总体比较差异有统计学意义(F_(组别)=74.01,P<0.001;F_(时间)=5171.48,P<0.001),其中造模后12 h SR1078组角膜上皮缺损率显著低于PBS对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。角膜组织中RORα和RORγmRNA相对表达量与小鼠角膜上皮缺损率均呈中度正相关(r=0.614、0.537,均P<0.01);RORαmRNA相对表达量与角膜上皮缺损率变化量的直线回归方程为Y=33.153X-43.052(F=20.58,P<0.001),RORγmRNA相对表达量与角膜上皮缺损率变化量的直线回归方程为Y=2.764X-1.364(F=13.11,P<0.001)。造模后不同时间点SR1078组和PBS对照组小鼠角膜上皮分裂细胞数量总体比较差异有统计学意义(F_(分组)=160.55,P<0.001;F_(时间)=83.57,P<0.001),其中造模后24、30、36 h SR1078组分裂细胞数目显著少于PBS对照组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论昼夜节律变化使小鼠角膜中RORα和RORγmRNA表达减少,SR1078可通过促进角膜上皮RORα和RORγmRNA的表达使小鼠角膜上皮分裂细胞数量减少,抑制角膜创伤后的修复过程。

关键词：角膜昼夜节律创伤修复 SR1078 时钟基因

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miR-29a基因敲除对C57BL/6小鼠肾小球结构和功能的影响

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中国病理生理杂志 2022年第5期38卷 884-892页

作者：李慧王鑫王向东李莉于小玲巩永凤青岛大学基础医学院生理学与病理生理学系山东青岛266073 滨州医学院基础医学院生理学系山东烟台264000

目的:观察微小RNA-29a(miR-29a)基因敲除对小鼠肾小球功能和结构的影响。方法:应用CRISPR/Cas9技术,选择C57BL/6 miR-29a基因敲除型(miR-29a knockout,miR-29a KO)小鼠作为实验组,未敲除型小鼠作为野生型(wild-type,WT)对照组(n=30)。分别在第3、12和24周收集小鼠24 h尿液。采用考马斯亮蓝染色法进行尿蛋白测定;ELISA测定尿白蛋白和尿肌酐水平,并计算尿白蛋白/肌酐比值(urinary albumin/creatinine ra‐tio,UACR)。选取3、12和24周的小鼠,采用过碘酸雪夫氏(periodic acid-schiff,PAS)染色法观察肾脏组织的病理变化;通过透射电镜以及冷冻蚀刻电镜观察肾小球超微结构。另取2组24周的小鼠,一组小鼠腹腔麻醉后用Dyna‐beads™M-450 Tosylactivated微磁珠经心脏灌流后分离肾小球,用于RNA和蛋白的提取;另一组小鼠肾脏用于免疫荧光染色。采用RT-qPCR、免疫荧光染色以及Western blot检测小鼠肾小球足细胞标志性蛋白nephrin和podocin以及肾小球IV型胶原(COL4α3、COL4α4和COL4α5)和层粘连蛋白β2(lamininβ2,LAMB2)的表达。结果:考马斯亮蓝染色法实验结果显示,miR-29a KO组小鼠出现尿白蛋白,WT组小鼠无蛋白尿。UACR结果显示3周时,miR-29a KO组与WT组相比,数据无统计学差异;12周时,miR-29a KO组的UACR比值与WT组相比显著增高(P<0.01);24周时,UACR比值差异更加显著(P<0.01)。PAS染色显示,3周时,miR-29a KO组小鼠肾小球出现轻微的细胞外基质沉积和系膜增生,随着周龄的增加,miR-29a KO组小鼠肾小球出现胶原纤维沉积,系膜扩张和外周血管壁增厚。透射电镜显示,miR-29a KO组小鼠肾小球超微结构在3周开始出现改变,包括足突排列紊乱,轻微融合等现象;12周时足突数量减少、足突融合加重,肾小球基底膜增厚的程度加重;24周时,上述变化进一步加重。与WT组小鼠相比,miR-29a KO组小鼠足细胞标志性蛋白nephrin的表达在mRNA水平显著下调(P<0.05);podocin表达在mRNA水平也呈下降趋势,但结果无统计学意义;COL4α3/α4/α5以及LAMB2表达在mRNA水平明显上调(P<0.05)。West‐ern blot结果显示,与WT组小鼠相比,miR-29a KO组小鼠nephrin和podocin蛋白表达显著降低(P<0.05);COL4α3/α4/α5以及LAMB2表达显著增加(P<0.01)。肾小球免疫荧光结果和Western blot结果一致。结论:miR-29a基因敲除会导致小鼠出现蛋白尿、肾小球损伤及纤维化,随着小鼠的老龄化损伤程度加重。

关键词：微小RNA-29a 基因敲除蛋白尿纤维化

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外泌体及其在神经退行性疾病发生、发展和诊治中的作用

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生理学报 2019年第3期71卷 439-453页

作者：张鲁琳刘明欣谢俊霞宋宁青岛大学基础医学院生理学与病理生理学系脑科学与疾病研究院

外泌体是一种直径在30~100 nm的细胞外膜性囊泡,由真核生物体内的多种细胞产生,其内含有蛋白质、脂质、核酸以及和起源细胞相关的物质等。外泌体能够携带起源细胞内成分并作用于邻近或远距离的细胞,从而实现生理及疾病状态下不同细胞间... 详细信息

外泌体是一种直径在30~100 nm的细胞外膜性囊泡,由真核生物体内的多种细胞产生,其内含有蛋白质、脂质、核酸以及和起源细胞相关的物质等。外泌体能够携带起源细胞内成分并作用于邻近或远距离的细胞,从而实现生理及疾病状态下不同细胞间的信息交流。近年来,研究表明神经退行性疾病发病相关的错误折叠蛋白(如α-突触核蛋白、tau蛋白、β-淀粉样蛋白等)能够通过外泌体运输,从而促进这些蛋白在细胞间传播并传播至未病变区域,加快疾病进程。本综述着重阐述了外泌体的起源和组成、生物合成、分泌、功能,尤其是在神经退行性疾病发生和发展中的作用。除此之外,还探讨了外泌体作为生物标记物和药物传递载体在神经退行性疾病的诊断与治疗中的作用和前景。

关键词：外泌体神经退行性疾病错误折叠蛋白生物标记物药物传递

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