检索结果-内蒙古大学图书馆

免疫学杂志 2015年第6期31卷 528-532页

作者：刘艳梅钟辉黄建芳谈思怡刘诗琴邵晨晨向军俭暨南大学抗体工程研究中心广东省分子免疫与抗体工程重点实验室广州市疾病与食品安全免疫学快速检测重点实验室广州510632

目的直接竞争ELISA方法检测大米样品中重金属镉。方法用纳米Ti O2对微波消解处理的大米样品中的重金属镉进行富集,通过比较不同p H值和不同洗脱体积来优化纳米Ti O2富集方法,再用直接竞争ELISA检测重金属镉的含量。结果在p H为9时,纳米T... 详细信息

目的直接竞争ELISA方法检测大米样品中重金属镉。方法用纳米Ti O2对微波消解处理的大米样品中的重金属镉进行富集,通过比较不同p H值和不同洗脱体积来优化纳米Ti O2富集方法,再用直接竞争ELISA检测重金属镉的含量。结果在p H为9时,纳米Ti O2对重金属镉有良好的吸附性,20 mg/ml的EDTA·2Na可将纳米Ti O2吸附的镉定量洗脱。用纯化后的镉单克隆抗体建立直接竞争ELISA检测方法,并进行灵敏度和特异性分析,其灵敏度（IC50）为19 ng/ml,检测限（IC10）为2.1 ng/ml,检测范围（IC20~IC80）为3.6~98.2 ng/ml。用优化后的直接竞争ELISA对富集洗脱后的镉溶液进行检测,检测效果满足国家检测标准。结论本研究对6份市售大米样品采用微波消解和富集,通过直接竞争ELISA检测其镉含量,所得结果与仪器法测定结果一致,可用于实际样品的快速检测。

关键词：重金属镉单克隆抗体直接竞争ELISA 纳米TiO2富集

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cTnI-linker-TnC融合蛋白的原核表达及鉴定

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中国生物工程杂志 2015年第4期35卷 48-53页

作者：龚隆财罗镇明杨雁青王振宇向军俭王宏暨南大学广东省分子免疫与抗体工程重点实验室广州510632 广州市疾病与食品安全免疫学快速检测重点实验室暨南大学分室广州510632

从PUBMED中查找人心脏cTnI和cTnC的cDNA序列,在两者之间加上15个中性氨基酸残基(G4S)3的linker编码序列,并分别构建原核表达质粒pET32a-cTnI-linker-TnC和pET28a-cTnI-linker-TnC,转化入大肠杆菌表达菌株BL21(DE3)中,用异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导其表达。通过SDS-PAGE电泳和间接ELISA对目的蛋白进行初步鉴定,并优化表达条件以实现目的蛋白的可溶性高表达。用标准抗cTnI单克隆抗体和标准抗cTnC单克隆抗体对目的蛋白进行Western blot鉴定和双抗体夹心ELISA鉴定,同时用八位心肌梗塞患者血清做间接ELISA鉴定。结果表明,cTnI-linker-TnC融合蛋白在表达载体pET32a中实现了可溶性高表达,最佳表达条件为28℃、0.4mmol/L IPTG、诱导表达5h;且融合蛋白具有较好的免疫原性,保存了cTnI和cTnC单体的天然结构,有望成为天然cTnI-TnC复合物的替代物,为下一步制备高特异性的抗cTnI-TnC复合物的单克隆抗体奠定了基础。

关键词： cTnI-linker-TnC 融合蛋白原核表达双抗体夹心ELISA

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VEGF/bFGF复合多肽疫苗对雌性小鼠的毒性及其生殖的影响

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中国病理生理杂志 2015年第7期31卷 1184-1188页

作者：翁锐强潘磊彭卉彤吕成定邓宁暨南大学生命科学技术学院抗体工程研究中心广东省分子免疫与抗体工程重点实验室广东广州510632

目的:初步探究血管内皮生长因子(VEGF)/碱性成纤维细胞生长因子(b FGF)复合多肽疫苗(VEGF/b FGF complex peptide vaccine,VBP3)对雌性小鼠的毒性及其生殖的影响。方法:通过镍离子亲和层析柱纯化VBP3蛋白,将纯化获得的VBP3免疫雌性BALB/... 详细信息

目的:初步探究血管内皮生长因子(VEGF)/碱性成纤维细胞生长因子(b FGF)复合多肽疫苗(VEGF/b FGF complex peptide vaccine,VBP3)对雌性小鼠的毒性及其生殖的影响。方法:通过镍离子亲和层析柱纯化VBP3蛋白,将纯化获得的VBP3免疫雌性BALB/c小鼠,酶联免疫吸附实验(ELISA)方法检测小鼠血清抗体效价和特异性,监测亲本小鼠体重,测定亲本小鼠脏器重量并对小鼠脏器进行HE染色观察;将免疫小鼠与未免疫雄性小鼠交配后,测定F1代小鼠存活率、体重、相关脏器重量,并对相关脏器进行HE染色观察。结果:间接ELISA检测结果显示免疫小鼠血清中抗VEGF、抗b FGF抗体滴度分别为1∶3 000、1∶20 000,且免疫组F1代小鼠能检测出低滴度的抗b FGF抗体,但抗VEGF抗体不能检出。在小鼠生产率实验中,免疫组与对照组崽鼠数目未见明显差异,但免疫组F1代小鼠存活率较对照组降低(P<0.05)。在亲本小鼠中,免疫组小鼠各脏器重量与对照组比较均未有差异,而在F1代小鼠中,2个组别的小鼠肝脏重量存在差异,但其它脏器重量未有差异;HE染色显示,在亲本小鼠中,2个组别小鼠的各脏器形态未有明显差异;在F1代小鼠中,免疫组F1代小鼠的肝脏与对照组相比存在形态差异。结论:VEGF/b FGF复合多肽疫苗未对亲本小鼠主要脏器造成直接损伤,但对亲本小鼠的生殖及F1代小鼠健康具有一定的影响。

关键词：血管内皮生长因子碱性成纤维细胞生长因子多肽疫苗

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重金属铜单克隆抗体的制备与间接竞争ELISA的建立

重金属铜单克隆抗体的制备与间接竞争ELISA的建立

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第十届全国免疫学学术大会

作者：郝代玲向军俭黄建芳暨南大学-广东省分子免疫与抗体工程重点实验室

目的 :制备重金属铜离子的单克隆抗体,建立并优化Cu2+的间接竞争ELISA检测法,实现对Cu2+的快速定量测定。方法 :利用双功能螯合剂p-SCN-Bn-NOTA将Cu2+分别与载体蛋白BSA和OVA偶联,制备免疫原Cu2+-NOTA-BSA和检测原Cu2+-NOTA-OVA;用免疫... 详细信息

目的 :制备重金属铜离子的单克隆抗体,建立并优化Cu2+的间接竞争ELISA检测法,实现对Cu2+的快速定量测定。方法 :利用双功能螯合剂p-SCN-Bn-NOTA将Cu2+分别与载体蛋白BSA和OVA偶联,制备免疫原Cu2+-NOTA-BSA和检测原Cu2+-NOTA-OVA;用免疫原Cu2+-NOTA-BSA免疫Balb/c小鼠;细胞融合后,通过间接ELISA和间接竞争ELISA筛选稳定分泌抗重金属Cu2+-NOTA单克隆抗体的杂交瘤细胞株;制备腹水型单抗并进行鉴定;建立间接竞争ELISA检测方法,并对检测结果进行综合评定。结果 :成功筛选出4株稳定分泌抗重金属Cu2+-NOTA单克隆抗体的杂交瘤细胞株,制备出腹水型单抗,并进行了抗体效价测定,亚型鉴定和特异性检测。结论 :成功制备出重金属铜离子单克隆抗体,并建立和优化了间接竞争ELISA检测方法。

关键词：重金属铜单克隆抗体 ELISA

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重金属铜单克隆抗体的制备与间接竞争ELISA的建立

重金属铜单克隆抗体的制备与间接竞争ELISA的建立

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中国免疫学会第十届全国免疫学学术大会

作者：郝代玲向军俭黄建芳暨南大学-广东省分子免疫与抗体工程重点实验室 510632

目的：制备重金属铜离子的单克隆抗体，建立并优化Cu2+的间接竞争ELISA检测法，实现对Cu2+的快速定量测定。方法：利用双功能螯合剂p-SCN-Bn-NOTA将Cu2+分别与载体蛋白BSA和OVA偶联，制备免疫原Cu2+-NOTA-BSA和检测原Cu2+-NOTA-OVA;用... 详细信息

目的：制备重金属铜离子的单克隆抗体，建立并优化Cu2+的间接竞争ELISA检测法，实现对Cu2+的快速定量测定。方法：利用双功能螯合剂p-SCN-Bn-NOTA将Cu2+分别与载体蛋白BSA和OVA偶联，制备免疫原Cu2+-NOTA-BSA和检测原Cu2+-NOTA-OVA;用免疫原Cu2+-NOTA-BSA免疫Balb/c小鼠;细胞融合后，通过间接ELISA和间接竞争ELISA筛选稳定分泌抗重金属Cu2+-NOTA单克隆抗体的杂交瘤细胞株;制备腹水型单抗并进行鉴定;建立间接竞争ELISA检测方法，并对检测结果进行综合评定。

关键词：重金属铜单克隆抗体 ELISA

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抗人PD-L1单克隆抗体的制备及其抗体特性的研究

抗人PD-L1单克隆抗体的制备及其抗体特性的研究

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第十届全国免疫学学术大会

作者：冯沛然黄建芳向军俭暨南大学抗体工程研究中心广东省分子免疫与抗体工程重点实验室

背景:PD-L1(1(Programmed Death-Ligand 1,程序性死亡配体)表达在活化的T细胞、B细胞、巨噬细胞、树突状细胞表面。在癌组织上可见异常高表达,如肺癌、肝癌、乳腺癌、鳞状细胞癌及卵巢癌组织等。在肿瘤邻近的正常组织中低水平表达,提示... 详细信息

背景:PD-L1(1(Programmed Death-Ligand 1,程序性死亡配体)表达在活化的T细胞、B细胞、巨噬细胞、树突状细胞表面。在癌组织上可见异常高表达,如肺癌、肝癌、乳腺癌、鳞状细胞癌及卵巢癌组织等。在肿瘤邻近的正常组织中低水平表达,提示它参与肿瘤发生发展,并在削弱抗肿瘤免疫反应中有重要作用。PD-1作为PD-L1的配体主要表达于活化T细胞,PD-1与PD-L1结合后,可抑制T细胞的增殖以及IL-2和IFN-γ等细胞因子的产生,并抑制B细胞的增殖、分化和Ig的分泌。由于PD-1/PD-L1在肿瘤免疫中发挥着重要作用,因此阻断此通路成为肿瘤免疫治疗的一个新方法,而阻断其通路可采用抗PD-1和抗PD-L1的单克隆抗体。目的 :制备PD-L1的m Ab杂交瘤细胞系并对其分泌的抗体特性进行研究。方法 :用重组人PD-L1胞外段免疫Balb/c小鼠,将免疫小鼠脾细胞与同系小鼠骨髓瘤细胞SP2/0进行细胞融合,通过克隆筛选方法选择能稳定分泌抗PD-L1抗体的杂交瘤细胞株并进行腹水型抗体的制备,用间接ELISA和Western-blot等方法研究其分泌抗体与PD-L1的结合特性。结果 :共制备出4株高亲和力、高特异性的抗人PD-L1 m Ab,杂交瘤细胞培养上清效价1×104,腹水效价达到2×***-blot结果显示制备的抗PD-L1 m Ab能与PD-L1特异性结合。结论 :制备的抗PD-L1杂交瘤细胞株能稳定分泌抗PD-L1抗体,其与PD-L1的特异性结合有望成为一种阻断型抗体,通过阻断PD-1/PD-L1通路激活体内以T细胞为主的抗肿瘤免疫反应。PD-L1抗体在对在自身免疫病、肿瘤生长、病毒感染的免疫检测中有着广阔的应用前景。

关键词： PD-L1 杂交瘤免疫检测肿瘤免疫

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抗人PD-L1单克隆抗体的制备及其抗体特性的研究

抗人PD-L1单克隆抗体的制备及其抗体特性的研究

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中国免疫学会第十届全国免疫学学术大会

作者：冯沛然黄建芳向军俭暨南大学抗体工程研究中心广东省分子免疫与抗体工程重点实验室

背景：PD-L1(1(Programmed Death-Ligand 1,程序性死亡配体)表达在活化的T细胞、B细胞、巨噬细胞、树突状细胞表面。在癌组织上可见异常高表达,如肺癌、肝癌、乳腺癌、鳞状细胞癌及卵巢癌组织等。在肿瘤邻近的正常组织中低水平表达,提... 详细信息

背景：PD-L1(1(Programmed Death-Ligand 1,程序性死亡配体)表达在活化的T细胞、B细胞、巨噬细胞、树突状细胞表面。在癌组织上可见异常高表达,如肺癌、肝癌、乳腺癌、鳞状细胞癌及卵巢癌组织等。在肿瘤邻近的正常组织中低水平表达,提示它参与肿瘤发生发展,并在削弱抗肿瘤免疫反应中有重要作用。

关键词： PD-L1 杂交瘤免疫检测肿瘤免疫

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非洲猪瘟病毒p72蛋白的真核表达及反应原性鉴定

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动物医学进展 2015年第6期36卷 29-33页

作者：梁云浩曹琛福叶奕优花群义张彩虹曾少灵陶虹廖立珊刘建利唐勇吕建强深圳出入境检验检疫局动植物检验检疫技术中心广东深圳518045 暨南大学广东省分子免疫与抗体工程重点实验室广东广州510632

将p72基因克隆到载体pFast Bac/NT-TOPO上,转化大肠埃希菌DH5α。将获得的重组载体pFastBac/NT-TOPO-p72,转化大肠埃希菌DH10Bac,获得重组杆状病毒质粒bacmid-p72。通过脂质体介导,将bacmid-p72转染sf9细胞,获得重组杆状病毒。用重组杆... 详细信息

将p72基因克隆到载体pFast Bac/NT-TOPO上,转化大肠埃希菌DH5α。将获得的重组载体pFastBac/NT-TOPO-p72,转化大肠埃希菌DH10Bac,获得重组杆状病毒质粒bacmid-p72。通过脂质体介导,将bacmid-p72转染sf9细胞,获得重组杆状病毒。用重组杆状病毒感染正常生长的sf9细胞,72h后收集细胞,超声破碎后取上清进行SDS-PAGE和Western blot分析。结果显示,重组蛋白大小约78ku,且重组蛋白可以与非洲猪瘟标准阳性血清反应。说明表达的重组蛋白为可溶性的,并具有良好的反应原性。

关键词：非洲猪瘟病毒 p72蛋白脂质体介导重组杆状病毒

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非洲猪瘟病毒p54蛋白特定抗原表位单克隆抗体的制备

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中国兽医科学 2015年第1期45卷 75-79页

作者：曹琛福梁云浩吕建强张彩虹唐金明杨俊兴张桂红花群义深圳出入境检验检疫局动植物检验检疫技术中心广东深圳518045 华南农业大学兽医学院广东广州510642 暨南大学广东省分子免疫与抗体工程重点实验室广东广州510632

为了制备针对非洲猪瘟病毒p54蛋白已知特定抗原表位的单克隆抗体,采用原核表达的重组蛋白p54免疫小鼠,并制备了原核表达p54蛋白、真核表达p54蛋白以及人工合成特定抗原表位氨基酸多肽A三种筛选抗原,筛选出了1株针对已知抗原位点的杂交... 详细信息

为了制备针对非洲猪瘟病毒p54蛋白已知特定抗原表位的单克隆抗体,采用原核表达的重组蛋白p54免疫小鼠,并制备了原核表达p54蛋白、真核表达p54蛋白以及人工合成特定抗原表位氨基酸多肽A三种筛选抗原,筛选出了1株针对已知抗原位点的杂交瘤细胞株。对其分泌的单克隆抗体进行了亚类及特异性鉴定,并利用ProteOn XPR36大分子相互作用系统分析了该单克隆抗体的亲和性。结果显示,该单克隆抗体属IgG1亚类,特异性强、亲和力高。这为以后的免疫学检测方法的建立奠定了基础。

关键词：非洲猪瘟病毒单克隆抗体特定抗原表位

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食物过敏动物模型的研究进展

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食品科学 2014年第3期35卷 280-284页

作者：黄建芳王彩霞向军俭郑函暨南大学广东省分子免疫与抗体工程重点实验室广东广州510632

食物过敏是食品安全的重要问题之一,日益受到人们的关注。食物过敏动物模型不仅为食物过敏机制的研究提供重要的依据,而且还可有效地对食物过敏原进行准确的评价和检测。本文对小鼠、大鼠、豚鼠等啮齿类动物及幼猪和狗等非啮齿类常见食... 详细信息

食物过敏是食品安全的重要问题之一,日益受到人们的关注。食物过敏动物模型不仅为食物过敏机制的研究提供重要的依据,而且还可有效地对食物过敏原进行准确的评价和检测。本文对小鼠、大鼠、豚鼠等啮齿类动物及幼猪和狗等非啮齿类常见食物过敏动物模型、动物模型致敏途径以及动物过敏模型检测、评价指标等研究进行了综述。

关键词：食物过敏动物模型过敏原检测致敏性评价

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