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Ⅰ型去乙酰化酶抑制剂MS-275对间充质干细胞C3H/10T1/2成脂分化的影响

第三军医大学学报 2012年第5期34卷 415-418页

作者：李智耀王奎栋吴伟龚雨琴季煜华暨南大学生命科学技术学院组织移植与免疫研究中心广州510632

目的探讨Ⅰ型去乙酰化酶抑制剂(histone deacetylase inhibitor,HDACi)MS-275对间充质干细胞(mesen-chymal stem cells,MSCs)成脂分化的影响。方法利用噻唑蓝(MTT)和碘化乙啶(PI)染色结合流式细胞术(FCM)分别检测不同浓度MS-275对C3H/10T1/2细胞活性和细胞周期的影响;油红O染色分析MS-275对C3H/10T1/2细胞成脂分化能力的影响;同时应用实时定量PCR(real-time PCR)检测MS-275对成脂分化标志物:脂结合蛋白(aP2)、围脂素(perilipin)、脂联素(Adipoq),以及成脂分化关键转录因子:过氧化物酶体增殖物激活受体-γ2(PPAR-γ2)mRNA转录水平的影响。结果随着MS-275浓度升高,其对C3H/10T1/2细胞的抑制率也随着增高,IC50约为8μmol/L(P<0.05);流式结果表明,MS-275将C3H/10T1/2细胞周期阻滞在G0/G1期;0.5μmol/L的MS-275明显减少C3H/10T1/2细胞的脂滴积累;同时成脂分化标志物aP2、perilipin、Adipoq及成脂关键转录因子PPAR-γ2的转录水平也显著降低(P<0.05)。结论 MS-275减弱了间充质干细胞成脂分化的能力,表明抑制Ⅰ型HDACs的活性可部分抑制MSCs向成脂分化。

关键词：间充质干细胞成脂分化 MS-275 组蛋白去乙酰化酶

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AG490下调STAT3活化增强葫芦素B对B16F10黑素瘤细胞的抑制作用

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暨南大学学报（自然科学与医学版） 2011年第6期32卷 579-583页

作者：李晶晶张延亭徐丽慧莫宏波欧阳东云何贤辉暨南大学生命科学技术学院组织移植与免疫实验中心广东广州510632 暨南大学生命科学技术学院生物工程研究所广东广州510632

目的:研究Jak2/STAT3特异性抑制剂AG490对葫芦素B(CuB)抑制B16F10黑素瘤细胞效应的影响,并探讨其作用机制。方法:用MTS法检测细胞增殖状态;用碘化丙锭(PI)染色分析细胞凋亡和细胞周期分布;用免疫印迹检测p-STAT3以及STAT3蛋白的表达情... 详细信息

目的:研究Jak2/STAT3特异性抑制剂AG490对葫芦素B(CuB)抑制B16F10黑素瘤细胞效应的影响,并探讨其作用机制。方法:用MTS法检测细胞增殖状态;用碘化丙锭(PI)染色分析细胞凋亡和细胞周期分布;用免疫印迹检测p-STAT3以及STAT3蛋白的表达情况。结果:CuB以时间与浓度依赖方式抑制B16F10黑素瘤细胞的生长,AG490预处理能增强CuB对B16F10细胞的抑制作用;PI染色分析显示,AG490能增强CuB诱导B16F10细胞凋亡的比率;免疫印迹检测表明,CuB引起B16F10细胞中STAT3的活化(p-STAT3),AG490能明显下调p-STAT3蛋白的表达水平。结论:阻断Jak/STAT3的活化可增强CuB对B16F10黑素瘤细胞的抑制作用。

关键词： AG490 葫芦素B B16F10黑素瘤细胞 STAT3

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瘦素基因佐剂对小鼠抗原提呈细胞表型的影响

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暨南大学学报（自然科学与医学版） 2010年第2期31卷 125-129页

作者：郭贺高琦徐丽慧欧阳东云刘春永何贤辉暨南大学生命科学技术学院组织移植与免疫实验中心广东广州510632 暨南大学生命科学技术学院生物工程研究所广东广州510632

目的:研究瘦素(Leptin)基因佐剂在体内对抗原提呈细胞的影响。方法:根据小鼠瘦素基因设计引物,采用RT-PCR方法获得瘦素cDNA,与pVAX1连接构建瘦素真核表达载体作为基因佐剂,制备无内毒素重组质粒,转染B16细胞鉴定瘦素的表达,并采用肌注... 详细信息

目的:研究瘦素(Leptin)基因佐剂在体内对抗原提呈细胞的影响。方法:根据小鼠瘦素基因设计引物,采用RT-PCR方法获得瘦素cDNA,与pVAX1连接构建瘦素真核表达载体作为基因佐剂,制备无内毒素重组质粒,转染B16细胞鉴定瘦素的表达,并采用肌注方式分析瘦素基因佐剂在体内对小鼠抗原提呈细胞表型的影响。结果:克隆得到的瘦素编码区全长序列,经DNA测序后证明与已报道序列相同,成功构建小鼠瘦素的真核表达载体,可在B16细胞表达;瘦素基因佐剂在体内对CD3-CD19-CD11c+细胞的MHC II和CD83的表达无明显影响,但能显著上调CD3-CD19-CD11c-免疫细胞表面MHC II类分子的表达。结论:成功构建小鼠瘦素基因佐剂,体内试验可促进免疫细胞上调MHC II类分子,提示瘦素基因佐剂有可能通过增强免疫细胞尤其是抗原提呈细胞的活化而促进免疫应答。

关键词：瘦素基因佐剂真核表达抗原提呈细胞

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负载野生型p53抗原肽HLA-A^＊2402四聚体的制备和鉴定

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暨南大学学报（自然科学与医学版） 2010年第2期31卷 136-139页

作者：王笑迎查庆兵何贤辉欧阳东云徐丽慧郭贺高琦暨南大学生命科学技术学院组织移植与免疫实验中心广东广州510632 暨南大学附属第一医院产前诊断中心广东广州510632 暨南大学生命科学技术学院生物工程研究所广东广州510632

目的:制备负载野生型p53抗原肽的HLA-A*2402四聚体,用于检测卵巢肿瘤患者p53特异性细胞毒T淋巴细胞(CTL)。方法:在p53125-134抗原肽TYS和轻链β2微球蛋白存在时,利用稀释法复性获得负载p53125-134抗原肽(TYSPALNKMF,TYS)的可溶性单体,... 详细信息

目的:制备负载野生型p53抗原肽的HLA-A*2402四聚体,用于检测卵巢肿瘤患者p53特异性细胞毒T淋巴细胞(CTL)。方法:在p53125-134抗原肽TYS和轻链β2微球蛋白存在时,利用稀释法复性获得负载p53125-134抗原肽(TYSPALNKMF,TYS)的可溶性单体,经生物素酰化并纯化后与荧光素标记的链亲和素按4∶1的比例混合形成HLA-A*2402/TYS四聚体,以流式细胞仪检测特异性CTL的频率。结果:流式细胞术分析显示,卵巢癌患者外周血中可检测减低频率的p53125-134TYS抗原肽特异性CTL。结论:成功制备HLA-A*2402/TYS四聚体。

关键词： HLA-A*2402 四聚体 p53抗原细胞毒T淋巴细胞

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人白细胞介素7重组蛋白原核表达载体在大肠杆菌中的表达和鉴定

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暨南大学学报（自然科学与医学版） 2010年第4期31卷 331-335页

作者：耿梅陈清徐丽慧张延亭何贤辉暨南大学生命科学技术学院组织移植与免疫实验中心广东广州510632 暨南大学再生医学教育部重点实验室广东广州510632 暨南大学生命科学技术学院生物工程研究所广东广州510632

目的:构建重组人白细胞介素7(rhIL-7)的原核表达载体,在大肠杆菌中表达并鉴定。方法:以RT-PCR方法扩增编码IL-7的cDNA片段,插入至pET-3d载体中,构建rhIL-7的原核表达载体,阳性克隆经测序鉴定,转化至大肠杆菌BL21(DE3),优化rhIL-7表达条... 详细信息

目的:构建重组人白细胞介素7(rhIL-7)的原核表达载体,在大肠杆菌中表达并鉴定。方法:以RT-PCR方法扩增编码IL-7的cDNA片段,插入至pET-3d载体中,构建rhIL-7的原核表达载体,阳性克隆经测序鉴定,转化至大肠杆菌BL21(DE3),优化rhIL-7表达条件,利用免疫印迹鉴定重组蛋白。结果:重组载体经DNA测序显示包含正确的rhIL-7编码序列,重组载体转入大肠杆菌后,经IPTG诱导后外源蛋白表达,相对分子质量为17 400,与IL-7理论分子质量一致;免疫印迹显示,外源蛋白可以被人IL-7特异性抗体识别,表明在原核表达的外源蛋白是rhIL-7。rhIL-7主要表达于包涵体中,包涵体表达优化条件为:温度为37℃、IPTG浓度为0.4 mmol/L、诱导时间为4h。结论:成功的构建了rhIL-7的原核表达载体。

关键词：白细胞介素7 原核表达载体包涵体表达免疫印迹

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中华实用诊断与治疗杂志 2010年第5期24卷 426-428,432页

作者：刘毅徐丽慧何贤辉孙建方中国医学科学院北京协和医学院皮肤病研究所南京市210042 暨南大学生命科学技术学院生物工程研究所广州市510632 暨南大学生命科学技术学院组织移植与免疫实验中心广州市510632

目的:构建负载人恶性黑素瘤相关抗原gp100抗原肽的HLA-A*2402四聚体并进行鉴定,为分析gp100抗原肽诱发的特异性细胞免疫应答创造条件。方法:以羧基端融合生物素化酶BirA底物肽的HLA-A*2402重链胞外域融合蛋白、人β2-微球蛋白、gp100 VY... 详细信息

目的:构建负载人恶性黑素瘤相关抗原gp100抗原肽的HLA-A*2402四聚体并进行鉴定,为分析gp100抗原肽诱发的特异性细胞免疫应答创造条件。方法:以羧基端融合生物素化酶BirA底物肽的HLA-A*2402重链胞外域融合蛋白、人β2-微球蛋白、gp100 VYFFLPDHL抗原肽、PE-链亲和素为材料,制备HLA-A*2402/VYF四聚体;非还原SDS-PAGE鉴定四聚体四聚化程度;三色免疫荧光标记流式细胞术分析HLA-A*2402+健康志愿者外周血gp100特异性CD8+T细胞的频率。结果:HLA-A*2402/VYF四聚体形成率为83%,所制备的四聚体具有与HLA-A*2402+供者抗原特异性CD8+T细胞的结合活性,特异性CD8+T细胞的频率为外周血总CD8+T细胞的0.02%～0.06%。结论:成功制备HLA-A*2402/VYF四聚体并用于检测gp100特异性CD8+T细胞,为研究HLA-A*2402+黑素瘤患者免疫治疗的机制及疗效监测创造了条件。

关键词：恶性黑素细胞瘤 MHC四聚体 HLA-A^＊2402 gp100

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银屑病患者外周血T细胞CD69和CD134表达的研究

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中国实用医刊 2010年第11期37卷 8-11页

作者：刘毅蔡小嫦曾耀英北京协和医学院皮肤病研究所中国医学科学院 210042 暨南大学附属第一医院皮肤科暨南大学生命科学技术学院组织移植与免疫实验中心

目的了解银屑病患者外周血T细胞CD69和CD134的表达情况及多克隆刺激剂对其表达的影响.方法取银屑病患者与健康志愿者外周血全血培养,佛波醇脂(PMA)联合Ionomycin刺激使T细胞体外活化;在刺激第0、6、12、24 h,用三色免疫荧光标记流式... 详细信息

目的了解银屑病患者外周血T细胞CD69和CD134的表达情况及多克隆刺激剂对其表达的影响.方法取银屑病患者与健康志愿者外周血全血培养,佛波醇脂(PMA)联合Ionomycin刺激使T细胞体外活化;在刺激第0、6、12、24 h,用三色免疫荧光标记流式细胞术检测T细胞CD69、CD134的表达.结果银屑病患者组和健康对照组各11例纳入研究,结果显示:①银屑病患者组新鲜血标本T细胞CD134、CD69表达率均明显高于健康对照组(P<0.01); ②PMA联合Ionomycin刺激第6、12、24 h,银屑病患者组与健康对照组外周血T细胞CD69表达率仅在第24 h差异具有统计学意义(P<0.05); ③在刺激第6、12、24 h,银屑病患者组外周血T细胞CD134表达率均较健康对照组显著升高(P<0.001).结论银屑病患者外周血T细胞存在异常活化.在体外活化的外周血T细胞上,银屑病患者组CD134的表达显著高于健康对照组.

关键词：银屑病患者外周血流式细胞术检测 CD69 表达率 T lymphocytes peripheral blood T cells controls 对照组健康志愿者 results 刺激体外活化 PMA 免疫荧光标记 plus whole blood significant 统计学意义

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连翘提取物对脓毒血症小鼠及体内T淋巴细胞影响

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现代免疫学 2009年第5期29卷 392-396页

作者：尹乐乐曾耀英侯会娜暨南大学生命科学技术学院组织移植与免疫研究中心广州510632

探讨连翘提取物(FS)对盲肠结扎穿孔(CLP)诱导脓毒血症小鼠的影响以及FS对CLP诱导小鼠脓毒血症体内T淋巴细胞的影响。建立脓毒血症动物模型,观察7 d内FS对小鼠存活率的影响;计算各组小鼠胸腺和脾脏指数;MTT比色法以及CFDA-SE染色分析,流... 详细信息

探讨连翘提取物(FS)对盲肠结扎穿孔(CLP)诱导脓毒血症小鼠的影响以及FS对CLP诱导小鼠脓毒血症体内T淋巴细胞的影响。建立脓毒血症动物模型,观察7 d内FS对小鼠存活率的影响;计算各组小鼠胸腺和脾脏指数;MTT比色法以及CFDA-SE染色分析,流式细胞术(FCM)检测FS对机体T淋巴细胞增殖的影响。FS可延长CLP诱导脓毒血症小鼠的存活率;FS药物治疗组小鼠脾脏的重量和指数明显增加和小鼠胸腺指数明显增加;药物FS治疗组对脓毒血症早期炎症性小鼠淋巴结细胞的增殖有抑制作用。FS对CLP小鼠胸腺和脾脏有保护作用。对脓毒血症早期炎症引起的T淋巴细胞增殖有抑制作用。

关键词：连翘提取物脓毒血症 T淋巴细胞

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γ-分泌酶抑制剂DAPT抑制Jurkat T细胞增殖

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暨南大学学报（自然科学与医学版） 2009年第2期30卷 152-156页

作者：李玉婷邢飞跃郭中峰暨南大学生命科学技术学院组织移植与免疫研究中心广东广州510632

目的:探讨γ-分泌酶抑制剂DAPT在体外对人T淋巴细胞白血病JurkatT细胞株增殖的抑制作用及其某些机制。方法:通过倒置显微镜和MTT法检测DAPT对Jurkat T细胞聚集的影响和对其增殖的抑制作用;利用碘化丙锭染色结合流式细胞术检测DAPT对Jurk... 详细信息

目的:探讨γ-分泌酶抑制剂DAPT在体外对人T淋巴细胞白血病JurkatT细胞株增殖的抑制作用及其某些机制。方法:通过倒置显微镜和MTT法检测DAPT对Jurkat T细胞聚集的影响和对其增殖的抑制作用;利用碘化丙锭染色结合流式细胞术检测DAPT对Jurkat T细胞周期的影响;藉免疫印迹法检测DAPT对Jurkat T细胞周期蛋白ICBP90表达的影响。结果:DAPT能显著影响Jurkat T细胞的聚集,抑制Jurkat T细胞的增殖,使其细胞周期停滞于S期,且周期蛋白ICBP90的表达下调。结论:γ-分泌酶抑制剂DAPT能够抑制Jurkat T细胞的增殖和细胞周期的进行,其抑制作用可能与ICBP90蛋白表达的下调有关。

关键词：反义CCAAT盒结合蛋白(ICBP90) 人T淋巴细胞白血病JurkatT细胞 γ-分泌酶抑制剂DAPT 细胞增殖细胞周期

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负载SIV抗原肽的中国恒河猴Mamu-B*1703可溶性单体及其四聚体的制备和鉴定

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暨南大学学报（自然科学与医学版） 2009年第4期30卷 349-354页

作者：王笑迎欧阳东云何贤辉徐丽慧施焕敬高琦郭贺暨南大学生命科学技术学院组织移植与免疫实验中心广东广州510632 暨南大学生命科学技术学院生物工程研究所广东广州510632

目的:制备负载SIV抗原肽的中国恒河猴Mamu-B*1703可溶性单体及其四聚体。方法:以含Mamu-B*1703重链cDNA序列的pMD19-T克隆为模板,通过PCR的方法克隆Mamu-B*1703重链基因,进而构建羧基端融合生物素化酶BirA底物肽(BSP)的Mamu-B*1703重链... 详细信息

目的:制备负载SIV抗原肽的中国恒河猴Mamu-B*1703可溶性单体及其四聚体。方法:以含Mamu-B*1703重链cDNA序列的pMD19-T克隆为模板,通过PCR的方法克隆Mamu-B*1703重链基因,进而构建羧基端融合生物素化酶BirA底物肽(BSP)的Mamu-B*1703重链胞外域融合蛋白的表达载体,并在大肠杆菌中获得表达。β微球蛋白、SIV抗原肽共存时,通过稀释法复性可溶性Mamu-B*1703单体,经生物素化并纯化后与荧光素标记的链亲和素按4∶1的比例混合形成四聚体。结果:ELISA检测显示获得具有正确构象的负载SIV抗原肽的Mamu-B*1703四聚体。结论:印度恒河猴Mamu-B*1701特异性抗原肽IW9,与中国恒河猴的Mamu-B*1703相结合形成可溶性Mamu-B*1703/IW9单体和四聚体。

关键词：恒河猴 Mamu-B*1703 猴免疫缺陷病毒四聚体

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