检索结果-内蒙古大学图书馆

免疫学杂志 2007年第3期23卷 260-264,269页

作者：查庆兵徐丽慧刘芳孙荭贾仟涛李丰耀何贤辉暨南大学生命科学技术学院组织移植与免疫实验中心暨南大学生物工程研究所暨南大学附属第一医院临床实验中心广州510632

目的利用负载pp65495-503抗原肽的HLA-A*0201四聚体染色结合流式细胞术,分析HLA-A2+健康青年供者外周血中HCMV pp65495-503特异性记忆CD8+T细胞的频率和表型。方法以优化的四聚体染色方法对22例中国青年供者全血进行染色,用流式细胞仪... 详细信息

目的利用负载pp65495-503抗原肽的HLA-A*0201四聚体染色结合流式细胞术,分析HLA-A2+健康青年供者外周血中HCMV pp65495-503特异性记忆CD8+T细胞的频率和表型。方法以优化的四聚体染色方法对22例中国青年供者全血进行染色,用流式细胞仪对样品进行三色荧光分析。结果健康中国青年人外周血中存在高频率的pp65495-503特异性CD8+T细胞,占CD8+T细胞的百分率为0.14~6.84%(均数2.45%);表型分析显示其CD28+细胞占四聚体阳性和四聚体阴性细胞的百分率分别为为32.5%(±21.7%)和58.58%(±10.4%)(P<0.001);CD57+细胞占四聚体阳性和四聚体阴性细胞的百分率分别为55.8%(±18.4%)和27.4%(±8.3%)(P<0.001)。同时,对三例健康青年人CD8+T细胞上多种表面分子的详细分析显示,pp65495-503特异性记忆CD8+T细胞有不同比率的细胞表达CD62L、CD45RO、CD38和CD27,而且还有一定比例的细胞表达CD45RA,但不表达活化抗原CD69分子。结论青年中国人外周血中存在高频率的HCMV特异性CD8+T细胞,这些细胞的表型存在高度异质性,可能是处于不同分化阶段的记忆和效应细胞群体组成。

关键词：四聚体技术人巨细胞病毒记忆型CD8^+T细胞流式细胞术

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人类巨细胞病毒特异性CD8^+T细胞IFN-γ和穿孔素水平的检测

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免疫学杂志 2006年第4期22卷 440-443页

作者：查庆兵徐丽慧迟晓云何贤辉肇静娴暨南大学生命科学技术学院组织移植与免疫研究中心暨南大学生命科学技术学院生物工程研究所广州510632

目的研究人巨细胞病毒(hCMV)结构蛋白pp65衍生抗原肽(pp65495503,NLV)特异性CD8+T细胞的功能特性。方法将HLAA2NLV四聚体染色与细胞内细胞因子或穿孔素染色相结合,以流式细胞仪直接分析NLV特异性CD8+T细胞内穿孔素的表达水平,或者在NLV... 详细信息

目的研究人巨细胞病毒(hCMV)结构蛋白pp65衍生抗原肽(pp65495503,NLV)特异性CD8+T细胞的功能特性。方法将HLAA2NLV四聚体染色与细胞内细胞因子或穿孔素染色相结合,以流式细胞仪直接分析NLV特异性CD8+T细胞内穿孔素的表达水平,或者在NLV抗原肽刺激6h后分析γ干扰素(IFNγ)的表达水平。结果NLV抗原肽能诱导hCMV特异性CD8+T细胞分泌IFNγ,不同供者特异性CD8+T细胞产生IFNγ的比率存在较大差异(55.69±17.64)%,当NLV抗原肽质量浓度为10μgmL时IFNγ阳性细胞百分率最高;未经刺激的特异性CD8+T细胞内表达较高水平的穿孔素(53.90±16.41)%。结论识别单一表位的hCMV特异性CD8+T细胞合成IFNγ和穿孔素的能力存在多样性。

关键词：巨细胞病毒 CD8^+T细胞四聚体细胞内细胞因子染色流式细胞术

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人EGF受体胞外域在大肠杆菌中表达、复性及抗原性鉴定

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免疫学杂志 2006年第4期22卷 362-365页

作者：徐丽慧洪岸何贤辉暨南大学生命科学技术学院组织移植与免疫实验中心暨南大学生命科学技术学院生物工程研究所广州510632

目的构建人EGF受体(EGFR)胞外域的原核表达载体并在大肠杆菌中表达,制备EGFR特异性抗体,对表达产物进行鉴定。方法以PCR方法从克隆的EGFR胞外区cDNA中扩增编码胞外结构域L1、S1、L2(EGFRLSL)的DNA片段,并在其3′端加入编码His6标签的序... 详细信息

目的构建人EGF受体(EGFR)胞外域的原核表达载体并在大肠杆菌中表达,制备EGFR特异性抗体,对表达产物进行鉴定。方法以PCR方法从克隆的EGFR胞外区cDNA中扩增编码胞外结构域L1、S1、L2(EGFRLSL)的DNA片段,并在其3′端加入编码His6标签的序列,与pET3c连接构建EGFRLSL原核表达载体,在大肠杆菌中进行表达;同时以纯化的EGFRL2结构域蛋白(EGFRL2)制备抗血清,以此抗血清鉴定表达产物。结果EGFRLSL在大肠杆菌BL21(DE3)中获得高效表达,抗His6抗体免疫印迹分析表明,表达产物全部以包涵体形式存在,通过Ni2+NTA柱上复性获得纯化的可溶性EGFRLSL蛋白;免疫印迹分析表明,EGFRLSL与小鼠抗EGFRL2抗血清具有高特异性反应。结论从大肠杆菌中获得具有特异抗原性的可溶性EGFRLSL蛋白。

关键词：表皮生长因子受体胞外域原核表达包涵体抗原性

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高频等位基因HLA-A* 1101重链胞外域-BSP融合蛋白原核表达载体的构建及表达鉴定

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暨南大学学报（自然科学与医学版） 2006年第4期27卷 509-514页

作者：李丰耀徐丽慧迟晓云查庆兵贾仟涛何贤辉暨南大学生命科学技术学院组织移植与免疫实验中心广东广州510632 暨南大学生命科学技术学院生物工程研究所广东广州510632

目的:构建HLA-A*1101重链胞外域羧基端融合生物素化酶B irA底物肽(BSP)的融合蛋白(HLA-A11-BSP)原核表达载体,并在大肠杆菌中表达该融合蛋白。方法:以RT-PCR法扩增并克隆HLA-A*1101重链基因的cDNA,以PCR方法构建HLA-A11-BSP的表达载体,... 详细信息

目的:构建HLA-A*1101重链胞外域羧基端融合生物素化酶B irA底物肽(BSP)的融合蛋白(HLA-A11-BSP)原核表达载体,并在大肠杆菌中表达该融合蛋白。方法:以RT-PCR法扩增并克隆HLA-A*1101重链基因的cDNA,以PCR方法构建HLA-A11-BSP的表达载体,在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,并以免疫印迹法进行鉴定。结果:从HLA-A2阴性的供者外周血单个核细胞中克隆到HLA-A*1101重链基因的cDNA,以此cDNA为模板,将编码HLA-A*1101重链胞外域1~276序列与编码BSP的序列融合,构建HLA-A11-BSP融合蛋白表达载体,重组质粒经测序验证。融合蛋白在BL21(DE3)中诱导后获得高效表达,约占菌体总蛋白的20%;其相对分子质量约为35 000,与理论值一致。免疫印迹分析显示表达产物主要存在于包涵体中,上清液中几乎无任何产物存在。结论:成功构建表达HLA-A11-BSP融合蛋白的原核表达载体,该融合蛋白在大肠杆菌中以包涵体形式获得高水平表达。

关键词：免疫学高频等位基因HLA-A*1101 生物素化酶底物肽融合蛋白原核表达包涵体

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负载HCMV pp65抗原肽的HLA-A*1101-GPI四聚体的制备和鉴定

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现代免疫学 2006年第6期26卷 459-464页

作者：李丰耀查庆兵徐丽慧迟晓云贾仟涛何贤辉曾耀英暨南大学生命科学技术学院组织移植与免疫实验中心广州510632 生物工程研究所广州510632

为体外复性制备负载人巨细胞病毒(HCMV)pp65抗原肽的HLA-A*1101-GPI四聚体,研究优化HLA-A*1101重链与生物素化酶底物肽融合蛋白(HLA-A*1101-BSP)在大肠杆菌中的诱导表达的温度、时间和诱导剂IPTG浓度,并以抗HLA-A*0201抗血清进行免疫印... 详细信息

为体外复性制备负载人巨细胞病毒(HCMV)pp65抗原肽的HLA-A*1101-GPI四聚体,研究优化HLA-A*1101重链与生物素化酶底物肽融合蛋白(HLA-A*1101-BSP)在大肠杆菌中的诱导表达的温度、时间和诱导剂IPTG浓度,并以抗HLA-A*0201抗血清进行免疫印迹鉴定HLA-A*1101-BSP的表达水平。将初步纯化的HLA-A*1101-BSP与β2-微球蛋白(β2m)和HCMV抗原肽pp6516-24(GPISGHVLK,简称GPI)一起利用稀释法进行重折叠复性,获得可溶性HLA-A*1101-GPI单体,经生物素化和纯化后,与Streptavidin-PE结合成四聚体。流式细胞仪分析显示HLA-A*1101-GPI四聚体具有与特异性细胞毒T细胞(CTL)的结合活性,表明成功获得可溶性HLA-A*1101-GPI四聚体,为研究HLA-A*1101限制性CTL的免疫应答打下基础。

关键词： HLA-A＊1101 四聚体流式细胞术巨细胞病毒

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可溶性人PD-L1胞外域的制备及其鉴定

可溶性人PD-L1胞外域的制备及其鉴定

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第三届全国中医药免疫学术研讨会

作者：徐丽慧何贤辉李丰耀贾仟涛查庆兵暨南大学生命科学技术学院组织移植与免疫研究中心暨南大学生命科学技术学院组织移植与免疫研究中心暨南大学生命科学技术学院组织移植与免疫研究中心暨南大学生命科学技术学院组织移植与免疫研究中心暨南大学生命科学技术学院组织移植与免疫研究中心

PD-L1(又称B7-H1)是近年来研究较多的B7家族的共信号分子,通过PD-1受体向T细胞传递抑制性信号,因此在调节T细胞免疫应答过程中发挥重要作用。我们已经克隆人PD-L1基因的 cDNA,构建了其胞外域的原核表达载体,并在大肠杆菌中获得了表达。... 详细信息

PD-L1(又称B7-H1)是近年来研究较多的B7家族的共信号分子,通过PD-1受体向T细胞传递抑制性信号,因此在调节T细胞免疫应答过程中发挥重要作用。我们已经克隆人PD-L1基因的 cDNA,构建了其胞外域的原核表达载体,并在大肠杆菌中获得了表达。为进一步研究PD-L1的生物学功能及作用机制,我们制备了可溶性PD-L1蛋白及其抗体,并对获得的PD-L1蛋白的活性进

关键词：胞外域 PD-L1

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健康青年中国人中HCMV特异性记忆CD8+ T细胞频率和表型分析

健康青年中国人中HCMV特异性记忆CD8+ T细胞频率和表型分析

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第三届全国中医药免疫学术研讨会

作者：何贤辉查庆兵徐丽慧贾仟涛李丰耀暨南大学生命科学技术学院组织移植与免疫研究中心暨南大学生命科学技术学院组织移植与免疫研究中心暨南大学生命科学技术学院生物工程研究所暨南大学生命科学技术学院组织移植与免疫研究中心暨南大学生命科学技术学院组织移植与免疫研究中心

抗原特异性CD8+T细胞在抗病毒感染过程中发挥极为重要的作用。CD8+T细胞应答分为三个时相:第一时相,CD8+T细胞发生克隆扩增并分化为效应T细胞,清除产生病毒的细胞;接着为收缩相,大部分(90-95％)由克隆扩增产生的抗原特异性CD8+T细胞通... 详细信息

抗原特异性CD8+T细胞在抗病毒感染过程中发挥极为重要的作用。CD8+T细胞应答分为三个时相:第一时相,CD8+T细胞发生克隆扩增并分化为效应T细胞,清除产生病毒的细胞;接着为收缩相,大部分(90-95％)由克隆扩增产生的抗原特异性CD8+T细胞通过凋亡而死亡;最后是第三时相,

关键词：特异性 CD8

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