检索结果-内蒙古大学图书馆

中国人兽共患病学报 2018年第5期34卷 404-410页

作者：何姣姣王南杰孙雪松暨南大学生命科学技术学院功能蛋白研究广东省普通高校重点实验室广州510632

目的 Dpr蛋白是与细菌毒力密切相关的铁离子结合蛋白,从Dpr蛋白潜在的相互作用蛋白网络出发,通过生物信息学手段分析这些蛋白发挥的功能以及参与的生物过程,揭示Dpr蛋白在化脓链球菌(Streptococcus pyogenes)中发挥作用的新机制。方法... 详细信息

目的 Dpr蛋白是与细菌毒力密切相关的铁离子结合蛋白,从Dpr蛋白潜在的相互作用蛋白网络出发,通过生物信息学手段分析这些蛋白发挥的功能以及参与的生物过程,揭示Dpr蛋白在化脓链球菌(Streptococcus pyogenes)中发挥作用的新机制。方法表达和纯化融合蛋白(GST-Dpr);通过GST-Pull down和质谱联用的方式,筛选化脓链球菌中与Dpr蛋白相互作用的蛋白。结果三次独立重复实验共同鉴定到26个相互作用蛋白;基于String分析构建各蛋白间的相互作用网络发现,这些相互作用蛋白中有15个蛋白与Dpr存在直接或间接的联系;利用生物信息学手段分析这些相互作用蛋白的分子功能以及可能参与的生物学途径,发现它们大多能够结合金属离子,主要参与碳代谢、丙酮酸代谢、糖代谢以及糖异生等生物过程。结论 Dpr蛋白可能通过与本研究中鉴定的GAPDH、AccD、Eno、RpsB和Fus等蛋白相互作用来共同完成相关的生物学功能。通过建立的Dpr蛋白相互作用蛋白网络,为全面阐述Dpr蛋白在细菌定植和毒力方面的功能提供了重要的理论基础和新思路。

关键词：化脓链球菌铁转运 Dpr蛋白生物信息学分析

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基于C6流式细胞仪平台应用FRET技术在活细胞中研究蛋白质相互作用

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中国生物工程杂志 2017年第5期37卷 45-51页

作者：孟坤何庆瑜王通卢少华暨南大学生命科学技术学院功能蛋白质研究广东省普通高校重点实验室广州510632

荧光共振能量转移(fluorescence resonance energy transfer,FRET)显微镜技术被广泛应用于在活细胞中研究蛋白质相互作用。随着流式细胞术(fluorescence activated cell sorting,FACS)的发展与应用,FACS-FRET技术不但可以检测活细胞中蛋白质相互作用,还可以进行定量统计分析。由于流式细胞仪价格昂贵、FRET技术对荧光基团发光光谱的特殊要求等原因,目前为止FACS-FRET技术仅仅被应用到一些特殊的科学研究。为了解决这些问题,构建了一对新的FRET荧光基团EGFP-m Cherry,并且在小型流式细胞仪C6上检测了EGFP-m Cherry融合蛋白的FRET信号,最后使用已明确有相互作用关系的p53蛋白和MDM2蛋白做验证,证明了所构建的EGFPm Cherry可以作为检测FRET信号的荧光基团。不仅促进了FACS-FRET技术的发展,还为人类疾病治疗的药物作用靶点研究提供了有利的研究手段。

关键词：荧光共振能量转移流式细胞术活细胞蛋白质相互作用

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海藻多糖通过下调肝癌细胞Hep3B糖酵解途径抑制细胞增殖和迁移

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中国生物工程杂志 2017年第9期37卷 31-40页

作者：冯源唐云徐蕾谭海刚广东省高校功能蛋白质研究重点实验室暨南大学生命与健康工程研究院广州510632 天津科技大学食品与营养安全教育部实验室天津300222 上海交通大学生命科学技术学院上海200240 青岛农业大学食品科学与工程学院青岛266109

目的:探讨海藻多糖(algal polysaccharides,AP)对肝癌细胞Hep3B的增殖和迁移的影响及其可能的作用机制,为治疗肝癌提供新的思路。方法:(1)比较正常细胞与癌细胞中糖酵解(embden-meyerhof-parnas,EMP)途径的表达差异,用紫外分光光度计比... 详细信息

目的:探讨海藻多糖(algal polysaccharides,AP)对肝癌细胞Hep3B的增殖和迁移的影响及其可能的作用机制,为治疗肝癌提供新的思路。方法:(1)比较正常细胞与癌细胞中糖酵解(embden-meyerhof-parnas,EMP)途径的表达差异,用紫外分光光度计比色法检测EMP限速酶酶活力:己糖激酶(hexokinase,HK)、丙酮酸激酶(pyruvate kinase,PK),用乳酸测定试剂盒测定EMP产物:乳酸。(2)AP处理Hep3B后,检测EMP表达水平变化。(3)AP处理细胞后,检测肝癌细胞Hep3B的增殖和迁移能力及对上皮细胞-间充质转化(EMT)的影响,方法包括MTT、q PCR和Transwell小室实验。(4)MTT、Transwell和q PCR检测HK抑制剂3-溴丙酮酸(3-bromopyruvate,3-BrPA)对肝癌Hep3B细胞的活力和迁移能力及EMT的影响。(5)Western blot和相关试剂盒检测AP与3-BrPA分别处理细胞时,对EMP水平及Akt通路的影响。(6)AP联合3-BrPA处理Hep B3后,检测HK和Akt信号通路表达水平及细胞活力和迁移的变化。结果:(1)癌细胞(Hep3B、He La、SW480)EMP代谢水平均高于正常肝细胞(HL02),其中Hep3B差异最为显著。(2)AP能抑制Hep B细胞EMP代谢水平,且抑制程度随着AP浓度升高而升高,存在浓度依赖性。(3)AP可抑制肝癌细胞Hep3B的增殖和迁移,且抑制EMT的发生。AP浓度为200mg/ml,处理时间为48h时,生长抑制率达(55±2.8)%,细胞迁移数为对照组的(32±2.9)%;(4)3-BrPA可下调Hep3B细胞HK活性,并抑制细胞活力与迁移,且抑制EMT的发生。200μmol/L 3-BrPA作用细胞48h后,与对照组相比,细胞活性下降了(52±5.8)%(P<0.001),细胞迁移数下降了(48±6.1)%(P<0.01)。(5)AP和3-BrPA均下调EMP代谢水平,且抑制Akt信号通路。(6)AP与3-BrPA联合处理Hep3B后,HK表达下降,显著抑制Akt信号通路,细胞活性和迁移能力均较AP单用组显著下降(P<0.05)。结论:肝癌细胞Hep3B EMP代谢水平高于正常肝细胞,AP可下调Hep3B细胞EMP代谢水平,低EMP代谢水平可能通过下调EMT和Akt信号通路抑制Hep3B的增殖和迁移。当AP和3-BrPA联合应用时,抑制肝癌迁移和增殖效果更明显。

关键词：海藻多糖 EMP途径 Hep3B细胞细胞增殖细胞迁移

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磷酸化蛋白质组学鉴定PTPLAD1调控的结肠癌细胞酪氨酸磷酸化蛋白质

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中国病理生理杂志 2015年第5期31卷 845-851页

作者：胡阳杨杰余汝媛汪洋暨南大学生命科学技术学院功能蛋白质研究广东普通高校重点实验室广东广州510632

目的:用磷酸化蛋白质组学的方法鉴定并分析结肠癌细胞中含蛋白酪氨酸磷酸酶样A结构域蛋白1(PTPLAD1)调控的酪氨酸磷酸化蛋白。方法:运用siRNA技术沉默PTPLAD1的表达,于细胞培养条件下运用氨基酸稳定同位素标记技术(stable lsotope label... 详细信息

目的:用磷酸化蛋白质组学的方法鉴定并分析结肠癌细胞中含蛋白酪氨酸磷酸酶样A结构域蛋白1(PTPLAD1)调控的酪氨酸磷酸化蛋白。方法:运用siRNA技术沉默PTPLAD1的表达,于细胞培养条件下运用氨基酸稳定同位素标记技术(stable lsotope labeling with amino acids in cell culture,SILAC)标记细胞,用酪氨酸磷酸化抗体免疫沉淀富集酪氨酸磷酸化蛋白,用LTQ-Orbitrap XL质谱鉴定因敲低PTPLAD1所出现的差异表达的酪氨酸磷酸化蛋白,进一步利用Ingenuity Pathway Analysis(IPA)软件对这些差异蛋白进行生物信息学分析。结果:用real-time PCR筛选得到有效的siRNA干扰片段,Western blot验证其干扰效果及有效干扰时间。质谱鉴定PTPLAD1调控的差异酪氨酸磷酸化蛋白共20个,其中显著上调的8个,显著下调的10个,主要为转录因子及肿瘤标志物相关蛋白。IPA软件的结果表明PTPLAD1调控的差异酪氨酸磷酸化蛋白的功能主要与器官发育分化、维持组织分化类型及细胞凋亡、增殖相关。结论:成功鉴定出PTPLAD1调控的差异酪氨酸磷酸化蛋白,可以为后续研究PTPLAD1在结肠癌的发生发展中的作用及机理提供基础。

关键词：含蛋白酪氨酸磷酸酶样A结构域蛋白1 HCT-116细胞小干扰RNA 氨基酸稳定同位素标记技术磷酸化蛋白质组学

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曲古抑菌素A对SH-SY5Y细胞缺氧/缺糖损伤的保护作用

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中国药理学通报 2013年第10期29卷 1395-1400页

作者：黄琼越茂松季秋虹王进京季煜华暨南大学生命科学技术学院组织移植和免疫研究中心广东广州510632 南通大学附属医院神经内科江苏南通226001 暨南大学功能蛋白质研究广东普通高校重点实验室广东广州510632

目的探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A(trichostatin A,TSA)对人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)缺氧/缺糖(oxygen-glucose deprivation,OGD)损伤的保护作用及其可能机制。方法采用化学方法建立SH-SY5Y细胞不同时间(1、2、4、6和8 h)... 详细信息

目的探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A(trichostatin A,TSA)对人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)缺氧/缺糖(oxygen-glucose deprivation,OGD)损伤的保护作用及其可能机制。方法采用化学方法建立SH-SY5Y细胞不同时间(1、2、4、6和8 h)持续性OGD损伤模型,MTT法检测细胞活性,以评估持续性OGD损伤对SH-SY5Y细胞的损伤程度。继而观察TSA(10、20、40、80 nmol·L-1)对OGD诱导的神经元损伤的影响,实验指标如下:倒置显微镜观察细胞形态学变化,MTT检测TSA对细胞活性的影响,Propidium iodide(PI)和Hoechst 33258染色检测细胞凋亡与坏死情况,荧光显微镜检测各组细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)含量和线粒体膜电位(mitochondrion membrane potential,MMP)的变化。结果 OGD损伤2 h,模型组的细胞活性和MMP水平较对照组明显降低,并随OGD时间的延长而变化越明显。而ROS含量较对照组明显升高,Hoechst和PI双染检测也发现染色质凝聚,核碎裂,凋亡小体产生,并随OGD时间的延长,凋亡和坏死细胞的数量增加。与模型组相比,40 nmol·L-1TSA能明显提高OGD诱导的神经元的活性,降低细胞内ROS含量,以及提高MMP水平。结论TSA对OGD诱导SH-SY5Y细胞缺氧/缺糖损伤具有明显的保护作用,其保护机制可能与降低细胞内ROS水平及维持MMP的高能状态有关。

关键词：曲古抑菌素A SH—SY5Y细胞缺氧缺糖损伤氧化应激活性氧线粒体膜电位

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曲古抑菌素A对缺糖/缺氧损伤PC12细胞的保护作用

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中国药理学通报 2013年第5期29卷 688-692页

作者：越茂松黄琼王进京季秋虹季煜华暨南大学生命科学技术学院组织移植与免疫研究中心广州510632 南通大学附属医院神经内科南通226001 暨南大学功能蛋白质研究广东普通高校重点实验室广州510632

目的研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A(trichostatin A,TSA)对PC12大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞缺糖/缺氧损伤的保护作用及其可能的作用机制。方法建立PC12细胞缺糖/缺氧(oxygen and glucose deprivation,OGD)损伤模型,1-640 nmol.L-... 详细信息

目的研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A(trichostatin A,TSA)对PC12大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞缺糖/缺氧损伤的保护作用及其可能的作用机制。方法建立PC12细胞缺糖/缺氧(oxygen and glucose deprivation,OGD)损伤模型,1-640 nmol.L-1TSA处理细胞,噻唑蓝(MTT)检测对PC12细胞活性的影响,Propidium iodide(PI)和Hoechst33258染色检测细胞凋亡与坏死,荧光显微镜和流式细胞仪检测各组细胞内活性氧(ROS)的含量。结果与模型组相比,80 nmol.L-1TSA可明显提高ODG PC12的细胞存活率,降低细胞内的ROS含量(P<0.05)。结论 TSA对OGD损伤的PC12细胞具有保护作用,其机制可能是通过增加细胞内能量代谢中各种酶的乙酰化水平来应对缺血损伤。

关键词： TSA PC12细胞缺糖缺氧能量代谢乙酰化活性氧

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