检索结果-内蒙古大学图书馆

农业环境科学学报 2025年第3期44卷 829-838页

作者：翟文花蒙家泽李彦文刘白林莫测辉暨南大学生命科学技术学院广东省环境污染控制与修复材料工程中心广州510632

为探究微囊藻毒素-LR(Microcystin-LR,MC-LR)对土壤动物的毒性效应,本研究采用土壤接触实验,利用酶活性检测、透射电镜与高通量测序等技术,研究了不同含量MC-LR(50、150、500μg·kg^(-1))污染胁迫对赤子爱胜蚓(Eisenia fetida)抗... 详细信息

为探究微囊藻毒素-LR(Microcystin-LR,MC-LR)对土壤动物的毒性效应,本研究采用土壤接触实验,利用酶活性检测、透射电镜与高通量测序等技术,研究了不同含量MC-LR(50、150、500μg·kg^(-1))污染胁迫对赤子爱胜蚓(Eisenia fetida)抗氧化防御系统及肠道微生物群落结构的影响。结果表明:蚯蚓表皮肌层的损伤程度与MC-LR暴露量之间存在明显的剂量效应关系。高含量MC-LR处理组中,蚯蚓丙二醛(MDA)含量最高(34.5 U·g^(-1)),纤维素酶(CL)活性最低(200.5 U·g^(-1))。随着MC-LR暴露量的升高,蚯蚓总抗氧化能力(T-AOC)和谷胱甘肽S-转移酶(GST)活性均呈现先升高后降低的趋势。蚯蚓肠道微生物群落结构多样性显著高于周围土壤(P<0.05),其中假单胞菌门(Pseudomonadota)、放线菌门(Actinobacteria)和芽孢杆菌门(Bacillota)为肠道优势菌群。MC-LR胁迫使得蚯蚓肠道微生物群落的遗传信息通路和代谢通路丰度呈现下降趋势。研究表明,MC-LR对蚯蚓的抗氧化系统产生明显的胁迫效应,降低了蚯蚓肠道的消化能力及肠道微生物丰度,进而干扰了蚯蚓正常的遗传信息传递及代谢通路运行。

关键词：微囊藻毒素赤子爱胜蚓毒性效应肠道微生物土壤污染

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抗bFGF人源性抗体的瞬时表达、纯化及鉴定

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中国免疫学杂志 2010年第10期26卷 876-880页

作者：陶俊李丹邓宁王宏龚义平向军俭暨南大学生命科学技术学院抗体工程中心广州510632

目的:将一株人源性中和性抗bFGF单链抗体基因转入真核表达载体,进行真核瞬时表达,通过细胞试验进一步验证其中和活性。方法:将1AscFv抗体基因克隆到真核表达载体pIgG中(编码全长人源性IgG1类抗体),T4连接酶连接后,转化大肠杆菌DH5α,挑... 详细信息

目的:将一株人源性中和性抗bFGF单链抗体基因转入真核表达载体,进行真核瞬时表达,通过细胞试验进一步验证其中和活性。方法:将1AscFv抗体基因克隆到真核表达载体pIgG中(编码全长人源性IgG1类抗体),T4连接酶连接后,转化大肠杆菌DH5α,挑取4个克隆,经测序其中有一株含有正确的scFv序列,命名为pIgG-1A2,将pIgG-1A2转染真核细胞HEK293T进行瞬时表达,表达产物经蛋白G纯化后,SDS-PAGE检测纯化抗体的纯度;ELISA和Western blot检测抗体的特异性;MTT法检测纯化抗体对人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)和人神经胶质瘤细胞株U87MG增殖的影响。结果:经酶切鉴定和测序发现pIgG-1A2含有正确的抗体轻重链基因,经293T细胞瞬时表达,表达产物经蛋白G亲和层析柱纯化后经SDS-PAGE鉴定,获得纯度为95%的电泳纯抗体,产量可以达到每升细胞培养上清10mg,交叉反应显示表达的抗体特异性针对bFGF,体外实验证实1A2能够抑制bFGF诱导的人脐静脉血管内皮细胞的增殖,同时还能抑制神经胶质瘤细胞株U87MG的增殖。结论:通过真核细胞成功地表达了抗bFGF人源性抗体,纯化后获得了高纯度的抗体,对HUVEC和神经胶质瘤细胞株U87MG具有抑制作用,为抗bFGF人源性抗体抗肿瘤研究奠定基础。

关键词： bFGF 人源性抗体瞬时表达中和活性

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碱性成纤维细胞生长因子单克隆抗体通过P-糖蛋白逆转乳腺癌MCF-7/ADM细胞多药耐药性的分子机制

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肿瘤 2013年第1期33卷 8-14页

作者：陈文慧徐萌杜超超赵建夫潘兰红李汉初向军俭邓宁暨南大学附属第一医院肿瘤科广东广州510630 暨南大学生命科学技术学院抗体工程中心广东广州510632

目的:探讨碱性成纤维细胞生长因子单克隆抗体(monoclonal antibody to basic broblast growth factor,bFGF mAb)通过P-糖蛋白(permeability glycoprotein,P-gp)对人乳腺癌多柔比星(adriamycin,ADM)耐药细胞株MCF-7/ADM多药耐药(multidrug resistance,MDR)性的逆转机制。方法:CCK-8(cell counting kit-8)法检测bFGF mAb对MCF-7/ADM细胞增殖的影响及其对化疗药物耐药的逆转作用;bFGF mAb作用后,FCM检测MCF-7/ADM细胞的细胞周期、P-gp的表达及细胞内罗丹明(rhodamine,Rho)123的荧光强度,实时荧光定量PCR检测MCF-7/ADM细胞中MDR1和碱性成纤维细胞生长因子(basic broblast growth factor,bFGF)mRNA的表达。结果:1μg/mL bFGF mAb对MCF-7和MCF-7/ADM细胞的抑制率分别为(19.87±1.05)%和(27.34±2.79)%,差异有统计学意义(P<0.01)。bFGF mAb可有效逆转MCF-7/ADM细胞对ADM、吉西他滨(gemcitabine,GEM)和奥沙利泊(oxaliplatin,OXA)的耐药性,逆转指数分别为4.46、4.25和2.18。bFGF mAb作用MCF-7/ADM细胞后,细胞阻滞于G0/G1期,P-gp表达下调,细胞内Rho123的荧光强度增强,MDR1和bFGF mRNA的表达下调,与未作用组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:bFGF mAb能抑制MCF-7/ADM细胞增殖并逆转其MDR,该作用机制可能与bFGF mAb下调MDR1/P-gp表达、抑制P-gp功能以及增加细胞内化疗药物浓度有关。

关键词：乳腺肿瘤碱性成纤维细胞生长因子抗体单克隆 P-糖蛋白抗药性肿瘤

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人源性抗体在HEK293T细胞中瞬时表达条件的优化

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生物技术通报 2010年第11期26卷 137-141页

作者：陶俊向军俭王宏龚义平邓宁暨南大学生命科学技术学院抗体工程中心广州510632

以HEK293T细胞为宿主对抗体基因的转染和表达条件进行优化。以GFP(green fluorescence protein)和人源性抗b FGF抗体1A2为报告基因,考察了3种转染试剂磷酸钙,PEI,FuGene HD的转染效率,确定FuGene HD的转染效率最高后,对DNA∶FuGene HD... 详细信息

以HEK293T细胞为宿主对抗体基因的转染和表达条件进行优化。以GFP(green fluorescence protein)和人源性抗b FGF抗体1A2为报告基因,考察了3种转染试剂磷酸钙,PEI,FuGene HD的转染效率,确定FuGene HD的转染效率最高后,对DNA∶FuGene HD的比例,加入氯喹的浓度,转染后的孵育时间,最佳的低温培养温度以及加入组蛋白抑制剂的浓度进行了优化。结果显示,FuGene HD的转染效率最高,达到56.7%。当转染的DNA=2μg/4×106细胞时,DNA∶FuGene HD的最佳比例为1∶4(W/V);加入氯喹能够增强FuGene HD的转染效率,最佳浓度为100μmol/L,转染后的最佳孵育时间为6h;低温诱导能够提高293T细胞表达抗体的能力,最佳的温度为33℃;加入组蛋白抑制剂丁酸钠或丙戊酸能够明显提高抗体的表达量,丙戊酸的效果优于丁酸钠。通过对转染试剂,转染方法,培养温度,组蛋白抑制剂的加入等条件进行优化使人源性抗bFGF抗体的表达量从1.5mg/L提高到了15.1mg/L。

关键词：人源性抗体瞬时表达优化 HEK293T

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碱性成纤维生长因子单克隆抗体联合伊立替康抑制小细胞肺癌H223细胞的增殖

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南方医科大学学报 2017年第11期37卷 1535-1539页

作者：廖湘晖徐萌向军俭暨南大学附属第一医院肿瘤科广东广州510632 暨南大学生命科学技术学院抗体工程中心广东广州510632

目的探讨碱性成纤维生长因子(bFGF)单克隆抗体与伊立替康联合应用体外对抑制小细胞肺癌细胞株增殖和凋亡的作用及可能机制。方法 CCK8检测bFGF单克隆抗体联合伊立替康对小细胞肺癌株H223增殖的抑制作用。Annegin V-FITC/PI染色流式细胞... 详细信息

目的探讨碱性成纤维生长因子(bFGF)单克隆抗体与伊立替康联合应用体外对抑制小细胞肺癌细胞株增殖和凋亡的作用及可能机制。方法 CCK8检测bFGF单克隆抗体联合伊立替康对小细胞肺癌株H223增殖的抑制作用。Annegin V-FITC/PI染色流式细胞仪检测新型bFGF单克隆抗体联合伊立替康对小细胞肺癌株H223凋亡的影响。Western blotting分析bFGFm Ab联合CPT-11对AKT和ERK1/2磷酸化水平的影响。结果 bFGF单克隆抗体、伊立替康剂量依赖性抑制小细胞肺癌株H223的增殖,bFGF单克隆抗体组、伊立替康组及bFGF单克隆抗体联合伊立替康组对小细胞肺癌株H223的增殖抑制率分别为18.73%、21.96%、54.30%,联合用药组抑制率明显高于单药组(P<0.05)。bFGF单克隆抗体、伊立替康剂量依赖性诱导小细胞肺癌株H223的凋亡,bFGF单克隆抗体组、伊立替康组及bFGF单克隆抗体联合伊立替康组诱导小细胞肺癌株H223的早期凋亡率分别为2.7%、4.3%、6.5%,联合用药组凋亡率明显高于单药组(P<0.05)。bFGF单克隆抗体组、CPT-11组及bFGF单克隆抗体联合CPT-11组可明显抑制p-AKT蛋白和p-ERK1/2蛋白的水平,差异有显著性,而对AKT、ERK1/2蛋白则影响不大。bFGF抗体联合CPT-11一方面通过抑制p-AKT蛋白和p-ERK1/2蛋白的水平来抑制肿瘤细胞的增殖和转移。结论 bFGF单克隆抗体联合伊立替康对小细胞肺癌株H223具有协同抑制作用,其机制与抑制细胞增殖和促进细胞凋亡有关。信号通路分析结果表明bFGF单克隆抗体联合伊立替康能有效阻断与bFGF相关的MAPK/ERK和PI3K/AKT信号通路。

关键词：碱性成纤维生长因子 bfgf单克隆抗体伊立替康小细胞肺癌增殖凋亡 MAPK/ERK1/2 PI3K/AKT

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血管内皮细胞生长因子表位肽体外抗肿瘤作用研究

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中国免疫学杂志 2010年第5期26卷 407-412页

作者：赵鑫王宏向军俭朱中松宋其芳邓宁暨南大学生命科学技术学院抗体工程研究中心广州510632

目的:研究筛选血管内皮细胞生长因子(VEGF)不同表位肽抗肿瘤及抗血管新生效用。方法:构建4种不同的pCANTAB5-E/VEGF表位肽载体,将VEGF表位肽通过噬菌体展示技术展示于噬菌体表面,MTT法检测VEGF噬菌体表位肽对黑色素瘤细胞(B16)、人脐静... 详细信息

目的:研究筛选血管内皮细胞生长因子(VEGF)不同表位肽抗肿瘤及抗血管新生效用。方法:构建4种不同的pCANTAB5-E/VEGF表位肽载体,将VEGF表位肽通过噬菌体展示技术展示于噬菌体表面,MTT法检测VEGF噬菌体表位肽对黑色素瘤细胞(B16)、人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)增殖的影响,Transwell小室检测其对B16F10细胞迁移的影响,ECMgel检测其对HUVEC成管的影响。结果:筛选出VEGF的4种(VSB、VNB、VEB、VTB)表位肽中,VNB对HUVEC细胞增殖的抑制率达到64.8%,VEB、VTB对B16的增殖抑制率分别为75.7%和66.5%。4株表位肽对高转移细胞B16F10迁移抑制率均超过80%。结论:筛选得到的4株VEGF表位肽对黑色素瘤细胞、血管内皮细胞的增殖、迁移和成管有抑制作用,通过分析其表位区段后可制备成小分子多肽,为今后抗肿瘤多肽药物和疫苗的研发奠定基础。

关键词： VEGF 表位肽抗肿瘤抗血管新生

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bFGF单抗协同替吉奥抑制肺癌Lewis细胞的增殖及移植瘤血管新生

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中国肿瘤生物治疗杂志 2011年第3期18卷 280-284页

作者：张国军徐萌赵建夫王宏向军俭邓宁曾世彬王盼盼暨南大学附属第一医院肿瘤科广东广州510632 暨南大学生命科学技术学院抗体工程中心广东广州510632

目的:探讨碱性成纤维生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)单抗与替吉奥(gimeracil and oteracil porassi-um,又称S-1)联合应用体内外抑制小鼠Lewis肺癌细胞增殖、移植瘤生长及转移、肿瘤血管新生的协同作用。方法:CCK-8法检... 详细信息

目的:探讨碱性成纤维生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)单抗与替吉奥(gimeracil and oteracil porassi-um,又称S-1)联合应用体内外抑制小鼠Lewis肺癌细胞增殖、移植瘤生长及转移、肿瘤血管新生的协同作用。方法:CCK-8法检测bFGF单抗及S-1对Lewis细胞增殖的抑制作用。建立C57BL/6小鼠Lewis肺癌自发转移瘤模型,32只小鼠随机分成生理盐水(NS)组、bFGF单抗组、S-1组和bFGF单抗+S-1组,每组8只;测量瘤体,绘制生长曲线,称瘤质量并计算抑瘤率;计数各组肺表面转移瘤结节;CD31标记血管内皮细胞,计数转移瘤微血管密度(microvessel density,MVD)。结果:bFGF单抗、S-1剂量依赖性抑制Lewis细胞增殖(P<0.05),联合用药组抑制率明显高于单药组(P<0.05或P<0.01)。bFGF单抗组、S-1组以及bFGF单抗+S-1组对Lewis转移瘤的抑瘤率分别为37.8%、47.7%、65.9%,联合组抑瘤率明显高于单药组(P<0.05或P<0.01)。联合组肺表面转移结节、微血管密度明显低于单药组(2.71±0.76vs6.57±0.98、4.71±0.76;21.6±2.9vs33.4±4.9、41.9±6.3;P<0.05或P<0.01)。结论:bFGF单抗联合S-1对Lewis肺癌移植瘤具有协同抑制作用,其机制与抑制细胞增殖及血管新生有关。

关键词：碱性成纤维生长因子单克隆抗体替吉奥(S-1) Lewis肺癌细胞微血管密度增殖

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固相萃取-气相色谱-质谱法同时测定黑臭水中15种邻苯二甲酸酯化合物

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分析化学 2019年第11期47卷 1842-1849页

作者：李新洪向垒黄裕宏莫测辉李彦文李慧蔡全英广东省环境污染控制与修复材料工程中心暨南大学生命科学技术学院

建立了固相萃取-气相色谱-质谱（GC-MS）法同时测定黑臭水中15种典型PAEs化合物的高效分析方法。采用HP-5MS色谱柱分离,以电子轰击（EI）-选择离子模式（SIM）和基质标准曲线进行定量测定。最佳萃取条件为:取水样100 mL,调节pH值为3,过W... 详细信息

建立了固相萃取-气相色谱-质谱（GC-MS）法同时测定黑臭水中15种典型PAEs化合物的高效分析方法。采用HP-5MS色谱柱分离,以电子轰击（EI）-选择离子模式（SIM）和基质标准曲线进行定量测定。最佳萃取条件为:取水样100 mL,调节pH值为3,过WondaSep C18萃取柱进行固相萃取,以6 mL甲醇-二氯甲烷（1∶4,V/V）进行洗脱。在此条件下,15种PAEs的线性范围为0.05～2.0 mg/L（R2>0.991）,检出限为0.04～0.38μg/L;在不同浓度基质加标（2和10μg/L）条件下,各PAEs回收率在70%～115%之间,标准偏差为10%。以此方法测定实际黑臭水样中PAEs,总浓度为2.57～13.69μg/L,加标（2μg/L）回收率为62%～115%。

关键词：固相萃取气相色谱-质谱邻苯二甲酸酯黑臭水样基质效应

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二硫键稳定的人源性抗bFGF双链抗体的酵母表达及鉴定

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免疫学杂志 2014年第6期30卷 550-559页

作者：张晋霞姜浩武亢中奎潘磊王金胜刘羿辰邓宁暨南大学生命科学技术学院暨南大学抗体工程研究中心广东省分子免疫与抗体工程重点实验室广州510632

目的为提高小分子抗体表达量,利用酵母表达系统表达二硫键稳定的人源性抗bFGF双链抗体(ds-Diabody)并研究其生物学活性。方法将ds-Diabody基因构建到酵母表达载体中获得重组质粒pPICZαA-ds-Diabody,经BglⅡ线性化电转至毕赤酵母GS115中... 详细信息

目的为提高小分子抗体表达量,利用酵母表达系统表达二硫键稳定的人源性抗bFGF双链抗体(ds-Diabody)并研究其生物学活性。方法将ds-Diabody基因构建到酵母表达载体中获得重组质粒pPICZαA-ds-Diabody,经BglⅡ线性化电转至毕赤酵母GS115中,甲醇诱导表达。表达产物经SDS-PAGE及Western blot鉴定,并进行镍离子亲和层析和阴离子交换层析纯化。间接ELISA检测其抗原结合活性,CCK8法和划痕实验检验其肿瘤抑制作用。结果成功构建人源性抗bFGF ds-Diabody酵母表达载体,并获得4株高表达酵母工程菌,经1%甲醇诱导96 h表达量即可恒定,表达量可达158 mg/L。SDS-PAGE及Western blot结果显示,目的蛋白大小约Mr35 000左右。通过两步纯化方案,目的蛋白的纯度可达95%以上。ELISA结果显示纯化的ds-Diabody可与bFGF特异性结合。CCK8结果显示,纯化的ds-Diabody可剂量依赖性地抑制人肺癌细胞株A549的增殖,最大抑制率为43.4%。划痕实验表明ds-Diabody可以抑制肿瘤细胞的迁移。结论研究结果表明人源性抗bFGF ds-Diabody在毕赤酵母中可获得高效表达,且具有很好的生物学活性。

关键词： bFGF ds—Diabody 毕赤酵母肺癌细胞

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固相萃取净化/GC-MS法测定水/土样品中α-松油醇含量

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农业环境科学学报 2024年第9期43卷 2183-2190页

作者：吴凤区嘉铖李彦文赵海明蔡全英向垒莫测辉暨南大学生命科学技术学院广东省环境污染控制与修复材料工程中心广州510632

采用固相萃取净化结合GC-MS法分别建立了测定水/土样品中典型有机浮选药剂(α-松油醇)的方法。采用DB-5 MS进行色谱分离,电子轰击(EI)-选择离子检测(SIM)和基质标线进行定量分析。水/土样品均采用二氯甲烷进行萃取,水样萃取时,先将其pH... 详细信息

采用固相萃取净化结合GC-MS法分别建立了测定水/土样品中典型有机浮选药剂(α-松油醇)的方法。采用DB-5 MS进行色谱分离,电子轰击(EI)-选择离子检测(SIM)和基质标线进行定量分析。水/土样品均采用二氯甲烷进行萃取,水样萃取时,先将其pH值和盐度调整为7.5和0.5%,之后采用二氯甲烷进行3次萃取;土壤萃取时采用二氯甲烷进行2次振荡萃取,萃取液旋转蒸发近干后用1 mL甲醇定容为萃取质。水、土样品萃取质均采用C18小柱进行固相萃取净化。在上述最优萃取条件下,目标化合物在0.1~5 mg·L^(-1)浓度范围内线性关系良好(R^(2)≥0.998);其在水/土样品中的检出限(LOD)分别为0.027~0.041 mg·L^(-1)(水样)和0.009~0.054 mg·kg^(-1)(土样),在实际样品中不同浓度(1、2、5 mg·L^(-1)或1、2、5 mg·kg^(-1))加标回收率分别为91.5%~112%[相对标准偏差(RSD)<15%,水样]和67%~114%(RSD<15%,土样)。

关键词：有机选冶药剂选矿废水土壤松油醇 GC-MS

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