检索结果-内蒙古大学图书馆

暨南大学学报（自然科学与医学版） 2010年第6期31卷 539-543页

作者：王宝玉邢飞跃刘娜李卓唐征乐暨南大学生命科学技术学院组织移植与免疫实验中心广东广州510632

目的:通过靶向p38α的siRNA干扰人血管内皮细胞的p38α信号通路,探索其对血管内皮型一氧化氮合酶(eNOS)基因启动子转录活性的调节作用。方法:利用W estern印迹检测siRNA-p38α干扰HUVEC-12细胞后p38α蛋白的表达,确定siRNA-p38α的最佳... 详细信息

目的:通过靶向p38α的siRNA干扰人血管内皮细胞的p38α信号通路,探索其对血管内皮型一氧化氮合酶(eNOS)基因启动子转录活性的调节作用。方法:利用W estern印迹检测siRNA-p38α干扰HUVEC-12细胞后p38α蛋白的表达,确定siRNA-p38α的最佳作用时间和浓度,然后通过双荧光素酶报告基因技术检测转染siRNA-p38α后细胞裂解液的荧光强度,分析eNOS基因启动子的转录活性变化。结果:与对照组比较,siRNA-p38α干扰后p38α蛋白表达明显减弱,而相应的eNOS启动子转录活性上调,以100 nmol/L的siRNA-p38α作用48 h的效果最佳。结论:siRNA干扰p38α信号可上调人血管内皮细胞eNOS基因的转录活性。

关键词：一氧化氮合酶 p38α丝裂原活化蛋白激酶小分子干扰RNΑ 内皮细胞

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中药喘可治注射液对小鼠腹腔巨噬细胞的影响

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暨南大学学报（自然科学与医学版） 2010年第6期31卷 572-576页

作者：孙成宏张亚兴宋兵曾耀英暨南大学生命科学技术学院组织移植与免疫实验中心广东广州510632

目的:研究中药喘可治注射液(CKZ)对小鼠腹腔巨噬细胞凋亡、一氧化氮(NO)释放和细胞因子分泌的影响,并探讨其作用机制。方法:无菌分离小鼠腹腔巨噬细胞,制备单细胞悬液,加入CKZ(终体积分数20μL/mL)孵育4 h后,加入过氧化氢(H2O2)、放线菌... 详细信息

目的:研究中药喘可治注射液(CKZ)对小鼠腹腔巨噬细胞凋亡、一氧化氮(NO)释放和细胞因子分泌的影响,并探讨其作用机制。方法:无菌分离小鼠腹腔巨噬细胞,制备单细胞悬液,加入CKZ(终体积分数20μL/mL)孵育4 h后,加入过氧化氢(H2O2)、放线菌酮(CHX)、环磷酰胺(CTX)诱导细胞凋亡,荧光酶标仪结合SytoxGreen染色检测细胞凋亡;加药孵育4 h后,加入细菌脂多糖(LPS,终质量浓度10μg/mL)和IFN-γ(终质量浓度80ng/mL),24h后Grass试剂盒检测巨噬细胞NO的量;加药孵育4 h后,加入LPS(终质量浓度10μg/mL)和IFN-γ(终质量浓度80 ng/mL),24h后流式细胞仪结合Cytometric Bead Array(CBA)技术检测细胞因子的释放。结果:CKZ能抑制H2O2、CHX、CTX诱导的细胞凋亡;促进非刺激状态下巨噬细胞NO和IL-6、IL-10、MCP-1、IFN-γ、TNF-α5种细胞因子的产生,抑制LPS和IFN-γ刺激的NO和IL-6、IL-10、MCP-1、IFN-γ、TNF-α5种细胞因子的产生。结论:CKZ可抑制巨噬细胞凋亡,并对巨噬细胞NO的分泌和IL-6、IL-10、MCP-1、IFN-γ、TNF-α5种细胞因子的生成具有双向调节作用。

关键词：巨噬细胞喘可治细胞凋亡一氧化氮细胞因子

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瘦素基因佐剂对小鼠抗原提呈细胞表型的影响

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暨南大学学报（自然科学与医学版） 2010年第2期31卷 125-129页

作者：郭贺高琦徐丽慧欧阳东云刘春永何贤辉暨南大学生命科学技术学院组织移植与免疫实验中心广东广州510632 暨南大学生命科学技术学院生物工程研究所广东广州510632

目的:研究瘦素(Leptin)基因佐剂在体内对抗原提呈细胞的影响。方法:根据小鼠瘦素基因设计引物,采用RT-PCR方法获得瘦素cDNA,与pVAX1连接构建瘦素真核表达载体作为基因佐剂,制备无内毒素重组质粒,转染B16细胞鉴定瘦素的表达,并采用肌注... 详细信息

目的:研究瘦素(Leptin)基因佐剂在体内对抗原提呈细胞的影响。方法:根据小鼠瘦素基因设计引物,采用RT-PCR方法获得瘦素cDNA,与pVAX1连接构建瘦素真核表达载体作为基因佐剂,制备无内毒素重组质粒,转染B16细胞鉴定瘦素的表达,并采用肌注方式分析瘦素基因佐剂在体内对小鼠抗原提呈细胞表型的影响。结果:克隆得到的瘦素编码区全长序列,经DNA测序后证明与已报道序列相同,成功构建小鼠瘦素的真核表达载体,可在B16细胞表达;瘦素基因佐剂在体内对CD3-CD19-CD11c+细胞的MHC II和CD83的表达无明显影响,但能显著上调CD3-CD19-CD11c-免疫细胞表面MHC II类分子的表达。结论:成功构建小鼠瘦素基因佐剂,体内试验可促进免疫细胞上调MHC II类分子,提示瘦素基因佐剂有可能通过增强免疫细胞尤其是抗原提呈细胞的活化而促进免疫应答。

关键词：瘦素基因佐剂真核表达抗原提呈细胞

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负载野生型p53抗原肽HLA-A^＊2402四聚体的制备和鉴定

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暨南大学学报（自然科学与医学版） 2010年第2期31卷 136-139页

作者：王笑迎查庆兵何贤辉欧阳东云徐丽慧郭贺高琦暨南大学生命科学技术学院组织移植与免疫实验中心广东广州510632 暨南大学附属第一医院产前诊断中心广东广州510632 暨南大学生命科学技术学院生物工程研究所广东广州510632

目的:制备负载野生型p53抗原肽的HLA-A*2402四聚体,用于检测卵巢肿瘤患者p53特异性细胞毒T淋巴细胞(CTL)。方法:在p53125-134抗原肽TYS和轻链β2微球蛋白存在时,利用稀释法复性获得负载p53125-134抗原肽(TYSPALNKMF,TYS)的可溶性单体,... 详细信息

目的:制备负载野生型p53抗原肽的HLA-A*2402四聚体,用于检测卵巢肿瘤患者p53特异性细胞毒T淋巴细胞(CTL)。方法:在p53125-134抗原肽TYS和轻链β2微球蛋白存在时,利用稀释法复性获得负载p53125-134抗原肽(TYSPALNKMF,TYS)的可溶性单体,经生物素酰化并纯化后与荧光素标记的链亲和素按4∶1的比例混合形成HLA-A*2402/TYS四聚体,以流式细胞仪检测特异性CTL的频率。结果:流式细胞术分析显示,卵巢癌患者外周血中可检测减低频率的p53125-134TYS抗原肽特异性CTL。结论:成功制备HLA-A*2402/TYS四聚体。

关键词： HLA-A*2402 四聚体 p53抗原细胞毒T淋巴细胞

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人白细胞介素7重组蛋白原核表达载体在大肠杆菌中的表达和鉴定

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暨南大学学报（自然科学与医学版） 2010年第4期31卷 331-335页

作者：耿梅陈清徐丽慧张延亭何贤辉暨南大学生命科学技术学院组织移植与免疫实验中心广东广州510632 暨南大学再生医学教育部重点实验室广东广州510632 暨南大学生命科学技术学院生物工程研究所广东广州510632

目的:构建重组人白细胞介素7(rhIL-7)的原核表达载体,在大肠杆菌中表达并鉴定。方法:以RT-PCR方法扩增编码IL-7的cDNA片段,插入至pET-3d载体中,构建rhIL-7的原核表达载体,阳性克隆经测序鉴定,转化至大肠杆菌BL21(DE3),优化rhIL-7表达条... 详细信息

目的:构建重组人白细胞介素7(rhIL-7)的原核表达载体,在大肠杆菌中表达并鉴定。方法:以RT-PCR方法扩增编码IL-7的cDNA片段,插入至pET-3d载体中,构建rhIL-7的原核表达载体,阳性克隆经测序鉴定,转化至大肠杆菌BL21(DE3),优化rhIL-7表达条件,利用免疫印迹鉴定重组蛋白。结果:重组载体经DNA测序显示包含正确的rhIL-7编码序列,重组载体转入大肠杆菌后,经IPTG诱导后外源蛋白表达,相对分子质量为17 400,与IL-7理论分子质量一致;免疫印迹显示,外源蛋白可以被人IL-7特异性抗体识别,表明在原核表达的外源蛋白是rhIL-7。rhIL-7主要表达于包涵体中,包涵体表达优化条件为:温度为37℃、IPTG浓度为0.4 mmol/L、诱导时间为4h。结论:成功的构建了rhIL-7的原核表达载体。

关键词：白细胞介素7 原核表达载体包涵体表达免疫印迹

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中华实用诊断与治疗杂志 2010年第5期24卷 426-428,432页

作者：刘毅徐丽慧何贤辉孙建方中国医学科学院北京协和医学院皮肤病研究所南京市210042 暨南大学生命科学技术学院生物工程研究所广州市510632 暨南大学生命科学技术学院组织移植与免疫实验中心广州市510632

目的:构建负载人恶性黑素瘤相关抗原gp100抗原肽的HLA-A*2402四聚体并进行鉴定,为分析gp100抗原肽诱发的特异性细胞免疫应答创造条件。方法:以羧基端融合生物素化酶BirA底物肽的HLA-A*2402重链胞外域融合蛋白、人β2-微球蛋白、gp100 VY... 详细信息

目的:构建负载人恶性黑素瘤相关抗原gp100抗原肽的HLA-A*2402四聚体并进行鉴定,为分析gp100抗原肽诱发的特异性细胞免疫应答创造条件。方法:以羧基端融合生物素化酶BirA底物肽的HLA-A*2402重链胞外域融合蛋白、人β2-微球蛋白、gp100 VYFFLPDHL抗原肽、PE-链亲和素为材料,制备HLA-A*2402/VYF四聚体;非还原SDS-PAGE鉴定四聚体四聚化程度;三色免疫荧光标记流式细胞术分析HLA-A*2402+健康志愿者外周血gp100特异性CD8+T细胞的频率。结果:HLA-A*2402/VYF四聚体形成率为83%,所制备的四聚体具有与HLA-A*2402+供者抗原特异性CD8+T细胞的结合活性,特异性CD8+T细胞的频率为外周血总CD8+T细胞的0.02%～0.06%。结论:成功制备HLA-A*2402/VYF四聚体并用于检测gp100特异性CD8+T细胞,为研究HLA-A*2402+黑素瘤患者免疫治疗的机制及疗效监测创造了条件。

关键词：恶性黑素细胞瘤 MHC四聚体 HLA-A^＊2402 gp100

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银屑病患者外周血T细胞CD69和CD134表达的研究

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中国实用医刊 2010年第11期37卷 8-11页

作者：刘毅蔡小嫦曾耀英北京协和医学院皮肤病研究所中国医学科学院 210042 暨南大学附属第一医院皮肤科暨南大学生命科学技术学院组织移植与免疫实验中心

目的了解银屑病患者外周血T细胞CD69和CD134的表达情况及多克隆刺激剂对其表达的影响.方法取银屑病患者与健康志愿者外周血全血培养,佛波醇脂(PMA)联合Ionomycin刺激使T细胞体外活化;在刺激第0、6、12、24 h,用三色免疫荧光标记流式... 详细信息

目的了解银屑病患者外周血T细胞CD69和CD134的表达情况及多克隆刺激剂对其表达的影响.方法取银屑病患者与健康志愿者外周血全血培养,佛波醇脂(PMA)联合Ionomycin刺激使T细胞体外活化;在刺激第0、6、12、24 h,用三色免疫荧光标记流式细胞术检测T细胞CD69、CD134的表达.结果银屑病患者组和健康对照组各11例纳入研究,结果显示:①银屑病患者组新鲜血标本T细胞CD134、CD69表达率均明显高于健康对照组(P<0.01); ②PMA联合Ionomycin刺激第6、12、24 h,银屑病患者组与健康对照组外周血T细胞CD69表达率仅在第24 h差异具有统计学意义(P<0.05); ③在刺激第6、12、24 h,银屑病患者组外周血T细胞CD134表达率均较健康对照组显著升高(P<0.001).结论银屑病患者外周血T细胞存在异常活化.在体外活化的外周血T细胞上,银屑病患者组CD134的表达显著高于健康对照组.

关键词：银屑病患者外周血流式细胞术检测 CD69 表达率 T lymphocytes peripheral blood T cells controls 对照组健康志愿者 results 刺激体外活化 PMA 免疫荧光标记 plus whole blood significant 统计学意义

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山奈酚对小鼠T淋巴细胞体外活化、增殖和细胞周期的影响

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细胞与分子免疫学杂志 2009年第12期25卷 1106-1108,1111页

作者：慕静静曾耀英黄秀艳赵晓慧宋兵暨南大学生命科学技术学院组织移植与免疫中心广东广州510632

目的:研究山奈酚(KA)对小鼠T细胞体外活化、增殖和细胞周期的影响,并对其免疫调节作用进行初步探讨。方法:分离小鼠淋巴结细胞,加入多克隆刺激剂刀豆蛋白A(ConA)进行刺激,以不同终浓度的KA与T细胞共培养。流式细胞术结合双色荧光抗体染... 详细信息

目的:研究山奈酚(KA)对小鼠T细胞体外活化、增殖和细胞周期的影响,并对其免疫调节作用进行初步探讨。方法:分离小鼠淋巴结细胞,加入多克隆刺激剂刀豆蛋白A(ConA)进行刺激,以不同终浓度的KA与T细胞共培养。流式细胞术结合双色荧光抗体染色,检测T细胞早期活化抗原CD69的表达;MTT法检测KA对T细胞增殖的影响;用碘化丙锭(PI)染色分析T细胞的细胞周期。结果:终浓度为10、20和40μmol/L的KA可以显著抑制ConA刺激的T细胞CD69的表达,由ConA组的(39.11±1.17)%,分别降低为(30.64±0.23)%、(27.95±0.04)%和(5.63±0.37)%(P<0.05);MTT法结果显示,KA对ConA诱导的小鼠T淋巴细胞增殖,具有明显的抑制作用(P<0.05),且呈剂量依赖性;PI染色结果显示,随着KA浓度的增加,均能明显阻止淋巴细胞进入S期和G2/M期。结论:KA可显著抑制ConA刺激下的小鼠T淋巴细胞体外活化和增殖;它能抑制T淋巴细胞进入细胞分裂期。

关键词：山奈酚 T淋巴细胞活化增殖细胞周期流式细胞术

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棉酚对小鼠淋巴细胞体外增殖和凋亡作用的影响

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现代免疫学 2009年第2期29卷 111-116页

作者：许文彬卢宏松徐丽慧施焕敬刘春永何贤辉暨南大学生命科学技术学院组织移植与免疫实验中心广州510632

研究棉酚(gossypol)对小鼠淋巴细胞体外增殖和凋亡作用的影响及作用机制。分离小鼠淋巴结细胞,以CFSE染色,加入佛波醇酯(PDB)和离子霉素(Ion)进行刺激,以流式细胞仪分析棉酚对淋巴细胞增殖率的影响;以MTS检测淋巴细胞的增殖情况;以Annex... 详细信息

研究棉酚(gossypol)对小鼠淋巴细胞体外增殖和凋亡作用的影响及作用机制。分离小鼠淋巴结细胞,以CFSE染色,加入佛波醇酯(PDB)和离子霉素(Ion)进行刺激,以流式细胞仪分析棉酚对淋巴细胞增殖率的影响;以MTS检测淋巴细胞的增殖情况;以Annexin V-PE染色分析细胞凋亡;用Hoechst33342染色观察细胞核形态。CFSE染色分析显示,棉酚对PDB+Ion诱导的小鼠淋巴细胞增殖,具有明显的抑制作用(P<0.01),且呈剂量依赖性。以MTS分析细胞增殖情况,也获得相似的结果。终浓度为4、8和16μmol/L的棉酚处理8 h后的细胞凋亡率分别为4.39%、6.57%和12.14%,PDB+Ion对照组凋亡率为2.13%。凋亡率随着棉酚作用时间的增加而上升,存在时间和剂量依赖关系。高浓度棉酚作用后大量细胞核呈现染色质固缩、核碎裂和致密浓染等凋亡特征。研究表明,棉酚能有效抑制小鼠淋巴细胞体外增殖和诱导其发生凋亡,并呈现出时间和剂量依赖关系。

关键词：棉酚淋巴细胞增殖凋亡流式细胞术

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重组hFGF-7腺病毒对角质形成细胞的生物学效应

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暨南大学学报（自然科学与医学版） 2009年第6期30卷 636-639页

作者：吴晓萍曾耀英暨南大学生命科学技术学院组织移植与免疫实验中心广东广州510632

目的:研究重组腺病毒导入人成纤维细胞生长因子7(hFGF-7)对人皮肤角质形成细胞(HaCat)的生物学效应。方法:通过倍比稀释和感染实验,测定重组腺病毒rAd-hFGF-7的滴度;流式细胞术检测重组腺病毒感染HaCat细胞的感染效率;MTT法检测rAd-hFG... 详细信息

目的:研究重组腺病毒导入人成纤维细胞生长因子7(hFGF-7)对人皮肤角质形成细胞(HaCat)的生物学效应。方法:通过倍比稀释和感染实验,测定重组腺病毒rAd-hFGF-7的滴度;流式细胞术检测重组腺病毒感染HaCat细胞的感染效率;MTT法检测rAd-hFGF-7对HaCat细胞增殖的影响;重组腺病毒对HaCat细胞周期的影响通过流式细胞术进行检测。结果:高滴度重组腺病毒可高效感染HaCat细胞,其促细胞增殖作用随着重组腺病毒MO I值的增加而增强,当MO I值为50时,感染细胞进入S期和G2期的细胞比率显著增加。结论:重组腺病毒rAd-hFGF-7可促进HaCat细胞的增殖,改变HaCat细胞周期。

关键词：成纤维细胞生长因子7 腺病毒细胞增殖细胞周期

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