检索结果-内蒙古大学图书馆

免疫学杂志 2006年第4期22卷 362-365页

作者：徐丽慧洪岸何贤辉暨南大学生命科学技术学院组织移植与免疫实验中心暨南大学生命科学技术学院生物工程研究所广州510632

目的构建人EGF受体(EGFR)胞外域的原核表达载体并在大肠杆菌中表达,制备EGFR特异性抗体,对表达产物进行鉴定。方法以PCR方法从克隆的EGFR胞外区cDNA中扩增编码胞外结构域L1、S1、L2(EGFRLSL)的DNA片段,并在其3′端加入编码His6标签的序... 详细信息

目的构建人EGF受体(EGFR)胞外域的原核表达载体并在大肠杆菌中表达,制备EGFR特异性抗体,对表达产物进行鉴定。方法以PCR方法从克隆的EGFR胞外区cDNA中扩增编码胞外结构域L1、S1、L2(EGFRLSL)的DNA片段,并在其3′端加入编码His6标签的序列,与pET3c连接构建EGFRLSL原核表达载体,在大肠杆菌中进行表达;同时以纯化的EGFRL2结构域蛋白(EGFRL2)制备抗血清,以此抗血清鉴定表达产物。结果EGFRLSL在大肠杆菌BL21(DE3)中获得高效表达,抗His6抗体免疫印迹分析表明,表达产物全部以包涵体形式存在,通过Ni2+NTA柱上复性获得纯化的可溶性EGFRLSL蛋白;免疫印迹分析表明,EGFRLSL与小鼠抗EGFRL2抗血清具有高特异性反应。结论从大肠杆菌中获得具有特异抗原性的可溶性EGFRLSL蛋白。

关键词：表皮生长因子受体胞外域原核表达包涵体抗原性

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喜树碱诱导的HL-60细胞凋亡过程中线粒体的变化

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细胞与分子免疫学杂志 2006年第2期22卷 144-147页

作者：贺芳曾耀英王通邢飞跃林羿梁佩燕肇静娴暨南大学生命科学技术学院组织移植与免疫中心教育部重点实验室广东广州510632

目的:研究喜树碱(CPT)诱导的人早幼粒细胞性白血病细胞HL-60凋亡过程中线粒体的质量和膜电势的变化。方法:以CPT诱导HL-60细胞凋亡为模型,利用膜联蛋白V(annexinV)-FITC/PI双染流式细胞术,研究HL-60细胞的凋亡和坏死。用DiOC6(3)染色流... 详细信息

目的:研究喜树碱(CPT)诱导的人早幼粒细胞性白血病细胞HL-60凋亡过程中线粒体的质量和膜电势的变化。方法:以CPT诱导HL-60细胞凋亡为模型,利用膜联蛋白V(annexinV)-FITC/PI双染流式细胞术,研究HL-60细胞的凋亡和坏死。用DiOC6(3)染色流式细胞术,检测线粒体的膜电势(△ψm)。用NAO染色流式细胞术,检测线粒体的质量。结果:在4×10-6mol/LCPT的诱导下,HL-60细胞(12h)早期的凋亡率为(12.75±4.61)%,对照组为(2.88±2.49)%,二者相比较差异显著(P<0.01);CPT组坏死比率为(3.48±1.67)%,对照组为(0.71±1.10)%(P<0.01)。PI染色的结果显示,HL-60细胞(12h)晚期凋亡细胞的百分率,CPT组为(3.52±1.07)%,对照组为(0.46±1.06)%(P<0.01)。同时观察到,G2/M期细胞出现阻滞,G2/M期细胞的百分率,对照组为(22.46±2.19)%,CPT组为(13.45±1.91)%(P<0.01)。在12h时间点,CPT组线粒体的质量显著低于对照组(P<0.01),低线粒体质量的细胞所占百分率,对照组为(4.53±1.26)%,CPT组为(25.74±2.09)%。同时,CPT组线粒体的膜电势显著下降(P<0.01),CPT组线粒体膜电势降低的比率为(17.71±5.23)%,对照组为(1.64±2.00)%。结论:CPT诱导HL-60细胞凋亡过程中,线粒体的质量和膜电势均有所下降,但其去极化作用增强。

关键词：喜树碱人HL-60细胞凋亡线粒体

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人类巨细胞病毒特异性CD8^+T细胞IFN-γ和穿孔素水平的检测

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免疫学杂志 2006年第4期22卷 440-443页

作者：查庆兵徐丽慧迟晓云何贤辉肇静娴暨南大学生命科学技术学院组织移植与免疫研究中心暨南大学生命科学技术学院生物工程研究所广州510632

目的研究人巨细胞病毒(hCMV)结构蛋白pp65衍生抗原肽(pp65495503,NLV)特异性CD8+T细胞的功能特性。方法将HLAA2NLV四聚体染色与细胞内细胞因子或穿孔素染色相结合,以流式细胞仪直接分析NLV特异性CD8+T细胞内穿孔素的表达水平,或者在NLV... 详细信息

目的研究人巨细胞病毒(hCMV)结构蛋白pp65衍生抗原肽(pp65495503,NLV)特异性CD8+T细胞的功能特性。方法将HLAA2NLV四聚体染色与细胞内细胞因子或穿孔素染色相结合,以流式细胞仪直接分析NLV特异性CD8+T细胞内穿孔素的表达水平,或者在NLV抗原肽刺激6h后分析γ干扰素(IFNγ)的表达水平。结果NLV抗原肽能诱导hCMV特异性CD8+T细胞分泌IFNγ,不同供者特异性CD8+T细胞产生IFNγ的比率存在较大差异(55.69±17.64)%,当NLV抗原肽质量浓度为10μgmL时IFNγ阳性细胞百分率最高;未经刺激的特异性CD8+T细胞内表达较高水平的穿孔素(53.90±16.41)%。结论识别单一表位的hCMV特异性CD8+T细胞合成IFNγ和穿孔素的能力存在多样性。

关键词：巨细胞病毒 CD8^+T细胞四聚体细胞内细胞因子染色流式细胞术

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高频等位基因HLA-A* 1101重链胞外域-BSP融合蛋白原核表达载体的构建及表达鉴定

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暨南大学学报（自然科学与医学版） 2006年第4期27卷 509-514页

作者：李丰耀徐丽慧迟晓云查庆兵贾仟涛何贤辉暨南大学生命科学技术学院组织移植与免疫实验中心广东广州510632 暨南大学生命科学技术学院生物工程研究所广东广州510632

目的:构建HLA-A*1101重链胞外域羧基端融合生物素化酶B irA底物肽(BSP)的融合蛋白(HLA-A11-BSP)原核表达载体,并在大肠杆菌中表达该融合蛋白。方法:以RT-PCR法扩增并克隆HLA-A*1101重链基因的cDNA,以PCR方法构建HLA-A11-BSP的表达载体,... 详细信息

目的:构建HLA-A*1101重链胞外域羧基端融合生物素化酶B irA底物肽(BSP)的融合蛋白(HLA-A11-BSP)原核表达载体,并在大肠杆菌中表达该融合蛋白。方法:以RT-PCR法扩增并克隆HLA-A*1101重链基因的cDNA,以PCR方法构建HLA-A11-BSP的表达载体,在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,并以免疫印迹法进行鉴定。结果:从HLA-A2阴性的供者外周血单个核细胞中克隆到HLA-A*1101重链基因的cDNA,以此cDNA为模板,将编码HLA-A*1101重链胞外域1~276序列与编码BSP的序列融合,构建HLA-A11-BSP融合蛋白表达载体,重组质粒经测序验证。融合蛋白在BL21(DE3)中诱导后获得高效表达,约占菌体总蛋白的20%;其相对分子质量约为35 000,与理论值一致。免疫印迹分析显示表达产物主要存在于包涵体中,上清液中几乎无任何产物存在。结论:成功构建表达HLA-A11-BSP融合蛋白的原核表达载体,该融合蛋白在大肠杆菌中以包涵体形式获得高水平表达。

关键词：免疫学高频等位基因HLA-A*1101 生物素化酶底物肽融合蛋白原核表达包涵体

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MAPK信号通路在诱导Th1/Th2分化中的作用

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现代免疫学 2006年第6期26卷 516-519页

作者：于哲刑飞跃曾耀英广州暨南大学生命科学技术学院组织移植与免疫中心广州510632

丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路是介导细胞外刺激到细胞内反应的重要信号转号系统,在诱导Th1/Th2分化中起重要作用,其中JNK1能够抑制初始CD4+T细胞向Th2分化,JNK2诱导其向Th1分化并能促进相应细胞因子的分泌;p38既能诱导Th1分化,也... 详细信息

丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路是介导细胞外刺激到细胞内反应的重要信号转号系统,在诱导Th1/Th2分化中起重要作用,其中JNK1能够抑制初始CD4+T细胞向Th2分化,JNK2诱导其向Th1分化并能促进相应细胞因子的分泌;p38既能诱导Th1分化,也能促进Th2分化;ERK1/2则能诱导CD4+T细胞向Th2分化。

关键词： JNK p38 ERK Th1 Th2 分化

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负载HCMV pp65抗原肽的HLA-A*1101-GPI四聚体的制备和鉴定

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现代免疫学 2006年第6期26卷 459-464页

作者：李丰耀查庆兵徐丽慧迟晓云贾仟涛何贤辉曾耀英暨南大学生命科学技术学院组织移植与免疫实验中心广州510632 生物工程研究所广州510632

为体外复性制备负载人巨细胞病毒(HCMV)pp65抗原肽的HLA-A*1101-GPI四聚体,研究优化HLA-A*1101重链与生物素化酶底物肽融合蛋白(HLA-A*1101-BSP)在大肠杆菌中的诱导表达的温度、时间和诱导剂IPTG浓度,并以抗HLA-A*0201抗血清进行免疫印... 详细信息

为体外复性制备负载人巨细胞病毒(HCMV)pp65抗原肽的HLA-A*1101-GPI四聚体,研究优化HLA-A*1101重链与生物素化酶底物肽融合蛋白(HLA-A*1101-BSP)在大肠杆菌中的诱导表达的温度、时间和诱导剂IPTG浓度,并以抗HLA-A*0201抗血清进行免疫印迹鉴定HLA-A*1101-BSP的表达水平。将初步纯化的HLA-A*1101-BSP与β2-微球蛋白(β2m)和HCMV抗原肽pp6516-24(GPISGHVLK,简称GPI)一起利用稀释法进行重折叠复性,获得可溶性HLA-A*1101-GPI单体,经生物素化和纯化后,与Streptavidin-PE结合成四聚体。流式细胞仪分析显示HLA-A*1101-GPI四聚体具有与特异性细胞毒T细胞(CTL)的结合活性,表明成功获得可溶性HLA-A*1101-GPI四聚体,为研究HLA-A*1101限制性CTL的免疫应答打下基础。

关键词： HLA-A＊1101 四聚体流式细胞术巨细胞病毒

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PD-L1基因在正常胃和胃癌组织中的表达及其可变剪接变异体的鉴定

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暨南大学学报（自然科学与医学版） 2006年第2期27卷 184-188页

作者：迟晓云徐丽慧查庆兵何贤辉暨南大学生命科学技术学院组织移植与免疫教育部重点实验室广东广州510632

目的:检测PD-L1基因的常规和可变剪接变异体mRNA在胃癌组织和正常胃组织中的表达。方法:以RT-PCR方法从胃癌和正常胃组织的总RNA中扩增PD-L1的cDNA,并将扩增产物通过测序鉴定。结果:4例胃癌标本中,从病例2中扩增到常规和可变剪接变异体... 详细信息

目的:检测PD-L1基因的常规和可变剪接变异体mRNA在胃癌组织和正常胃组织中的表达。方法:以RT-PCR方法从胃癌和正常胃组织的总RNA中扩增PD-L1的cDNA,并将扩增产物通过测序鉴定。结果:4例胃癌标本中,从病例2中扩增到常规和可变剪接变异体,但以常规剪接体为主,病例3仅扩增到常规剪接体PD-L1Ⅰ,病例4扩增到其可变剪接变异体PD-L1Ⅱ,而病例1两种剪接形式均未扩增到。在2例正常胃组织中均只扩增到可变剪接变异体PD-L1Ⅱ。结论:PD-L1基因在大多数胃癌组织中表达,正常与胃癌组织中还表达可变剪接变异体PD-L1Ⅱ,提示表达产物的剪接方式具有多样性。

关键词： PD-L1基因可变剪接胃癌

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可溶性人PD-L1胞外域的制备及其鉴定

可溶性人PD-L1胞外域的制备及其鉴定

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第三届全国中医药免疫学术研讨会

作者：徐丽慧何贤辉李丰耀贾仟涛查庆兵暨南大学生命科学技术学院组织移植与免疫研究中心暨南大学生命科学技术学院组织移植与免疫研究中心暨南大学生命科学技术学院组织移植与免疫研究中心暨南大学生命科学技术学院组织移植与免疫研究中心暨南大学生命科学技术学院组织移植与免疫研究中心

PD-L1(又称B7-H1)是近年来研究较多的B7家族的共信号分子,通过PD-1受体向T细胞传递抑制性信号,因此在调节T细胞免疫应答过程中发挥重要作用。我们已经克隆人PD-L1基因的 cDNA,构建了其胞外域的原核表达载体,并在大肠杆菌中获得了表达。... 详细信息

PD-L1(又称B7-H1)是近年来研究较多的B7家族的共信号分子,通过PD-1受体向T细胞传递抑制性信号,因此在调节T细胞免疫应答过程中发挥重要作用。我们已经克隆人PD-L1基因的 cDNA,构建了其胞外域的原核表达载体,并在大肠杆菌中获得了表达。为进一步研究PD-L1的生物学功能及作用机制,我们制备了可溶性PD-L1蛋白及其抗体,并对获得的PD-L1蛋白的活性进

关键词：胞外域 PD-L1

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可溶性EGF受体胞外域在HeLa细胞中的表达及鉴定

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暨南大学学报（自然科学与医学版） 2006年第2期27卷 189-193页

作者：徐丽慧洪岸何贤辉暨南大学生命科学技术学院生物工程研究所组织移植与免疫教育部重点实验室广东广州510632

目的:在哺乳动物细胞中表达可溶性人表皮生长因子受体(sEGFR)并进行鉴定。方法:以带信号肽的sEGFR的真核表达载体pEGFR s或pEGFP-N1空载体转染HeLa细胞,利用流式细胞仪和激光共聚焦显微镜分析外源基因的表达水平,并以免疫印迹法分析培... 详细信息

目的:在哺乳动物细胞中表达可溶性人表皮生长因子受体(sEGFR)并进行鉴定。方法:以带信号肽的sEGFR的真核表达载体pEGFR s或pEGFP-N1空载体转染HeLa细胞,利用流式细胞仪和激光共聚焦显微镜分析外源基因的表达水平,并以免疫印迹法分析培养上清中的sEG-FR。结果:转染pEGFP-N1的HeLa细胞,48 h后EGFP的表达百分率可达83%,而转染pEGFR s载体的HeLa细胞EGFP阳性率为4.8%,表明由于插入的sEGFR基因包含终止密码而抑制了EG-FP的表达;共聚焦显微镜观察也得到一致的结果。进一步以抗EGFR结构域L2的抗血清进行免疫印迹分析证明,转染pEGFR s的HeLa细胞培养上清液中表达sEGFR,存在相对分子质量为83 000和80 000两种产物。结论:转染表达载体的HeLa细胞分泌表达sEGFR。

关键词：表皮生长因子受体可溶性EGFR HeLa细胞

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健康青年中国人中HCMV特异性记忆CD8+ T细胞频率和表型分析

健康青年中国人中HCMV特异性记忆CD8+ T细胞频率和表型分析

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第三届全国中医药免疫学术研讨会

作者：何贤辉查庆兵徐丽慧贾仟涛李丰耀暨南大学生命科学技术学院组织移植与免疫研究中心暨南大学生命科学技术学院组织移植与免疫研究中心暨南大学生命科学技术学院生物工程研究所暨南大学生命科学技术学院组织移植与免疫研究中心暨南大学生命科学技术学院组织移植与免疫研究中心

抗原特异性CD8+T细胞在抗病毒感染过程中发挥极为重要的作用。CD8+T细胞应答分为三个时相:第一时相,CD8+T细胞发生克隆扩增并分化为效应T细胞,清除产生病毒的细胞;接着为收缩相,大部分(90-95％)由克隆扩增产生的抗原特异性CD8+T细胞通... 详细信息

抗原特异性CD8+T细胞在抗病毒感染过程中发挥极为重要的作用。CD8+T细胞应答分为三个时相:第一时相,CD8+T细胞发生克隆扩增并分化为效应T细胞,清除产生病毒的细胞;接着为收缩相,大部分(90-95％)由克隆扩增产生的抗原特异性CD8+T细胞通过凋亡而死亡;最后是第三时相,

关键词：特异性 CD8

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