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暨南大学学报（自然科学与医学版） 2009年第2期30卷 133-138页

作者：慕静静曾耀英黄秀艳赵晓慧暨南大学生命科学技术学院组织移植与免疫中心广东广州510632

目的:研究C2-神经酰胺(C2-cer)对小鼠T细胞体外活化和增殖的影响,并对其免疫调节作用进行初步探讨。方法:分离小鼠淋巴结细胞,加入刀豆蛋白A(ConA)或佛波醇酯(PMA)和离子霉素(Ion)进行刺激,以不同终浓度的C2-cer与T细胞共培养。流式细... 详细信息

目的:研究C2-神经酰胺(C2-cer)对小鼠T细胞体外活化和增殖的影响,并对其免疫调节作用进行初步探讨。方法:分离小鼠淋巴结细胞,加入刀豆蛋白A(ConA)或佛波醇酯(PMA)和离子霉素(Ion)进行刺激,以不同终浓度的C2-cer与T细胞共培养。流式细胞术结合双色荧光抗体染色,检测T细胞早期活化抗原CD69的表达;用羧基荧光素双醋酸盐琥珀酰(CFDA-SE)染色结合流式细胞术,并用ModF it软件分析T细胞增殖相关指数。结果:终浓度为25、50和75μmol/L的C2-cer可以显著抑制ConA诱导的T细胞CD69的表达,由ConA组的(60.13±1.18)%,分别降低为(54.56±1.14)%、(48.73±1.26)%和(27.09±1.07)%(P<0.01);CFDA-SE染色结果显示,各浓度C2-cer对ConA诱导的小鼠淋巴细胞增殖,具有明显的抑制作用,增殖指数(PI)由ConA组的(1.81±0.25),分别降低为(1.46±0.01)、(1.25±0.04)和(1.18±0.03)(P<0.05);各浓度C2-cer均可明显抑制PMA+Ion诱导的小鼠淋巴细胞增殖,增殖指数(PI)由PMA+Ion组的(1.47±0.01),分别降低为(1.27±0.01)、(1.11±0.01)和(1.05±0.01)(P<0.05)。结论:C2-cer能有效地抑制小鼠T细胞的体外活化和增殖。

关键词： C2-神经酰胺增殖 T细胞活化流式细胞术

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γ-分泌酶抑制剂DAPT抑制Jurkat T细胞增殖

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暨南大学学报（自然科学与医学版） 2009年第2期30卷 152-156页

作者：李玉婷邢飞跃郭中峰暨南大学生命科学技术学院组织移植与免疫研究中心广东广州510632

目的:探讨γ-分泌酶抑制剂DAPT在体外对人T淋巴细胞白血病JurkatT细胞株增殖的抑制作用及其某些机制。方法:通过倒置显微镜和MTT法检测DAPT对Jurkat T细胞聚集的影响和对其增殖的抑制作用;利用碘化丙锭染色结合流式细胞术检测DAPT对Jurk... 详细信息

目的:探讨γ-分泌酶抑制剂DAPT在体外对人T淋巴细胞白血病JurkatT细胞株增殖的抑制作用及其某些机制。方法:通过倒置显微镜和MTT法检测DAPT对Jurkat T细胞聚集的影响和对其增殖的抑制作用;利用碘化丙锭染色结合流式细胞术检测DAPT对Jurkat T细胞周期的影响;藉免疫印迹法检测DAPT对Jurkat T细胞周期蛋白ICBP90表达的影响。结果:DAPT能显著影响Jurkat T细胞的聚集,抑制Jurkat T细胞的增殖,使其细胞周期停滞于S期,且周期蛋白ICBP90的表达下调。结论:γ-分泌酶抑制剂DAPT能够抑制Jurkat T细胞的增殖和细胞周期的进行,其抑制作用可能与ICBP90蛋白表达的下调有关。

关键词：反义CCAAT盒结合蛋白(ICBP90) 人T淋巴细胞白血病JurkatT细胞 γ-分泌酶抑制剂DAPT 细胞增殖细胞周期

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孕酮对人T淋巴细胞体外活化CD69表达的作用

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中国免疫学杂志 2000年第12期16卷 675-677页

作者：孙荭曾耀英黄柏炎何贤辉曾洁铭徐丽慧暨南大学组织移植与免疫实验中心广州510632 暨南大学生命科学技术学院广州510632

目的 :探讨孕酮 (Progesterone ,Prog)及地塞米松 (Dexamethasone,Dex )对人外周血T淋巴细胞体外活化CD6 9表达的作用。方法 :以女性健康志愿者 (10名 )为研究对象 ,以蛋白激酶C的刺激剂佛波醇酯 (Phorbolester,PDB)为T淋巴细胞的活化... 详细信息

目的 :探讨孕酮 (Progesterone ,Prog)及地塞米松 (Dexamethasone,Dex )对人外周血T淋巴细胞体外活化CD6 9表达的作用。方法 :以女性健康志愿者 (10名 )为研究对象 ,以蛋白激酶C的刺激剂佛波醇酯 (Phorbolester,PDB)为T淋巴细胞的活化剂 ,采用双荧光染色流式细胞技术 ,检测CD3+的T淋巴细胞表达早期活化表面分子CD6 9的百分率 ,以观察Prog、Dex及Prog加上Dex对外周血T淋巴细胞体外活化的作用。结果 :在体外培养条件下 ,无论单独使用Prog还是Dex均增强低剂量PDB刺激CD6 9的表达。然而 ,与单独使用Prog或Dex的作用相比 ,Prog加上Dex明显减弱低剂量PDB的活化CD6 9的表达。结论 :同时使用Prog与Dex可明显抑制T淋巴细胞的体外活化。

关键词：孕酮 T细胞 CD69 体外活化自身免疫性疾病

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喜树碱诱导的HL-60细胞凋亡过程中线粒体的变化

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细胞与分子免疫学杂志 2006年第2期22卷 144-147页

作者：贺芳曾耀英王通邢飞跃林羿梁佩燕肇静娴暨南大学生命科学技术学院组织移植与免疫中心教育部重点实验室广东广州510632

目的:研究喜树碱(CPT)诱导的人早幼粒细胞性白血病细胞HL-60凋亡过程中线粒体的质量和膜电势的变化。方法:以CPT诱导HL-60细胞凋亡为模型,利用膜联蛋白V(annexinV)-FITC/PI双染流式细胞术,研究HL-60细胞的凋亡和坏死。用DiOC6(3)染色流... 详细信息

目的:研究喜树碱(CPT)诱导的人早幼粒细胞性白血病细胞HL-60凋亡过程中线粒体的质量和膜电势的变化。方法:以CPT诱导HL-60细胞凋亡为模型,利用膜联蛋白V(annexinV)-FITC/PI双染流式细胞术,研究HL-60细胞的凋亡和坏死。用DiOC6(3)染色流式细胞术,检测线粒体的膜电势(△ψm)。用NAO染色流式细胞术,检测线粒体的质量。结果:在4×10-6mol/LCPT的诱导下,HL-60细胞(12h)早期的凋亡率为(12.75±4.61)%,对照组为(2.88±2.49)%,二者相比较差异显著(P<0.01);CPT组坏死比率为(3.48±1.67)%,对照组为(0.71±1.10)%(P<0.01)。PI染色的结果显示,HL-60细胞(12h)晚期凋亡细胞的百分率,CPT组为(3.52±1.07)%,对照组为(0.46±1.06)%(P<0.01)。同时观察到,G2/M期细胞出现阻滞,G2/M期细胞的百分率,对照组为(22.46±2.19)%,CPT组为(13.45±1.91)%(P<0.01)。在12h时间点,CPT组线粒体的质量显著低于对照组(P<0.01),低线粒体质量的细胞所占百分率,对照组为(4.53±1.26)%,CPT组为(25.74±2.09)%。同时,CPT组线粒体的膜电势显著下降(P<0.01),CPT组线粒体膜电势降低的比率为(17.71±5.23)%,对照组为(1.64±2.00)%。结论:CPT诱导HL-60细胞凋亡过程中,线粒体的质量和膜电势均有所下降,但其去极化作用增强。

关键词：喜树碱人HL-60细胞凋亡线粒体

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棉酚对小鼠淋巴细胞体外增殖和凋亡作用的影响

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现代免疫学 2009年第2期29卷 111-116页

作者：许文彬卢宏松徐丽慧施焕敬刘春永何贤辉暨南大学生命科学技术学院组织移植与免疫实验中心广州510632

研究棉酚(gossypol)对小鼠淋巴细胞体外增殖和凋亡作用的影响及作用机制。分离小鼠淋巴结细胞,以CFSE染色,加入佛波醇酯(PDB)和离子霉素(Ion)进行刺激,以流式细胞仪分析棉酚对淋巴细胞增殖率的影响;以MTS检测淋巴细胞的增殖情况;以Annex... 详细信息

研究棉酚(gossypol)对小鼠淋巴细胞体外增殖和凋亡作用的影响及作用机制。分离小鼠淋巴结细胞,以CFSE染色,加入佛波醇酯(PDB)和离子霉素(Ion)进行刺激,以流式细胞仪分析棉酚对淋巴细胞增殖率的影响;以MTS检测淋巴细胞的增殖情况;以Annexin V-PE染色分析细胞凋亡;用Hoechst33342染色观察细胞核形态。CFSE染色分析显示,棉酚对PDB+Ion诱导的小鼠淋巴细胞增殖,具有明显的抑制作用(P<0.01),且呈剂量依赖性。以MTS分析细胞增殖情况,也获得相似的结果。终浓度为4、8和16μmol/L的棉酚处理8 h后的细胞凋亡率分别为4.39%、6.57%和12.14%,PDB+Ion对照组凋亡率为2.13%。凋亡率随着棉酚作用时间的增加而上升,存在时间和剂量依赖关系。高浓度棉酚作用后大量细胞核呈现染色质固缩、核碎裂和致密浓染等凋亡特征。研究表明,棉酚能有效抑制小鼠淋巴细胞体外增殖和诱导其发生凋亡,并呈现出时间和剂量依赖关系。

关键词：棉酚淋巴细胞增殖凋亡流式细胞术

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MAPK信号通路在诱导Th1/Th2分化中的作用

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现代免疫学 2007年第1期27卷 81-84页

作者：于哲邢飞跃曾耀英广州暨南大学生命科学技术学院组织移植与免疫中心广州510632

丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路是介导细胞外刺激到细胞内反应的重要信号转号系统,在诱导Th1/Th2分化中起重要作用,其中JNK1能够抑制初始CD4+T细胞向Th2分化,JNK2诱导其向Th1分化并能促进相应细胞因子的分泌;p38既能诱导Th1分化,也... 详细信息

丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路是介导细胞外刺激到细胞内反应的重要信号转号系统,在诱导Th1/Th2分化中起重要作用,其中JNK1能够抑制初始CD4+T细胞向Th2分化,JNK2诱导其向Th1分化并能促进相应细胞因子的分泌;p38既能诱导Th1分化,也能促进Th2分化;ERK1/2则能诱导CD4+T细胞向Th2分化。

关键词： JNK p38 ERK Th1 Th2 分化

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人EGF受体胞外域在大肠杆菌中表达、复性及抗原性鉴定

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免疫学杂志 2006年第4期22卷 362-365页

作者：徐丽慧洪岸何贤辉暨南大学生命科学技术学院组织移植与免疫实验中心暨南大学生命科学技术学院生物工程研究所广州510632

目的构建人EGF受体(EGFR)胞外域的原核表达载体并在大肠杆菌中表达,制备EGFR特异性抗体,对表达产物进行鉴定。方法以PCR方法从克隆的EGFR胞外区cDNA中扩增编码胞外结构域L1、S1、L2(EGFRLSL)的DNA片段,并在其3′端加入编码His6标签的序... 详细信息

目的构建人EGF受体(EGFR)胞外域的原核表达载体并在大肠杆菌中表达,制备EGFR特异性抗体,对表达产物进行鉴定。方法以PCR方法从克隆的EGFR胞外区cDNA中扩增编码胞外结构域L1、S1、L2(EGFRLSL)的DNA片段,并在其3′端加入编码His6标签的序列,与pET3c连接构建EGFRLSL原核表达载体,在大肠杆菌中进行表达;同时以纯化的EGFRL2结构域蛋白(EGFRL2)制备抗血清,以此抗血清鉴定表达产物。结果EGFRLSL在大肠杆菌BL21(DE3)中获得高效表达,抗His6抗体免疫印迹分析表明,表达产物全部以包涵体形式存在,通过Ni2+NTA柱上复性获得纯化的可溶性EGFRLSL蛋白;免疫印迹分析表明,EGFRLSL与小鼠抗EGFRL2抗血清具有高特异性反应。结论从大肠杆菌中获得具有特异抗原性的可溶性EGFRLSL蛋白。

关键词：表皮生长因子受体胞外域原核表达包涵体抗原性

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氯化钴对人eNOS基因启动子转录活性的影响

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暨南大学学报（自然科学与医学版） 2009年第4期30卷 379-382页

作者：樊振华邢飞跃暨南大学生命科学技术学院组织移植与免疫中心广东广州510632

目的:建立氯化钴诱导的人脐静脉血管内皮细胞-12(HUVEC-12)缺氧模型,研究人血管内皮细胞一氧化氮合酶(eNOS)基因的启动子活性变化。方法:用含不同浓度氯化钴的培养基培养细胞,检测细胞培养上清中的乳酸脱氢酶(LDH)含量;将已构建的pGL2-e... 详细信息

目的:建立氯化钴诱导的人脐静脉血管内皮细胞-12(HUVEC-12)缺氧模型,研究人血管内皮细胞一氧化氮合酶(eNOS)基因的启动子活性变化。方法:用含不同浓度氯化钴的培养基培养细胞,检测细胞培养上清中的乳酸脱氢酶(LDH)含量;将已构建的pGL2-eNOS-p质粒转染HUVEC-12细胞,利用双荧光素酶报告基因技术检测在不同浓度氯化钴和不同作用时间下的eNOS启动子转录活性。结果:氯化钴刺激下HUVEC-12细胞培养上清的LDH含量随氯化钴作用浓度增加而提高;氯化钴刺激后转染细胞的eNOS启动子活性呈现随氯化钴剂量增加而升高的趋势,随作用时间的延长而上升的趋势。结论:成功建立氯化钴诱导HUVEC-12细胞缺氧的体外模型。

关键词：一氧化氮合酶启动子乳酸脱氢酶氯化钴内皮细胞

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一种Th1-like调节性T细胞新亚群

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现代免疫学 2008年第3期28卷 253-256页

作者：郝文婷邢飞跃广州暨南大学生命科学技术学院组织移植与免疫中心广州510632

本文描述了一种独特的调节性T细胞亚群——Th1-like调节性T细胞,这类细胞是卵清蛋白特异性的调节性T细胞,经CD8α+DC诱导产生,其表达的表面标志与Th1细胞和调节性T细胞均有相似之处,既表达Th1细胞的特异性标志T-bet,又表达调节性T细胞... 详细信息

本文描述了一种独特的调节性T细胞亚群——Th1-like调节性T细胞,这类细胞是卵清蛋白特异性的调节性T细胞,经CD8α+DC诱导产生,其表达的表面标志与Th1细胞和调节性T细胞均有相似之处,既表达Th1细胞的特异性标志T-bet,又表达调节性T细胞的特异性标志Foxp3。Th1-like调节性T细胞分泌IL-10、IFN-γ等细胞因子,这些细胞因子在免疫抑制与平衡中发挥重要作用。Th1-like调节性T细胞主要作用于呼吸道,对气道超反应呈现显著抑制作用。

关键词： Th1-like调节性T细胞 CD4+CD25+调节性T细胞 Tr1 Th3

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淫羊藿甙对小鼠同种异基因皮片移植的影响

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暨南大学学报（自然科学与医学版） 2009年第4期30卷 403-407页

作者：滕菲曾耀英黄秀艳狄静芳杨志暨南大学生命科学技术学院组织移植与免疫中心广东广州510632

目的:研究淫羊藿甙(ICA)对小鼠同种异基因皮片移植的影响。方法:试验分为腹腔注射生理盐水、ICA、环孢素A(CsA)以及CsA与ICA联用4组,5 d后将C57BL/C小鼠的背部皮片移植到BALB/c小鼠的相同位置,用眼科缝合线缝合,观察皮片愈合情况并记录... 详细信息

目的:研究淫羊藿甙(ICA)对小鼠同种异基因皮片移植的影响。方法:试验分为腹腔注射生理盐水、ICA、环孢素A(CsA)以及CsA与ICA联用4组,5 d后将C57BL/C小鼠的背部皮片移植到BALB/c小鼠的相同位置,用眼科缝合线缝合,观察皮片愈合情况并记录皮片外观性状、排斥时间,于第11天取移植皮片做病理石蜡切片,取淋巴结细胞和脾细胞做增殖实验(CFDA-SE染色)。结果:CsA+ICA联用能够延长皮片排斥时间,使皮片愈合得更好,胸腺和脾脏指数均比单独CsA组高,切片显示浸润的炎症细胞也较少,其淋巴结细胞增殖能力明显降低。结论:CsA与ICA联合能抑制移植造成的免疫排斥反应,可能是通过抑制受体小鼠的反应性T细胞的活化增殖来降低细胞免疫反应。

关键词：淫羊藿甙皮片移植增殖流式细胞术

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