检索结果-内蒙古大学图书馆

现代免疫学 2009年第5期29卷 392-396页

作者：尹乐乐曾耀英侯会娜暨南大学生命科学技术学院组织移植与免疫研究中心广州510632

探讨连翘提取物(FS)对盲肠结扎穿孔(CLP)诱导脓毒血症小鼠的影响以及FS对CLP诱导小鼠脓毒血症体内T淋巴细胞的影响。建立脓毒血症动物模型,观察7 d内FS对小鼠存活率的影响;计算各组小鼠胸腺和脾脏指数;MTT比色法以及CFDA-SE染色分析,流... 详细信息

探讨连翘提取物(FS)对盲肠结扎穿孔(CLP)诱导脓毒血症小鼠的影响以及FS对CLP诱导小鼠脓毒血症体内T淋巴细胞的影响。建立脓毒血症动物模型,观察7 d内FS对小鼠存活率的影响;计算各组小鼠胸腺和脾脏指数;MTT比色法以及CFDA-SE染色分析,流式细胞术(FCM)检测FS对机体T淋巴细胞增殖的影响。FS可延长CLP诱导脓毒血症小鼠的存活率;FS药物治疗组小鼠脾脏的重量和指数明显增加和小鼠胸腺指数明显增加;药物FS治疗组对脓毒血症早期炎症性小鼠淋巴结细胞的增殖有抑制作用。FS对CLP小鼠胸腺和脾脏有保护作用。对脓毒血症早期炎症引起的T淋巴细胞增殖有抑制作用。

关键词：连翘提取物脓毒血症 T淋巴细胞

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C_2-神经酰胺对小鼠T淋巴细胞体外活化和增殖的影响

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暨南大学学报（自然科学与医学版） 2009年第2期30卷 133-138页

作者：慕静静曾耀英黄秀艳赵晓慧暨南大学生命科学技术学院组织移植与免疫中心广东广州510632

目的:研究C2-神经酰胺(C2-cer)对小鼠T细胞体外活化和增殖的影响,并对其免疫调节作用进行初步探讨。方法:分离小鼠淋巴结细胞,加入刀豆蛋白A(ConA)或佛波醇酯(PMA)和离子霉素(Ion)进行刺激,以不同终浓度的C2-cer与T细胞共培养。流式细... 详细信息

目的:研究C2-神经酰胺(C2-cer)对小鼠T细胞体外活化和增殖的影响,并对其免疫调节作用进行初步探讨。方法:分离小鼠淋巴结细胞,加入刀豆蛋白A(ConA)或佛波醇酯(PMA)和离子霉素(Ion)进行刺激,以不同终浓度的C2-cer与T细胞共培养。流式细胞术结合双色荧光抗体染色,检测T细胞早期活化抗原CD69的表达;用羧基荧光素双醋酸盐琥珀酰(CFDA-SE)染色结合流式细胞术,并用ModF it软件分析T细胞增殖相关指数。结果:终浓度为25、50和75μmol/L的C2-cer可以显著抑制ConA诱导的T细胞CD69的表达,由ConA组的(60.13±1.18)%,分别降低为(54.56±1.14)%、(48.73±1.26)%和(27.09±1.07)%(P<0.01);CFDA-SE染色结果显示,各浓度C2-cer对ConA诱导的小鼠淋巴细胞增殖,具有明显的抑制作用,增殖指数(PI)由ConA组的(1.81±0.25),分别降低为(1.46±0.01)、(1.25±0.04)和(1.18±0.03)(P<0.05);各浓度C2-cer均可明显抑制PMA+Ion诱导的小鼠淋巴细胞增殖,增殖指数(PI)由PMA+Ion组的(1.47±0.01),分别降低为(1.27±0.01)、(1.11±0.01)和(1.05±0.01)(P<0.05)。结论:C2-cer能有效地抑制小鼠T细胞的体外活化和增殖。

关键词： C2-神经酰胺增殖 T细胞活化流式细胞术

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γ-分泌酶抑制剂DAPT抑制Jurkat T细胞增殖

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暨南大学学报（自然科学与医学版） 2009年第2期30卷 152-156页

作者：李玉婷邢飞跃郭中峰暨南大学生命科学技术学院组织移植与免疫研究中心广东广州510632

目的:探讨γ-分泌酶抑制剂DAPT在体外对人T淋巴细胞白血病JurkatT细胞株增殖的抑制作用及其某些机制。方法:通过倒置显微镜和MTT法检测DAPT对Jurkat T细胞聚集的影响和对其增殖的抑制作用;利用碘化丙锭染色结合流式细胞术检测DAPT对Jurk... 详细信息

目的:探讨γ-分泌酶抑制剂DAPT在体外对人T淋巴细胞白血病JurkatT细胞株增殖的抑制作用及其某些机制。方法:通过倒置显微镜和MTT法检测DAPT对Jurkat T细胞聚集的影响和对其增殖的抑制作用;利用碘化丙锭染色结合流式细胞术检测DAPT对Jurkat T细胞周期的影响;藉免疫印迹法检测DAPT对Jurkat T细胞周期蛋白ICBP90表达的影响。结果:DAPT能显著影响Jurkat T细胞的聚集,抑制Jurkat T细胞的增殖,使其细胞周期停滞于S期,且周期蛋白ICBP90的表达下调。结论:γ-分泌酶抑制剂DAPT能够抑制Jurkat T细胞的增殖和细胞周期的进行,其抑制作用可能与ICBP90蛋白表达的下调有关。

关键词：反义CCAAT盒结合蛋白(ICBP90) 人T淋巴细胞白血病JurkatT细胞 γ-分泌酶抑制剂DAPT 细胞增殖细胞周期

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棉酚对小鼠淋巴细胞体外增殖和凋亡作用的影响

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现代免疫学 2009年第2期29卷 111-116页

作者：许文彬卢宏松徐丽慧施焕敬刘春永何贤辉暨南大学生命科学技术学院组织移植与免疫实验中心广州510632

研究棉酚(gossypol)对小鼠淋巴细胞体外增殖和凋亡作用的影响及作用机制。分离小鼠淋巴结细胞,以CFSE染色,加入佛波醇酯(PDB)和离子霉素(Ion)进行刺激,以流式细胞仪分析棉酚对淋巴细胞增殖率的影响;以MTS检测淋巴细胞的增殖情况;以Annex... 详细信息

研究棉酚(gossypol)对小鼠淋巴细胞体外增殖和凋亡作用的影响及作用机制。分离小鼠淋巴结细胞,以CFSE染色,加入佛波醇酯(PDB)和离子霉素(Ion)进行刺激,以流式细胞仪分析棉酚对淋巴细胞增殖率的影响;以MTS检测淋巴细胞的增殖情况;以Annexin V-PE染色分析细胞凋亡;用Hoechst33342染色观察细胞核形态。CFSE染色分析显示,棉酚对PDB+Ion诱导的小鼠淋巴细胞增殖,具有明显的抑制作用(P<0.01),且呈剂量依赖性。以MTS分析细胞增殖情况,也获得相似的结果。终浓度为4、8和16μmol/L的棉酚处理8 h后的细胞凋亡率分别为4.39%、6.57%和12.14%,PDB+Ion对照组凋亡率为2.13%。凋亡率随着棉酚作用时间的增加而上升,存在时间和剂量依赖关系。高浓度棉酚作用后大量细胞核呈现染色质固缩、核碎裂和致密浓染等凋亡特征。研究表明,棉酚能有效抑制小鼠淋巴细胞体外增殖和诱导其发生凋亡,并呈现出时间和剂量依赖关系。

关键词：棉酚淋巴细胞增殖凋亡流式细胞术

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氯化钴对人eNOS基因启动子转录活性的影响

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暨南大学学报（自然科学与医学版） 2009年第4期30卷 379-382页

作者：樊振华邢飞跃暨南大学生命科学技术学院组织移植与免疫中心广东广州510632

目的:建立氯化钴诱导的人脐静脉血管内皮细胞-12(HUVEC-12)缺氧模型,研究人血管内皮细胞一氧化氮合酶(eNOS)基因的启动子活性变化。方法:用含不同浓度氯化钴的培养基培养细胞,检测细胞培养上清中的乳酸脱氢酶(LDH)含量;将已构建的pGL2-e... 详细信息

目的:建立氯化钴诱导的人脐静脉血管内皮细胞-12(HUVEC-12)缺氧模型,研究人血管内皮细胞一氧化氮合酶(eNOS)基因的启动子活性变化。方法:用含不同浓度氯化钴的培养基培养细胞,检测细胞培养上清中的乳酸脱氢酶(LDH)含量;将已构建的pGL2-eNOS-p质粒转染HUVEC-12细胞,利用双荧光素酶报告基因技术检测在不同浓度氯化钴和不同作用时间下的eNOS启动子转录活性。结果:氯化钴刺激下HUVEC-12细胞培养上清的LDH含量随氯化钴作用浓度增加而提高;氯化钴刺激后转染细胞的eNOS启动子活性呈现随氯化钴剂量增加而升高的趋势,随作用时间的延长而上升的趋势。结论:成功建立氯化钴诱导HUVEC-12细胞缺氧的体外模型。

关键词：一氧化氮合酶启动子乳酸脱氢酶氯化钴内皮细胞

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淫羊藿甙对小鼠同种异基因皮片移植的影响

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暨南大学学报（自然科学与医学版） 2009年第4期30卷 403-407页

作者：滕菲曾耀英黄秀艳狄静芳杨志暨南大学生命科学技术学院组织移植与免疫中心广东广州510632

目的:研究淫羊藿甙(ICA)对小鼠同种异基因皮片移植的影响。方法:试验分为腹腔注射生理盐水、ICA、环孢素A(CsA)以及CsA与ICA联用4组,5 d后将C57BL/C小鼠的背部皮片移植到BALB/c小鼠的相同位置,用眼科缝合线缝合,观察皮片愈合情况并记录... 详细信息

目的:研究淫羊藿甙(ICA)对小鼠同种异基因皮片移植的影响。方法:试验分为腹腔注射生理盐水、ICA、环孢素A(CsA)以及CsA与ICA联用4组,5 d后将C57BL/C小鼠的背部皮片移植到BALB/c小鼠的相同位置,用眼科缝合线缝合,观察皮片愈合情况并记录皮片外观性状、排斥时间,于第11天取移植皮片做病理石蜡切片,取淋巴结细胞和脾细胞做增殖实验(CFDA-SE染色)。结果:CsA+ICA联用能够延长皮片排斥时间,使皮片愈合得更好,胸腺和脾脏指数均比单独CsA组高,切片显示浸润的炎症细胞也较少,其淋巴结细胞增殖能力明显降低。结论:CsA与ICA联合能抑制移植造成的免疫排斥反应,可能是通过抑制受体小鼠的反应性T细胞的活化增殖来降低细胞免疫反应。

关键词：淫羊藿甙皮片移植增殖流式细胞术

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重组hFGF-7腺病毒对角质形成细胞的生物学效应

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暨南大学学报（自然科学与医学版） 2009年第6期30卷 636-639页

作者：吴晓萍曾耀英暨南大学生命科学技术学院组织移植与免疫实验中心广东广州510632

目的:研究重组腺病毒导入人成纤维细胞生长因子7(hFGF-7)对人皮肤角质形成细胞(HaCat)的生物学效应。方法:通过倍比稀释和感染实验,测定重组腺病毒rAd-hFGF-7的滴度;流式细胞术检测重组腺病毒感染HaCat细胞的感染效率;MTT法检测rAd-hFG... 详细信息

目的:研究重组腺病毒导入人成纤维细胞生长因子7(hFGF-7)对人皮肤角质形成细胞(HaCat)的生物学效应。方法:通过倍比稀释和感染实验,测定重组腺病毒rAd-hFGF-7的滴度;流式细胞术检测重组腺病毒感染HaCat细胞的感染效率;MTT法检测rAd-hFGF-7对HaCat细胞增殖的影响;重组腺病毒对HaCat细胞周期的影响通过流式细胞术进行检测。结果:高滴度重组腺病毒可高效感染HaCat细胞,其促细胞增殖作用随着重组腺病毒MO I值的增加而增强,当MO I值为50时,感染细胞进入S期和G2期的细胞比率显著增加。结论:重组腺病毒rAd-hFGF-7可促进HaCat细胞的增殖,改变HaCat细胞周期。

关键词：成纤维细胞生长因子7 腺病毒细胞增殖细胞周期

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P38α对人血管内皮一氧化氮合酶(eNOS)基因启动子转录活性的影响

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暨南大学学报（自然科学与医学版） 2009年第6期30卷 610-613页

作者：刘娜邢飞跃暨南大学生命科学技术学院组织移植与免疫实验中心广东广州510632

目的:研究P38α对人血管内皮细胞一氧化氮合酶(eNOS)基因启动子转录活性的影响。方法:利用硝酸还原酶法检测不同浓度氯化钴作用下人脐静脉血管内皮细胞-12(HUVEC-12)上清中的一氧化氮(NO)的含量。以pRL-TK为内参照,将已经构建好的pGL2-e... 详细信息

目的:研究P38α对人血管内皮细胞一氧化氮合酶(eNOS)基因启动子转录活性的影响。方法:利用硝酸还原酶法检测不同浓度氯化钴作用下人脐静脉血管内皮细胞-12(HUVEC-12)上清中的一氧化氮(NO)的含量。以pRL-TK为内参照,将已经构建好的pGL2-eNOS-p质粒分别与pGL3-BASIC、pcDNA3、p38 a、及p38 a(AF)共转染HUVEC-12细胞,利用双荧光素酶报告基因技术检测eNOS基因启动子转录活性,并在共转染的基础上加氯化钴刺激,并检测eNOS基因启动子转录活性。结果:氯化钴刺激下HUVEC-12细胞培养上清的NO含量随氯化钴作用浓度增加而提高,成功建立化学缺氧模型;p38 a在正常和缺氧条件下均明显降低eNOS基因启动子的活性,可被无活性诱变体p38 a(AF)逆转。结论:P38α下调人血eNOS基因启动子转录活性。

关键词：一氧化氮合酶(NOS) 启动子 P38丝裂原活化蛋白激酶(P38MAPK) 氯化钴内皮细胞

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负载SIV抗原肽的中国恒河猴Mamu-B*1703可溶性单体及其四聚体的制备和鉴定

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暨南大学学报（自然科学与医学版） 2009年第4期30卷 349-354页

作者：王笑迎欧阳东云何贤辉徐丽慧施焕敬高琦郭贺暨南大学生命科学技术学院组织移植与免疫实验中心广东广州510632 暨南大学生命科学技术学院生物工程研究所广东广州510632

目的:制备负载SIV抗原肽的中国恒河猴Mamu-B*1703可溶性单体及其四聚体。方法:以含Mamu-B*1703重链cDNA序列的pMD19-T克隆为模板,通过PCR的方法克隆Mamu-B*1703重链基因,进而构建羧基端融合生物素化酶BirA底物肽(BSP)的Mamu-B*1703重链... 详细信息

目的:制备负载SIV抗原肽的中国恒河猴Mamu-B*1703可溶性单体及其四聚体。方法:以含Mamu-B*1703重链cDNA序列的pMD19-T克隆为模板,通过PCR的方法克隆Mamu-B*1703重链基因,进而构建羧基端融合生物素化酶BirA底物肽(BSP)的Mamu-B*1703重链胞外域融合蛋白的表达载体,并在大肠杆菌中获得表达。β微球蛋白、SIV抗原肽共存时,通过稀释法复性可溶性Mamu-B*1703单体,经生物素化并纯化后与荧光素标记的链亲和素按4∶1的比例混合形成四聚体。结果:ELISA检测显示获得具有正确构象的负载SIV抗原肽的Mamu-B*1703四聚体。结论:印度恒河猴Mamu-B*1701特异性抗原肽IW9,与中国恒河猴的Mamu-B*1703相结合形成可溶性Mamu-B*1703/IW9单体和四聚体。

关键词：恒河猴 Mamu-B*1703 猴免疫缺陷病毒四聚体

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OX40L在小鼠B16黑素瘤细胞中表达及对活化淋巴细胞凋亡影响

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暨南大学学报（自然科学与医学版） 2009年第6期30卷 585-589页

作者：高琦徐丽慧郭贺欧阳东云王笑迎何贤辉暨南大学生命科学技术学院组织移植与免疫实验中心广东广州510632 暨南大学生命科学技术学院生物工程研究所广东广州510632

目的:构建OX40L的真核表达载体,分析其在B16细胞中的表达,研究OX40L对活化T淋巴细胞凋亡的影响。方法:以小鼠C57BL/6脾脏的cDNA为模板,PCR扩增小鼠OX40L基因,构建真核表达载体pVAX1-OX40L,转染B16细胞后,荧光染色检测OX40L的表达;利用An... 详细信息

目的:构建OX40L的真核表达载体,分析其在B16细胞中的表达,研究OX40L对活化T淋巴细胞凋亡的影响。方法:以小鼠C57BL/6脾脏的cDNA为模板,PCR扩增小鼠OX40L基因,构建真核表达载体pVAX1-OX40L,转染B16细胞后,荧光染色检测OX40L的表达;利用AnnexinV-PE凋亡试剂盒,检测B16黑素瘤细胞-淋巴细胞体外混合培养中对活化淋巴细胞凋亡的影响。结果:成功构建OX40L的真核表达载体,并转染B16细胞中,流式细胞术和激光共聚焦显微术均可检测到OX40L表达于B16细胞表面。淋巴细胞体外混合培养显示,表达OX40L的B16细胞组活化淋巴细胞的凋亡率为6.57%,而空质粒转染组为17.24%。结论:OX40L能表达于B16细胞表面,并能显著抑制活化淋巴细胞凋亡。

关键词： OX40L 黑素瘤淋巴细胞混合淋巴细胞培养细胞凋亡

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