检索结果-内蒙古大学图书馆

中华实验眼科杂志 2014年第9期32卷 786-790页

作者：杨艳刘庆郭永龙王婵傅婷陈建苏暨南大学第一临床医学院眼科广州510632 暨南大学第一临床医学院再生医学教育部重点实验室广州510632 暨南大学第一临床医学院眼科研究所广州510632

背景组织工程角膜内皮层的构建和细胞注射疗法需要足够数量的角膜内皮细胞（CECs）,因此如何在体外培养大量高活性的角膜内皮种子细胞是当前亟需解决的问题. 目的建立兔CECs高活性三维（3D）球形培养方法,探索培养细胞的生物学特性. ... 详细信息

背景组织工程角膜内皮层的构建和细胞注射疗法需要足够数量的角膜内皮细胞（CECs）,因此如何在体外培养大量高活性的角膜内皮种子细胞是当前亟需解决的问题. 目的建立兔CECs高活性三维（3D）球形培养方法,探索培养细胞的生物学特性. 方法酶消化法分离和培养兔CECs并进行传代,经低黏附振动培养法产生兔CECs球,倒置相差显微镜下观察培养细胞的形态;采用扫描电子显微镜观察CECs球的表面超微结构;用吖啶橙染色法鉴定CECs球中细胞的活性;采用CCK-8试剂盒检测细胞的吸光度（A450）值,判断细胞的增生情况.将CECs球接种到6孔细胞培养板贴壁培养1周,球形培养的细胞为球形培养组,常规培养的细胞为常规培养组.采用免疫荧光法检测闭锁小带蛋白1（ZO-1）和Na＋/K＋-ATP酶在细胞中的表达.结果经球形培养的CECs呈聚集生长,培养1周细胞形态为六角形或多边形,融合成单层,呈铺路石状排列;扫描电子显微镜下可见兔CECs球体周围有细胞爬出,未长散的细胞球中细胞与细胞之间结合紧密,球体表面凹凸不平.吖啶橙染色表明,细胞球中90％细胞呈绿色荧光;球形培养组细胞平均A450值为1.524±0.013,常规培养组细胞平均A450值为1.265±0.021,球形培养组细胞增生值明显增加,2个组间差异有统计学意义（t=-3.436,P=0.010）.免疫荧光检测表明,培养的细胞中ZO-1和Na＋/K＋-ATP酶阳性细胞膜对FITC呈绿色荧光,细胞核DAPI染色呈蓝色荧光.结论 CECs的3D球形培养方法培养的细胞可保持细胞的高活性、高增生能力和细胞表型,为构建组织工程角膜内皮及细胞疗法提供了更好的角膜内皮种子细朐.

关键词：角膜内皮细胞球形培养三维细胞活性细胞表型

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CdSe／ZnS核壳结构量子点用于人诱导多能干细胞标记的研究

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中华实验眼科杂志 2013年第9期31卷 819-822页

作者：谭美华陈建苏陈剑吴静招志毅戴应李善义暨南大学第一临床医学院眼科广州510632 暨南大学医学院眼科研究所广州510632 再生医学教育部重点实验室

背景近年来，诱导多能干细胞（iPSCs）的多向分化特性为各种临床疾病的细胞替代治疗提供了新的种子来源，在眼科领域，iPSCs已成为人眼变性类疾病发病机制研究的良好模型，而更好的iPSCs识别和鉴定技术是对其体内生物学特性进行研究的... 详细信息

背景近年来，诱导多能干细胞（iPSCs）的多向分化特性为各种临床疾病的细胞替代治疗提供了新的种子来源，在眼科领域，iPSCs已成为人眼变性类疾病发病机制研究的良好模型，而更好的iPSCs识别和鉴定技术是对其体内生物学特性进行研究的基础。目的探讨量子点标记人iPSCs的可行性及其最佳浓度，并观察量子点标记人iPSCs的光稳定性，为iPSCs应用于眼部细胞移植的实验研究和临床研究提供一种新的示踪技术。方法用无饲养层细胞培养法培养和扩增脐带间充质基质细胞一人iPSCs系，并用免疫荧光法对其干细胞特性进行鉴定；选取不同浓度CdSe／ZnS核壳结构的量子点对扩增培养的iPSCs进行标记，用三维去卷积实时活细胞成像系统观察标记效果。将量子点标记后的iPSCs继续培养，分别于1次传代后1周和2次传代后1周观察荧光标记的稳定性。结果倒置显微镜下观察可见培养和扩增的iPSCs呈克隆样生长，免疫荧光检测显示iPSCs中OCT4和Nanog两种干细胞标志蛋白均阳性表达。5．0、7．5、10．0nmol／L三种浓度的量子点标记后均可见iPSCs中的橘红色荧光，随着量子点浓度的增加，iPSCs中标记的橘红色颗粒明显增加，10．0nmol／L量子点标记后iPSCs中的橘红色荧光最强，荧光颗粒最多。iPSCs2次传代1周后仍可观察到量子点的橘红色荧光，但与传代前和1次传代后1周相比荧光强度减弱。结论量子点标记技术可示踪iPSCs，其荧光标记效果呈浓度依赖性。本研究实验条件下量子点标记的荧光至少可维持2周。

关键词：量子点标志物诱导多能干细胞示踪

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原子力显微镜观察角膜内皮细胞诱导后诱导多能干细胞的形态学变化

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中华实验眼科杂志 2012年第11期30卷 976-981页

作者：招志毅陈建苏钟敬祥谭美华李善义戴应暨南大学附属第一医院眼科暨南大学医学院眼科研究所再生医学教育部重点实验室广州510632

背景诱导多能干细胞（iPSCs）具有类似胚胎干细胞的分化能力，可以分化为全身各种类型的体细胞，同时不会引起伦理学问题和免疫排斥反应，因此iPSCs有可能作为组织工程角膜内皮重建的种子细胞。目的利用原子力显微镜（AFM）观察人iPSCs... 详细信息

背景诱导多能干细胞（iPSCs）具有类似胚胎干细胞的分化能力，可以分化为全身各种类型的体细胞，同时不会引起伦理学问题和免疫排斥反应，因此iPSCs有可能作为组织工程角膜内皮重建的种子细胞。目的利用原子力显微镜（AFM）观察人iPSCs与兔角膜内皮细胞（CECs）混合共培养后分化iPSCs的形态学变化，并找出其细胞膜超微结构变化的规律。方法分别培养兔CECs和人MMC-iPSCs细胞系，用免疫组织化学法测定iPSCs细胞的标志物以鉴定iPSCs细胞。将传代后7d的iPSCs与60％融合的CECs在内皮细胞培养基中共培养建立混合共培养模型，利用AFM结合倒置显微镜观察CECs及共培养前后iPSCs的形貌和超微结构变化。结果CECs的长度和宽度分别为（66．93±10．48）μm和（44．85±8．14）μm，共培养前未分化的谮SCs的长度和宽度分别为（12．51±1．40）μm和（10．93±1．69）μm，共培养后分化的iPSCs长度和宽度分别为（36．12±10．29）μm和（31．53±9．65）μm。分化的iPSCs长度和宽度均大于共培养前的iPSCs，差异均有统计学意义（P〈0．05）。分化的iPSCs宽度与CECs比较差异无统计学意义（P〉0．05）。CECs细胞膜表面突起的最大宽度和高度分别为（2．11±1．03）μm和（115．68±92．08）nm，膜表面凹陷为窗孔样凹陷，最大宽度为（1．49±0．65）μm，膜表面结构几何参数均方根粗糙度（Rq）为（39．20±7．82）nm，平均粗糙度（Ra）为（30．37±5．32）nm；未分化的iPSCs细胞膜表面突起为颗粒状，突起的最大宽度和高度分别为（0．39±0．22）μm和（13．11±9．18）nm，膜表面凹陷为虫蚀样，凹陷的最大宽度为（0．34±0．18）μm，Rq和Ra分别为（26．60±4．93）nm和（9．97±3．78）nm；分化的iPSCs细胞膜表面突起为指状，突起的最大宽度和高度分别为（1．91±0．76）μm和（106．55±77．27）nm，膜表面凹陷为窗孔样，凹陷的最大宽度为（1．61±1．25）μm，Rq为（57．33±12．80）nm，Ra为（43．63±11．17）nm。分化的iPSCs细胞膜表面突起最大宽度和高度、凹陷最大宽度、Rq、Ra均大于共培养前未分化的iPSCs，差异均有统计学意义（P〈0．05），与CECs比较差异均无统计学意义（P〉0．05）。结论AFM能够敏感地观察到iPSCs与CECs接触共培养7d后iPSCs向CECs方向转化的形态学变化，为进一步研究iPSCs向CECs的分化提供了研究基础。

关键词：诱导多能干细胞角膜内皮细胞混合共培养分化原子力显微镜

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转谷氨酰胺酶交联胶原凝胶构建三维角膜基质

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眼科研究 2009年第10期27卷 839-843页

作者：李燕陈建苏李晓霞王伟暨南大学眼科研究室再生医学教育部重点实验室暨南大学附属第一临床医学院眼科广州510632

目的检测转谷氨酰胺酶交联胶原凝胶对三维培养的角膜基质细胞的影响,探讨可提高机械性能的组织工程角膜基质层新途径。方法胶原酶消化法获取原代兔角膜基质细胞,以加入转谷氨酰胺酶与胶原凝胶交联为实验组,不加酶交联为对照组。倒置显... 详细信息

目的检测转谷氨酰胺酶交联胶原凝胶对三维培养的角膜基质细胞的影响,探讨可提高机械性能的组织工程角膜基质层新途径。方法胶原酶消化法获取原代兔角膜基质细胞,以加入转谷氨酰胺酶与胶原凝胶交联为实验组,不加酶交联为对照组。倒置显微镜下每日观察细胞生长情况、Alamar-Blue试剂检测细胞增生、免疫荧光法检测凝胶内细胞波形蛋白、检测透光度、酶消化法检测胶原凝胶抗消化能力。结果实验组细胞胶原凝胶内附着和生长优于对照组,细胞在凝胶内呈树枝状生长。2组细胞均随培养时间延长明显增生(P=0.000)。共焦显微镜下见2组细胞胞浆波形蛋白均阳性表达,实验组细胞伪足更丰富。实验组透光度稍差于对照组。实验组抵抗胶原酶消化的能力显著增强。结论酶交联的胶原凝胶对角膜基质细胞无毒性作用,重构的基质层结构更加稳定,有利于组织工程角膜基质层的构建。

关键词：转谷氨酰胺酶交联胶原凝胶组织工程角膜

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诱导多能干细胞在眼科的研究进展

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中华实验眼科杂志 2012年第7期30卷 662-666页

作者：招志毅(综述) 陈建苏(审校) 暨南大学附属第一医院眼科、暨南大学医学院眼科研究所、再生医学教育部重点实验室广州510632

2006年诱导多能干细胞（iPSCs）的建立被誉为是干细胞研究领域的重大突破，使得进行患者体细胞来源的干细胞治疗成为可能。近年的研究表明，动物和人的成纤维细胞、B淋巴细胞、神经干细胞、头发角质细胞、胰腺细胞、脐带基质和羊膜的间... 详细信息

2006年诱导多能干细胞（iPSCs）的建立被誉为是干细胞研究领域的重大突破，使得进行患者体细胞来源的干细胞治疗成为可能。近年的研究表明，动物和人的成纤维细胞、B淋巴细胞、神经干细胞、头发角质细胞、胰腺细胞、脐带基质和羊膜的间充质细胞均可重编程成为iPSCs并可通过一定的诱导分化为特定类型的细胞，为多种疾病的特异性治疗提供了新的方法。而iPSCs研究在眼科领域的研究也取得了长足进展。在眼科，iPSCs诱导后可分化为视网膜色素上皮（RPE）细胞、感光细胞和其他视网膜细胞，从而为治疗视网膜退行性病变奠定了基础。与传统的干细胞治疗不同，iPSCs移植治疗相应的疾病避免了传统干细胞治疗所存在的道德伦理及免疫排斥等限制，具有较好的应用前景。就iPSCs的概念、诱导策略及方法、在眼科领域的研究现状、研究中存在的问题及应用前景等方面进行综述。

关键词：诱导多能干细胞视网膜变性性疾病眼科

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急性髓系白血病中eIF4E高表达与疾病进展相关

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中国实验血液学杂志 2013年第2期21卷 296-299页

作者：蒋引娣卢育洪陈少华朱康儿张学利郁志钟隽张涛罗更新陈洁潘焕玉李琰秦恋岸李扬秋暨南大学附属第一医院血液科医学院血液病研究所再生医学教育部重点实验室广东广州510632

本研究检测未治疗、未缓解/复发及缓解期间急性髓系白血病(AML)和其他良性血液病患者骨髓细胞中eIF4E基因表达水平并分析其与疾病进展的关系。采用SYBR Green I荧光定量PCR和相对定量分析法检测30例AML患者(M2型6例,M3型5例,M4型8例,M5... 详细信息

本研究检测未治疗、未缓解/复发及缓解期间急性髓系白血病(AML)和其他良性血液病患者骨髓细胞中eIF4E基因表达水平并分析其与疾病进展的关系。采用SYBR Green I荧光定量PCR和相对定量分析法检测30例AML患者(M2型6例,M3型5例,M4型8例,M5型10例,M6型1例),11例AML化疗后完全缓解患者和20例非肿瘤性血液病患者骨髓单个核细胞的eIF4E表达情况,以β2微球蛋白基因(β2M)作为内参,采用公式2-△Ct×100%计算eIF4E基因表达水平。结果表明:AML未治疗及未缓解/复发组患者骨髓细胞eIF4E表达水平(7.098±5.544)%明显高于非肿瘤患者(0.248±0.163)%(P<0.01)和化疗后完全缓解患者(0.964±0.312)%(P<0.01),各AML亚型之间不存在统计学差异,尽管M4、M5亚型的表达水平相对较高。非白血病患者与缓解患者比较,eIF4E表达水平不存在显著性差异。结论:eIF4E基因在急性髓系白血病细胞中出现高表达,并随着疾病的缓解而明显降低,因此eIF4E有可能作为监测白血病进展的一项参数。

关键词： eIF4E基因实时定量PCR 急性髓系白血病

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共培养环境中兔角膜内皮细胞诱导人iPSCs分化

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中国病理生理杂志 2012年第8期28卷 1488-1493页

作者：谭美华陈建苏招志毅丁勇钟敬祥戴应李善义杨皓庄暨南大学第一临床医学院眼科暨南大学医学院眼科研究所暨南大学再生医学教育部重点实验室暨南大学医学院病理生理学系广东广州510632

目的:观察人诱导多能干细胞(induced pluripotent stem cells,iPSCs)与兔角膜内皮细胞(cornealendothelial cells,CECs)共培养前后的形态学变化,检测iPSCs向CECs分化前后部分标志蛋白表达的变化,为研究iPSCs向CECs的分化提供实验依据。... 详细信息

目的:观察人诱导多能干细胞(induced pluripotent stem cells,iPSCs)与兔角膜内皮细胞(cornealendothelial cells,CECs)共培养前后的形态学变化,检测iPSCs向CECs分化前后部分标志蛋白表达的变化,为研究iPSCs向CECs的分化提供实验依据。方法:分离培养兔CECs并传代,同时使用无饲养层细胞法培养扩增人脐带源iPSCs,Western blotting对其进行鉴定;用量子点对iPSCs进行标记示踪,以不同密度比例建立iPSCs与CECs的共培养模式,用原子力显微镜(atomic force microscopy,AFM)结合倒置显微镜观察共培养前后iPSCs的形态学变化,免疫荧光法检测iPSCs分化前后CD34、CD133、CD31和水通道蛋白1(AQP1)蛋白表达的变化。结果:培养扩增的兔CECs形态为六边形,呈典型的铺路石样外观;iPSCs呈克隆样生长,Western blotting检测Oct4、Nanog和Sox2多能性标志蛋白均呈阳性;10 nmol/L量子点标记的iPSCs以1/4悬液与融合60%的兔CECs共培养为最佳模式;AFM结合倒置显微镜观察到共培养后iPSCs体积增大,胞浆增多,核浆比减小,细胞膜表面可见颗粒状突起物,膜表面粗糙度增加;免疫荧光法检测分化前iPSCs的CD34、CD133、CD31和AQP1表达均呈阴性,共培养2周后iPSCs的CD34、CD133和CD31表达阴性,AQP1表达阳性。结论:与兔CECs混合共培养后人iPSCs不仅从形态学上向内皮样细胞方向转化,同时表达角膜内皮细胞标志蛋白AQP1。

关键词：诱导多能干细胞角膜内皮细胞混合培养显微镜检查原子力水通道蛋白1

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细胞与分子免疫学杂志 2009年第2期25卷 136-138页

作者：陈少华李扬秋杨力建周羽竝李萡张学利罗更新暨南大学医学院血液病研究所暨南大学再生医学教育部重点实验室暨南大学医学院生化教研室暨南大学第一附属医院血液科广东广州510632

目的:分析急性早幼粒细胞白血病(APL)患者外周血TCRVα和Vβ克隆性增殖T细胞及CDR3序列特点。方法:利用RT-PCR法扩增1例APL患者外周血单个核细胞中29个TCRVα基因和24个Vβ基因CDR3,阳性PCR产物进一步经荧光标记和基因扫描分析确定其CDR... 详细信息

目的:分析急性早幼粒细胞白血病(APL)患者外周血TCRVα和Vβ克隆性增殖T细胞及CDR3序列特点。方法:利用RT-PCR法扩增1例APL患者外周血单个核细胞中29个TCRVα基因和24个Vβ基因CDR3,阳性PCR产物进一步经荧光标记和基因扫描分析确定其CDR3长度,了解其克隆性;寡克隆的PCR产物再进行CDR3区序列分析。结果:该例APL患者外周血T细胞分别在TCRVα6、Vα10和Vβ23亚家族中出现寡克隆性增殖T细胞,经序列分析显示TCRVα6、Vα10和Vβ23亚家族基因序列分别为Vα6NJα17、Vα10NJα35和Vβ23NDβ1NJβ2.7,其CDR3区氨基酸序列分别为CAMRENSAGNK,YLCAGDELLWECA,CASSSKWAG-GTYEQY,该3个TCR基因已被GenBank收录(登陆号:EU544946、EU544947和EU647219)。结论:APL患者外周血T细胞出现的TCRVα6、Vα10和Vβ23克隆性增殖T细胞可能是机体对抗白血病细胞所引起的抗原特异性免疫反应;这3个独特TCR重排序列将进一步作为开展APL特异性免疫治疗研究提供资料。

关键词： APL TCR CDR3 T细胞克隆

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房水培养对牛角膜内皮细胞生长的影响

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中华实验眼科杂志 2013年第2期31卷 127-131页

作者：李善义戴应谭美华丁勇钟敬祥陈建苏暨南大学再生医学教育部重点实验室暨南大学医学院眼科研究所广州510632 暨南大学附属第一医院眼科广州510630

背景组织工程角膜内皮层的构建需要有活性的角膜内皮细胞（CECs），因此如何在体外培养出大量有生理功能的角膜内皮种子细胞是迫切需要解决的问题。目的观察房水对体外培养的牛CECs生长的影响。方法从新鲜牛眼球前房抽取1．2ml房水，经... 详细信息

背景组织工程角膜内皮层的构建需要有活性的角膜内皮细胞（CECs），因此如何在体外培养出大量有生理功能的角膜内皮种子细胞是迫切需要解决的问题。目的观察房水对体外培养的牛CECs生长的影响。方法从新鲜牛眼球前房抽取1．2ml房水，经消毒过滤后取上清备用。从牛眼角膜组织分离牛CECs并用含质量分数10％胎牛血清的低糖DMEM培养液进行培养传代。分别在培养液中加入不同体积的房水，使房水终体积分数分别为2．5％、5．O％、10．O％、15．O％、20．O％，对照组不加房水，利用细胞计数试剂盒-8（CCK_8）比色法检测各组细胞在450nm处的吸光度（A。，。）值。流式细胞仪分析10．O％房水培养对CECs细胞周期的影响。待培养细胞融合成单层后，1ml塑料枪头尖端在培养皿底划痕并用含10％胎牛血清的DMEM培养液中加入10．O％房水培养24h，未加入房水的培养液作为对照组，检测细胞单层的愈合情况。将细胞以6xlO’个／ml密度接种到培养皿中，分别用含10．0％房水的培养液和无房水的培养液孵育5d，利用DAPI荧光染色技术分析细胞密度。结果培养的CECs呈六角形、铺路石样的扁平状。CCK-8比色法检测表明，各培养组细胞的A450值总体比较差异有统计学意义（F=4．051，P=0．007）；与对照组比较，各房水培养组细胞的A450值均明显高于对照组，以含10．0％房水培养组CECs的A450值最高，差异有统计学意义（P〈0．01）。流式细胞术分析表明，10．0％房水孵育24h后，处于S-G2期的细胞比例为（34．80±3．13）％，对照组为（23．06±1．13）％，差异有统计学意义（t=-5．729，P=0．005）。划痕愈合分析检测表明，10．0％房水组的细胞单层划痕面积为（0．116±0．019）mm2，对照组为（0．358±0．049）mm2，差异有统计学意义（t=13．842，P=0．000）。DAPI荧光染色结果显示，10．0％房水组的平均细胞密度为（1439±110）个／视野，大于对照组的（1162±45）个／视野，差异有统计学意义（t=-11．020，P=0．000）。结论房水作用于培养的牛CECs后可促进CECs的生长，10．0％房水对培养的CECs有促进角膜细胞增生的作用。

关键词：房水角膜内皮细胞增生细胞培养

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基于免疫抑制性受体的血液肿瘤靶向免疫治疗研究

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白血病．淋巴瘤 2015年第8期24卷 449-452页

作者：陈少华查显丰李扬秋暨南大学医学院血液研究所广州510632 暨南大学第一附属医院临床实验室暨南大学再生医学教育部重点实验室

T细胞免疫功能缺陷导致多数血液肿瘤患者不能产生有效的抗肿瘤免疫应答,从而逃避宿主免疫系统的攻击,即肿瘤细胞免疫逃逸.近年来认为肿瘤免疫抑制最为重要的机制之一是CD8＋T细胞的功能耗竭,主要为免疫细胞异常表达程序性死亡分子1（PD-... 详细信息

T细胞免疫功能缺陷导致多数血液肿瘤患者不能产生有效的抗肿瘤免疫应答,从而逃避宿主免疫系统的攻击,即肿瘤细胞免疫逃逸.近年来认为肿瘤免疫抑制最为重要的机制之一是CD8＋T细胞的功能耗竭,主要为免疫细胞异常表达程序性死亡分子1（PD-1）和细胞毒性T淋巴细胞相关抗原（CTLA-4）等免疫抑制所介导,而阻断此通路可以使T细胞部分或全部恢复功能.文章介绍近年来血液肿瘤中PD-1和CTLA-4及二者在介导T细胞免疫耐受中的作用及其在靶向治疗研究中的进展,为血液肿瘤的免疫靶向治疗提供新的思路.

关键词：血液肿瘤 PD-1 CTLA-4 PD—L1 分子靶向治疗

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