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第十届全国免疫学学术大会

作者：周玲玲陆帅曾成武胡峻岩陈少华杨力建卢育洪李萡吴秀丽李扬秋暨南大学再生医学教育部重点实验室暨南大学血液病研究所广州医学院第三附属医院急诊科暨南大学第一附属医院血液科

目的 :急性B淋巴细胞白血病(B-ALL)是一组异质性强的血液肿瘤,特别是成人和儿童B-ALL在临床预后方面有很大的差异性。涉及B-ALL发病机制的分子很多,但仍然有部分B-ALL的发病机制不甚明确。近期有研究报道NF-κB的负调控因子A20(肿瘤坏... 详细信息

目的 :急性B淋巴细胞白血病(B-ALL)是一组异质性强的血液肿瘤,特别是成人和儿童B-ALL在临床预后方面有很大的差异性。涉及B-ALL发病机制的分子很多,但仍然有部分B-ALL的发病机制不甚明确。近期有研究报道NF-κB的负调控因子A20(肿瘤坏死因子α诱导蛋白3,TNFAIP3)基因缺失与B细胞淋巴瘤发生相关。而我们前期研究发现在B-ALL中,A20表达上调,其在B-ALL的调控作用有待明确。为了解B-ALL中A20相关调控因素,本研究进一步分析A20基因3′端非编码区(3′UTR)区域突变情况。方法 :收集21例初发未治B-ALL病人和20例健康人外周血单个核细胞并提取DNA,利用PCR技术扩增A20基因3′UTR片段(1996 bp),并通过核苷酸序列分析技术分析其突变情况。结果 :B-ALL患者A20基因3′UTR突变检出率(9.5%),而所检测的20例健康人样本中未发生突变。2例B-ALL样本中A20基因3′UTR发现3080 C>T突变(杂合子基因型,发生率为9.5%),该位点的改变在基因库中显示为单核苷酸多态性(SNP,rs77191406)。结论 :本研究首先提供国人B-ALL中A20基因3′UTR的突变发生情况。有待进一步扩大样本明确其发生频率,并将研究这些突变对A20表达的影响。

关键词：急性B淋巴细胞白血病 A20 3′端非编码区单核苷酸多态性

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Transwell 接触共培养促进单散iPSCs 生长及分化

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中国病理生理杂志 2014年第8期30卷 1404-1409页

作者：刘庆郭永龙郭晓令连瑞玲陈建苏暨南大学附属第一医院眼科广东广州510632 暨南大学再生医学教育部重点实验室广东广州510632 医学院眼科研究所广东广州510632

目的：观察Transwell接触共培养促进单散人诱导多能干细胞（inducedpluripotentstemcells， iPSCs）生长及分化的作用。方法：将1～2代牛角膜内皮细胞（corneal endothelial cells， CECs）接种在Transwell 小室底面培养8 h后，应用Accu... 详细信息

目的：观察Transwell接触共培养促进单散人诱导多能干细胞（inducedpluripotentstemcells， iPSCs）生长及分化的作用。方法：将1～2代牛角膜内皮细胞（corneal endothelial cells， CECs）接种在Transwell 小室底面培养8 h后，应用Accutase消化及40μm过滤处理获得单散iPSCs，将其接种到已有CECs的Transwell小室内共培养14 d，前3 d使用mTeSR1培养基，第4天开始用含10％胎牛血清的低糖DMEM培养基。分别进行实时荧光定量聚合酶链式反应（ real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction ， qPCR ）、免疫荧光、死活细胞染色及碱性磷酸酶（ alkaline phosphatase ， ALP）染色，对iPSCs多能特性表达及分化进行鉴定。设定单散iPSCs共培养组为实验组，常规培养iPSCs组为对照组（一），非共培养单散iPSCs组为对照组（二）。结果：培养牛CECs形态呈典型的六边形铺路石样外观。人iPSCs呈克隆样生长，共培养3 d后iPSCs贴壁呈单散细胞生长，免疫荧光检测未分化标志Nanog和Oct4呈阳性。 qPCR检测Nanog、Oct4和Sox2 mRNA表达，实验组与对照组（一）比较差异无统计学意义（P＞0.05）。死活细胞染色显示，实验组死细胞明显减少，与对照组（二）比较差异有统计学意义（P＜0.01）。共培养14 d后，人iPSCs形态比较均一，呈多边形，体积增大，无明显克隆团块；ALP染色阴性；免疫荧光染色ZO-1、AQP1和CD31表达阳性，CD34和CD133表达阴性。 qPCR检测Oct4、Nanog和Sox2 mRNA表达明显下调，与对照组（一）比较差异有统计学意义（P＜0．01）。结论：与牛CECs共培养可增强人单散iPSCs活性，使iPSCs形态上向内皮样细胞转化，表达部分CECs的标志。 Transwell接触共培养模型可以促进单散iPSCs生长及分化。

关键词：诱导多能干细胞角膜内皮细胞 Transwell接触共培养

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RNA干扰下调PPP2R5C对T-ALL TCR Vβ亚家族分布和克隆增殖的影响

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暨南大学学报（自然科学与医学版） 2014年第4期35卷 361-366页

作者：徐艳陈宇周玲玲刘思初杨力建陈少华罗更新李扬秋暨南大学再生医学教育部重点实验室广东广州510632 暨南大学医学院血液病研究所广东广州510632 暨南大学第一附属医院血液科广东广州510630

目的:基于前期利用靶向PPP2R5C基因的小干扰RNA(PPP2R5C-siRNA)抑制白血病T细胞增殖的结果,进一步了解PPP2R5C-siRNA对T-ALL样本中TCR Vβ亚家族基因谱系及其克隆性增殖情况.方法:利用PPP2R5C-siRNA转染2例初发未治疗T-ALL病人外周血单... 详细信息

目的:基于前期利用靶向PPP2R5C基因的小干扰RNA(PPP2R5C-siRNA)抑制白血病T细胞增殖的结果,进一步了解PPP2R5C-siRNA对T-ALL样本中TCR Vβ亚家族基因谱系及其克隆性增殖情况.方法:利用PPP2R5C-siRNA转染2例初发未治疗T-ALL病人外周血单个核细胞(PBMC),设无关序列对照组(SC)和空白对照组(NC);利用实时定量PCR检测PPP2R5C基因表达水平.利用RT-PCR扩增各组样本中24个TCR Vβ亚家族基因的互补决定区3(CDR3);阳性产物进一步经基因扫描分析CDR3长度,了解其Vβ亚家族T细胞克隆性.结果:PPP2R5C-siRNA处理后明显下调PBMC中PPP2R5C基因表达水平.2例初发T-ALL外周血中分别可检测到10和17个Vβ亚家族,多数Vβ亚家族T细胞为多克隆性,病例1中Vβ9和Vβ17为寡克隆性,而病例2中,Vβ14和Vβ16呈寡克隆性;经过RNA干扰处理后,TCR Vβ亚家族表达率降低,仅检测到3和4个Vβ亚家族,分别为Vβ2,Vβ3,Vβ16和Vβ17.其中2个Vβ家族的寡克隆性模式发生改变,病例1中,Vβ17转为多克隆,而病例2中,Vβ16也转变为多克隆.结论:RNA干扰下调白血病T细胞PPP2R5C基因表达抑制细胞增殖时,在一定程度上影响TCR Vβ亚家族T细胞增殖和克隆模式变化,对正常T细胞功能可能存在一定影响.

关键词： PPP2R5C基因 T细胞-急性淋巴细胞白血病 T细胞受体Vβ基因 T细胞克隆性

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重编程诱导多功能干细胞的研究进展

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中国病理生理杂志 2014年第7期30卷 1218-1222,1227页

作者：郭晓令刘庆王婵郭永龙余榕捷陈建苏暨南大学再生医学教育部重点实验室广东广州510632 暨南大学附属第一临床学院眼科广东广州510632 暨南大学生命科学技术学院细胞生物学系广东广州510632 暨南大学医学院眼科研究所广东广州510632

诱导多功能干细胞（ induced pluripotent stem cells，iPSCs），即通过不同的转导方法，将影响重编程的关键转录因子、RNA、蛋白或小分子化合物导入到成体细胞，使其＂返老还童＂回到胚胎干细胞状态，并能够被诱导分化产生不同的细胞... 详细信息

诱导多功能干细胞（ induced pluripotent stem cells，iPSCs），即通过不同的转导方法，将影响重编程的关键转录因子、RNA、蛋白或小分子化合物导入到成体细胞，使其＂返老还童＂回到胚胎干细胞状态，并能够被诱导分化产生不同的细胞类型。 iPSCs 的问世，对干细胞的发展具有划时代的意义，使得患者来源的体细胞可以被诱导成iPSCs，用于相关疾病的检测分析与干细胞治疗，规避了免疫排斥和道德论理等问题。但是由于iPSCs诱导的低效性和致瘤性，使得这个＂新星＂在临床中的应用被质疑，目前科学家一直围绕这2个核心问题展开研究，通过改进转导途径，改变重编程方法来提高它的安全性和效率，并取得了一系列喜人的结果，从而使iPSCs未来用于临床的前景变得越来越光明。

关键词：诱导多能性干细胞安全性有效性

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HLA-G基因及免疫调节相关分子在急性B淋巴细胞白血病患者外周血中...

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第九届全国免疫学学术大会

作者：王欣玉胡峻岩金真伊陈少华杨力建卢育洪朱康儿吴秀丽李扬秋暨南大学医学院血液病研究所暨南大学附属第一医院血液科暨南大学再生医学教育部重点实验室

研究背景及目的:急性淋巴细胞白血病(ALL)具有高度的异质性,不同患者的疗效和预后具有较大的不同。寻找新的与成人ALL预后相关的基因靶标对于指导临床分层治疗以及探讨新的白血病靶向治疗靶点有着重要意义。新近报道HLA-G抗原表达水平... 详细信息

研究背景及目的:急性淋巴细胞白血病(ALL)具有高度的异质性,不同患者的疗效和预后具有较大的不同。寻找新的与成人ALL预后相关的基因靶标对于指导临床分层治疗以及探讨新的白血病靶向治疗靶点有着重要意义。新近报道HLA-G抗原表达水平与慢性B淋巴细胞白血病预后明显相关,且其临床敏感度较ZAP-70、CD38更高。我们的前期研究也发现急性B淋巴细胞白血病(B-ALL)患者膜结合型HLA-G1基因高表达组复发率高

关键词：淋巴细胞白血病免疫调节 HLA-G 外周血

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HLA-G基因及免疫调节相关分子在急性B淋巴细胞白血病患者外周血中...

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中国免疫学会第九届全国免疫学学术大会

作者：王欣玉胡峻岩金真伊陈少华杨力建卢育洪朱康儿吴秀丽李扬秋暨南大学医学院血液病研究所暨南大学附属第一医院血液科暨南大学医学院血液病研究所暨南大学再生医学教育部重点实验室

研究背景及目的:急性淋巴细胞白血病(ALL)具有高度的异质性,不同患者的疗效和预后具有较大的不同.寻找新的与成人ALL预后相关的基因靶标对于指导临床分层治疗以及探讨新的白血病靶向治疗靶点有着重要意义.新近报道HLA-G抗原表达水平与慢...

研究背景及目的:急性淋巴细胞白血病(ALL)具有高度的异质性,不同患者的疗效和预后具有较大的不同.寻找新的与成人ALL预后相关的基因靶标对于指导临床分层治疗以及探讨新的白血病靶向治疗靶点有着重要意义.新近报道HLA-G抗原表达水平与慢性B淋巴细胞白血病预后明显相关,且其临床敏感度较ZAP-70、CD38更高.我们的前期研究也发现急性B淋巴细胞白血病(B-ALL)患者膜结合型HLA-G1基因高表达组复发率高于低表达组.最近的研究发现HLA-G能够诱导生成新型的调节性T细胞,并可能影响TH17/调节性T细胞的平衡,然而其免疫调节相关机制尚不明确.因此,我们首先定量分析了初发初治、难治复发以及临床缓解的B-ALL患者外周血中HLA-G基因及免疫调节相关分子(IL-17A、IL-23、RORc、RORa、t-bet、FOXP3、GATA-3和CD25)的表达水平.

关键词：

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CdSe／ZnS核壳结构量子点用于人诱导多能干细胞标记的研究

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中华实验眼科杂志 2013年第9期31卷 819-822页

作者：谭美华陈建苏陈剑吴静招志毅戴应李善义暨南大学第一临床医学院眼科广州510632 暨南大学医学院眼科研究所广州510632 再生医学教育部重点实验室

背景近年来，诱导多能干细胞（iPSCs）的多向分化特性为各种临床疾病的细胞替代治疗提供了新的种子来源，在眼科领域，iPSCs已成为人眼变性类疾病发病机制研究的良好模型，而更好的iPSCs识别和鉴定技术是对其体内生物学特性进行研究的... 详细信息

背景近年来，诱导多能干细胞（iPSCs）的多向分化特性为各种临床疾病的细胞替代治疗提供了新的种子来源，在眼科领域，iPSCs已成为人眼变性类疾病发病机制研究的良好模型，而更好的iPSCs识别和鉴定技术是对其体内生物学特性进行研究的基础。目的探讨量子点标记人iPSCs的可行性及其最佳浓度，并观察量子点标记人iPSCs的光稳定性，为iPSCs应用于眼部细胞移植的实验研究和临床研究提供一种新的示踪技术。方法用无饲养层细胞培养法培养和扩增脐带间充质基质细胞一人iPSCs系，并用免疫荧光法对其干细胞特性进行鉴定；选取不同浓度CdSe／ZnS核壳结构的量子点对扩增培养的iPSCs进行标记，用三维去卷积实时活细胞成像系统观察标记效果。将量子点标记后的iPSCs继续培养，分别于1次传代后1周和2次传代后1周观察荧光标记的稳定性。结果倒置显微镜下观察可见培养和扩增的iPSCs呈克隆样生长，免疫荧光检测显示iPSCs中OCT4和Nanog两种干细胞标志蛋白均阳性表达。5．0、7．5、10．0nmol／L三种浓度的量子点标记后均可见iPSCs中的橘红色荧光，随着量子点浓度的增加，iPSCs中标记的橘红色颗粒明显增加，10．0nmol／L量子点标记后iPSCs中的橘红色荧光最强，荧光颗粒最多。iPSCs2次传代1周后仍可观察到量子点的橘红色荧光，但与传代前和1次传代后1周相比荧光强度减弱。结论量子点标记技术可示踪iPSCs，其荧光标记效果呈浓度依赖性。本研究实验条件下量子点标记的荧光至少可维持2周。

关键词：量子点标志物诱导多能干细胞示踪

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急性髓系白血病中eIF4E高表达与疾病进展相关

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中国实验血液学杂志 2013年第2期21卷 296-299页

作者：蒋引娣卢育洪陈少华朱康儿张学利郁志钟隽张涛罗更新陈洁潘焕玉李琰秦恋岸李扬秋暨南大学附属第一医院血液科医学院血液病研究所再生医学教育部重点实验室广东广州510632

本研究检测未治疗、未缓解/复发及缓解期间急性髓系白血病(AML)和其他良性血液病患者骨髓细胞中eIF4E基因表达水平并分析其与疾病进展的关系。采用SYBR Green I荧光定量PCR和相对定量分析法检测30例AML患者(M2型6例,M3型5例,M4型8例,M5... 详细信息

本研究检测未治疗、未缓解/复发及缓解期间急性髓系白血病(AML)和其他良性血液病患者骨髓细胞中eIF4E基因表达水平并分析其与疾病进展的关系。采用SYBR Green I荧光定量PCR和相对定量分析法检测30例AML患者(M2型6例,M3型5例,M4型8例,M5型10例,M6型1例),11例AML化疗后完全缓解患者和20例非肿瘤性血液病患者骨髓单个核细胞的eIF4E表达情况,以β2微球蛋白基因(β2M)作为内参,采用公式2-△Ct×100%计算eIF4E基因表达水平。结果表明:AML未治疗及未缓解/复发组患者骨髓细胞eIF4E表达水平(7.098±5.544)%明显高于非肿瘤患者(0.248±0.163)%(P<0.01)和化疗后完全缓解患者(0.964±0.312)%(P<0.01),各AML亚型之间不存在统计学差异,尽管M4、M5亚型的表达水平相对较高。非白血病患者与缓解患者比较,eIF4E表达水平不存在显著性差异。结论:eIF4E基因在急性髓系白血病细胞中出现高表达,并随着疾病的缓解而明显降低,因此eIF4E有可能作为监测白血病进展的一项参数。

关键词： eIF4E基因实时定量PCR 急性髓系白血病

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房水培养对牛角膜内皮细胞生长的影响

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中华实验眼科杂志 2013年第2期31卷 127-131页

作者：李善义戴应谭美华丁勇钟敬祥陈建苏暨南大学再生医学教育部重点实验室暨南大学医学院眼科研究所广州510632 暨南大学附属第一医院眼科广州510630

背景组织工程角膜内皮层的构建需要有活性的角膜内皮细胞（CECs），因此如何在体外培养出大量有生理功能的角膜内皮种子细胞是迫切需要解决的问题。目的观察房水对体外培养的牛CECs生长的影响。方法从新鲜牛眼球前房抽取1．2ml房水，经... 详细信息

背景组织工程角膜内皮层的构建需要有活性的角膜内皮细胞（CECs），因此如何在体外培养出大量有生理功能的角膜内皮种子细胞是迫切需要解决的问题。目的观察房水对体外培养的牛CECs生长的影响。方法从新鲜牛眼球前房抽取1．2ml房水，经消毒过滤后取上清备用。从牛眼角膜组织分离牛CECs并用含质量分数10％胎牛血清的低糖DMEM培养液进行培养传代。分别在培养液中加入不同体积的房水，使房水终体积分数分别为2．5％、5．O％、10．O％、15．O％、20．O％，对照组不加房水，利用细胞计数试剂盒-8（CCK_8）比色法检测各组细胞在450nm处的吸光度（A。，。）值。流式细胞仪分析10．O％房水培养对CECs细胞周期的影响。待培养细胞融合成单层后，1ml塑料枪头尖端在培养皿底划痕并用含10％胎牛血清的DMEM培养液中加入10．O％房水培养24h，未加入房水的培养液作为对照组，检测细胞单层的愈合情况。将细胞以6xlO’个／ml密度接种到培养皿中，分别用含10．0％房水的培养液和无房水的培养液孵育5d，利用DAPI荧光染色技术分析细胞密度。结果培养的CECs呈六角形、铺路石样的扁平状。CCK-8比色法检测表明，各培养组细胞的A450值总体比较差异有统计学意义（F=4．051，P=0．007）；与对照组比较，各房水培养组细胞的A450值均明显高于对照组，以含10．0％房水培养组CECs的A450值最高，差异有统计学意义（P〈0．01）。流式细胞术分析表明，10．0％房水孵育24h后，处于S-G2期的细胞比例为（34．80±3．13）％，对照组为（23．06±1．13）％，差异有统计学意义（t=-5．729，P=0．005）。划痕愈合分析检测表明，10．0％房水组的细胞单层划痕面积为（0．116±0．019）mm2，对照组为（0．358±0．049）mm2，差异有统计学意义（t=13．842，P=0．000）。DAPI荧光染色结果显示，10．0％房水组的平均细胞密度为（1439±110）个／视野，大于对照组的（1162±45）个／视野，差异有统计学意义（t=-11．020，P=0．000）。结论房水作用于培养的牛CECs后可促进CECs的生长，10．0％房水对培养的CECs有促进角膜细胞增生的作用。

关键词：房水角膜内皮细胞增生细胞培养

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MALT1基因2种转录本在正常人和B细胞白血病患者中的表达特点

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中国病理生理杂志 2013年第6期29卷 1124-1128,1132页

作者：王旭张帆徐艳吴秀丽陈少华杨力建李萡卢育洪李扬秋暨南大学再生医学教育部重点实验室广东广州510632 暨南大学医学院血液病研究所广东广州510632 暨南大学第一附属医院血液科广东广州510632

目的:比较正常人和B细胞白血病患者外周血中黏膜相关淋巴样组织淋巴瘤转位基因1(MALT1)2种异构体的分布和表达差异。方法:根据MALT1基因的结构特点,设计2对引物,通过建立2种转录本的逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法分析8例B细胞急性... 详细信息

目的:比较正常人和B细胞白血病患者外周血中黏膜相关淋巴样组织淋巴瘤转位基因1(MALT1)2种异构体的分布和表达差异。方法:根据MALT1基因的结构特点,设计2对引物,通过建立2种转录本的逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法分析8例B细胞急性淋巴细胞白血病(B-ALL)、8例B细胞慢性淋巴细胞白血病(B-CLL)和8例正常人的外周血单个核细胞(PBMC)中MALT1的表达情况。实时定量PCR分析各组样本的MALT1 mRNA表达水平。结果:所有样本中均能得到所预期的PCR产物,其中第1对引物可以扩增出2条片段,分别为MALT1转录本1(包含第5、6、7、8、9外显子)和MALT1转录本2(包含第5、6、8、9外显子),第2对引物只能扩增出1条包含转录本1的片段,所有PCR产物均通过核苷酸序列分析证实。MALT1 2种转录本均在外周血中有表达,并且MALT1转录本2表达水平高于转录本1。通过灰度分析发现,在B-ALL中,MALT1转录本1的灰度与正常人相比显著增高(P<0.05),而MALT1转录本2显著降低(P<0.05);在B-CLL中,MALT1 2种转录本的灰度与正常人相比无显著差异(P>0.05)。此外,B-ALL中,MALT1 mRNA表达水平(中位数:1.253)低于正常人(中位数:1.976)(P=0.05);而B-CLL中,MALT1 mRNA的表达水平与正常人相比无显著差异(P>0.05)。结论:MALT1 2种转录本均表达于正常和B细胞白血病样本中,但B-ALL中两者的表达水平有所差异,同时,B-ALL的MALT1 mRNA表达水平也有所降低。B-ALL中MALT1基因表达的异常可能影响MALT1信号通路而与疾病的发生发展相关。

关键词：黏膜相关淋巴样组织淋巴瘤转位基因1 转录本白血病 B细胞基因表达

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