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第八届全国免疫学学术大会

作者：史丽陈少华杨力建吴秀丽李萡卢育洪郁志沈琦闫小娟李扬秋暨南大学医学院血液病研究所暨南大学第一附属医院血液科暨南大学再生医学教育部重点实验室

研究背景:白血病病人常伴有严重的T细胞免疫缺陷,我们的前期研究显示急性髓细胞白血病(AML)病人T细胞亚家族存在明显缺失,胸腺近期输出功能低下,T细胞受体(TCR)信号传导分子TCRζ等表达低下。目的:了解TCRζ缺陷的AML病人外周血T细胞中E... 详细信息

研究背景:白血病病人常伴有严重的T细胞免疫缺陷,我们的前期研究显示急性髓细胞白血病(AML)病人T细胞亚家族存在明显缺失,胸腺近期输出功能低下,T细胞受体(TCR)信号传导分子TCRζ等表达低下。目的:了解TCRζ缺陷的AML病人外周血T细胞中Elf-1、Zap-70和Fcε R Iγ基因的表达特点。方法采用SYB R GreenⅠ荧光定量PCR和相对定量分析法检测10例TCRζ缺陷的AML病人外周血CD3+T细胞中Zap-70、Elf-1和Fcε R Iγ基因的表达情况。以β2微球蛋白基因(β2M)作为内参,10例健康成人作为对照;采用相对定量公式:2-△Ct×100%,计算Zap-70、Elf-1和Fcε R Iγ基因的表达水平。结果:所有样本均表达Elf-1、Zap-70和Fcε R Iγ基因,健康成人在所有基因中的表达水平比较集中,而AML病人的样本在同一基因中的表达水平差异较大;TCRζ缺陷的AML病人外周血T细胞中Elf-1基因的表达水平(中位数8.526%)明显低于健康对照组(中位数:33.237%)(P=0.000),Fcε R Iγ基因的表达水平(中位数:2.571%)则高于健康对照组(中位数:0.958%)(P=0.019),而在健康对照组中,Fcε R Iγ基因表达水平明显低于TCRζ基因的表达水平(P=0.000)。Zap-70基因在两组中的表达水平没有显著性差异(中位数:0.479%和0.781%;P=0.247);进一步采用相关性分析显示:在健康对照组中,Elf-1基因与TCRζ基因表达水平呈正相关(rs=0.636,P=0.048),在AML病人中,Elf-1基因与相对应的TCRζ基因表达水平也呈正相关趋势,但尚未有统计学意义(rs=0.624,P=0.054),Elf-1与Fcε R Iγ、Fcε R Iγ基因与TCRζ基因的表达水平在AML和健康组的相关性未有统计学意义,而Zap-70基因与TCRζ基因的表达水平在两组中则均呈正相关(rs=0.661,P=0.038;rs=0.697,P=0.025)结论:TCRζ缺陷的AML病人T细胞中Elf-1基因的低表达可能是导致AML病人TCRζ基因缺陷性表达的原因之一,而Fcε R Iγ基因的高表达则可能是在一定程度上缓解了TCRζ基因缺陷性表达所带来的T细胞免疫异常。

关键词：急性髓细胞白血病 TCRζ Elf-1 Zap-70 FcεR Iγ 基因表达

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急性B淋巴细胞白血病患者外周血高表达ZAP-70与HLA-G基因及其临床意义

急性B淋巴细胞白血病患者外周血高表达ZAP-70与HLA-G基因及其临床...

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第十五届全国临床肿瘤学大会暨2012年CSCO学术年会

作者：吴秀丽陈少华卢育洪朱康儿杨力建李扬秋 510632 暨南大学医学院血液病研究所 510632 暨南大学附属第一医院 510632 暨南大学医学院血液病研究所 510632 暨南大学再生医学教育部重点实验室

急性淋巴细胞白血病(ALL)具有高度的异质性,不同患者的疗效和预后具有较大的不同.目前Zeta链相关蛋白-70(ZAP-70)被认为是慢性B淋巴细胞白血病(B-CLL)的重要独立预后指标。本文旨在了解ZAP70与HLA-G在急性B淋巴细胞白血病(B-ALL)中的表... 详细信息

急性淋巴细胞白血病(ALL)具有高度的异质性,不同患者的疗效和预后具有较大的不同.目前Zeta链相关蛋白-70(ZAP-70)被认为是慢性B淋巴细胞白血病(B-CLL)的重要独立预后指标。本文旨在了解ZAP70与HLA-G在急性B淋巴细胞白血病(B-ALL)中的表达情况，首先定量分析初发初治B-ALL患者以及难治复发B-ALL患者ZAP70基因和HLA-G基因的表达水平。结果表明B-ALL患者ZAP-70和HLA-G1基因表达水平均显著增高，且两者高表达水平可能影响B-ALL的预后。

关键词：急性B淋巴细胞白血病病理机制基因表达临床预后 ZAP-70基因 HLA-G基因

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TCRζ缺陷的急性髓细胞白血病病人T细胞中Elf-1、Zap-70和FcεR Iγ基因的表达特点

TCRζ缺陷的急性髓细胞白血病病人T细胞中Elf-1、Zap-70和FcεR I...

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第十五届全国临床肿瘤学大会暨2012年CSCO学术年会

作者：史丽李扬秋陈少华杨力建吴秀丽李萡卢育洪郁志沈琦闫小娟 510632 暨南大学医学院血液病研究所 510632 暨南大学医学院血液病研究所 510632暨南大学再生医学教育部重点实验室 510632 暨南大学第一附属医院血液科

本文旨在了解TCRζ缺陷的急性髓细胞白血病(AML)病人外周血T细胞中Elf-1、Zap-70和FcεR Iγ基因的表达特点.采用SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR和相对定量分析法检测10例TCRζ缺陷的AML病人外周血CD3+T细胞中Zap-70、Elf-1和FcεR Iγ基因... 详细信息

本文旨在了解TCRζ缺陷的急性髓细胞白血病(AML)病人外周血T细胞中Elf-1、Zap-70和FcεR Iγ基因的表达特点.采用SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR和相对定量分析法检测10例TCRζ缺陷的AML病人外周血CD3+T细胞中Zap-70、Elf-1和FcεR Iγ基因的表达情况.以β2微球蛋白基因(β2M)作为内参,10例健康成人作为对照;采用相对定量公式:2-△ctx 100％,计算Zap-70、Elf-1和FcεR Iγ基因的表达水平.试验表明TCRζ缺陷的AML病人T细胞中Elf-1基因的低表达可能是导致AML病人TCRζ基因缺陷性表达的原因之一，而FcεR Iγ基因的高表达则可能是在一定程度上缓解了TCRζ基因缺陷性表达所带来的T细胞免疫异常。

关键词：急性髓细胞白血病病理机制基因表达临床试验

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带有穿膜肽PTD的重组Oct4的制备及活性鉴定

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中国病理生理杂志 2011年第9期27卷 1790-1795页

作者：李红阳李晓霞余榕捷刘晓飞王静静苏航陈建苏暨南大学第一临床医学院广东广州510632 暨南大学医学院眼科广东广州510632 暨南大学再生医学教育部重点实验室广东广州510632 暨南大学生物工程研究所广东广州510632

目的:重组蛋白构建细胞转录因子PTD-Oct4。方法:利用重叠延伸PCR法重组目的基因构建质粒pKYB-PTD-Oct4,并转染至*** ER2566。镍柱纯化重组蛋白并用Western bloting对其进行鉴定。用异硫氰酸荧光素(FITC)标记PTD-Oct4,检测其穿透中国仓... 详细信息

目的:重组蛋白构建细胞转录因子PTD-Oct4。方法:利用重叠延伸PCR法重组目的基因构建质粒pKYB-PTD-Oct4,并转染至*** ER2566。镍柱纯化重组蛋白并用Western bloting对其进行鉴定。用异硫氰酸荧光素(FITC)标记PTD-Oct4,检测其穿透中国仓鼠卵巢(CHO)细胞膜的能力;用荧光共振能量转移(FRET)检测重组融合蛋白PTD-Oct4结合目的DNA的活性。结果:成功获得目的蛋白PTD-Oct4,其可以成功进入细胞,定位于细胞核内,穿膜效率为(28.3±2.4)%,并具有与目标DNA序列特异结合的能力。结论:制备重组PTD-Oct4为外源蛋白诱导多能干细胞(IPSCs)奠定基础。

关键词： Oct4 诱导全能干细胞

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Maxadilan对诱导多能干细胞增殖的作用

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中国病理生理杂志 2011年第10期27卷 1982-1988页

作者：招志毅陈建苏余榕捷刘晓飞谭美华李红阳暨南大学附属第一医院眼科医学院眼科研究所再生医学教育部重点实验室广东广州510632 暨南大学生物工程研究所广东广州510632

目的:探讨垂体腺苷酸环化酶激活肽(PACAP)的PAC1受体特异激动剂maxadilan对人诱导多能干细胞(IPSCs)增殖的作用。方法:培养人IPSCs,利用RT-PCR和Western blotting检测IPSCs的PAC1受体;IP-SCs培养基中加入不同浓度的maxadilan作为实验组... 详细信息

目的:探讨垂体腺苷酸环化酶激活肽(PACAP)的PAC1受体特异激动剂maxadilan对人诱导多能干细胞(IPSCs)增殖的作用。方法:培养人IPSCs,利用RT-PCR和Western blotting检测IPSCs的PAC1受体;IP-SCs培养基中加入不同浓度的maxadilan作为实验组,未加入maxadilan作为对照组。CCK-8法检测maxadilan对IPSCs增殖的影响;流式细胞仪分析maxadilan对细胞周期的影响;染色体核型分析检测maxadilan对IPSCs核型的影响;real-time-qPCR和免疫荧光法从基因及蛋白水平检测maxadilan对IPSCs的多能性基因Nanog和OCT4的影响;real-time qPCR检测maxadilan对IPSCs及其形成胚体细胞的Nestin和PAX6基因的影响;RT-PCR检测maxadilan对IPSCs分化为三胚层能力的影响。结果:RT-PCR和Western blotting均显示IPSCs含有PAC1受体;CCK-8法显示100 nmol/L maxadilan组比对照组细胞增多16%(P<0.05);流式细胞仪分析显示孵育100 nmol/Lmaxadilan 3 h、6 h和9 h后IPSCs增殖指数为47.23%、59.70%、55.67%,与对照组37.00%相比,差异显著(P<0.05);染色体核型分析显示maxadilan处理过的IPSCs核型正常;RT-PCR、real-time qPCR和免疫荧光法显示maxadilan未影响IPSCs多能性。结论:人IPSCs存在PAC1受体,maxadilan对人IPSCs具有促进细胞增殖作用且没有影响IPSCs的多能性和染色体核型。

关键词： Maxadilan 诱导多能干细胞细胞增殖染色体核型分析

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抗原特异TCR α和β链基因克隆及分子空间结构预测

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第三军医大学学报 2011年第4期33卷 349-352页

作者：尹青松谭获陈少华杨力建李萡叶静梅李扬秋河南省肿瘤医院郑州450008 暨南大学医学院血液病研究所广州510632 广州医学院第一附属医院肿瘤血液中心广州510260 暨南大学再生医学教育部重点实验室

目的扩增弥漫大B细胞淋巴瘤(diffuse large B cell lymphoma,DLBCL)相关抗原特异T细胞克隆的全长TCRα和β链基因序列,并对其三维空间结构进行预测。方法从已鉴定的2例伴有克隆性增殖TCR Vα6和Vβ13亚家族T细胞的DLBCL患者外周血中克... 详细信息

目的扩增弥漫大B细胞淋巴瘤(diffuse large B cell lymphoma,DLBCL)相关抗原特异T细胞克隆的全长TCRα和β链基因序列,并对其三维空间结构进行预测。方法从已鉴定的2例伴有克隆性增殖TCR Vα6和Vβ13亚家族T细胞的DLBCL患者外周血中克隆全长TCRα和β基因序列,利用Primer Premier 5.0分析软件推算其相应的氨基酸序列,并通过自动化蛋白质模建服务器SWISS-MODEL进行三维空间结构预测。然后利用蛋白质三维图像分析软件Rasmol对所获得的TCR三维空间结构进行显示和分析。结果获得DLBCL相关抗原特异TCRα6和β13全长基因序列及其氨基酸序列。2例患者的TCR Vα6的空间结构与PDB ID:3ffcD模型相似,序列同源性分别为92.16%和91.71%;而2个TCR Vβ13也均具有同一个空间结构模型PDB ID:2ialD,序列同源性分别为92.95%和92.18%。结论来自不同DLBCL患者外周血中克隆性增殖的TCR Vα6或Vβ13亚家族T细胞的TCR具有高度同源性的空间结构,提示其可能识别相同的肿瘤抗原表位。

关键词： T细胞受体 CDR3区同源建模弥漫大B细胞淋巴瘤

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一种培养原代小鼠角膜基质细胞的新方法

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眼科新进展 2011年第6期31卷 524-526页

作者：李晓霞陈建苏余榕捷苏杭李娟田振彩戴静赵秀丽李红阳招志毅暨南大学第一临床医学院眼科广东省广州市510632 暨南大学医学院眼科研究所广东省广州市510632 暨南大学生物工程研究所广东省广州市510632 暨南大学再生医学教育部重点实验室

目的改良小鼠角膜基质细胞分离培养方法 ,为角膜基质细胞生物学和角膜组织工程等研究提供更好的种子细胞。方法采用Dispase酶消化法联合组织块贴壁法分离、培养原代小鼠角膜基质细胞,倒置显微镜下观察细胞生长情况,通过间接免疫荧光化... 详细信息

目的改良小鼠角膜基质细胞分离培养方法 ,为角膜基质细胞生物学和角膜组织工程等研究提供更好的种子细胞。方法采用Dispase酶消化法联合组织块贴壁法分离、培养原代小鼠角膜基质细胞,倒置显微镜下观察细胞生长情况,通过间接免疫荧光化学染色Vimentin表型和RT-PCR检测Vimentin、Lumican和CK12基因表达对培养的细胞进行鉴别。结果倒置显微镜下可见小鼠角膜基质细胞呈三角形和树枝状,细胞间连接明显,可形成网状连接;免疫荧光化学鉴定小鼠角膜基质细胞表达Vimentin阳性;RT-PCR显示Vimentin和Lumican基因表达阳性,CK12表达阴性。结论 Dispase酶消化法联合组织块贴壁法培养可获得具有角膜基质细胞特性的细胞,本方法为体外获得单纯小鼠角膜基质细胞提供了简单高效的途径。

关键词：角膜基质细胞培养小鼠

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Maxadilan 对兔角膜上皮细胞的促增殖作用

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眼科新进展 2011年第10期31卷 901-903,911页

作者：招志毅陈建苏余榕捷谭美华李红阳刘晓飞王静静暨南大学附属第一医院眼科暨南大学医学院眼科研究所再生医学教育部重点实验室广东省广州市510632 暨南大学生物医学工程研究所广东省广州市510632

目的探讨垂体腺苷酸环化酶激活肽(pituitary adenylate cyclase activating polypeptide,PACAP)的PAC1受体特异激动剂Maxadilan对角膜上皮细胞的促增殖作用。方法分离新西兰大白兔角膜上皮细胞,并在含体积分数10%胎牛血清的DMEM培养基... 详细信息

目的探讨垂体腺苷酸环化酶激活肽(pituitary adenylate cyclase activating polypeptide,PACAP)的PAC1受体特异激动剂Maxadilan对角膜上皮细胞的促增殖作用。方法分离新西兰大白兔角膜上皮细胞,并在含体积分数10%胎牛血清的DMEM培养基中培养。利用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测兔角膜上皮细胞PACAP的PAC1受体;细胞增殖实验采用CCK-8法检测,角膜上皮细胞培养基中分别加入0.01μmol.L-1、0.03μmol.L-1、0.05μmol.L-1、0.10μmol.L-1、0.15μmol.L-1Maxadilan作为实验组,未加入Maxadilan作为对照组,检测不同浓度的Maxadilan对角膜上皮细胞增殖的影响;流式细胞仪分析0.10μmol.L-1Maxadilan对细胞周期的影响。结果 RT-PCR检测显示兔角膜上皮细胞含有PACAP的PAC1受体;CCK-8法检测显示0.05μmol.L-1、0.10μmol.L-1、0.15μmol.L-1Maxadilan实验组分别比对照组细胞增多29.1%、41.5%、32.5%,与对照组相比差异有统计学意义(P分别为0.001、0.000、0.000);流式细胞仪分析显示0.10欁μmol.L-1Maxadilan组细胞增殖指数平均值为35.98%,与对照组细胞细胞增殖指数平均值29.48%相比,差异有统计学意义(P=0.014)。结论角膜上皮细胞存在PACAP的PAC1受体,Maxadilan对角膜上皮细胞有促增殖作用。

关键词： Maxadilan 角膜上皮细胞细胞增殖兔

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T-ALL中Notch1基因突变和高表达特点

T-ALL中Notch1基因突变和高表达特点

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第13届全国实验血液学会议

作者：林春兰郑海涛王春燕杨力建陈少华李萡周羽竝谭获李扬秋暨南大学医学院生化教研室暨南大学医学院血液病研究所广州医学院第一附属医院肿瘤血液中心暨南大学再生医学教育部重点实验室

Notch1信号通路在T细胞的发育过程起重要作用,对T细胞发育的各个阶段进行精细调节,Notch1表达失调可使得T淋巴细胞的发育阻断在双阳性阶段。近年来,不少研究报道了T-ALL/淋巴瘤中Notch1基因突变和异常表达情况,有认为可以作为T-ALL预后... 详细信息

Notch1信号通路在T细胞的发育过程起重要作用,对T细胞发育的各个阶段进行精细调节,Notch1表达失调可使得T淋巴细胞的发育阻断在双阳性阶段。近年来,不少研究报道了T-ALL/淋巴瘤中Notch1基因突变和异常表达情况,有认为可以作为T-ALL预后的一个指标。本研究利用RT-PCR和核苷酸序列分析分析了13例T-ALL病人中Notch1基因突变及其表达水平变化特点。研究发现,3例T-ALL中出现Notch1基因突变,

关键词：基因突变高表达 Notchl T-ALL Notch1

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抗凋亡蛋白BRE、TNFR1和自体吞噬蛋白Beclin1在小鼠肝纤维化的表达及Reversine对其的影响

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广东医学 2011年第15期32卷 1941-1944页

作者：李莲莲陈若翰陈淑珍甄永苏古维立蔡冬青崔耀隆李嘉豪暨南大学再生医学教育部重点实验室广州510632 中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所北京100050 广东省广州市第一人民医院肝胆外科 510180 香港中文大学病理化学系香港中文大学生物医学学院

目的研究抗凋亡蛋白BRE、TNFR1蛋白和自体吞噬蛋白Beclin1在小鼠肝纤维化的表达,并观察Reversine对其表达的影响。方法 24只昆明小鼠随机分为6组:第1组不作任何处理;第2组皮下注射0.1 mLCCl4/oil2,4 h后处死取肝组织;第3组皮下注射0.1 m... 详细信息

目的研究抗凋亡蛋白BRE、TNFR1蛋白和自体吞噬蛋白Beclin1在小鼠肝纤维化的表达,并观察Reversine对其表达的影响。方法 24只昆明小鼠随机分为6组:第1组不作任何处理;第2组皮下注射0.1 mLCCl4/oil2,4 h后处死取肝组织;第3组皮下注射0.1 mL CCl4/oil4,8 h后处死;第4组皮下注射0.1 mL CCl4/oil,每周2次,连续注射6周,停止用药后15 d处死;第56、组方法同第4组,停止注射CCl4后分别用Reversine 501、00mg/(kg.d)皮下注射15 d,15 d后进行免疫组织化学检测,对BRE、TNFR1和Beclin1 3种蛋白的表达进行分析。结果免疫组化结果发现BRE、TNFR1和Beclin1 3种蛋白在CCl4诱肝纤维化过程中的表达明显上升,而经过纤维化抑制剂Reversine的处理后3种蛋白的表达下降至正常小鼠肝的水平。结论 BRE、TNFR1和Beclin1 3种应激反应分子可能在肝纤维化与肝炎发病中起重要作用,它们有可能成为肝病诊断标志物和治疗肝脏疾病的重要靶点。

关键词： BRE TNFR1 Beclin1 肝纤维化 Reversine

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