检索结果-内蒙古大学图书馆

肿瘤防治研究 2010年第5期37卷 547-550页

作者：李菊香陈少华杨力建林春兰李扬秋暨南大学附属第一医院临床医学检验中心广州510632 暨南大学医学院血液病研究所暨南大学医学院生化教研室暨南大学再生医学教育部重点实验室

目的分析B细胞非霍奇金淋巴瘤(B-NHL)患者外周血中T细胞信号转导分子TCRζ基因的表达特点。方法采用SYBRGreenⅠ实时定量RT-PCR和相对定量分析法检测17例B-NHL患者外周血单个核细胞(PBMCs)中TCRζ基因的表达情况,以β2微球蛋白基因(β2M... 详细信息

目的分析B细胞非霍奇金淋巴瘤(B-NHL)患者外周血中T细胞信号转导分子TCRζ基因的表达特点。方法采用SYBRGreenⅠ实时定量RT-PCR和相对定量分析法检测17例B-NHL患者外周血单个核细胞(PBMCs)中TCRζ基因的表达情况,以β2微球蛋白基因(β2M)作为内参,采用相对定量公式:2-△Ct×100%,计算TCRζ基因的相对mRNA表达量,17例健康成人作为对照。结果全部B-NHL样本均全部表达TCRζ基因,但其表达水平显著低于对照组(P=0.000),健康人PBMCs的TCRζ基因mRNA的表达水平为B-NHL患者的3.26倍。B-NHL患者TCRζ基因表达水平与患者的年龄无相关性。结论 B-NHL患者中TCRζ基因的mRNA表达水平明显下调,可能是其细胞免疫功能缺陷的原因之一。

关键词： TCRζ基因非霍奇金淋巴瘤实时定量RT-PCR

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PACAP38对兔角膜瓣术后三叉神经节细胞及角膜神经生长的影响

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眼科研究 2010年第8期28卷 694-698页

作者：赵秀丽陈建苏余榕捷丁勇郑佩娥李晓霞田振彩戴静暨南大学附属第一医院眼科暨南大学医学院眼科研究室再生医学教育部重点实验室广州510632 暨南大学生物医学工程系广州510632

目的观察垂体腺苷酸环化酶激活肽(PACAP38)对培养的兔三叉神经节细胞及角膜瓣术后角膜神经生长的影响。方法从2周龄新西兰白兔中分离三叉神经节细胞,并在神经元基础培养液中进行培养。培养24h后在培养液中分别加入1μmol/LPACAP38(A组)... 详细信息

目的观察垂体腺苷酸环化酶激活肽(PACAP38)对培养的兔三叉神经节细胞及角膜瓣术后角膜神经生长的影响。方法从2周龄新西兰白兔中分离三叉神经节细胞,并在神经元基础培养液中进行培养。培养24h后在培养液中分别加入1μmol/LPACAP38(A组)、0.1μmol/LPACAP38(B组),C组培养液中加入PBS。1周后行抗神经纤维丝蛋白(NF200)免疫荧光染色鉴别培养的三叉神经节细胞。27只新西兰白兔右眼行角膜瓣手术,并分为3组,术后1d分别以10μmol/LPACAP38、5μmol/LPACAP38或PBS点眼,共8周,行角膜敏感度测定和NF200免疫荧光染色,评价术后不同时间角膜神经的修复情况。结果 PACAP38培养的三叉神经节细胞有较多神经细胞存活,伸出突触并交织呈网状,A组神经细胞存活最多。角膜瓣手术的3个组角膜敏感度随着术后时间的延长逐渐增加(Ftime=58.196,P=0.00),10μmol/LPACAP38点眼组角膜敏感度恢复最快。10μmol/LPACAP38点眼组和5μmol/LPACAP38点眼组角膜敏感度值明显高于PBS点眼组,差异均有统计学意义(P=0.000,P=0.005)。角膜神经染色示10μmol/LPACAP38点眼组角膜神经密度较5μmol/LPACAP38点眼组和PBS点眼组高,神经干短端多膨大,以出芽方式发出细微的新生神经纤维芽。结论 PACAP38能促进兔三叉神经节细胞增生及诱导神经突形成,可促进角膜敏感性恢复及角膜神经修复再生。

关键词：垂体腺苷酸环化酶激活肽细胞增生分化神经再生角膜

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有序排列微模板培养角膜基质细胞及其细胞生物学变化

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眼科研究 2010年第8期28卷 699-702页

作者：田振彩陈建苏周平李沁华李晓霞戴静赵秀丽暨南大学附属第一医院眼科暨南大学医学院眼科研究室再生医学教育部重点实验室广州510632 暨南大学生物医学工程系广州510632

目的探讨CO2激光打标机处理的有序排列微模板培养兔角膜基质细胞的生长特征及其细胞生物学变化。方法用CO2激光打标机刻制的聚苯乙烯有序排列微模板培养兔角膜基质细胞,模板沟槽划线间隔距离0.25mm者为窄间隔组,间隔距离1mm者为宽间隔组... 详细信息

目的探讨CO2激光打标机处理的有序排列微模板培养兔角膜基质细胞的生长特征及其细胞生物学变化。方法用CO2激光打标机刻制的聚苯乙烯有序排列微模板培养兔角膜基质细胞,模板沟槽划线间隔距离0.25mm者为窄间隔组,间隔距离1mm者为宽间隔组,平板组作为对照组。将角膜基质细胞悬液以1×105/mL细胞密度接种于培养板中,倒置显微镜下观察细胞生长情况,苏木精-伊红染色观察细胞排列的形态学差异,免疫荧光法检测培养板上细胞的波形蛋白,实时监测显微镜下观察24h窄间隔组细胞的接触指引特性及细胞的动态生长过程。结果培养第1天倒置显微镜下见3组培养细胞贴壁生长状态无明显区别,窄间隔组和宽间隔组细胞逐渐围绕沟槽接触指引生长,表现为有序排列,且窄间隔组较宽间隔组明显。苏木精-伊红染色和免疫荧光染色显示培养的细胞在窄间隔组沟槽的接触指引下呈有序排列,呈现10余层细胞排列的平行板层结构。3组细胞波形蛋白免疫荧光染色均呈阳性反应。实时监测显微镜下可见窄间隔组细胞体部首先贴壁,在接触指引下生长,而细胞在干燥环境下的凋亡始于细胞伪足突起处。结论利用CO2激光打标机制备的有序排列微模板可获得有序排列的角膜基质细胞,有利于在接近生理状态条件下角膜基质层的构建。

关键词：角膜基质细胞有序排列细胞培养微纹理细胞生物学

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自体血小板血浆对角膜基质细胞生物学功能的影响

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眼科新进展 2010年第8期30卷 705-708,713页

作者：戴静陈建苏李晓霞田振彩赵秀丽暨南大学附属第一医院眼科暨南大学医学院眼科研究室再生医学教育部重点实验室广东省广州市510632

目的观察自体血小板血浆对体外培养的角膜基质细胞生物学功能的影响。方法采用二次离心法分离兔全血获得富血小板血浆（platelet—richplasma，PRP）和贫血小板血浆（platelet—poorplasma，PPP）；原代培养兔角膜基质细胞，取第3代细... 详细信息

目的观察自体血小板血浆对体外培养的角膜基质细胞生物学功能的影响。方法采用二次离心法分离兔全血获得富血小板血浆（platelet—richplasma，PRP）和贫血小板血浆（platelet—poorplasma，PPP）；原代培养兔角膜基质细胞，取第3代细胞用于实验。在角膜基质细胞中分别加入体积分数5．0％的PRP和PPP，倒置显微镜下观察细胞生长情况，对比PRP和PPP对角膜基质细胞的促生长情况，以确定自体血小板血浆中促增殖作用的最有效成分。采用不同浓度的PRP（体积分数分别为2．5％、5．0％、10．0％）作用于角膜基质细胞，以及采用不同浓度PRP（体积分数分别为2．5％、5．0％、20．0％）联合FBS作用于角膜基质细胞，CCK-8法检测PRP、PRP联合FBS促进角膜基质细胞增殖的作用。对不同浓度（体积分数分别为2．5％、5．0％）PRP作用的角膜基质细胞进行免疫荧光法检测其表达的平滑肌型肌动蛋白（a-smooth muscle actin，a-SMA）．结果加入体积分数5．0％PRP组促细胞增殖作用强于加入体积分数5．0％PPP组。PRP在体积分数为2．5％～10．0％时，均能促进角膜基质细胞的增殖，其中体积分数为5．0％时作用最强；体积分数5．0％PRP与FBS联合作用时的吸光度值随时间的变化均明显高于两者单独作用时的吸光度值（均为P〈0．05），而体积分数20．0％的PRP与FBS联合作用时的吸光度值随时间的变化低于FBS单独作用时的吸光度值。不同浓度PRP处理的角膜基质细胞均可见a-SMA的阳性表达。结论低浓度的PRP能有效促进角膜基质细胞的增殖及活化，有利于角膜基质损伤的快速修复，促进伤口愈合，防止严重并发症的发生。

关键词：自体血小板血浆富血小板血浆贫血小板血浆角膜基质细胞兔

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兔房水HPCE检测及其对培养角膜基质细胞的作用

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暨南大学学报（自然科学与医学版） 2010年第4期31卷 374-377页

作者：陈建苏李晓霞唐光霞麦志伟王升威洪嘉凡罗子源李泽键卢春婷暨南大学医学院眼科研究室广东广州510632 暨南大学再生医学教育部重点实验室广东广州510632 暨南大学医学院口腔医学系广东广州510632 暨南大学医学院临床医学系广东广州510632

目的:采用高效毛细管电泳(HPCE)的毛细管区带电泳(CZE)分离与检测兔房水中各蛋白组成,观察房水对培养角膜基质细胞的作用。方法:CZE测定新西兰白兔房水蛋白成分:运行缓冲液硼酸钠-硼酸缓冲溶液(pH=8.7、9.1、9.4);毛细管柱温20℃;检测波... 详细信息

目的:采用高效毛细管电泳(HPCE)的毛细管区带电泳(CZE)分离与检测兔房水中各蛋白组成,观察房水对培养角膜基质细胞的作用。方法:CZE测定新西兰白兔房水蛋白成分:运行缓冲液硼酸钠-硼酸缓冲溶液(pH=8.7、9.1、9.4);毛细管柱温20℃;检测波长200 nm;压力进样0.5 psi,进样时间10s;运行电压20 kV。第1代培养角膜基质细胞进行DMEM/F12培养,加入体积分数为10%的房水,CCK-8检测24 h后细胞增殖情况,每天倒置显微镜下观察细胞生长情况。结果:应用pH=9.4的硼酸钠-硼酸缓冲溶液可获得分离效果较理想的兔房水毛细管电泳峰图。加入房水24 h后CCK8检测吸光度增高(P<0.05),角膜基质细胞生长良好。结论:HPCE可快速有效方便检测兔房水蛋白成分,体积分数为10%的兔房水可促进培养的兔角膜基质细胞生长与增殖。

关键词：房水高效毛细管电泳(HPCE) 毛细管区带电泳(CZE) 角膜基质细胞分离

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CML病人外周血T细胞CD3基因表达模式变化

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中国实验血液学杂志 2010年第4期18卷 937-941页

作者：杨力建陈少华王亮陈思郁志卢育洪李扬秋暨南大学医学院血液病研究所广东广州510632 暨南大学附属第一医院血液科广东广州510632 暨南大学再生医学教育部重点实验室广东广州510632

在我们前期研究发现慢性髓系白血病(CML)病人中T细胞受体信号传导分子CD3ζ基因表达下调的基础上,本研究进一步分析病人外周血中全部4种CD3γδεζ基因的表达模式特点,以深入了解病人的T细胞免疫中信号转导的变化。利用SYBR GreenⅠ实... 详细信息

在我们前期研究发现慢性髓系白血病(CML)病人中T细胞受体信号传导分子CD3ζ基因表达下调的基础上,本研究进一步分析病人外周血中全部4种CD3γδεζ基因的表达模式特点,以深入了解病人的T细胞免疫中信号转导的变化。利用SYBR GreenⅠ实时荧光定量RT-PCR检测17例初诊慢性期CML病人外周血单个核细胞中CD3γ、δ、ε和ζ链的表达水平,以β2微球蛋白基因(β2MG)作为内参照,采用相对定量公式:2-△Ct×100%,计算CD3分子各亚单位的相对mRNA表达量,以17例健康成人外周血作为对照。结果表明:CML中CD3γ、δ、ε基因表达水平分别为2.344%,0.515%和3.516%(中位数),与健康对照组比较(3.093%,0.853%和2.302%)并没有显著性差异(p=0.072,p=0.190,p=0.615),而CML中CD3ζ链基因的表达水平(0.395%)则明显低于健康对照组(1.538%)(p<0.001)。在CML中4种CD3分子表达水平模式依次为CD3ε>CD3γ>CD3δ>CD3ζ,而对照组中则为CD3γ>CD3ε>CD3ζ>CD3δ。结论:本研究首先提供了CML病人中CD3各基因表达模式情况,显示以CD3ζ为主的TCR信号分子的表达缺陷,4种CD3链分子的表达水平模式也发生变化。

关键词：慢性髓系白血病 CD3链基因基因表达免疫缺陷

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兔角膜重度碱烧伤后异种猫前板层角膜移植重建角膜眼表

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眼科新进展 2010年第2期30卷 105-108,114页

作者：吴连胜陈建苏徐锦堂丁勇唐光霞郑佩娥雷自鸣暨南大学医学院眼科研究室再生医学教育部重点实验室广东省广州市510632 暨南大学附属第一临床医学院眼科广东省广州市510632 暨南大学医学院病理教研室广东省广州市510632 侏罗纪生化有限公司广东省恩平市529458 浙江省温州市龙湾区第一人民医院眼科

目的研究猫新鲜前板层角膜移植治疗兔右眼角膜重度碱烧伤的疗效。方法将16只5个月龄的健康雄性新西兰白兔右眼制作重度角膜碱烧伤模型,随机分成A、B两组,每组各8只兔,其中A组为猫(4只)→兔异种前板层角膜移植组,植片直径为11.0mm,植床... 详细信息

目的研究猫新鲜前板层角膜移植治疗兔右眼角膜重度碱烧伤的疗效。方法将16只5个月龄的健康雄性新西兰白兔右眼制作重度角膜碱烧伤模型,随机分成A、B两组,每组各8只兔,其中A组为猫(4只)→兔异种前板层角膜移植组,植片直径为11.0mm,植床直径为10.0mm;B组未行手术。A组兔术后及B组造模后用500g.L-1葡萄糖及复方氯霉素滴术眼直至处死,记录两组疗效指数,并分别于术后1个月、2个月、3个月取材进行术眼角膜病理学及扫描电镜检查。结果3个月内A组8只角膜碱烧伤兔经异种猫前板层角膜移植后,7只移植角膜保持透明,1只出现局限性角膜混浊和角膜新生血管;而B组未手术的8只兔中出现角膜白斑、新生血管4只,角膜溃疡、穿孔3只,角膜溶解穿孔1只,并且有4只发生睑球粘连等并发症。A、B两组治疗后1个月、2个月、3个月平均疗效指数差异均有统计学意义(均为P<0.05)。A组透明角膜中组织学及扫描电镜下的结构特征清晰;B组兔角膜中有明显的角膜水肿和炎性细胞浸润,组织学及扫描电镜下的结构特征显示细胞连接混乱、消失。B组扫描电镜还提示随着时间的延长,上皮细胞部分生长、增多,细胞连接差,角膜上皮排列紊乱;角膜内皮细胞数量明显减少或无,细胞连接混乱、消失。结论用异种猫新鲜前板层材料对重度兔碱烧伤角膜进行板层移植手术治疗在一定程度上可减轻伤后炎症反应,防止严重并发症的发生,维持眼表结构并可达到一定的光学治疗效果。

关键词：异种角膜移植前板层角膜移植角膜碱烧伤兔猫

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转谷氨酰胺酶交联胶原凝胶构建三维角膜基质

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眼科研究 2009年第10期27卷 839-843页

作者：李燕陈建苏李晓霞王伟暨南大学眼科研究室再生医学教育部重点实验室暨南大学附属第一临床医学院眼科广州510632

目的检测转谷氨酰胺酶交联胶原凝胶对三维培养的角膜基质细胞的影响,探讨可提高机械性能的组织工程角膜基质层新途径。方法胶原酶消化法获取原代兔角膜基质细胞,以加入转谷氨酰胺酶与胶原凝胶交联为实验组,不加酶交联为对照组。倒置显... 详细信息

目的检测转谷氨酰胺酶交联胶原凝胶对三维培养的角膜基质细胞的影响,探讨可提高机械性能的组织工程角膜基质层新途径。方法胶原酶消化法获取原代兔角膜基质细胞,以加入转谷氨酰胺酶与胶原凝胶交联为实验组,不加酶交联为对照组。倒置显微镜下每日观察细胞生长情况、Alamar-Blue试剂检测细胞增生、免疫荧光法检测凝胶内细胞波形蛋白、检测透光度、酶消化法检测胶原凝胶抗消化能力。结果实验组细胞胶原凝胶内附着和生长优于对照组,细胞在凝胶内呈树枝状生长。2组细胞均随培养时间延长明显增生(P=0.000)。共焦显微镜下见2组细胞胞浆波形蛋白均阳性表达,实验组细胞伪足更丰富。实验组透光度稍差于对照组。实验组抵抗胶原酶消化的能力显著增强。结论酶交联的胶原凝胶对角膜基质细胞无毒性作用,重构的基质层结构更加稳定,有利于组织工程角膜基质层的构建。

关键词：转谷氨酰胺酶交联胶原凝胶组织工程角膜

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细胞与分子免疫学杂志 2009年第2期25卷 136-138页

作者：陈少华李扬秋杨力建周羽竝李萡张学利罗更新暨南大学医学院血液病研究所暨南大学再生医学教育部重点实验室暨南大学医学院生化教研室暨南大学第一附属医院血液科广东广州510632

目的:分析急性早幼粒细胞白血病(APL)患者外周血TCRVα和Vβ克隆性增殖T细胞及CDR3序列特点。方法:利用RT-PCR法扩增1例APL患者外周血单个核细胞中29个TCRVα基因和24个Vβ基因CDR3,阳性PCR产物进一步经荧光标记和基因扫描分析确定其CDR... 详细信息

目的:分析急性早幼粒细胞白血病(APL)患者外周血TCRVα和Vβ克隆性增殖T细胞及CDR3序列特点。方法:利用RT-PCR法扩增1例APL患者外周血单个核细胞中29个TCRVα基因和24个Vβ基因CDR3,阳性PCR产物进一步经荧光标记和基因扫描分析确定其CDR3长度,了解其克隆性;寡克隆的PCR产物再进行CDR3区序列分析。结果:该例APL患者外周血T细胞分别在TCRVα6、Vα10和Vβ23亚家族中出现寡克隆性增殖T细胞,经序列分析显示TCRVα6、Vα10和Vβ23亚家族基因序列分别为Vα6NJα17、Vα10NJα35和Vβ23NDβ1NJβ2.7,其CDR3区氨基酸序列分别为CAMRENSAGNK,YLCAGDELLWECA,CASSSKWAG-GTYEQY,该3个TCR基因已被GenBank收录(登陆号:EU544946、EU544947和EU647219)。结论:APL患者外周血T细胞出现的TCRVα6、Vα10和Vβ23克隆性增殖T细胞可能是机体对抗白血病细胞所引起的抗原特异性免疫反应;这3个独特TCR重排序列将进一步作为开展APL特异性免疫治疗研究提供资料。

关键词： APL TCR CDR3 T细胞克隆

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异种全厚板层角膜和前板层角膜植片板层移植术后拆线时间探讨

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眼科新进展 2009年第3期29卷 165-169页

作者：吴连胜陈建苏徐锦堂丁勇郑佩娥暨南大学医学院眼科研究室再生医学教育部重点实验室广东省广州市510630 暨南大学附属第一临床医学院眼科暨南大学医学院病理教研室东莞市凤岗镇雁田广济医院眼科

目的研究全厚板层和前板层角膜移植后不同的角膜缝线拆除时间对植片的影响。方法将32只健康新西兰白兔随机分成4组,每组各8只:A组、B组(A、B2组又合为M组)为猫→兔异种全厚板层移植组。C组、D组(C、D2组又合为N组)为猫→兔异种前板层移... 详细信息

目的研究全厚板层和前板层角膜移植后不同的角膜缝线拆除时间对植片的影响。方法将32只健康新西兰白兔随机分成4组,每组各8只:A组、B组(A、B2组又合为M组)为猫→兔异种全厚板层移植组。C组、D组(C、D2组又合为N组)为猫→兔异种前板层移植组。术眼为右眼,植片直径为9.0mm,植床直径为8.0mm。A、C2组拆线时间为10d(A、C2组又合为G组),B、D2组拆线时间为1个月(B、D2组又合为H组)。观察时间为3个月。结果用两因素方差分析法分析3个月时的炎性反应指数:(1)角膜植片M组(2.560±2.065)与N组(5.250±2.887)比较差异有显著统计学意义(F=15.427,P=0.001<0.05),即M组炎性反应较轻;(2)拆线时间G组(2.560±2.128)与H组(5.250±2.840)比较差异有显著统计学意义(F=15.427,P=0.001<0.05),即G组炎性反应较轻;(3)角膜植片差异联合拆线时间差异:F=7.017,P=0.013<0.05,差异有统计学意义,即角膜植片差异和拆线时间之间存在交互影响角膜移植炎性反应作用。结论角膜植片差异和拆线时间差异均存在影响异种角膜移植炎性反应的作用,并且二者存在交互作用。

关键词：炎性反应指数异种角膜移植全厚板层角膜移植前板层角膜移植高渗葡萄糖角膜水肿兔猫

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