检索结果-内蒙古大学图书馆

藤黄健骨胶囊对膝骨关节炎鼠软骨组织Notch1、Jagged1、炎性反应因子及基质金属蛋白酶表达的影响

中华骨质疏松和骨矿盐疾病杂志 2023年第1期16卷 41-51页

作者：蔡成成颜春鲁安方玉孙柏王霞霞邓婕孟祥睿张金龙石瑶袁灵青席永斌兰州市第二人民医院骨科兰州730046 甘肃中医药大学中西医结合学院.中医外科教研室兰州730000 甘肃中医药大学教学实验实训中心生物化学实验室兰州730000 甘肃中医药大学第一临床医学院内科教研室兰州730000 甘肃中医药大学基础医学院微生物与免疫学教研室兰州730000

目的探讨Notch/Jagged1信号通路对膝骨关节炎(knee osteoarthritis,KOA)模型鼠软骨组织炎性反应因子及基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMPs)表达的影响,并揭示藤黄健骨胶囊可能的干预机制。方法60只SD雌性大鼠随机分为假手术... 详细信息

目的探讨Notch/Jagged1信号通路对膝骨关节炎(knee osteoarthritis,KOA)模型鼠软骨组织炎性反应因子及基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMPs)表达的影响,并揭示藤黄健骨胶囊可能的干预机制。方法60只SD雌性大鼠随机分为假手术组、模型组、仙灵骨葆胶囊组[0.27 g/(kg·d)]及藤黄健骨胶囊干预组[高剂量0.36 g/(kg·d)、中剂量0.18 g/(kg·d)、低剂量0.09 g/(kg·d)],每组10只。除假手术组外,其余5组采用改良Hulth法构建KOA大鼠模型,模型制备成功后,分别给予仙灵骨葆胶囊及相应剂量的藤黄健骨胶囊灌胃给药,假手术组和模型组给予0.9%(质量分数)氯化钠注射液。给药2个月后股动脉采血处死大鼠,取患侧膝关节软骨采用苏木精-伊红(HE)染色观察关节软骨组织的形态变化;ELISA法检测关节软骨组织中白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、Notch1和Jagged1含量变化;免疫组化法观察关节软骨组织中Col-Ⅱ、MMP-9、MMP-13、Notch1和Jagged1蛋白表达变化。结果与假手术组比较,模型组关节面脱落、严重破坏,软骨细胞分布紊乱;模型组软骨细胞Mankin(5.56±0.85)评分、IL-1β(11.13±2.19)、TNF-α(98.29±9.13)、Notch1(5.03±0.37)和Jagged1(222.54±36.87)含量均显著升高,MMP-9(1.54±0.72)、MMP-13(0.41±0.04)、Notch1(0.39±0.05)和Jagged1(0.38±0.05)等蛋白的免疫反应性均显著增强,Col-Ⅱ(0.15±0.04)蛋白的免疫反应性则显著降低(P<0.05)。与模型组比较,藤黄健骨胶囊0.36 g/(kg·d)剂量组软骨细胞形态和分布趋于正常;其软骨组织Mankin(2.86±0.48)评分显著降低,Col-Ⅱ(0.39±0.03)蛋白的免疫反应性则显著增强(P<0.05);藤黄健骨胶囊0.36、0.18 g/(kg·d)剂量组Jagged1(170.54±41.09、183.46±33.12)含量显著降低,MMP-9(0.68±0.25、1.14±0.49)和Jagged1(0.21±0.05、0.26±0.07)等蛋白的免疫反应性也均显著降低(P<0.05);藤黄健骨胶囊0.36、0.18、0.09 g/(kg·d)剂量组IL-1β(5.71±1.03、8.71±1.53、8.81±2.31)、TNF-α(63.42±10.01、67.46±11.68、71.88±15.63)和Notch1(2.95±0.39、3.56±0.37、4.22±0.33)含量均显著降低,同时MMP-13(0.21±0.02、0.27±0.04、0.31±0.09)和Notch1(0.19±0.06、0.24±0.05、0.28±0.04)等蛋白的免疫反应性也均显著降低。结论藤黄健骨胶囊可能通过促进KOA模型鼠关节软骨组织Notch/Jagged1信号通路下游蛋白Col-Ⅱ表达,抑制其Notch/Jagged1信号通路关键蛋白Notch、Jagged1、炎性反应因子及MMPs表达,延缓关节软骨退变,从而改善KOA的临床症状。

关键词：藤黄健骨胶囊膝骨关节炎 Notch/Jagged1信号通路炎性反应因子基质金属蛋白酶

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活性氧的抗肿瘤作用机制及其在肿瘤治疗中的应用

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生命的化学 2023年第4期43卷 501-509页

作者：梁润森严逸非陈家辉郑梓楷严志成李祥勇广东医科大学生物化学与分子生物学教研室湛江524023 广东医科大学第一临床医学院湛江524023

活性氧(reactive oxygen species,ROS)是一类含氧的化学活性物质。近些年来,随着ROS相关信号通路逐渐被发现,其作为体内重要的代谢产物在调节细胞信号传导和维持体内平衡中发挥的重要作用也越来越被人们重视。目前认为,肿瘤细胞由于其... 详细信息

活性氧(reactive oxygen species,ROS)是一类含氧的化学活性物质。近些年来,随着ROS相关信号通路逐渐被发现,其作为体内重要的代谢产物在调节细胞信号传导和维持体内平衡中发挥的重要作用也越来越被人们重视。目前认为,肿瘤细胞由于其旺盛的代谢活动,其细胞内往往具有较高水平的ROS。因此,通过调节肿瘤细胞内的ROS水平来探索抗肿瘤新途径被认为是肿瘤治疗研究中的重要方向。为全面了解ROS在肿瘤治疗中的作用,本文拟从ROS来源及其与肿瘤的相关性、ROS抗肿瘤作用机制、ROS在肿瘤治疗中的作用和ROS在肿瘤诊断中的应用四个方面进行综述。

关键词：活性氧肿瘤细胞死亡

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负载干细胞外囊泡的缓释聚左旋乳酸微球在促肝细胞增殖中的作用

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中国热带医学 2023年第10期23卷 1030-1036页

作者：楚瑨木克西娜·木拉提高瑾李亮张雪吕国栋林仁勇毕晓娟省部共建中亚高发病成因与防治国家重点实验室新疆医科大学第一附属医院临床医学研究院新疆乌鲁木齐830011 新疆医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室新疆乌鲁木齐830011 新疆农业大学动物医学学院新疆乌鲁木齐830052

目的制备一种调控释放干细胞外囊泡的微粒子递送系统,仅干预1次后长期发挥增强肝细胞增殖能力的作用。方法采用差速离心法提取干细胞外囊泡并鉴定,透射电镜观察外囊泡结构和免疫印记检测外囊泡膜标志蛋白,评价所提取外囊泡符合规范。采... 详细信息

目的制备一种调控释放干细胞外囊泡的微粒子递送系统,仅干预1次后长期发挥增强肝细胞增殖能力的作用。方法采用差速离心法提取干细胞外囊泡并鉴定,透射电镜观察外囊泡结构和免疫印记检测外囊泡膜标志蛋白,评价所提取外囊泡符合规范。采用乳液-溶剂挥发法制备“壳-核”结构聚左旋乳酸(poly-L-lactic acid,PLA)微球,在微球“核”结构位置负载干细胞外囊泡(extracellular vesicles,EVs)得到EVs-PLA微球。通过扫描、透射电镜检测微球及外囊泡形貌,粒径分析,缓释实验检测EVs-PLA微球缓释周期,扫描电镜检测缓释至8周EVs-PLA微球形貌变化;将EVs-PLA微球与肝实质细胞共培养,鬼笔环肽/DAPI染色评价EVs-PLA微球生物相容性和细胞毒性,CCK8评价EVs-PLA微球对细胞增殖活力的影响作用,免疫印记检测EVs-PLA微球共培养后细胞中增殖标志蛋白表达量并统计数据结果。结果对比EVs-PLA干细胞外囊泡微球处理组和对照组的肝实质细胞增殖能力评价,发现EVs-PLA微球未造成细胞凋亡和细胞结构发生变异,具有生物相容性无细胞毒性;EVs-PLA微球的“壳-核”结构调控所负载的干细胞外囊泡的释放速率和释放周期,EVs-PLA微球可缓慢释放EVs,单次干预后持续发挥促进肝实质细胞增殖的生物作用。结论EVs-PLA微球可缓慢释放EVs,单次干预后持续发挥增强肝细胞增殖能力的作用,为探索外囊泡促肝细胞增殖的微递送系统提供了新的思路。

关键词：干细胞外囊泡缓释肝再生 O/W乳化生物因子载体

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阿司匹林抑制肾癌细胞增殖和迁移并诱导凋亡和自噬

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现代肿瘤医学 2023年第17期31卷 3145-3153页

作者：贾薇石宇马彦杰郑锦秀刘盛露索利敏杨涛山西医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室山西晋中030600 山西医科大学第一临床医学院泌尿外科山西太原030000 山西医科大学第二医院耳鼻咽喉头颈外科山西太原030000

目的:探讨阿司匹林(aspirin,又称acetyl salicylic acid,ASA)对人肾癌细胞系ACHN和786-O细胞增殖、迁移、凋亡和自噬的影响。方法:利用CCK-8法检测不同浓度的ASA及ASA联合氯喹(chloroquine,CQ)对ACHN和786-O细胞存活率的影响;应用平板... 详细信息

目的:探讨阿司匹林(aspirin,又称acetyl salicylic acid,ASA)对人肾癌细胞系ACHN和786-O细胞增殖、迁移、凋亡和自噬的影响。方法:利用CCK-8法检测不同浓度的ASA及ASA联合氯喹(chloroquine,CQ)对ACHN和786-O细胞存活率的影响;应用平板克隆实验检测不同浓度ASA对肾癌细胞克隆形成能力的影响;采用Transwell实验和划痕实验检测肾癌细胞迁移能力;通过Annexin V-FITC/PI实验检测肾癌细胞的凋亡情况;Western blot法检测ASA对肾癌细胞凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2及自噬相关蛋白LC3B、Beclin-1和p62表达水平的影响。结果:ASA可显著抑制ACHN和786-O细胞的存活率,随ASA浓度/时间增加细胞存活率显著下降(P<0.05);与对照组相比,ASA显著抑制肾癌细胞的增殖和迁移(P<0.05);ASA处理增加了肾癌细胞凋亡数目,显著抑制了肾癌细胞凋亡相关蛋白Bcl-2的表达,上调Bax表达,并促进自噬相关蛋白LC3B和Beclin-1的表达,抑制p62的表达(P<0.05)。与CQ处理组相比,ASA联合CQ组显著促进了LC3B的表达抑制p62的表达(P<0.05),并显著抑制了肾癌细胞的增殖和迁移并促进其凋亡(P<0.05)。结论:ASA可抑制肾癌细胞的增殖和迁移并促进凋亡和自噬。

关键词：阿司匹林肾癌自噬增殖迁移

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泡球蚴蛋白促进脂肪间充质干细胞向肝细胞分化的研究

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中国病原生物学杂志 2022年第4期17卷 425-429,434页

作者：刘辉毕晓娟杨宁柯颖孙立楚瑨孙涛吕国栋林仁勇新疆医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室新疆乌鲁木齐830011 新疆医科大学第一附属医院临床医学研究院省部共建中亚高发病成因与防治国家重点实验室

目的探讨泡球蚴蛋白(Echinococcus multilocularis protein,EmP)促脂肪间充质干细胞(Adipose tissue Derived Mesenchymal Stem Cells,ADSCs)向肝细胞分化的作用。方法体外分离人脂肪组织来源的ADSCs,第三代(P3)ADSCs分为对照组(HDM肝细胞诱导分化组)和Em蛋白处理组(HDM+EmP组),经无血清肝细胞诱导培养基培养7、14和21 d,检测对照组和EmP处理组肝细胞样细胞(iHep)百分比、糖原染色面积、肝细胞标志物白蛋白(Albumin,ALB)的蛋白及基因表达水平。Western-Blot法检测p-GSK-3β的表达情况。结果 P3代ADSCs具有成脂及成骨分化能力并表达干细胞标志物(CD29、CD90和CD105等)。在ADSCs向肝细胞诱导分化14 d,EmP处理组iHep细胞百分比显著高于对照组(P<0.05),EmP处理组糖原染色面积显著高于对照组(P<0.05)。免疫荧光染色结果显示两组细胞在诱导分化7 d开始表达ALB,荧光强度随诱导时间增加呈增强趋势。qPCR结果显示在诱导分化后第14 d,EmP处理组ALB表达水平显著高于对照组,两组间具有统计学差异(P<0.05)。Western-Blot结果显示,诱导分化第7 d和14 d,EmP处理组p-GSK-3β蛋白表达水平显著高于对照组(P<0.01和P<0.05)。结论 Em蛋白可能通过激活GSK-3β而具有促进ADSCs向肝细胞分化的作用,本研究为临床应用ADSCs移植治疗泡型棘球蚴病奠定了基础。

关键词：泡球蚴蛋白脂肪间充质干细胞肝细胞分化 GSK-3β

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过表达LRRFIP1对肝癌细胞Huh7生物学行为的影响

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广西医科大学学报 2023年第2期40卷 206-213页

作者：宋萨许悦欢张瑶尧吴莹莹艾明凤谢嘉琳邱藓婷李奕宝周素芳晁耐霞广西医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室南宁530021 广西高校生物分子医学研究重点实验室南宁530021 广西医科大学第一临床医学院南宁530021

目的:探讨LRRFIP1表达上调对肝癌细胞Huh7的生物学行为影响,并初步探索其相关机制。方法:构建LRRFIP1过表达的稳定细胞株,实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)和蛋白免疫印迹法(western blotting)检测过表达效率,细胞增殖实验(CCK-8)... 详细信息

目的:探讨LRRFIP1表达上调对肝癌细胞Huh7的生物学行为影响,并初步探索其相关机制。方法:构建LRRFIP1过表达的稳定细胞株,实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)和蛋白免疫印迹法(western blotting)检测过表达效率,细胞增殖实验(CCK-8)检测过表达LRRFIP11对Huh7细胞增殖能力的影响;平板克隆形成实验检测过表达LRRFIP1对Huh7细胞克隆形成能力的影响;流式细胞术检测过表达LRRFIP1对Huh7细胞周期和凋亡的影响;划痕实验和Transwell实验检测过表达LRRFIP1对细胞迁移和侵袭能力的影响;检测与上皮间质转化(EMT)相关的蛋白E-cadherin、N-cadherin,Vimentin和Snail的表达;免疫共沉淀和蛋白质谱技术串联(CoIP-MS)法筛选可能与LRRFIP1互作蛋白。结果:过表达LRRFIP1促进了Huh7细胞的增殖(P<0.001)和克隆形成能力(P<0.001),抑制了细胞凋亡(P<0.01);过表达LRRFIP1导致Huh7细胞G0/G1期比例减少,S期增加(P<0.001,P<0.01)。此外,过表达LRRFIP1组细胞的迁移(P<0.05)和侵袭(P<0.001)数量显著低于对照组;western blotting实验结果显示,与对照组相比,过表达LRRFIP1组细胞上皮细胞标志蛋白E-cadherin表达显著升高(P<0.001),间充质细胞标志蛋白N-cadherin和Vimentin表达显著减低(P<0.001,P<0.01),EMT相关转录因子Snail蛋白表达显著降低(P<0.001)。最后,过表达LRRFIP1后我们采用CoIP-MS法筛选出80个可能与其互作蛋白,GO分析显示Huh7细胞株中下拉LRRFIP结合蛋白富集于27个生物过程、11个细胞组分和9种分子功能。KEGG通路注释显示这80种蛋白主要富集于ECM-受体相互作用信号通路;STRING和Cytoscape分析Hub基因。结论:LRRFIP1过表达促进了肝癌细胞Huh7的增殖和克隆形成能力,抑制其凋亡、迁移、侵袭能力;LRRFIP1可能与eEF1A1相互作用,从而影响肝癌的发生发展。

关键词： LRRFIP1 原发性肝癌 Huh7 增殖迁移 CoIP-MS

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p62体募集自噬相关蛋白WIPI2的机制研究

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新疆医科大学学报 2024年第5期47卷 668-674页

作者：张金佩冯学召刘梦薇何心瞳徐梦波阿来依·买提卡比力麦尔哈巴·达毛拉衡锐米娜新疆医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室乌鲁木齐830017 新疆医科大学重点实验室乌鲁木齐830017 中山大学肿瘤防治中心广东510060 新疆医科大学基础医学院生物学教研室乌鲁木齐830017 新疆医科大学第一附属医院临床医学研究院乌鲁木齐830054

目的探讨自噬接头蛋白(Sequestosome 1,SQSTM1/p62)与磷脂酰肌醇3-激酶(Phosphatidylinositide 3-kinase,PI3K)复合物的结合蛋白WD重复结构域磷酸肌醇互作蛋白2(WD repeat domain phosphoinositide-interacting protein 2,WIPI2)在空间上定位的调控关系。方法使用CRISPR-Cas9技术敲除正常大鼠肾上皮细胞(Normal rat kidney,NRK)中的自噬相关基因2A(Autophagy-related gene,Atg2A)、自噬相关基因2B(Autophagy-related gene,Atg2B)和p62基因,建立Atg2A和Atg2B基因敲除的细胞系(Atg2AB double knockout,Atg2AB DKO)以及p62基因敲除细胞系(p62 knockout,p62 KO);透射电镜观察Atg2AB DKO细胞中p62体周围囊泡的定位;活细胞成像观察Atg2AB DKO细胞内p62体与自噬相关蛋白WIPI2的定位变化;光漂白实验观察相变蛋白p62与WIPI2的荧光漂白恢复;通过免疫荧光观察WT、p62 KO和Atg2AB DKO细胞中WIPI2与p62的定位关系;通过蛋白免疫印记检测WT和p62 KO细胞中WIPI2表达量的变化。结果建立了Atg2AB DKO和p62 KO细胞系;透射电镜显示Atg2AB DKO细胞中p62附近聚集了大量囊泡;在Atg2AB DKO中,通过活细胞成像观察到tdTomatop62与WIPI2-GFP高度共定位;荧光漂白实验观察到WIPI2具有流动性;通过免疫荧光观察到,与WT细胞相比,在Atg2AB DKO中WIPI2点的数量明显增多(P<0.0001);与WT细胞相比,p62 KO细胞中WIPI2点的数量和表达量无明显变化(P>0.05)。结论无膜细胞器p62能够与具有流动性的WIPI2阳性囊泡动态融合,促进自噬体的形成。

关键词：自噬体自噬接头蛋白 WD重复结构域磷酸肌醇互作蛋白2

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脂肪干细胞在肥胖症治疗中的研究进展

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生命科学研究 2024年第4期28卷 312-319页

作者：张全颖杨阳王艳陈玲俐刘婉晴李祥勇广东医科大学医学技术学院中国广东东莞523808 广东医科大学生物化学与分子生物学教研室中国广东湛江524023 广东医科大学第一临床医学院中国广东湛江524023

随着经济的不断发展和生活水平的提高,肥胖症的患病率正逐年显著升高。肥胖症不仅会引起机体能量代谢失衡,还会导致脂肪组织组成细胞的功能紊乱。脂肪干细胞(adipose-derived stemcell,ADSC)是形成脂肪组织的起源细胞,能够改变脂肪组织... 详细信息

随着经济的不断发展和生活水平的提高,肥胖症的患病率正逐年显著升高。肥胖症不仅会引起机体能量代谢失衡,还会导致脂肪组织组成细胞的功能紊乱。脂肪干细胞(adipose-derived stemcell,ADSC)是形成脂肪组织的起源细胞,能够改变脂肪组织的重塑和功能,目前被认为可在肥胖症防治中发挥重要作用。为此,本文就ADSC的生物学特征、功能以及其在抗肥胖症中的作用机制进行综述,以期为肥胖症的临床防治研究提供新思路。

关键词：脂肪干细胞(ADSC) 肥胖症脂肪棕色化脂肪炎症

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钙连蛋白(CNX)通过促进MHC Ⅰ表达增强CD8^(+)T细胞对结直肠癌细胞的杀伤作用

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细胞与分子免疫学杂志 2022年第2期38卷 97-102页

作者：杨婷郑锦秀高书华成敏蓉薛宇彤邵莹李逸涵杨涛山西医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室山西太原030001 山西医科大学基础医学院药理学教研室山西太原030001 山西医科大学基础医学院病理山西太原030001 山西医科大学第一临床医学院山西太原030001 山西医科大学细胞生理学教育部重点实验室山西太原030001

目的分析钙连蛋白(CNX)在结直肠癌(CRC)的异常表达对免疫细胞杀伤作用的影响及分子机制。方法免疫组织化学染色检测组织芯片102对CRC及癌旁组织的CNX的表达;在人HCT-15细胞过表达CNX,在人SW480细胞采用小干扰RNA敲低CNX表达,Western blo... 详细信息

目的分析钙连蛋白(CNX)在结直肠癌(CRC)的异常表达对免疫细胞杀伤作用的影响及分子机制。方法免疫组织化学染色检测组织芯片102对CRC及癌旁组织的CNX的表达;在人HCT-15细胞过表达CNX,在人SW480细胞采用小干扰RNA敲低CNX表达,Western blot法检测主要组织相容性复合体Ⅰ(MHCⅠ)蛋白表达;将过表达CNX的慢病毒感染CT-26小鼠结肠癌细胞,并与脾脏分离的CD8^(+)T细胞共培养,利用细胞毒性试剂盒检测CD8^(+)T细胞对CT-26细胞的杀伤作用,ELISA检测γ干扰素(IFN-γ)与肿瘤坏死因子α(TNF-α)分泌的变化。结果CNX在结直肠癌组织的表达低于癌旁组织;HCT-15细胞过表达CNX后,MHCⅠ的蛋白水平升高:敲低SW480细胞CNX,MHCⅠ表达水平下降。过表达CNX可增强CD8T细胞对CT-26细胞的杀伤能力,且培养液上清中IFN-γ与TNF-α的含量增加。结论CNX可通过促进结直肠癌细胞MHCⅠ表达,增强CD8^(+)T细胞对肿瘤细胞的杀伤作用。

关键词：钙连蛋白(CNX) MHCⅠ CD8^(+)T细胞结直肠癌免疫逃逸

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骆驼蓬总碱通过诱导细胞自噬促进Tau蛋白和α-突触核蛋白的降解

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中华神经医学杂志 2021年第11期20卷 1081-1091页

作者：雷秀英伊力亚斯·艾萨张瑜陈倩冯学召西仁阿依·西热甫米娜新疆医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室乌鲁木齐830011 新疆医科大学药学院药理学教研室乌鲁木齐830011 新疆医科大学基础医学院生物学教研室乌鲁木齐830011 新疆医科大学药学院生药学教研室乌鲁木齐830011 新疆医科大学第一附属医院临床医学研究院乌鲁木齐830011

目的:探讨骆驼蓬总碱(TAH)能否诱导神经细胞自噬并促进神经毒性蛋白Tau蛋白和α-突触核蛋白(α-Syn)的降解。方法:(1)将体外培养的PC12细胞分为空白对照组及1、2.5、5、10、20、50μg/mL TAH组,分别加入0、1、2.5、5、10、20、50μg/mL ... 详细信息

目的:探讨骆驼蓬总碱(TAH)能否诱导神经细胞自噬并促进神经毒性蛋白Tau蛋白和α-突触核蛋白(α-Syn)的降解。方法:(1)将体外培养的PC12细胞分为空白对照组及1、2.5、5、10、20、50μg/mL TAH组,分别加入0、1、2.5、5、10、20、50μg/mL TAH作用24 h,观察细胞形态及数目的变化,采用MTT法检测细胞存活率;(2)将PC12细胞分为空白对照组、雷帕霉素组及1、2.5、5、10、20μg/mL TAH组,分别加入等量溶剂、50 nmol/L自噬激活剂雷帕霉素及1、2.5、5、10、20μg/mL TAH作用4 h,采用免疫荧光染色检测细胞自噬体数;(3)将PC12细胞分为空白对照组、雷帕霉素组、10μg/mL TAH组,分别加入等量溶剂、50 nmol/L雷帕霉素、10μg/mL TAH作用4 h,Western blotting检测细胞p62和微管相关蛋白1轻链3(LC3)-Ⅱ蛋白的表达;(4)将PC12细胞分为空白对照组、氯喹组、TAH组、TAH+氯喹组,分别加入等量溶剂、50 nmol/L自噬抑制剂氯喹、10μg/mL TAH、10μg/mL TAH+50 nmol/L氯喹作用4 h,Western blotting检测细胞LC3-Ⅱ蛋白的表达;(5)将PC12细胞分为TAH组和空白对照组,分别加入10μg/mL TAH和等量溶剂处理4 h后,Western blotting检测细胞磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)、磷酸化p70核糖体蛋白S6激酶(p-p70S6K)的表达;(6)将过表达Tau-绿色荧光蛋白(GFP)的Tet on HEK293细胞分为空白对照组、TAH组、强力霉素组、强力霉素+TAH组、强力霉素+TAH+3-甲基腺嘌呤(3-MA)组、强力霉素+TAH+氯喹组,后4组细胞加入200 ng/mL强力霉素处理24 h后,空白对照组加入等量溶剂,TAH组加入10μg/mL TAH,后3组细胞分别加入10μg/mL TAH、10μg/mL TAH+5 mmol/L 3-MA、10μg/mL TAH+50 nmol/L氯喹,作用24 h后在激光共聚焦显微镜下观察细胞绿色荧光强度的变化,Western blotting检测细胞Tau-GFP和LC3-Ⅱ蛋白的表达;(7)将稳定表达α-Syn的HEK293细胞分为空白对照组、氯喹组、TAH组、TAH+氯喹组,分别加入等量溶剂、50 nmol/L氯喹、10μg/mL TAH、10μg/mL TAH+50 nmol/L氯喹作用24 h,Western blotting检测细胞α-Syn和LC3-Ⅱ蛋白的表达。结果:(1)与空白对照组比较,20、50μg/mL TAH组细胞存活率降低,且50μg/mL TAH组细胞存活率低于20μg/mL TAH组,差异均有统计学意义(P<0.05);(2)与空白对照组比较,雷帕霉素组、10、20μg/mL TAH组细胞自噬体数增多,且10μg/mL TAH组细胞自噬体数多于20μg/mL TAH组,差异均有统计学意义(P<0.05),因此,选择10μg/mL TAH用于后续实验;(3)与空白对照组比较,雷帕霉素组、TAH组细胞p62蛋白的表达均降低,LC3-Ⅱ蛋白的表达均增加,差异均有统计学意义(P<0.05);(4)与空白对照组比较,氯喹组、TAH组、TAH+氯喹组细胞LC3-Ⅱ蛋白的表达均增加,且TAH+氯喹组细胞LC3-Ⅱ蛋白的表达高于氯喹组,差异均有统计学意义(P<0.05);(5)与空白对照组比较,TAH组细胞p-mTOR、p-p70S6K的表达均降低,差异均有统计学意义(P<0.05);(6)强力霉素组细胞Tau-GFP蛋白的表达较空白对照组增加,强力霉素+TAH组细胞Tau-GFP蛋白的表达较强力霉素组降低,强力霉素+TAH+3-MA组、强力霉素+TAH+氯喹组细胞Tau-GFP蛋白的表达较强力霉素+TAH组增高,差异均有统计学意义(P<0.05)。TAH组细胞LC3-Ⅱ蛋白的表达较空白对照组增加,强力霉素+TAH组细胞LC3-Ⅱ蛋白的表达较强力霉素组增加,强力霉素+TAH+3-MA组细胞LC3-Ⅱ蛋白的表达较强力霉素+TAH组降低,强力霉素+TAH+氯喹组细胞LC3-Ⅱ蛋白的表达较强力霉素+TAH组增高,差异均有统计学意义(P<0.05);(7)与空白对照组比较,TAH组HEK293细胞α-Syn蛋白的表达降低,LC3-Ⅱ蛋白的表达升高,差异均有统计学意义(P<0.05);TAH+氯喹组细胞LC3-Ⅱ蛋白的表达高于氯喹组,TAH+氯喹组细胞α-Syn蛋白的表达高于TAH组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:TAH可能通过抑制mTOR/p70S6K信号通路激活神经细胞

关键词：骆驼蓬总碱细胞自噬 Tau蛋白 α-突触核蛋白

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